CORPORACIÓN TECNOLOGICA DE BOGOTÁ

CURSO DE MICROBIOLÓGIA
GUÍA DE LABORATORIO

MÉTODOS DE SIEMBRA DE BACTERIAS EN MEDIOS DE CULTIVO

INTRODUCCIÓN:

En microbiología se utilizan medios de cultivos adecuados para el aislamiento de distintos microorganismos, por ende
es necesario cultivarlos en medios de cultivos que ofrezcan las características óptimas para el crecimiento de los
mismos, gracias a este aislamiento es posible analizar y observar la morfología macroscópica y microscópica del
microorganismo aislado, existen varias formas de realizar los aislamientos de acuerdo al tipo de medio en el que se
vaya a realizar dicho crecimiento bacteriano, esto con el fin de obtener buenos resultados.

Siembra en medio líquido:

Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo crecido, ya sea en medio líquido ó sólido o una muestra líquida)
y se toma un inóculo, que se lleva al tubo estéril con medio líquido (agitándola en el medio), tomando las precauciones
mencionadas anteriormente, ver el siguiente enlace.
(http://www.youtube.com/watch?v=Y9qAk6Aom2U&feature=related)

Siembra en placa:
Dividida la placa en tres partes, sembrar en cada tercio el inóculo tomado de los cultivos crecidos. Se introduce el asa
de siembra en el tubo con cultivo crecido y se toma una gota de inóculo que se extiende sobre el agar de la placa
deslizando el asa suavemente por su superficie en zig-zag o estría, esterilice el asa nuevamente y de la siembra
realizada en la primera parte de la caja recoja nuevamente parte de ese contenido bacteriano y girando caja del agar,
nuevamente desice el asa por la segunda parte en estría, realice por tercera vez el procedimiento en la última porción
de la caja. Ver el siguiente enlace. (http://www.youtube.com/watch?v=eNz0FE9Q-BA) o puede hacerlo asi:
http://www.youtube.com/watch?v=rxtGsn3b-1g&NR=1

Siembra en agar pico de flauta:

Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo crecido y se toma un inóculo que se extiende sobre el agar
inclinado deslizando el asa suavemente por su superficie en zig-zag o estría. En el caso del medio TSI, la siembra se
deberá realizar tanto en superficie (aerobiosis) como en la profundidad del agar (anaerobiosis). Ver el siguiente
enlace. (http://www.youtube.com/watch?v=9NIP20JBWXA&feature=related).

OBJETIVO

Aprender a realizar siembras de microorganismos en los distintos medios de cultivos y desde la muestra
directa.
Adquirir destrezas en el manejo los materiales de laboratorio, así mismo con la selección de los medios de
cultivos de acuerdo a su uso.

MATERIALES

Gradillas.
Incubadra
Siembra de Streptococcus sp en medio sólido o líquido.
Sembrado con Escherichia coli puede ser en medio sólido o líquido
Hipoclorito
Alcohol al 70%
8 tubos con 2,0 mL de solución salina esteril.
8 tubos con caldo nutritivo y caldo BHI.
Estudiantes:
3 escobillones limpios o bajaleguas
Material de limpieza.
Asas bacteriologicas, curva y recta
1 cajas de agar Streptococo preparado en la clase anterior
1 tubo de caldo nutritivo.
1 tubo con caldo BHI.
1 caja de agar EMB preparada en la clase anterior.
Mecheros
Fósforos
Papel Vinipel
Palillos o escobillones limpios
Una muestra de orina o de agua de charca o de florero.
Un tubo con 2 ml de solución salina esteril.

PROCEDIMIENTO

1. Método de siembra masiva a partir de muestra de placa dental.

Estas siembras se hacen cuando se parte de muestras directas como placa dental, orina, agua de charco, etc.
Verifique antes de trabajar, que el mesón esté totalmente estéril, de lo contrario límpielo con alcohol y etanol
al 70 %.
Marcar los tubos que se van a utilizar para la siembra (nombre de la persona quien realiza el procedimiento,
nombre de la muestra, fecha y grupo).
Tome una muestra de placa dental con el escobillón realice un pase al medio caldo nutritivo, realice el
procedimiento cerca del mechero.
Tapar el tubo y llevarlo a incubación por 24 horas a 37ºC. Verificar el crecimiento bacteriano por turbidez del
medio.
Nota: Puede hacer este mismo procedimiento con la muestra de agua de charca o de orina.

2. Método de siembra masiva

Con el asa previamente esterilizada, tome la muestra a partir de una caja con un microorganismo sembrado
previamente (Escherichia coli, Streptococcus sp), realice una siembra masiva inicial en el agar EMB,
realizando estrías en forma de Z sobre un área pequeña en el borde del agar.
Nuevamente esterilice el asa, deje enfriar y extienda la muestra uniformemente por toda el medio.
Envuelva las cajas en papel vinipel y lleve las cajas a la incubadora a 37°C durante 24 horas para permitir el
desarrollo bacteriano.
Las cajas deben ponerse en la incubadora con el medio hacia arriba, para que el agua de condensación que
se libera durante la incubación caiga sobre la tapa de la caja de Petri y no perjudique el cultivo.
Las cajas deben rotularse como ya se ha indicado previamente sobre la caja y no sobre la tapa.

3. Método de aislamiento de colonias a partir de muestra líquida

Marque la caja con el número de grupo, fecha y origen de la muestra

Tome una muestra del caldo nutritivo con la bacteria (puede utilizar también la muestra de orina),
introduciendo el asa redonda estéril y fría en el tubo.
En la caja de agar EMB se distribuye la muestra pasando suavemente el asa redonda sobre una pequeña
área circular en el borde del medio.
Extienda la muestra con el asa recta o redonda esterilizada (sin quemar), en forma de “Z” (estría) de 5 a 10
veces
 Esterilice el asa y a partir de la última estría realice nuevamente 5 a 6 estrías en sentido perpendicular
conservando la forma de “Z”.
Esterilice el asa y a partir de la última estría realice nuevamente 5 a 6 estrías en sentido perpendicular
conservando la forma de “Z”.
Envolver las cajas en vinilpel y llevar a incubar a 37°C.
Observar el crecimiento de las colonias aisladas.
(http://www.youtube.com/watch?v=eNz0FE9Q-BA) http://www.youtube.com/watch?v=rxtGsn3b-1g&NR=1

4. Método de Siembra para Aislamiento de Colonias (a partir de un cultivo sólido).

Marque el material con el número de grupo, fecha y origen de la muestra.

Tome con el asa recta, una muestra de la bacteria a partir del medio de cultivo sembrado. Para ésto, toque
con la punta del asa, el centro de una colonia aislada.
Tome la muestra, una sola vez y coloque cada una sobre Agar Streptococo cerca de uno de los bordes de la
caja, extienda la muestra con el asa recta (sin quemar), en forma de “Z” de 5 a 10 veces
Esterilice el asa y a partir de la última estría realice nuevamente 5 a 6 estrías en sentido perpendicular
conservando la forma de “Z”.
Esterilice el asa y a partir de la última estría realice nuevamente 5 a 6 estrías en sentido perpendicular
conservando la forma de “Z”.
Envolver las cajas en vinilpel y llevar a incubar a 37°C.
Ver (http://www.youtube.com/watch?v=eNz0FE9Q-BA) http://www.youtube.com/watch?v=rxtGsn3b-
1g&NR=1

5. Método de siembra en medio líquido.

Marque el material con el número de grupo, fecha y origen de la muestra.

Tome la muestra con asa de argolla previamente esterilizada y enfriada
Introduzca el asa con la muestra dentro del medio de cultivo líquido y agítela.
Lleve a incubar de acuerdo a las condiciones que necesita.
Ver. http://www.youtube.com/watch?v=Y9qAk6Aom2U&feature=related

6. Método de siembra en medio pico de flauta.

Este método se utiliza para la determinación de características bioquímicas bacterianas: asimilación de diferentes
azúcares en medio TSI (agar hierro triple azúcar), o para conservar cultivos bacterianos.
Marque el material con el número de grupo, fecha y origen de la muestra.
Tome muestra del cultivo de Salmonella sp o de Escherichia coli con el asa recta estéril y fría.
Siembre por picadura el tubo con Agar Nutritivo, introduciendo el asa hasta el fondo, saque hasta la superficie
de pico de flauta y sobre esta realice estrías.
Ver. http://www.youtube.com/watch?v=9NIP20JBWXA&feature=related

Taller:
1. Investigar la utilidad que tiene los diferentes tipos de siembra en microbiología
2. Las colonias aisladas a partir de los medios de cultivo sólidos, permiten estudiar el tipo de bacteria según su
morfología. Investigue cuáles son las formas de estudiar las colonias bacterianas de los medios de cultivo.
3. Según el punto anterior compare con la morfología de las colonias de sus ensayos.
4. Investigue el protocolo de estudio de una bacteria desde que se encuentra en la muestra inicial (como por
ejemplo: muestra de suelo, orina, secreción animal, alimento, medio ambiente etc.) hasta su diagnóstico final.