UNIVERSIDAD VERACRUZANA-QFB

MEDIOS DE CULTIVO
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

KARLA VÁZQUEZ FERNÁNDEZ

S21015748
Karlavazqferdz.23.vf@gmail.com
Agar MacConkey
Es un medio selectivo diferencial utilizado para el aislamiento y diferenciación de bacilos
gramnegativos fermentadores y no fermentadores de lactosa. Se utiliza con frecuencia para el
aislamiento de coliformes. El agar MacConkey es sólo ligeramente selectivo, dado que la
concentración de sales biliares, que inhiben los microorganismos gram positivos, es baja en
comparación con otros medios en placa entéricos. Se recomienda el uso de este medio en muestras
clínicas con posible flora microbiana mixta, tal como: procedentes de la orina, del sistema
respiratorio, de heridas y otras, porque permite la agrupación preliminar de bacterias entéricas y otras
bacterias gramnegativas en organismos fermentadores y no fermentadores de lactosa. El agar
MacConkey también se utiliza en el examen microbiológico de alimentos.
Las peptonas proporcionan los nutrientes. Componentes Fórmula* por litro de agua
Cristal violeta inhibe las bacterias gram purificada
positivas, en especial los enterococos y Peptona de Gelatina 17.0
estafilococos. La diferenciación de los Mezcla de Peptonas 3.0
microorganismos entéricos se logra mediante Lactosa 10.0
Mezcla de sales
la combinación de lactosa y el indicador de pH 1.5
Biliares
rojo neutro. Se producen colonias incoloras o Cloruro de sodio 5.0
de color de rosa a rojo según la capacidad del Agar 13.5
aislado para fermentar carbohidratos. Su pH Rojo Neutro 0.03
final es de aproximadamente 7,1 ± 0,2 Cristal Violeta 0.001

Preparación:
Disolver 50 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar lentamente hasta ebullición, agitando
para su completa disolución. Repartir en tubos ó frascos. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.
Enfriar a 40°-50° C y vaciar en cajas Petri unos 20 min. por placa. Dejar solidificar y luego invertir
las cajas para evitar el exceso de humedad.
La morfología de colonia característica en MacConkey Agar es la siguiente:
Organismos Resultados del crecimiento
Colonias de color rosa a rojo (pueden estar rodeadas
E. coli de una zona con precipitación de bilis). No mucoides
Enterobacter Grandes, rosadas, no mucoides.
Klebsiella Colonias rosadas, mucoides, grandes.
Serratia Colonias color rosa o rojo. No mucoides.
Incoloras-transparentes. Rojas si se fermenta a la
Arizona lactosa.
Incoloras-transparentes. Rojas si se fermenta a la
Citrobacter lactosa.
Proteus Incoloras y transparentes.
Pseudomonas Incoloras, hasta café verdosas. Olor dlijlzaino
Colonias incoloras. Color del medio: Anaranjado a
Salmonella ámbar.
Shigella Incoloras, transparentes o rosa muy tenue.
Estafilococos Puntiformes, rosa pálido, opacas y escasas.
Escasas, puntiformes, rojas, opacas y con un halo
Enterococos claro de aprox. 1mm de diámetro alrededor de la
colonia
Evidencia fotográfica:

b:Evidencia del medio sin crecimiento a: crecimiento de E. coli c: crecimiento de Salmonella

Agar eosina-azul de metileno (EMB o Levine)

Este medio es utilizado para el aislamiento

Fórmula (gr x Litro)
selectivo de bacilos Gram negativos de rápido Peptona 10.0
desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Lactosa 5.0
Permite el desarrollo de todas las especies de Sacarosa 5.0
la familia Enterobacteriaceae. Es similar al Fosfato Dipotásico 2.0
MacConkey, pero contiene eosina y azul de Eosina 0.4
metileno como indicadores. Azul de metileno 0.065
Agar 13.5
Es nutritivo por la presencia de peptona que
Microorganismos Características de las colonias
favorece el desarrollo microbiano. La
Escherichia coli Negro azuladas con brillo metálico.
diferenciación entre organismos capaces de
Klebsiella Mucosas confluentes, con centro
utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que pneumoniae oscuro.
son incapaces de hacerlo, está dada por los Proteus Sp. Incoloras. Cuando no hay
indicadores eosina y azul de metileno; éstos swarming, semejantes a Salmonella
ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia y Shigella.
variedad de bacterias Gram positivas. El agar Salmonella y Ligeramente elevadas, tamaño
es el agente solidificante. Shigella medio, de incoloras a ambarinas.
Candida albicans Colonias plumosas semejantes a
Preparación: telarañas (miceliales).
Enterobacter Colonias grandes, elevadas y
Suspender 36 g del polvo en 1 litro de agua aerogenes mucoides, tienden a unirse. A la luz
purificada. Reposar 5 minutos. Calentar con centro grisáceo café y bordes claros.
agitación frecuente y llevar a ebullición hasta Estafilococos Muy pequeños, puntiformes,
su disolución total. Esterilizar en autoclave Coagulasa incoloros y bastante inhibidos.
121°C durante 15 minutos. Distribuir en Positivos
placas de Petri estériles.
Evidencia fotográfica:

a: agar MB sin crecimiento b: agar MB con crecimiento de E. coli c: agar MB con crecimiento de Enterobacter
aerogenes

Agar Salmonella-Shigella (Agar SS)

Medio de cultivo selectivo, adecuado para el aislamiento de microorganismos Gram negativos
tolerantes a la bilis, especialmente especies de los géneros Salmonella y Shigella. En Agar Salmonella
Shigella (Agar SS), el mayor contenido de sales biliares y verde brillante contribuyen a un aislamiento
selectivo de Salmonellas y Shigellas, junto a una inhibición marcada o total de la mayoría de las otras
enterobacterias. El contenido de citrato férrico y tiosulfato de sodio permite evidenciar colonias
bacterias productoras de H2S, tales como Proteus y Salmonella, las que se observarán coloreadas de
negro con halo claro. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
El tiosulfato de sodio permite la formación de SH2 que se evidencia por la formación de sulfuro de
hierro. El rojo neutro es el indicador de pH y el agar es el agente solidificante. Los pocos
microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar
al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella,
Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen adecuadamente en el medio de
cultivo, y producen colonias transparentes. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como
colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
Preparación:
Suspender 60 g del polvo en 1 litro de agua Fórmula (gr x Litro)
purificada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta Pluripeptona 5.0
Extracto de carne 5.0
homogeneizar.
Lactosa 10.0
Calentar con agitación frecuente y llevar a Mezcla se sales binarias 8.5
ebullición durante 1 minuto para disolución Citraro de sodio 8.5
Tiosulfato de sodio 8.5
total. Citrato férrico 1.0
No esterilizar en autoclave. Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0025
Enfriar y distribuir en placas de Petri estériles. Agar 13.5

Microorganismo Características de las colonias

Escherichia coli colonias convexas rosadas.
 Enterobacter y Klebsiella colonias grandes y mucoides rojas o rosadas.
Shigella flexneri colonias planas trasparentes o incoloras.
Salmonella typhimurium colonias incoloras con centro negro.

Evidencia fotográfica:

a: Agar SS sin crecimiento b: Crecimiento de Salmonella en Agar

b: Crecimiento de E.coli en Agar SS
SS
Agar Sal y manitol
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de
estafilococos a partir de diversas muestras. En el medio de cultivo, el extracto de carne, la peptona de
carne y la tripteína, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales que promueven
el desarrollo microbiano. El manitol es el hidrato de carbono fermentable. El cloruro de sodio (que se
encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora
acompañante, el rojo fenol es el indicador de pH y el agar es el agente solidificante.
Se trata de un medio altamente selectivo por la alta concentración salina y diferencial debido a la
capacidad de fermentación del manitol por los microorganismos. Las bacterias que crecen en un
medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica
el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. Los estafilococos crecen en altas
concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva
fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una
zona del mismo color o púrpura. Este medio de cultivo es recomendado para el aislamiento de
estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos farmacéuticos,
cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria.
Preparación:
Suspender 111 g del polvo en 1 litro de agua
purificada. Reposar 5 minutos y calentar con
agitación frecuente, llevando a ebullición durante 1 o
2 minutos para disolución total.
Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en
autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.
Enfriar y distribuir en placas de Petri estériles.
 Microorganismo Características de las colonias
Staphylococcus aureus Colonias amarillas rodeadas de un halo amarillo
Staphylococcus epidermidis Colonias rojas sin cambio de color del medio
Escherichia coli Inhibición total del medio.
Klebsiella pneumoniae Inhibición total del medio
Micrococos Grandes, de color blanco a anaranjado

Evidencia fotográfica:

a: Agar Sal y Manitol sin crecimiento

Agar Staphylococcus Nº 110 (Agar S-110)

El Agar Staphylococcus Nº 110 es un medio selectivo utilizado para aislar estafilococos patógenos
de muestras clínicas y no clínicas basado en la fermentación de manitol, la formación de pigmentos
y la actividad de la gelatinasa. Los estafilococos son responsables de muchos casos de neumonía,
meningitis, furunculosis, uretritis, vaginitis, etc. Este medio también se utiliza para aislar
estafilococos que contaminan una gran variedad de alimentos y producen intoxicación alimentaria.
La peptona de caseína proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el
crecimiento. El extracto de levadura es una fuente de vitaminas, particularmente el grupo B. La
lactosa y el D-manitol son los carbohidratos fermentables como fuentes de energía; El fosfato de
dipotasio actúa como tampón; El cloruro de sodio suministra electrolitos esenciales para el transporte
y el equilibrio osmótico y, en altas concentraciones, inhibe la mayoría de las bacterias, excepto los
estafilococos. La gelatina se incluye para probar la licuefacción. El agar bacteriológico es el agente
solidificante. Los estafilococos patógenos (estafilococos coagulasa positivos) resisten la alta
concentración de NaCl y forman colonias de color amarillo dorado. La fermentación de manitol, que
produce ácido, se detecta agregando unas gotas de azul de bromotimol a una placa y buscando un
halo amarillo alrededor de las colonias. Los estafilococos licuan la gelatina y producen zonas claras
alrededor de las colonias.
Preparación:
Suspender 149,5 gramos del medio en un
litro de agua destilada. Mezclar bien y
disolver por calentamiento agitando con
frecuencia. Hervir durante un minuto hasta
su completa disolución. Esterilizar en
autoclave a 121 ºC durante 15 minutos.
 Enfriar a 45-50 ºC, mezclar bien y dispensar en placas.

Microorganismo Características de las colonias

Staphylococcus aureus Producción de pigmentos
Staphylococcus epidermidis No hay producción de pigmento
Escherichia coli Inhibición total
Bacillus subtilis No hay producción de pigmento

Evidencia fotográfica:

a: Agar S-110- Staphylococcus aureus b: Agar S-110- Staphylococcus epidermis c: Agar S-110 sin crecimiento

Agar Baird Parker

Medio de alta especificidad diagnóstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de
estafilococos coagulasa positiva en alimentos y otros materiales de importancia sanitaria. la peptona
de caseína y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura
aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.
El agar es el agente solidificante. Permite el crecimiento selectivo de estafilococos ya que el telurito
de potasio y el cloruro de litio inhiben el desarrollo de la flora acompañante presente en la muestra.
La yema de huevo permite demostrar la actividad lecitinásica de los microorganismos. Los
estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de color grisáceo-
negro, y tienen actividad lecitinásica, por eso actúan sobre
Preparación:
Suspender 60 g del polvo en 940 ml de agua
purificada. Dejar enreposo 5 a 10 minutos.
Calentar agitando frecuentemente y hervir
durante 1 minuto, hasta disolución total.
Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar
en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Enfriar
a 45°-50°C y agregar 50 ml de emulsión de yema
de huevo y 10 ml de la solución de telurito
(Emulsión Yema de Huevo con Telurito).
Homogeneizar y distribuir en placas de Petri estériles.
 Microorganismo
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Escherichia coli
Proteus mirabilis
Micrococcus luteus
Staphylococcus saprophyticus
Bacillus subtilis
Características de las colonias
Crecimiento de bueno a excelente; colonias brillantes, de tamaño
mediano y color de gris oscuro a negro; halos transparentes
alrededor de las colonias.
Ausencia de crecimiento a crecimiento promedio; colonias
pequeñas, de incoloras a color gris amarronado; sin zonas
transparentes.
Inhibición completa.
Ausencia de crecimiento a crecimiento bueno; colonias de
color marrón oscuro; proliferación reducida.
Tonos de marrón-negro (muy pequeños), Negativo para lecitinasa
Irregular y puede producir aclaramiento. Se pueden producir
amplias zonas opacas en 24 horas
Marrón oscuro mate, Negativo para lecitinasa

Evidencia fotográfica:

a: Agar Braid Parker sin

crecimiento

a: Agar Braid Parker- Staphylococcus aureus

Agar Chapman Stone

Champan Stone Agar se utiliza para el aislamiento de estafilococos patógenos en alimentos. Es un
medio similar al Agar Estafilococos Nº10 (Cat. 1032), pero contiene sulfato de amonio para detectar
la actividad de la gelatinasa (reacción de Stone), y la concentración de cloruro de sodio se reduce al
5,5%. La principal modificación es la inclusión de sulfato de amonio en el medio, que permite la
observación directa de la hidrólisis de la gelatina en lugar de agregar reactivos al medio ya en la placa.
Debido a la presencia de sulfato de amonio en el medio en sí, no hay necesidad de inundar la placa
con la solución de amonio para detectar la licuefacción de gelatina (método de Stone). El sulfato de
amonio precipita la gelatina no hidrolizada, por lo que aparecerá un halo transparente alrededor de
las colonias gelatinasa (+).
Las colonias estafilocócicas son de color amarillo, amarillo-dorado o naranja, fermentan el manitol,
son coagulasas positivas, producen ß-hemólisis en medios como el Agar Sangre (Cat. 1108) y son
positivas a la gelatinasa (reacción de Stone positiva). Cualquier colonia pigmentada (amarilla o
naranja suave) que esté rodeada por una zona clara, es probablemente un estafilococo patógeno. Las
colonias pálidas, que carecen prácticamente de color o que no producen pigmento, no deben
considerarse positivas, incluso si están rodeadas por una zona clara (halo), y se identifican como
presuntas colonias de S. epidermidis.
Preparación:
Suspender 202,5 gramos del medio en un litro de
agua destilada. Mezclar bien y disolver por
calentamiento agitando con frecuencia. Hervir
durante un minuto hasta su completa disolución.
Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 10
minutos. Enfriar a 50 ºC, mezclar bien y distribuir
en placas.

Microorganismo Características de las colonias

Staphylococcus aureus Manitol (+), Halo (+)
Staphylococcus epidermidis Manitol (-), Halo (+)
Escherichia coli Manitol (-), Halo (-)

Evidencia fotográfica:

a: Agar Champan Stone Parker sin

crecimiento

Agar Vogel Johnson

Medio utilizado para la rápida detección de estafilococos coagulasa positivo fermentadores de
manitol, a partir de alimentos y otros materiales de importancia sanitaria y clínica. Consiste en una
modificación realizada por Vogel y Johnson, quienes agregaron el indicador de pH e incrementaron
el contenido de manitol al Agar Telurito Glicina desarrollado por Zebovitz, Evans y Niven. En el
medio de cultivo, la tripteína y el extracto de levadura aportan los nutrientes necesarios para el
adecuado desarrollo bacteriano.
El manitol es el hidrato de carbono fermentable. El telurito de potasio, el cloruro de litio y la alta
concentración de glicina inhiben el desarrollo de la flora habitual de tracto respiratorio superior y de
algunas especies de microorganismos Gram positivos y negativos, permitiendo el crecimiento
selectivo de estafilococos. El rojo fenol es el indicador de pH y el agar es el agente solidificante. Es
diferencial por la fermentación de manitol y reducción de telurito a teluro.
Observar las características de las colonias.
 • Bacterias fermentadoras de manitol: halo amarillo en el medio de cultivo alrededor de la
colonia.
• Bacterias no fermentadoras de manitol: halo rojizo en el medio de cultivo alrededor de la
colonia.
• Bacterias que reducen el telurito de potasio: colonias de color grisáceo-negro.
• Bacterias que no reducen el telurito de potasio: colonias del color del medio, transparentes.

Procedimiento:
Suspender 61 g del polvo en un litro de agua
purificada. Mezclar bien. Calentar agitando
frecuentemente y hervir durante 1 minuto para
disolución total. Distribuir en recipientes apropiados y
esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos.
Enfriar a 45-50°C y agregar asépticamente 20 ml de
Solución Estéril de Telurito de Potasio al 1%. Mezclar
suavemente y distribuir en placas de Petri estériles.

Microorganismo Características de las colonias

Staphylococcus aureus Colonias negras, rodeadas de una zona amarilla
Staphylococcus epidermidis Colonias negras, pequeñas rodeadas de una zona roja
Proteus mirabilis Colonias negras, rodeadas de una zona roja

Evidencia fotográfica

a: Agar Vogel y Johnson con

crecimiento de Staphylococcus aureus

a: Agar Vogel y Johnson sin crecimiento

Agar Biggy
El Agar Biggy es la abreviatura de Agar Bismuto Glucosa Glicina Levadura. Se usa para aislar y
diferenciar Candida albicans y Candida tropicalis, y para diferenciar especies de acuerdo con el
método de Nickerson. Nickerson descubrió que Candida albicans puede diferenciarse de otras
Candida en este medio basándose en la morfología de la colonia. El extracto de levadura es una fuente
de vitaminas, particularmente del grupo B, esencial para el crecimiento. La glicina estimula el
crecimiento. La dextrosa es el carbohidrato fermentable que proporciona carbono y energía. Candida
spp. reduce el sulfito de bismuto a sulfuro de bismuto formando colonias de color marrón a negro. El
citrato de amonio y bismuto y el sulfito de sodio inhiben el crecimiento bacteriano sin afectar el
crecimiento de las especies de Candida
Preparación:
Suspender 45 gramos de medio en un litro
de agua destilada. Mezclar bien y disolver
calentando con agitación frecuente. Hervir
durante un minuto hasta disolver por
completo. NO SOBRECALENTAR. NO
AUTOCLAVAR. Enfriar a 45-50 ºC y
verter en placas.

Microorganismo Características de las colonias

Cándida albicans
Cándida tropicalis
Cándida glabatra
Cándida parapsilosis
Cándida krusei
Trichosporon sp
Cándida kefyr
Cándida lusitaniae
Cándida guillermondil
Geotrichum candidum
Saccharomyces cerevisiae
Colonias marrones claro (mayoría)- marrón
obscuro (minoría)
Colonias marrón obscuras (mayoría)- marrones
oscuras (minoría)
Colonias marrones claro (mayoría)- colonias
grises (minoría)
Colonias marrones claro (mayoría)-gris claro
(minoría)
Aspecto áspero y difuso de color marrón claro.
Todas desarrollaron halo amarillo alrededor.
Colonias de marrón claro.
Colonias marrones obscuro.
Cepas color marones claro-amarillo mostaza
Colonias color marrón claro.
Colonias marrones claro.
Creció como colonias color marrón claro.

Evidencia fotográfica

a: Agar Biggy con crecimiento de C.krusei

a: Agar Biggy sin crecimiento
Agar Dextrosa Sabouraud
Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos.
También es útil para el cultivo de levaduras. Medio utilizado para el aislamiento, identificación y
conservación de hongos patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de levaduras.
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los
asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo). En el medio de cultivo, la peptona, la tripteína y la
glucosa son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la
presencia de cloranfenicol y el pH ácido, inhiben el desarrollo bacteriano y favorecen el crecimiento
de hongos y levaduras. El agar es el agente solidificante. Puede ser suplementado con otros agentes
selectivos de crecimiento.

Procedimiento:
Colocar los frascos cerrados en baño maría y llevar a
ebullición para fundir el medio de cultivo sólido
contenido en los mismos. Una vez que se ha fundido el
medio de cultivo, retirar cuidadosamente los frascos del
baño maría y dejar enfriar. Cuando alcanzan temperatura
45-50 ºC, abrirlos y distribuir aproximadamente 15 ml
en placas de Petri estériles.

Microorganismo Características de las colonias

Aspergillus brasiliensis Micelio blanco, esporas negras
Candida albicans Colonias blancas
E. coli Inhibición
Saccharomyces cerevisiae Colonias crema abovedadas

Evidencia fotográfica

A. Agar Sabouraud sin sembrar. B. Agar Sabouraud sembrada con una

levadura.

Agar Sangre
La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite
el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante. El agregado de
5-10 % sangre ovina desfibrinada estéril (Britasheep) promueve el desarrollo de bacterias exigentes
en sus requerimientos nutricionales y la adecuada observación de las reacciones de hemólisis.
Preparación:
Suspender 40 g del polvo en 1 litro de agua
purificada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar
perfectamente hasta obtener una suspensión
homogénea. Calentar con agitación frecuente y
hervir 1 minuto para disolución total. Esterilizar a
121 ºC durante 20 minutos.
Observar las características de las colonias.
Para el medio de cultivo conteniendo sangre, observar las reacciones de hemólisis:
Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso alrededor de
la colonia en estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de
color verdoso) por el peróxido de hidrógeno generado por los microorganismos.
Hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante alrededor de la
colonia en estudio.
Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no presenta
modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia en estudio

Microorganismo Características de las colonias

Staphylococcus aureus
Staphylococcus coagulasa negativa
Streptococcus grupo viridans
Streptococcus agalactiae
Streptococcus pyogenes
Streptococcus anginosus
Streptococcus pneumoniae
Moraxella catarrhalis
Neisseria gonohhhoeae
Listeria monocytogenes
Colonias grandes, opacas, cremosas con borde circular, elevación
convexa, de coloración blanca o amarilla, en general
ß-hemolíticas
Colonias medias, opacas, cremosas con borde circular, elevación
convexa, de coloración blanca-grisácea, no hemolítica.
Colonias pequeñas, translúcidas, cremosas con bordes puntiformes, de
coloración blanca-grisácea, elevaciones achatadas, α-hemolíticas.
Colonias medias, circulares, translúcidas con borde circular, elevación
convexa, de coloración gris, en general ß-hemolíticas (aprox. 11% no
presentan hemólisis).
Colonias pequeñas, puntiformes, translúcidas, elevación convexa, de
coloración gris, ß-hemolíticas.
Colonias pequeñas, puntiformes, traslúcidas, elevación convexa, de
coloración gris, ß-hemolíticas.
Colonias pequeñas, con borde circular, transparentes, elevación
umbilicada o achatada, de coloración gris, α-hemolíticas
Colonias medias con borde circular, opacas y elevadas, de coloración
gris, en general no hemolíticas.
Colonias grandes, con borde circular, opacas y con elevación domo,
de coloración “café con leche”, secas, no hemolíticas y que se
desprenden por entero del medio.
Colonias pequeñas translúscidas con pequeñas zonas de beta-
hemólisis.
Evidencia fotográfica

a)Streptoccocus en Agar Sangre

b) Agar Sangre sin crecimiento

Agar Chocolate
Carpenter y Morton describieron un medio para el aislamiento de gonococcus en veinticuatro horas.
La base del Agar Chocolate contiene caseína y peptonas seleccionadas como fuentes de nitrógeno,
con un pH controlado, la hemoglobina aporta la hemina (factor X) y el suplemento vitamínico que
aporta entre otros el factor V (nicotina mida adenina dinucleótido), esencial para las diferentes
especies de Haemophilus, además de vitaminas, aminoácidos, coenzimas, glucosa, factores esenciales
para el crecimiento de Neisserias patógenas y otros microorganismos exigentes.
Preparación:
Este medio se prepara a partir de la base GC
a la que se agrega sangre o glóbulos rojos
lisados. El medio de cul8vo es muy
nutri8vo por la presencia de peptonas
especiales y almidón. El cloruro de sodio
man8ene el balance osmó8co, el buffer
fosfato el pH y el agar es el agente
solidificante.
La adición de sangre (hemoglobina) aporta al medio un importante factor de crecimiento, el factor X
o hemina termoestable. Otros factores, en par8cular el factor V (dicobn-adenina nucleó8do)
termosensible, pueden agregarse mediante la adición de Vitox.

Microorganismo Características de las colonias

Haemophilus influenzae
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
Streptococcus pneumoniae
Pequeñas, húmedas, nacaradas con un olor de "ratón"
característico.
Pequeñas, de color blanco grisáceo a incoloro, mucoides.
Medianas a grandes, gris azulado, mucoides.
Colonias pequeñas, planas o más grandes, mucoides verdosas,
las colonias circundantes pueden ser verdosas.

Evidencia fotográfica:
 b)Agar chocolate Streptoccocus c)Agar chocolate con crecimiento
a)Agar chocolate sin crecimiento de E. coli
agalactiae

Caldo de Tioglicolato
Medio de cultivo utilizado en microbiología clínica e industrial para el desarrollo de microorganismos
aerobios y anaerobios y para ensayos de control de esterilidad de diversos productos. Fue descripto
originalmente por Brewer. Presenta la misma calidad nutricional del Tripteína Soya Caldo y favorece
el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los nutricionalmente exigentes.
Caldo Tioglicolato se prepara según la fórmula del Instituto Nacional de Salud (NIH) y la Farmacopea
de los Estados Unidos (USP). Se usa para detectar microorganismos en materiales normalmente
estériles, y es una alternativa a ciertos productos que son turbios o no pueden cultivarse fácilmente
debido a la viscosidad. Es un medio líquido selectivo.

La peptona de caseína proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el

crecimiento. El extracto de levadura es una fuente de vitaminas, particularmente del grupo B. El
tioglicolato sódico y la L-cistina reducen el potencial de oxidación-reducción al eliminar el oxígeno
para mantener un Eh bajo. La dextrosa es la fuente de energía de carbohidratos y permite un
crecimiento rápido y vigoroso. El cloruro de sodio suministra electrolitos esenciales para el transporte
y el equilibrio osmótico.

El crecimiento microbiano se observa por turbidez.

- Microorganismos aerobios estrictos: crecen en la parte superior del medio de cultivo.

- Microorganismos anaerobios facultativos: crecen en todo el medio de cultivo.

- Microorganismos anaerobios estrictos: crecen en las profundidades del medio del cultivo.

Preparación:

Suspender 30 g del polvo en 1 litro de agua purificada.

Dejar reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente
y llevar a ebullición hasta disolución total. Distribuir en
recipientes apropiados y esterilizar a 121°C durante 15
minutos.
 Cepa de prueba Resultados de crecimiento esperados (turbidez)*
Staphylococcus aureus +++ o más
Micrococcus luteus ++ o más
Bacillus subtilis ++ o más
Pseudomonas aeruginosa +++ o más
Clostridium sporogenes +++ o más
Clostridium sporogenes +++ o más
Bacteroides vulgatus +++ o más

Evidencia fotográfica:

a)Caldo de Tioglicato

Agar Mueller Hinton

Medio de cultivo recomendado universalmente para la realización de la prueba de sensibilidad a los
antimicrobianos. Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarrollo microbiano.
Utilizado en forma rutinaria en la realización del antibiograma en medio sólido, debido a que presenta
buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de
sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos microbianos crece
satisfactoriamente y una gran cantidad de datos adicionales que han sido evaluados y avalados usando
este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, permite realizarlas pruebas
de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. También, con el agregado de
sangre puede utilizarse para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.
Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto
inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición más pequeñas y
por lo tanto informes de falsa resistencia. - Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar
Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio
pueden afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas
de Pseudomonas spp. - Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los
organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de cultivo. Para aquellas cepas
que no puedan crecer satisfactoriamente en el Agar Mueller Hinton no suplementado, se agrega
sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado, en concentración final al 5% (v/v).
Preparación:
Suspender 37 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar
con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto para disolución total. Esterilizar a 121°C durante
15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y distribuir en placas de Petri estériles, en volumen apropiado para
que el espesor sea de 4 mm sobre una
superficie horizontal (25-30 ml en
placas de 9 cm de diámetro). Previo a
su distribución en placas de Petri,
puede ser suplementado con 5% de
sangre ovina desfibrinada estéril
(Britasheep) preparándose así Mueller
Hinton Sangre Agar.

Evidencia fotográfica:
 Agar de Soya tripticaseina
Medio utilizado para propósitos generales, favorece el desarrollo y aislamiento de una gran variedad
de microorganismos aerobios, y anaerobios facultativos y estrictos. Al ser suplementado con sangre
permite el crecimiento de microorganismos exigentes y la clara visualización de reacciones de
hemólisis. En el medio de cultivo, la tripteína y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en
péptidos, aminoácidos libres, bases púricas y pirimídicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya
además es fuente de hidratos de carbono que estimulan el crecimiento de diversos microorganismos.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante.

• Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso
alrededor de la colonia en estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a
metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el peróxido de hidrógeno generado por
los microorganismos.
• Hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante alrededor
de la colonia en estudio.
• Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no presenta
modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia en estudio.
Preparación:
Disolver 40 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar
agitando suavemente y hervir durante 1 o 2 minutos hasta su disolución total. Distribuir en recipientes
apropiados y esterilizar en autoclave a 118-
121 ºC durante 15 minutos.
Preparación de Agar Sangre: agregar 5-10
% de sangre ovina desfibrinada estéril
(Britasheep) al medio esterilizado, fundido y
enfriado a 45-50 ºC. Homogeneizar y
distribuir en placas de Petri estériles.
Microorganismos Crecimiento Hemólisis
Streptococcus pyogenes Satisfactorio Beta
Streptococcus pneumoniae Satisfactorio Alfa

Evidencia fotográfica:

b)Agar de soya tripticaseina con crecimiento

de Brucella canis

a)Agar de soya tripticaseina sin crecimiento

Caldo nutritivo
Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el desarrollo de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales. Está descripto en muchos procedimientos para el análisis de
alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Medio no selectivo, contiene
pluripeptona (una mezcla de partes iguales de peptona de carne y de caseína) y extracto de carne que
constituyen la fuente de carbono y nitrógeno necesarias para el adecuado desarrollo bacteriano. Puede
ser utilizado, además, como pre enriquecimiento en la búsqueda de Salmonella spp. a partir de
alimentos, ya que permite recuperar células dañadas, diluir metabolitos tóxicos y sustancias
inhibitorias.
Examinar los tubos para evaluar el crecimiento por turbiedad. Cuando sea necesario, subcultivar en
medios sólidos apropiados y realizar la identificación bioquímica.
Preparación:
Suspender 8 g del polvo en 1 litro de agua
purificada. Reposar 5 minutos y calentar con
agitación frecuente, llevando a ebullición para
disolución total. Distribuir en tubos u otros
recipientes apropiados y esterilizar en
autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.

Evidencia fotográfica: