TÉCNICAS DE SIEMBRAS BACTERIOLÓGICAS

. OBJETIVOS

● Aplicar varias técnicas de siembra en medios de cultivo.

● Realizar las técnicas de siembra de microorganismos en placa Petri y
en tubos

INTRODUCCION

En Microbiología se entiende como siembra el proceso mediante el cual se

lleva una porción de una población de microorganismos, denominada
entonces inóculo, de un cultivo crecido a un medio nutritivo para su
crecimiento. Todo este proceso hay que llevarlo a cabo con instrumentos y
medios previamente esterilizados y siguiendo las instrucciones de los
monitores de prácticas. La principal advertencia consiste en trabajar siempre
próximos a la llama del mechero que, debido a las corrientes de convección
verticales que genera, es capaz de crear un ambiente estéril en la zona
inmediatamente alrededor y debajo de la llama. En este informe se explican
las principales técnicas usadas para el cultivo del microorganismo,
características del crecimiento en medios de cultivos como en el caldo
nutritivo y agar nutritivo (inclinado y vertical); además del aislamiento y
recuento de microorganismos con dos métodos: a) por estrías en placas con
agar Mc Conkey y agar Manitol-salado, b) diluciones por incorporación (0,1
ml) en agar nutritivo licuado La técnica de aislamiento, fue desarrollada
durante el siglo XIX. En un principio se utilizó diluciones seriadas en medio
líquido, pero la presencia de contaminantes (microorganismos no deseados)
dificulto el aislamiento. Posteriormente la escuela de Robert Koch introdujo
los medios sólidos, completamente con agar y las placas Petri para bacterias,
permitiendo así la separación física de las colonias sobre la superficie del
medio de cultivo o en el interior del mismo. Esto permite tener una visión
macroscópica de las colonias y de diferenciar distintas especies microbianas.
MARCO TEÓRICO

. Material y Equipos

● Varilla de vidrio
● Lámpara de alcohol
● Pipeta
● Caja Petri
● Hisopos
● Asas de cultivo
● Aguja de cultivo

Sustancias y reactivos

● Medios de cultivo
● Agua destilada

C) Técnicas para medio sólido. (Caja Petri).

1. Por diseminación con hisopo.

● Se sumerge en caldo de cultivo y se estrían ambas mitades de la caja Petri.

● Se gira 90 grados y se estaría nuevamente las dos mitades de caja Petri.
● Se gira 45 grados y se estría nuevamente.

2.- Por agotamiento de estría

● Con ayuda del asa de cultivo, recoger un poco de muestra y por medio de técnica de
estriado realizar un estría.
● . Sin levantar el asa girar la caja Petri (cierto grado) en dirección opuesta de las
manecillas del reloj, y proceder a realizar el estriado seguido del anterior.
● . Repetir el procedimiento 4 veces hasta realizar 4 estrías superficiales.
● . Acabado al siembra llevar a incubadora.

Técnica de agotamiento, aislamiento o de estría cruzada.

Es un buen método para el aislamiento de colonias (obtención de colonias

aisladas); mediante esta técnica buscamos obtener colonias separadas a partir de

un inóculo. Para su realización:

[1] se toma la caja de Petri en la palma de la mano

y ligeramente inclinada; con la mano contraria, se manipula el asa de argolla

previamente esterilizada y con ella se recoge el material de cultivo, para colocarlo

en un área periférica de la caja haciendo movimientos circulares para

homogeneizar el inóculo.

[2] El asa debe ser nuevamente flameada y enfriada en

un lateral del agar (procurando no dañarlo); a continuación, se realiza una estría

partiendo de la primera y arrastrando los microorganismos presentes en ella hacia

el extremo contrario de la superficie del agar. Se debe procurar que, en cada

sección de la caja, las estrías queden trazadas con mayor separación.

[3] Repita el paso 2, por tres veces (algunos autores reportansolo dos), recordando inmediat
y enfriar el asa cada vez que culmine una estría y solo tocar con el asa la estría
inmediatamente anterior, con el objetivo de ir reduciendo la carga microbiana arrastrada por
la argolla. Finalmente se esteriliza el asa antes de descamicrob

Fig. 1. Pasos para la siembra de bacterias por la técnica de agotamiento (y otros

microorganismos emulsionables como las levaduras)

3,.-Técnica de siembra en cuadrantes

El objetivo de esta técnica, es el de diluir el inóculo a medida que se realizan estrías en la

superficie del agar. Para realizar la siembra, la caja se divide en cuatro cuadrantes

(imaginariamente o con un marcador vidrio gráficopor la base de la caja); se procede a

esterilizar
el asa en el mechero, se toma el inóculo y se inicia el rayado de la superficie del agar, en
cuatro cuadrantes consecutivos (sin esterilizar el asa posteriormente o tomar nuevamente
inóculo). Las cajas así sembradas, se incuban a la temperatura adecuada de acuerdo a la
bacteria.

Con esta técnica de siembra, se espera que al menos en el cuarto cuadrante (última estría
realizada), se encuentren colonias de la bacteria aisladas

Fig. 2. Técnica de siembra en cuadrantes, donde se observan las cuatro estrías realizadas
una a continuación de la otra y sin cargar el asa nuevamente.

Técnica de siembra masiva.Este método es muy utilizado para obtener un gran número de
microorganismos (incremento de inóculo), en la superficie de un agar. Esta técnica de
siembra utiliza un hisopo, el cual se pasa por toda la superficie de la placa en distintas
direcciones y finalmente por el borde para que, el crecimiento de los microorganismos sea
total en la superficie de la placa (Figura 3).

Fig. 3. Procedimiento para la realización de una siembra por

la técnica masiva, utilizando hisopos estériles y sobre la superficie de un agar en caja Petri.

Técnica de punción.
Método de siembra utilizado para observar el crecimiento de microorganismos y así más
adelante establecer su morfología; así como, para la transferencia o subcultivo de cepas
previamente almacenadas y/o conservadas. Consiste en tomar parte de micelio con un asa
micológica (o asa recta), y por una punción suave en el centro de la caja inocular el
microorganismo a estudiar. Dependiendo del objetivo, pueden hacerse múltiples picaduras
en el agar (varios puntos de siembra) (Figura 4).

Fig. 4. Procedimiento para la realización de una siembra por la técnica de punción,

utilizando asa micológica y sobre la superficie de un agar en caja Petri.

SIEMBRA POR ESTRÍA EN TUBO INCLINADO

 Se realiza en un tubo con medio solido inclinado (en bisel o pico de flauta), y deslizando el
asa sobre la superficie expuesta del agar de manera que se marque con movimiento en
zigzag o surcos en la superficie.
 El proceso se inicia en el fondo y se va avanzando hacia arriba por el área inclinada.
 Luego incubar en estufa durante 28-48 horas a temperatura más adecuada a 37ªC.
 3.-Por diseminación con espátula de Drigalsky.

● Se deposita sobre el medio sólido una asada o una gota con pipeta el material a
sembrar.
● . Se extiende con la asa de Drigalsky por todo el medio.
● . Acabado la siembra llevar a incubadora.

4.-Por agar volcado.

● . Se deposita el inóculo con pipeta en el centro de la caja Petri y luego se vuelca el

medio de cultivo.
● . Se homogeniza por rotación.

2.-TÉCNICAS DE SIEMBRA

EN MEDIO LÍQUID0

Asa en caldo:

● . Esterilizar el asa y tomar la muestra con la punta redondeada.

● Antes dela siembra esterilizar la boca del tubo, posteriormente introducir el
asa con el inoculo y agitar homogéneamente.
● Se saca el asa del tubo y se vuelve a esterilizar para eliminar el exceso de
microorganismo que haya quedado adherido.
Técnicas de siembra (tubo)

Siembra por inoculación o agitación:

Con un asa bacteriológica, esterilizada, se toma cantidad de inoculo, se intorduce en el
centro del medio liquido, agitándose, no tocando la pared del tubo.

Siembra por estría ( en tubos de agar inclinado):

Muestra de material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por superficie mas
profunda.

Siembra por picadura:

Asa recta, tomar la muestra, sembrar en agar semisólido, en el tubo de ensayo hasta
que la muestra quede bien impregnada al agar.
Siembra por vertido en placa:
Diluciones en varios tubos, pipeta 1cc de muestra o dilución, agregar tubo de ensayo
estéril, se agrega medio licuado, mantener a 55°C, movimientos rotatorios, solidificar.

B) Técnica para siembra en medios semisólidos.

Picadura y estriado superficial,SIEMBRA POR ESTRÍA EN SUPERFICIE:

● Con la aguja de cultivo, tomar la muestra que se desea sembrar.

● Realizar una punción en el medio semisólido y retirar con la misma trayectoria de
punción.
● . En el momento que la aguja llegue a la superficie realizar una con la misma, un
estriado
● Acabado el procedimiento llevar la siembra a la incubadora.

BIBLIOGRAFIA.

 Manual práctico de microbiología Carlos Gamazo Ignacio LópezGoñi Ramón DíazElsevier

España, 2005

 Manual de Bioseguridad Y Control de la Infeccion de PracticaOdontologicaUNAM 2004

 Rodriguez E. Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio, UNAM 2004.

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http://www.microinmuno.qb.fcen.u ba.ar/SeminarioAntibioticos.htm

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Flores, E. (2013). Tecnica de cultivo de microorganismos. Recuperado de:

https://es.scribd.com/doc/186726490/Tecnica-de-cultivo-de-microorganismos-7-pdf