MORFOLOGÍA

CLÍNICA
CITOQUÍMICA

DIAGNÓSTICO

CITOMETRÍA CITOGENÉTICA + FISH

DE FLUJO BIOLOGÍA MOLECULAR
 CLASIFICACIONES Y SU EVOLUCION

INMUNOFENOTIPO
MORFOLOGIA BIOLOGIA
CELULAR MOLECULAR
1986 2001
+ FAB MIC REAL OMS
1976 1999
CITOQUIMICA
OMS
2008
GENETICA
Definición ICD
Epidemiología Etiología
Compromiso Clínica
Morfología Variantes morfológicas
Cito/histoquímica
Inmunofenotipo
Genética y Biología molecular
Factores pronósticos y predictivos
Terapia
COMPARTIMENTOS CELULARES

CITOPLASMA : MPO,
MEMBRANA CD79a, Ig, CD22, CD3
CELULAR :
>CDs

NÚCLEO : TdT
CARACTERIZACIÓN INMUNOFENOTÍPICA
DE LAS CÉLULAS

¿ QUÉ
CARACTERIZA A LAS CÉLULAS
NORMALES ?
Expresión del linaje celular y estadío de maduración.

¿ EN QUÉ DIFIEREN LAS ANORMALES ?

Reflejan desarreglos de expresión proteica con
fenotipos aberrantes con o sin anomalías genéticas
asociadas
 Intensidad fluorescente anormal por Ac
 Ausencia o sobreexpresión de Ac
 Expresión asincrónica madurativa
 Maduración/compartimento biológico
 Curva de maduración anormal
 Expresión antigénica de varios linajes
 -LMA M0
-LMA M7
-LA bifenotípicas, LA bilineales

-Células dendríticas. Mastocitos.

 Médula ósea
 Sangre periférica
 Líquidos corporales (cavidades,lavados)
 Tejidos sólidos (piel, ganglios linfáticos,
otros)
 Recepción: datos clínicos y dx. presuntivo
 Lisado glóbulos rojos no nucleados (muestras
hematológicas)
 Lavado y filtrado (muestras no hematológicas)
 Aplicación de Ac : paneles (fases)
 Adquisición y almacenamiento de data
 Análisis e interpretación
 Impresión e informe
 MÉDULA ÓSEA NORMAL

Eosinófilos

Neutrófilos

Monocitos

CD34+ HPC
Rojos nucleados

Linfocitos
DISTRIBUCIÓN DE POBLACIONES EN MÉDULA
ÓSEA NORMAL
SUBPOBLACIONES MO % NORMAL MO
% CD34+ 1.1  0.6 (0.3-2.6)
% CD34+ y/o CD117+ 2.2  1.4 (0.6-6)
% Eritroide 4.7  2.1 (2-9)
% Neutrófilos 67  6.1 (57-80)
% Monocitos 4.3  1.4 (2-6.5)
% Eosinófilos 2.5  1.3 (0.8-5)
% Basófilos 0.4  0.7 (<0.1-2.4)
% Mastocitos 0.02  0.01 (<0.03)
% Plasmáticas 0.2  0.2 (0.01-0.5)
% Linfocitos B maduros 2.9  1.5 (1.6-6.3)
% Linfocitos B precursores 0.9  1.5 (0.1-3.9)
% Linfocitos T 9.2  4.5 (2.6-18)
% Linfocitos NK 2.8  1.4 (0.7-5)
 HEMATOPOYESIS
T-lymphocytes
B-lymphocytes
NK-cells
Plasmacytoid DC
Lymphoid precursor
Erythroid cells
Megakaryocytic cells
Stem cell Neutrophils
Monocytes
Monocytic DC
Eosinophils
Basophils
Myeloid precursor Mast cells
Myeloid DC
INMUNOFENOTIPO DE PRECURSORAS
B NORMALES - MÉDULA ÓSEA
CD38 SmIgM
CyIg
CD10 M
CD34

TdT

CD45

CD22 CD19
CD20

I II III IV
ORIGEN Y MADURACION : LINFOCITOS B
ORIGEN Y MADURACION : LINFOCITOS T

Early
Thymoc
yte
Cortica
l
Thimoc
yte

Mature
Thymoc
yte
 MADURACIÓN GRANULOCÍTICA

MIELOBLASTO PROMIELOCITO MIELOCITO METAMIELOCITO SEGMENTADO

CD13

103

CD117

102 CD33
CD11b
CD15
CD34 CD16
101

CD65
HLA-DR CD10
(Adaptado de Orfao et al. Haematologica, 2003 )
 MADURACIÓN MONOCÍTICA

MONOBLASTO PROMONOCITO MONOCITO

103
HLA-DR
CD33
102
CD13
CD15
CD36 CD11b
101
CD117
CD34 CD11c CD14
(Adaptado de Orfao et al. Haematologica, 2003 )
 MADURACIÓN ERITROIDE

PROERITROBLASTO ERITROBLASTO HEMATÍE

103
CD71
Glicoforina A
CD34
102
CD117
HLA-DR

101 CD45

(Adaptado de Orfao et al. Haematologica, 2003 )

 MADURACIÓN MEGACARIOCÍTICA

INMADURO MADURO

103
CD36
CD41
CD42
102 CD61
CD34
HLA-DR
CD117
101

(Adaptado de Orfao et al. Haematologica, 2003 )

P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
COMBINACIONES X 4 FL
FITC PE PerCP/Cy5.5 APC
cCont. cCont. CD45 CD34
nTdt cMPO CD45 CD34
cCD3 CD7 CD45 CD34
CD19 cCD79a CD45 CD34
CD20 CD10 CD19 CD34
sCont. sCont. CD45 CD34
HLADR CD117 CD45 CD34
HLADR CD123 CD45 CD34
CD11b CD13 CD45 CD34
CD15 CD16 CD45 CD10
CD36 CD64 CD45 CD14
CD33 CD61 CD45 CD34
CD71 GphA CD45 CD34
CD2 CD56 CD45 CD34
 PANEL INICIAL

FITC PE PerCP APC

Control Control Control
CD4 CD8 CD3
CD16 CD19 CD3 CD45
CD20 CD10 CD19 CD34
CD34 CD33 HLA-DR CD45
CD2 CD5 CD7
CD36 CD13 CD45 CD34
CD15 CD117 CD34 CD45

CD61 CD34 CD45

LINAJE T LINAJE B MIELOIDE INMADUREZ
Y NK
TCR / CD79a , MPO CD33, TdT, CD34,
CD3 Ig M, CD22 CD13 CD117,
(Sm,Cy) Ig D, Ig A, Lisozima
Ig G, k, l

CD1a, CD2, CD10, CD19 CD14, CD15, CD38

CD4, CD5, CD20, CD11c CD16, HLA-DR
CD7, CD8, CD25, FMC7 CD64,CD11b
CD103
CD56, CD57 Gly-A, CD71,
CD16 CD41a ,CD61
 EXPRESIÓN ANTÍGENICA

-Línea granulocítica: CD11b, CD13, CD15, CD16, CD33, CD65,

CD117, MPOc.
-Línea monocítica: CD11b, CD11c, CD14, CD36, LISOZIMAc.
-Línea eritroide: glicoforina A, CD71.
-Línea megacariocítica: CD41, CD42, CD61.
-Línea B: CD10, CD19, CD22, CD79ac.
-Línea T: CD2, CD3c, CD4, CD7.
-Línea NK: CD16, CD56.
-Antígenos no específicos de línea: 7.1, CD34, CD45, HLA-DR.
WHO 2008 - TUMORES
HEMATOPOYÉTICOS Y LINFOIDES
MIELOIDES :
- Neoplasias mieloproliferativas
- Neoplasias mieloides y linfoides con
eosinofilia y anormalidades de PDGFR
- Neoplasias Mieloproliferativas y
Mielodisplásico
- SMD
- Leucemias mieloides agudas y
neoplasias precursoras relacionadas
- Leucemias Agudas de Linaje Ambiguo
WHO 2008 - TUMORES
HEMATOPOYÉTICOS Y LINFOIDES

LINFOIDES:

- Neoplasias linfoides precursoras

- Neoplasias maduras B
- Neoplasias maduras T y NK
- Linfoma Hodgkin
- Desórdenes linfoproliferativos
asociados a inmunodeficiencias
- Neoplasias histiocíticas y dendríticas
 PAS  Fosfatase-ácida
 LLA Ph +
t(9:22)(q34;q11.2)
LLA-B
CD19
cCD79a
cCD22

CD10, CD22, CD24, TdT

CD20,CD34,CD45 variable
CD13,CD33 Ag asociados

LLA-T
cCD3, CD7 ,TdT,
CD1a,CD2,CD3,CD4,CD5.CD8
CD10
CLASIFICACIÓN DE MADURACIÓN DE
PRECURSORES LINFOIDES
Precursores B-ALL: CD79a+ CD19+ CD34+ o -
- B I ó pro-B (CD10-/IgM-/CD20-)
- B II ó común (CD10+/IgM-/CD20+)
- B III ó pre-B (CD10+/CyIgM+/CD20+)
- B IV•ó madura (CD10-/SmIgM+/CD20+)

Precursor T-ALL:
-TI (CD7+/CyCD3+)
- T II (CD2+ y/o CD5+ y/o CD8+)
- T III (CD1a+/CyCD3+)
- T IV (CD1a-,SmCD3+)
 LMA: CLASIFICACIÓN FAB

FAB Leucemia Serie

M0 Mieloblástica mínimamente diferenciada Granulocítica
M1 Mieloblástica sin maduración Granulocítica
M2 Mieloblástica con maduración Granulocítica
M3 Promielocítica Granulocítica
Granulocítica y
M4 Mielomonocítica
monocítica
M5 Monoblástica/monocítica Monocítica
Eritroblástica y
M6 Eritroide
granulocítica
M7 Megacarioblástica Megacariocítica
 LMA: CLASIFICACIÓN EGIL

 Línea mielomonocítica:
 α-MPO+, CD13+, CD33+, CD65+ y/o CD117+ (al menos dos
marcadores positivos).
 Línea eritroide (M6):
 Inmaduro: inclasificable por marcadores.
 Maduro: Glicoforina A +.
 Línea megacariocítica (M7):
 CD41+ y/o CD61+ (de superficie o citoplasmáticos); habitualmente
CD34+, CD33+ y/o CD13+.
 Mieloide (M0):
 Inmunofenotipo idéntico a las de linaje mielomonocítico con citoquímica
negativa para MPO y con antígenos específicos de línea linfoide (CD3,
CD79a, CD22) negativos.
 LMA TdT+.
 LMA con marcadores linfoides (Ly+LMA).
 LMA: CLASIFICACIÓN EGIL

Score Linfoide B Linfoide T Mieloide

2 CD79ac CD3 ó CD3c MPO
IgMc Anti-TCR
CD22c
1 CD19 CD2 CD117
CD20 CD5 CD13
CD10 CD8 CD33
0,5 TdT CD10 CD65
CD24 TdT CD14
CD7 CD15
CD1a CD64
Una puntuación de 2,5 se considera suficiente para asignar linaje.
CD79a puede ser también expresado en una subpoblación de
leucemia / linfoma linfoblástico T.
 LMA: CLASIFICACIÓN MIC-M

Anomalía cromosómica Subtipo FAB Genes participantes

t(8;21)(q22;q22) M2/M4 eto / aml-1
t(15;17)(q22;q21) M3 pml / rarα
inv(16)(p13;q22) / t(16;16) M4-Eo myh-11 / cbfβ
t(9;11)(p21-22;q23) M5 af-9 / hrx
t(11;19)(q23;p13.1) mll / ell
t(11;19)(q23;p13.3 mll / enl
t(?;11)(?;q23) M4/M5 hrx
t(6;9)(q23;q34) M2/M4 dek / can
t(8;16)(p11;p13) M5 moz / cbfβ
inv(3)(q21;q26) / t(3;3) M4 evi-1 / evi-1
t(1;3)(p36;q21)
t(3;21)(q26;q22) evi-1? / aml-1
t(9;22)(q34;q11) M1 abl /bcr
t(1;22)(p13;q13 M7
 LMA: CLASIFICACIÓN OMS

LMA no clasificable en otra categoría:

- Leucemia mieloide aguda indiferenciada (M0)
- Leucemia mieloide aguda mínima maduración (M1)
- Leucemia mieloide aguda con maduración (M2)
- Leucemia aguda mielomonocítica (M4)
- Leucemia aguda monocítica (M5a y M5b)
- Leucemia aguda eritroide (M6)
- Leucemia aguda megacariocítica (M7)
- Leucemia aguda con basofilia (M2 con basofilia)
- Panmielosis aguda con mielofibrosis
- Leucemias agudas bifenotípicas
 LMA CON DIFERENCIACION MINIMA LMA MO
INMUNOFENOTIPO:
Bajo SSC/FSC
Incidencia 2% - 7% Marcadores mieloides positivos
MPO- por citoquímica ó <3% MPO-/+ CD13+
CD33-/+ CD117+
Marcadores linfoides negativos

SSC/FSC
 LMA M0

CD45/SSC CD34/SSC CD117/SSC

CD13/SSC CD33/SSC
 LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA SIN MADURACION
LMA M1

Incidencia 15% - 20%

Blastos ≥ 90% C.N.E.
MPO+ ≥ 3% por citoquímica

INMUNOFENOTIPO:
No fenotipo característico
Bajo SSC/FSC
MPO+ CD13+
CD34+ CD33+
CD15-/+ CD117+
 LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA CON MADURACION
LMA M2

Incidencia 10%
Blastos 30% - 89% C.N.E.
MPO+
>10% cel maduras linaje neutrofilico
<20% cel linaje monocitico

INMUNOFENOTIPO:
CD34-/+ MPO++
HLA-DR-/+ CD33+
CD117-/+ CD13+
CD15+/++ CD11b+

Dx.Dif: LMA sin Mad.

AREB, LAMielomonoc.
 LEUCEMIA AGUDA PROMIELOCITICA CON
t(15,17)(q22;q12) LMA M3
Incidencia 5% - 15% CID
Tipos: Hipergranular y Microgranular FSC/SSC

INMUNOFENOTIPO:
Alto SSC/FSC
MPO++h CD13+
CD33+hom CD117+
CD34- HLA-DR-
CD2-/+ (M3v) AUTOFLC.
LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA MIELOMONOCITICA
LMA M4
Incidencia 15% - 20%
Bl>20% incluye Promonocitos
Neutrofilos >20% Monocitos>20%

INMUNOFENOTIPO:

Blastos:
Bajo SSC/FSC CD13+
CD33+ CD34+
CD117+ CD11c+d

Monocitos:
CD34- CD117-
CD11b+ CD11c++
HLA-DR+ CD14++
CD64+
 LMA M4

FSC/SSC CD45/SSC CD34/SSC

CD13/SSC CD33/SSC MPOc/SSC CD11c/SSC

LEUCEMIA AGUDA MONOBLASTICA Y MONOCITICA
LMA M5

Incidencia 15%

M5a M5b
 LMA M5

>80% linaje monocitico

INMUNOFENOTIPO: SSC/FSC CD56/SSC

CD4 + CD11b
CD64 CD36 +
CD14 +
CD14/CD45
LISOZIMAc +

CD13,CD33,CD15,
HLADR
MPO+/- CD13/CD33 CD11c/CD15 CD2/CD117

DxDif: LMA s/mad,

LMAdif.min, LMMC,LPA
 LEUCEMIA ERITROIDE AGUDA LMA M6

Incidencia 4% - 5%
L.E.Pura >80%
L.Mieloide/Eritroide >50%prec.er. SSC/CD45 CD71/CD45
>20%mielobl.

CD34/CD45 GA/CD34

INMUNOFENOTIPO:
Glicoforina A+ MPONeg
CD71+
CD34+
CD36+
 LEUCEMIA MEGACARIOCITICA AGUDA LMA M7

INMUNOFENOTIPO:
FSC/SSC CD61/SSC
Muy infrecuente CD41+
Morfologia indifer.
CD42a+
>20% blastos
c/50%megacariocitico CD42b+
CD61+
CD45- ó +
MPO-

MPOc/SSC CD41/SSC CD61/SSC

Incidencia: < 3% de las LA

1. Coexpresión de
antígenos de dos ó más
líneas.
2. Pob.separadas de
blastos de mas de 1
linaje.
LA bifenotípica (mieloide y linfoide T)
CORRELACIÓN CON ALTERACIONES CITOGENÉTICAS ESPECÍFICAS

Adaptado de Orfao et al. Cytometry Part A 58ª: 62-71 2004

 LMA: INMUNOFENOTIPO Y PRONÓSTICO

CD34 Blastos inmaduros

Mal pronóstico
CD56 Localización extramedular (LPA)
Mal pronóstico en subgrupo de t(8;21) y t(15;17)
CD7 Mal pronóstico
LMA inmaduras (M0, M1 en relación con citogenética de mal
pronóstico)
CD2 En LMA muy mal pronóstico, excepto si hay inv(16): baja tasa de RC
CITOMETRÍA DE LÍNEA CELULAR
FLUJO ESTADIO
MADURATIVO

FACTORES PERFIL INMUNOFENOTÍPICO

EMR
PRONÓSTICO

MORFOLOGÍA
CITOQUÍMICA

CITOGENÉTICA + FISH DIAGNÓSTICO

BIOLOGÍA MOLECULAR INTEGRADO
CLÍNICA