Pontificia Universidad Catlica de Chile

Facultad de Ciencias Biolgica

Departamento de Gentica Molecular y Microbiologa
Biologa de microorganismos
Daniela
BIO151E-2

Informe N1 Procedimientos
Bsicos y Morfologa de
microorganismos

Nombre: Daniela lvarez Riquelme

Profesores: Dras. Beatriz Diez y Carolina Serrano
Jefe de Ayudantes: Daniela Ruiz
Ayudante: Tamara Ortega
Fecha de entrega: 01 de Octubre 2014

Introduccin
Los microorganismos, tambin llamados microbios, son organismos microscpicos que estn
presentes en nuestro medio, tenernos contacto con ellos desde el momento del nacimiento hasta
la muerte. Esta es una de la razn para saber los riegos y beneficios que pueden proporcionar.
Los microorganismos son organismos microscpicos unicelulares, pluricelulares y virus, que no
poseen estructura celular (1).Estas tienen gran similitud con las clulas eucariontes por lo que
comprender sus procesos biolgicos elementales es sumamente importante analizar organismos
superiores (2).
En los trabajos prcticos se empleo tcnicas reconocimiento de bacterias, basndose en sus
caractersticas macroscpicas y microscpicas. Las diferenciacin macroscpica, son las diferencias
que poseen colonias de bacteria que pueden ser reconocidas a ojo desnudo . La diferenciacin
microscpica es aquella en que es necesaria la utilizacin de microscpico para diferenciar
bacterias (3).
En la observacin macroscpica son sumamente importantes las siembras y aislamiento de
bacterias en diferentes medios. Los medos de cultivo se pueden encontrar segn su estado fsico
en forma solida, semitendida y liquida, tambin segn las necesidades del microbio en bsicos y
especiales; en este ltimo estn los medios de cultivo especiales, mejorados o diferenciadores (4).
Los medios segn su estado fsico, lquido son para el desarrollo bacteriano de bacterias
estresadas, el semitendido se utiliza para estudiar la motilidad de la bacteria y el slido para la
formacin de colonias (5). En cambio los segn s utilidad prctica se clasifican en corrientes o
especiales y este a su vez en mejorados, diferenciales o selectivos, en los medios corrientes se
conoce la composicin exacta de esta y en l es capaz de crecer la mayora de bacterias, mientras
que los mejorados se desconoce su composicin exacta, por lo cual son ptimos para el
crecimiento de bacterias con necesidad nutricional alta (6).
Para la realizacin de observaciones microscpicas es necesario el uso de microscpico y con ello
diferenciar las bacterias segn sus afinidades con tinciones, la tincin ms utilizada es la tincin
Gram, esta se basa en las diferencias morfolgicas de las bacterias, particularmente en la
estructura y composicin de su pared celular dividiendo a las bacterias en Gram- con color rosa y
Gram+ con color morado (7). Para la observacin e otras estructuras son requeridos diferentes

tinciones, para capsula la utilizacin de tinta china y para esporas colorante verde de malaquita
(8).
Para la aislacin de una cepa bacteriana se debe obtener el inoculo de un cultivo puro y despus
sembrarlo en un medio de cultivo solido, este depender de las necesidades de la bacteria,
posteriormente en el crecimiento de la colonia y su identificacin (9).
Otra forma de identificar a la bacteria es mediante pruebas bioqumicas, las cuales mdela reaccin
de la bacteria contra diferentes sustratos (el metabolismo de la bacteria)(10).

Objetivos
a) Poseer conocimiento sobre material, su uso y medios de cultivo utilizados en un
laboratorio de Bacteriologa.
b) Conocer diferentes mtodos de cultivo, siembra y aislamiento de bacterias.
c) Conocer y aplicar diferentes tipos de tinciones.
d) Reconocer caractersticas que poseen colonias segn sus caractersticas macroscpicas.
e) Practicar pruebas bioqumicas rpidas para identificacin de cocceas Gram +, utilizando
prueba de catalasa y coagulasa.
f) Identificar microscpicamente y macroscpicamente bacterias que habitan en nuestro
cuerpo.

Materiales y Mtodos
-Mechero
-Asa de platino
-Pipetas pasteur
-Tubos de ensayo
-Placas Petri
-Portaobjetos
-Aceite de inversion
-Medios de cultivo solido:
a) Agar corriente
b) Agar McConkey
c) Agar Sangre
-Tubo de medio de cultivo semitendido
-Tubo de medio de cultivo liquido
-Tinta China
-Verde de Malaquita
-Cristal violeta
-Disolucion Lugol
-Alcohol 70%
-Safranina 1%
-Papel Tissue
-Torulas estril
-Catalasa
-Coagulasa
-Muestra liquida de S. aureus, E.coli y B.cereus
-Muestras en agar solido de Klebsiella pneumoniae y Streptococcus aureus
-Microscopio ptico
-API 10S
-Batera Bioqumica convencional

En los pasos a seguir en el prctico 2 que estn indicados en la gua de trabajos

prcticos (11)
- Dentro de la preparacin del prctico 3, para la toma de muestras no se utiliz
suero fisiolgico.

Resultados
Tabla I: Observacin morfologa de muestras preparadas previamente
Numero de
Muestra
101
102
103
105
106
107

Nombre
Gram Positivo
Gram Negativo
Mezcla Gram positivo y Gram
Negativo
Estafilococos
Levadura
Estreptococos

Forma
Bacilo
Bacilo
Bacilo
Cocoacea
Cocoacea
Bacilo

109

Esporas

Bacilo

110

Capsula

Cocoacea

Afinidad
Tincion
tintrea Agrupacin
Gram
Gram +
X
Gram
Gram X
Gram + y
Gram
Gram X
Gram
Gram +
Racimo
Gram
Gram +
Racimo
Gram
x
Cadena
Esporas
Verde de
basales
Cadena
malaquita
Capsula
Tinta
no teida
acimo
China

Simbologa: Gram+, Gram positivo. Gram-, Gram negativo. X no se observa resultado.

TablaII: Resultado de crecimiento bacteriano

Cepa
E. coli
B.cereus
S. aureus

Agar Corriente
+
+
+

Agar Sangre
+
+
+

Agar McConkey
+
-

Simbologa: + crecimiento. Ausencia de crecimiento.

TablaIII: Caractersticas macroscpicas del crecimiento de S. aureus

Forma
Elevacin
Borde
Superficie
Caractersticas fsicas

Agar Corriente
Circular
Levantada
Lisa
lisa
Opaca

Simbologa: n/c, no hubo crecimiento.

Agar McConkey
n/c
n/c
n/c
n/c
n/c

Agar Sangre
Circular
Plana
Lisa
Lisa
Opaca

Tabla IV: Caractersticas macroscpicas del crecimiento de B. cereus

Forma
Elevacin
Borde
Superficie
Caractersticas fsicas

Agar Corriente
Circular
Cncavo
Lisa
Rugosa
Brillante

Agar McConkey
n/c
n/c
n/c
n/c
n/c

Agar Sangre
Circular
Plana
Lisa
Escamosa
Color- Opaca

Simbologia :n/c, un hubo crecimiento

Tabla V : Caractersticas macroscpicas de crecimiento de E. coli

Forma
Elevacin
Borde
Superficie
Caractersticas fsicas

Agar Corriene
Puntiforme
Plana
Liso
Rugosa
Brillante - No color

Agar McConkey Agar Sangre

Puntiforme
Irregular
Convexo
Plana
Ondulado
Lobuado
Rugosa
Rugosa
Color - Brillante Color - Brillante

Tabla VI: Caractersticas macroscpicas de K. pneumoniae y Streptoccocus A.

Cepa
Forma
Elevacin
Borde
Superficie
Caractersticas fsicas

Agar McConkey
Klebsiella pneumoniae
Fusiforme
Convexa
Lobulada
Rugosa
Brilante - Color

Agar Sangre
Streptococus aureus
Circular
Concava
Ondulado
Rugosa
Opaca - No color

Tabla VII: Caractersticas macroscpicas del crecimiento de la flora

Zona
Forma
Elevacin
Borde
Superficie

Agar Corriente
Nasofarngea
Circular
Convexa
Liso
Lisa

Caractersticas fsicas Brillante - Blanca

Simbologa: n/c, no hubo crecimiento.

Agar Sangre
Nasofarngea
Circular
Convexa
Liso
Lisa

Agar McConkey
Nasofarngea
n/c
n/c
n/c
n/c

Agar Corriente
Boca
Circular
Convexo
Lisa
Lisa

Brillante - Color oscura

n/c

Brillante - Blanca

Discusin
Se analizo y comparo la morfologa bacteriana y los distintos mtodos utilizados en microbiologa
En el anlisis microscpico de las muestras preparadas previamente (tabla I), se tomaron en
cuenta los datos sobre su forma, afinidad tintoreal , tipo de tincin y agrupacin , estos resultados
coincidieron con la biografa consultada(12) . En a tincin Gram , las Gram positivas poseen un
color violeta , esto se debe por su gran pared de celular , mientras que en las Gam negativas su
pared celular es pequea y no retine el complejo que forma el tinte (cristal violeta) con el lugol al
ser lavadas con alcohol 70%, por lo cual se aplica un tinte de contraste que es safranina 1% y es
por este tinte que toma el color rosa- rojizo.(13)
En las muestras 101, 103, 105, 106 y 107 se observo presencia de bacterias Gram positivas, cuya
forma fue de bacilos y cocoacea, con agrupacin en racimo. En las muestras 102 y 103 de
bacterias Gram negativas, se observo la forma de bacilo Mientras las muestras 109 y 110 fueron
tincin de esporas y capsula. En la 109 se tie con verde de malaquita para la tincin de esporas y
en la 110 con tinta china, esta tie toda la bacteria menos la zona de la capsula.(14)
Se realiz crecimiento de 3 bacterias, dos Gram positivas y dos Gram negativas, en tres tipos de
medios de cultivo solido, agar corriente(medio bsico) , agar sangre(medio mejorado) y agar
McConkey(medio selectivo e indicador), hubo crecimiento de as 3 en medio solido de agar
Corriente y Sangre , pero solo hubo crecimiento de E. coli en medio de agar McConkey (Tabla II),
ya que este es selectivo al solo permitir el crecimiento de bacterias Gram y selectivo ya que
posee un indicador de Ph, ya que posee lactosa para distinguir aquellas que fermentan o no.(15)
Para el anlisis de caractersticas macroscpicas se utilizaron 5 cepas en diferentes medios de
cultivos solidos(agar corriente, sangre y McConkey), se compararon su forma , elevacin, borde,
superficie y caractersticas fsicas(Tablas III, IV, V, VI)(12)
En las caractersticas macroscpicas de S. aureus , al ser una bacteria Gram positiva no creci en
agar McConkey(Tabla III), se reconoci una diferencie entre el crecimiento en agar corriente y
sangre en su elevacin , ya que en agar corriente su elevacin fue levantada en agar sangre fue lisa
, esto se debe a las diferencias de nutrientes que posee cada tipo de agar.(15)

En las caractersticas macroscpicas de B. cereus, al ser una bacteria Gram positiva no se observo
crecimiento en agar McConkey(Tabla IV),se observo mayores diferencias entre los tipos de agares ,
que los hubo en S. aureus.
En las caractersticas macroscpicas de E. coli, se observo crecimiento en los tres tipos de agar
(tabla V), tambin se observaron diferencias en las estructura macroscpica de la cepa (12).
Se utilizo dos Cepas de K. pneumoniae y Streptoccocus (Tabla VI). En las cuales se puede apreciar
las caractersticas macroscpicas de cada una, K. pneumoniae en agar McConkey , al observar
crecimiento de esta se clasifica como una bacteria gran negativa y Streptococcus se observa
hemolisis entonces para una mayor crecimiento se necesitara un medio mejorado como es el agar
sangre.(16)

Figura 1. Colonia en agar McConkey de K.

pneumoniae

Figura 2. Colonia en agar sangre de y

Streptoccocus

En el crecimiento de flora corporal en las zonas nasofarngea y boca (Tabla VII)se llega a observar
que en estas zonas no crecen bacterias Gram positivas, ya que en agar McConkey no se observo
crecimiento bacteriano. Por las formas y caractersticas de esta determina que pueden se
Streptococcus y Staphylococcu(17)(12).

Conclusiones
a) Se conoci sobre material, su uso y medios de cultivo utilizados en un laboratorio de
Bacteriologa.
b) Se conoci diferentes mtodos de cultivo, siembra y aislamiento de bacterias.
c) Se aplico y reconoci diferentes tipos de tinciones.
d) Se reconoci caractersticas que poseen colonias segn sus caractersticas macroscpicas.
e) Se realizo pruebas bioqumicas rpidas para identificacin de cocceas Gram +, utilizando
prueba de catalasa y coagulasa.
f) Se identifico microscpicamente y macroscpicamente bacterias que habitan en nuestro
cuerpo.

Bibliografa
1) Brock Biloga de microorganismos. Madigan, Michael T.; Martinko, John M.;
Parker, Jack; Octava edicion, Prentice Hall Iberia, 1997.Pag 2
2) Referencia 1 ;Pag 3
3) Gua de Trabajos Prcticos. Bueno, Susan; Serrano, Carolina; Diez Beatriz,
Departamento de Gentica molecular y microbiologa, PUC. Pag 32
4) Bacteriologia. Salle, Cuarta edicin, Editorial Gustavo Grill S.A., 1957. Pag 159
163.
5) Referencia 3 Pag 20-21
6) Introduction to microbiology Ingraham John, Ingraham Catherine. Second
Edition. Brooks/Cole. 2000. Pag 77-79
7) Microbiologa de Burrows. Freeman, Bob. Segunda edicin,McGraw-Hill, 1985.
Pag 19-20.
8) Referencia 3. Pag 39
9) Referencia 6. Pag 74-76
10) Referencia 3. Pag 55-56
11) Referencia 3. Pag 51
12) Referencia 4. Pg. 168- 169
13) Referencia 1. Pg. 57
14) Referencia 3. Pg. 38
15) Referencia 1 . Pg. 116
16) Referencia6. Pg. 79-80
17) Referencia3. Pg. 44-43 y 52-53