Método para la proteína.

Propiedad de las proteínas de absorber luz en el UV absorción A=280nm.

La mayoría de las proteínas muestran una absorción a 280 nm, la cual se atribuye al grupo fenólico
de la tirosina y al grupo indólico del triptofano

• Tiene la ventaja de que no es necesario utilizar reactivos y la muestra no se daña o destruye

durante la determinación. (del puerto 2015)

Método de absorción UV

• Se determina la cantidad de luz absorbida una

solución proteica.

• Para el cálculo de la concentración de dicha

solución se aplica la ley de Lambert –Beer:

A = ε ·c ·l
Donde:

• A = absorbancia

•  = Coeficiente de extinción molar.

• l = longitud de la celda.

• C = concentración

Ilustración 1: formulación para procedimiento. (cruz alta 2015)

€ - coeficiente de extinción molecular: la cantidad de luz absorbida por unidad de concentración

Se utiliza el coeficiente de extinción de la Albúmina de Suero Bovino (BSA) que es de 43824 M-1
cm
 Determinación de carbohidratos.

Determinación cuantitativa de azúcares reductores y totales (método de Lane y Eynon). Existen

diversos métodos de cuantificación de carbohidratos basados en la capacidad reductora de los
azúcares que tienen libre el grupo carbonilo.

Estos carbohidratos son capaces de reducir elementos como:

El cobre (Cu+2)

El hierro (Fe+3)

El yodo (I0).

En el caso específico del cobre, este es reducido desde Cu+2 a Cu+1.

En este sentido, en el método de Lane y Eynon (1923) se hace reaccionar sulfato cúprico con
azúcar reductor en medio alcalino, formándose oxido cuproso, el cual forma un precipitado rojo
ladrillo. Este método utiliza azul de metileno como indicador, el cual es decolorado una vez que
todo el cobre ha sido reducido, lo que indica el fin de la titulación. (Milena and Monroy, 2015)

ALTERNATIVAS:

Prueba de Fehling.

Esta prueba plantea la reacción de identificación de azucares reductores. Se fundamenta en el

poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído. Como muestra la figura 2-16 este se oxida a un
ácido carboxílico y reduce el Sulfato de Cobre en medio alcalino a óxido cuproso, que forma un
precipitado de color rojo. Lo importante de la reacción es que el aldehído del carbohidrato puede
detectarse fácilmente, aunque exista en muy pequeña cantidad.

Prueba de Benedict:

Esta prueba plantea la reacción de identificación de azúcares reductores, este reactivo es más
estable que el de fehling. Se fundamenta en que el que el ion cúprico proveniente del sulfato
cúprico, en medio alcalino es capaz de reducirse por efecto del grupo Aldehído del azúcar a su
forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al
óxido cuproso. La reacción es similar a la reacción con el reactivo Fehling. Figura 2-16. Como se
mencionó anteriormente la Sacarosa por ser un azúcar no reductor no reacciona con el Reactivo
de Fehling ni Benedict debido a que este azúcar es un disacárido que no posee carbonos
anoméricos libres por lo tanto no posee un extremo reductor.
del puerto, M., 2015. Determinación De Proteínas. 1st ed. [ebook] sn: detdePC, pp.1-24. Available
at: <http://www.fagro.edu.uy/~nutrical/ensenanza/AVI%20WEB/cursoema/detdePC.pdf> [Accessed
24 June 2020].

 Milena, L. and Monroy, R., 2015. Manual De Métodos Generales Para Determinación De

Carbohidratos. 1st ed. [ebook] UPTC, pp.1-24. Available at:
<https://es.slideshare.net/LeidyCristancho/manual-de-mtodos-generales-para-determinacin-de-
carbohidratos> [Accessed 24 June 2020].