Re-10-Lab-034 Microbiologia I (Med) v3

GUIA DE PRÁCTICA CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-034 Version 3.0

UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA I
PRÁCTICA Nº 1
NORMAS BASICAS DE BIOSEGURIDAD, MATERIALES E INSTRUMENTOS DE

LABORATORIO EMPLEADOS EN MICROBIOLOGIA
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:

Las medidas de seguridad en laboratorios son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger
la salud de los que allí se desempeñan frente a los riesgos propios derivados de la actividad, para evitar
accidentes y contaminaciones tanto dentro de su ámbito de trabajo, como hacia el exterior. En ese
entendido la OMS se dio a la tarea de estudiar estos riesgos y clasificar a los laboratorios, para luego dar
recomendaciones en lo que se refiere a normas de bioseguridad. Los laboratorios se clasifican en :
Nuestro laboratorio se encuentra en el grupo de riesgo 1, nivel básico, en este nivel la OMS recomienda
que es necesario para minimizar riesgos:
➢ El Símbolo internacional de peligro biológico debe estar colocado en las puertas de los lugares donde
se manipulen microorganismos que puedan resultar patógenos al humano.
➢ Sólo se podrá entrar a las zonas de trabajo personal autorizado.
➢ Las puertas del laboratorio deben mantenerse cerradas.
➢ No se autoriza la entrada de niños en las zonas de trabajo del laboratorio.
Protección personal:
➢ Se usarán en todo momento batas o guardapolvos especiales para el trabajo de laboratorio.

➢ Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que pueden entrañar
contacto directo o accidental con sangre, líquidos corporales y otros materiales potencialmente
infecciosos. Una vez utilizados los guantes, se retirarán de forma aséptica y a continuación se
lavarán las manos.
➢ El personal y los estudiantes se lavarán las manos después de manipular muestras y antes de salir
del laboratorio.
➢ Se usarán lentes y caretas de seguridad para protección de los ojos y el rostro de salpicaduras,
impactos y fuentes de radiación ultravioleta artificial.
➢ Está prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio.
➢ Debe usarse calzado cerrado, prohibido entrar con sandalias.
➢ Está prohibido comer, fumar o beber en el laboratorio.
➢ No debe almacenarse comida para consumo humano en el laboratorio.
Procedimientos:
➢ Está estrictamente prohibido pipetear con la boca.

➢ No se colocará ningún material en la boca ni se pasará la lengua por las etiquetas.
➢ Todos los procedimientos técnicos se practicarán de manera que se reduzca al mínimo la formación
de aerosoles .
➢ Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales infecciosos se
comunicarán al supervisor del laboratorio. Se mantendrá un registro escrito de estos accidentes e
incidentes.
➢ Se elaborará y seguirá un procedimiento escrito para la limpieza de todos los derrames.
➢ Los líquidos contaminados deberán descontaminarse ( por medios químicos o físicos) antes de
eliminarlos por el colector de saneamiento.
Zonas de trabajo del laboratorio:
➢ El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el trabajo.

➢ Las superficies de trabajo se descontaminarán después de todo derrame de material potencialmente
peligroso y al final de cada jornada de trabajo.
➢ Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados deberán ser descontaminados antes de
eliminarlos o de limpiarlos para volverlos a utilizar.
➢ Las ventanas que puedan abrirse estarán equipadas con rejillas que impidan el paso de artrópodos.
Clasificación de los residuos:
➢ Desechos generales o comunes son aquellos que no presentan un riesgo adicional para la salud
humana y el ambiente y que no requieren de un manejo especial como papel, cartón, plásticos,
restos de alimentos.
➢ Desechos peligrosos o especiales son aquellos que presentan un riesgo para la salud humana y
el ambiente y que requieren de un manejo especial como sangre y hemoderivados, fluidos
corporales, cultivos de agentes infecciosos, vacunas vencidas, cajas de petri, placas de frotis,
órganos, tejidos, partes corporales.
➢ Desechos cortopunzantes agujas, hojas de bisturí, hojas de afeitar, objetos de vidrio y

cortopunzantes desechables.
➢ Desechos especiales frascos de antibióticos y sachett de medicamentos
2 COMPETENCIA (S)
✓ Identifica y aplica las normas básicas de bioseguridad en laboratorio de microbiología en relcion con
su contexto
✓ Investiga la metodologías correcta para la eliminación de los residuos generados en el laboratorio y
la solucion de problemas.
✓ Aplica la metodología correcta para la eliminación de los residuos generados en el laboratorio
microbiología.
✓ Reconoce el uso correcto del material y equipo en las prácticas de microbiología, para la
soluccion de problemas que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
3. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS
➢ Manual de Higiene y seguridad en Microbiología.

➢ Normas de bioseguridad.
EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Portaobjetos pzas
2 Tubos de ensayo 10 pzas
3 Tubos de Hemólisis o Kant 10 pzas
4 Cajas Petri pzas
5 Asas bacteriológicas 5 pzas
6 Matraces erlermeyer 4 pzas
7 Pipetas de 10 ml 3 pzas
8 Lavadores o Frascos lavadores 2 pzas
9 Gradillas 2 pzas
10 Varillas de tinción 3 pzas
11 Goteros 2 pzas
12 Probetas de 100 ml 5 pzas
13 Bastones o Varillas de vidrio 2 pzas
Pinzas de traspaso anatómicas punta 4 pzas
14 roma o diente de raton
15 Microscopios 6 pzas
16 Centrifugas 1 pzas
17 Autoclave 1 pzas
18 Hornos de calor seco (Estufas) 1 pzas
19 incubadoras 1 pzas
20 Baños de agua o maria 1 pzas
21 Cámara de anaerobiosis 1 pzas
22 Refrigeradores pzas
23 Mecheros de alcohol 2 pzas
24
Mecheros de gas 4 pzas
25 Balanzas 2 pzas
INSUMOS
1 cubreobjetos 10
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO.
➢ Trabajo en grupos pequeños
5. PERIODO DE DURACION DE LA PRACTICA

Dos periodos de 50 minutos
6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS

No se aplica
7. CUESTIONARIO
1. Realizar un mapa conceptual sobre normas de bioseguridad.

2. Esquematizar un mapa cognitivo en forma personalizado de manejo de residuos.
3. Mencione las barreras quimicas, fisicas, biologicas de proteccion personal
4. Clasifique los residuos.
Residuos Infeccioso Cortopunzante Comunes

Jeringa con sangre
Hojas de bisturí
Cajas petri
cultivadas
Papel de escritorio
Tiras reactivas de
orina
Frasco con muestra
Aguja hipodérmica
5. Indique el uso y realice el dibujo que falta de cada uno de los materiales e instrumentos
MATERIALES USOS DIBUJO

Portaobjetos
Cubreobjetos
Tubo de ensayo
Tubos de hemolisis
Caja petri
Pipetas graduadas
6. ¿Qué otros tipos de materiales e instrumentos de laboratorio utilizados en Microbiología se

pueden añadir a los ya enunciados?
7. Esquematicé un microscopio e identifique sus partes.
8. Cite tipo de microscopios los mas empleados en el diagnostico microbiológico.
PRÁCTICA Nº 2
TOMA DE MUESTRA
1. CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO.-

. Recomendaciones generales para la recolección de muestras:
• Si el paciente recolectara la muestra las instrucciones deberán ser claras (Mejor si son
por escrito)
• La muestra deberá ser representativa del proceso infeccioso
• La recolección deberá relazarse antes de comenzar la terapia antimicrobiana o
suspender el antibiótico 48-72 horas antes de la toma de muestra
• Cuando se realice cultivo y aislamiento de gérmenes el material deberá recolectarse en
recipientes estériles
• Una vez recolectada la muestra deberá ser llevada al laboratorio lo más rápido posible
• Etiquetar correctamente las muestras
• Toda muestra deberá como si fuera patógena
• Cuando se realiza cultivo de material deberá conocerse el lugar de donde proviene la
muestra: Zonas corporales que normalmente son estériles (sangre, punción de medula
ósea, líquido cefalorraquídeo, liquido sinovial, liquido pleural, liquido peritoneal, tracto
respiratorio inferior, orina recolectada por punción suprapúbica), Zonas corporales que
poseen flora normal comensal (boca, nariz, tracto respiratorio superior, piel, tracto genital,
tracto gastrointestinal, orina recolectada por micción media, sondas o bolsas
recolectoras)
Fuente. P. Murray
2. COMPETENCIA (S)
✓ Emplea y describe métodos y técnicas para la obtención adecuada de muestras para el diagnóstico
microbiológico.
✓ Conoce los diferentes medios de transporte y técnicas de envío de muestras al laboratorio
microbiológico.
✓ Realiza una solicitud correcta para el examen microbiológico y su relación con el campo de trabajo
del profesional.

1 Portaobjetos 15 Piezas
2 Mechero de Bunsen 4 piezasp
3 Pinzas metálicas punta roma 5 Piezas
4 Varillas de tinción 2 Piezas
INSUMOS
1 Colorantes de Gram 1 Kit
2 Guantes 5 Pares
3 Frascos para muestra de orina 5 piezas
4 Bajalenguas 15
5 Hisopos de algodón estériles 15
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO
Trabajo en grupos 5 estudiantes para la extracción de muestras

Muestra Preparación del paciente Instrucciones especiales
Orina chorro medio Mujeres: limpiar la El recipiente donde se
previa higiene zona con agua y jabón, luego recolecta la muestra deberá ser
enjuagar con agua, colocar estéril y no tocar la piel del
tampón vaginal, paciente.
manteniendo separados los En el caso de niños se
labios mayores y comenzar e podrá emplear bolsa
evacuar en el inodoro; recolectora.
recoger el chorro medio
después de eliminar los
primeros ml de orina.
Varones: limpiar el
glande con agua y jabón,
luego enjuagar con agua;
retraer la piel del glande;
recoger el chorro medio
después de eliminar varios
mL.
Orina por Punción Punción en la vejiga,
suprapúbica previa asepsia de la región
con alcohol yodado
Sangre venosa Limpiar el sitio de Extraer sangre durante el
punción venosa con alcohol episodio febril, extraer dos
al 70 % o con alcohol muestras, de brazo izquierdo y
yodado. derecho, no extraer más de tres
muestras en un periodo de 24
horas.
Tracto genital Limpiar la piel antes de Se puede aspirar el
femenino la recolección. líquido o se puede realizar un
hisopado, o recolectar las
secreciones con ayuda de un
hisopo.
Tracto genital Limpiar el glande con Recolectar las
masculino agua y jabón. secreciones con hisopo o en
tubo.
Vías respiratorias Enjuagar con agua Pasar el hisopo por la
superiores faringe antes de la recolección de la faringe posterior y las
muestra amígdalas, con la ayuda de un
baja lengua, sin tocar paladar,
úvula y dientes.
Vías respiratorias La muestra recolectada El paciente debe
inferiores es Esputo. Enjuagar o hacer obtenerlo por tos profunda.
Muestra Preparación del paciente Instrucciones especiales
gárgaras con agua antes de la
recolección.
Liquido Se realiza mediante
cefalorraquídeo (LCR) punción lumbar (PL) entre la
3º y 4º vértebra lumbar,
previa asepsia de la zona con
alcohol yodado
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA


El estudiante anotara los posibles errores cometidos en la toma de muestra
7. CUESTIONARIO
1.- Llenar el cuadro que muestra son representativas en las siguientes patologías:
Enfermedad Agente etiológico muestra tratamiento
Meningitis neonatal
tuberculosis
Fiebre tifoidea
Amigdalitis
Micosis sistémicas
Infecciones urinarias
otitis
Gonorrea
Sífilis
Disentería bacilar
Chancroide
PRÁCTICA Nº 3
TINCIÓN DE GRAM

Debido a que las bacterias y otros microorganismos son muy pequeños, se requieren generalmente
tinciones biológicas para visualizarlos adecuadamente y demostrar el fino detalle de sus estructuras
internas y su morfología. En la coloración de Gram el Cristal Violeta actúa como colorante primario o
básico, que se une a la pared celular bacteriana, luego de un tratamiento con una solución débil de
lugol (Mordiente). Algunas especies bacterianas debido a la naturaleza química de sus paredes
celulares, poseen la capacidad de retener el colorante primario o básico (Cristal Violeta), luego de una
decoloración con una mezcla de alcohol y acetona o con alcohol al 95 %. Tales bacterias se denominan
Gram positivas. Las bacterias Gram negativas, debido a su mayor contenido lipídico en su pared
celular, pierden la coloración primaria (Cristal Violeta) cuando son tratadas con el decolorante y por lo
tanto deben tomar el colorante secundario o de contraste que es la Fucsina o Safranina. Las bacterias
Gram negativas aparecen de color rosadas o rojas vistas al microscopio y las bacterias Gram positivas
aparecen de color violeta purpúreo.
1.1 Fundamento de la coloración de Gram:
Este método divide las bacterias en dos grupos: Gram positivos y Gram negativas. Al colocar los
agentes como cristal violeta o violeta de genciana y añadirles una solución lugol, se combinan con
algunos componentes de la celular bacteriana que son retenidos por la membrana citoplasmática
cuando se tratan con alcohol acetona; otros, en cambio liberan rápidamente el colorante, por lo
que no aparecerán a la visión microscópica a no ser que se contrasten con algún otro tinte
biológico como safranina o fucsina. Por lo tanto los microorganismos que conservan el cristal
violeta o violeta de genciana se observa de violeta Gram positivo y los que no lo hacen Gram
negativos muestran un color que corresponde al colorante de contraste de color rosado.
1.2 Integridad de la Pared Bacteriana
Si bien se ha demostrado que la pared no toma el colorante, desempeña un importante papel en el

equilibrio de pasaje y retención del colorante primario (Cristal Violeta). Se ha observado que las
células mutiladas en su pared no se tiñen por el Gram y pese a ser Gram positivas, aparecen como
Gram negativas. La pared intacta constituye una barrera importante para la elusión del colorante por
el alcohol. Las células Gram positivas y Gram negativas acumulan el colorante primario por medio
de un eslabón iónico entre los grupos básicos del colorante y los grupos ácidos de la célula.
1.3 Intervención de los componentes químicos:
Es muy probable que la composición química y la permeabilidad de la bacteria, intervengan en la

diferenciación del Gram. Los lípidos, polisacáridos, ácidos grasos, nucleoproteínas y ciertos
ésteres fosfóricos, intervienen en la coloración. La presencia de mucopéptidos en las Gram
positivas y de mayor cantidad de lípidos en las Gram negativas, podrían ser factores para tener en
cuenta. En las Gram negativas los lípidos serian disueltos en gran parte por el alcohol, facilitando
la salida del colorante primario.
1.4 Importancia de Otros Componentes:

a. Lugol: actúa penetrando en ambos tipos de bacterias, formando un precipitado Cristal
Violeta-Yodo.
b. Alcohol-acetona: es en esta etapa donde realmente tiene lugar la diferenciación. En las

Gram negativas, el alcohol no encuentra obstáculos en las capas bacterianas y disuelve
o disocia el precipitado Cristal Violeta-Yodo, el que puede fácilmente escapar al exterior.
Las bacterias Gram negativas al perder el compuesto Cristal Violeta-Yodo, quedan
libres, y pueden tomar el colorante secundario o de contraste (Fucsina o Safranina) y
aparecer de color rosado o rojo. En las Gram positivas, el alcohol atraviesa con dificultad
las capas bacterianas debido a la deshidratación que produce y reduce los poros de la
pared.
c. En consecuencia, la disolución del precipitado Cristal Violeta-Yodo se efectúa

lentamente, y el proceso de arrastre tiene lugar aún con mayor lentitud. Por lo tanto,
después de transcurrido el tiempo usual de decoloración, la mayor parte del precipitado
Cristal Violeta-Yodo se queda en las células y estas pueden observarse en el
microscopio de color violeta purpúreo.
2. COMPETENCIA (S).-
✓ Analiza el fundamento de la tinción de Gram, para la solución de problemas en el campo de
trabajo del profesional.
✓ Interpreta los resultados de la coloración de Gram, reconociendo la morfología y características
tintoriales de los diferentes microorganismos.
✓ Reconoce la importancia de la tinción de Gram en la práctica médica diaria.
1 Microscopio 6 Pzas
3 Mechero bunsen 4 Piezas
4 piceta 4 Piezas
5 Varillas para coloracion 2 Pares
6 Laminas coloreadas: cocos G+ 5 Piezas
7 Laminas Bacilos G+ 5 piezas
8 Laminas cocos G- 5 piezas
INSUMOS
1 Colorantes GRAM 1 kit
2 Aceite de inmersión 1 fco
3 Hisopos de algodon 10 Piezas
4 Baja lengua 10 Piezas
 Preparar un extendido fino en portaobjetos y dejarlo secar al aire
 Fijar el material al portaobjetos de manera que no sea arrastrado durante el proceso de tinción,
pasando el portaobjetos 3 o 4 veces por la llama de un mechero de alcohol. El calor del
portaobjetos debe ser tolerado por las manos del operador.
 Colocar el preparado sobre un soporte de tinción y cubrirlo con Cristal Violeta por 1 minutos.
 Lavar con agua a chorro débil.
 Recubrir la preparación con Lugol de Gram y dejar por 1 minutos.
 Bañar la superficie del portaobjetos con alcohol de 95 % o con Alcohol-Acetona por 30
segundos.
 Lavar con agua a chorro débil hasta que la decoloración sea total, es decir que no escurra más
alcohol coloreado.
 Cubrir la preparación con safranina por 1 minuto.
 Dejar secar.
 Observar al microscopio con lente de inmersión (100X)

El estudiante anotara los resultados y compara con tablas de referencia
7. CUESTIONARIO.-
1. Complete el siguiente esquema:

PASOS METODO GRAM (+) GRAM (-)
1. Colorante básico
1. Mordiente
2. Decolorante
4. Colorante de
contraste
2. Llenar el siguiente cuadro

Género Morfología Gram habitad
Staphylococcus aureus
Streptococcus
pneumoniae
Neisseria meningitidis
Bacillus cereus
Escherichia coli
Clostridium perfringens
Staphylococus epidermidis
Klebsiella ozaenae
Enterobacter aerogenes
Corynebacterium
diphtheriae
PRÁCTICA Nº 4
ESTERILIZACIÓN Y PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:
ESTERILIZACIÓN: Es un proceso por el que se eliminan todas las formas de vida microbiana
(Microorganismos patógenos y no patógenos), incluso las esporas bacterianas, se logra por medios físicos
y químicos (Óxido de Etileno).
Aire caliente
Esto se realiza en los Hornos Pasteur a temperaturas superior a los 180ºC por hora y media. Se pueden
esterilizar pipetas, varillas de vidrio, espátulas de vidrio, material metálico como tijeras, pinzas, polvos
termoestables, etc.
Ebullición
Tomar un recipiente y llenar con agua, proceder a colocar el material que se desee esterilizar ejemplo:
agujas y jeringas de vidrio, pinzas, mangos de bisturí, etc.
Dejar hervir el agua por 30 minutos. Posteriormente apagar y dejar enfriar.
Pasteurización
Este método fue descubierto por Louis Pasteur en 1860 y se emplea para algunos líquidos termolábiles
que no se pueden someter a temperaturas elevadas porque el calor desnaturaliza sus componentes.
Este método de utiliza para disminuir el número de microorganismos patógenos. La temperatura y
el tiempo de pasteurización dependen del microorganismo patógeno más resistente que se quiera
destruir. Se emplea principalmente para lácteos, jugos y cerveza
Tindalización
Se conoce como la esterilización fraccionada y consiste en aplicar temperaturas correspondientes a
90ºC y 100ºC por un tiempo, luego incubar y al día siguiente otra vez el mismo proceso. Esto se
realiza tres veces.
Uso de radiaciones
Se utiliza radiación U.V y radiación ionizante como por ejemplo: la gamma. La radiación U.V puede ser
letal sin embargo no atraviesa eficazmente el vidrio debido a esto se lo utiliza en pocas situaciones;
como en lámparas que se puede colocar en una habitación o en una campana de seguridad biológica.
Se debe tener cuidado en el manejo de radiación U.V.
La radiación gamma es excelente porque penetra profundamente los objetos, con esta radiación se
pueden esterilizar en frío antibiótico, hormonas, suturas, jeringas de plástico.
Filtración
Se emplea cuando la sustancia a esterilizar son alteradas en sus propiedades físicas y químicas si son
sometidas a la acción del calor. Por ejemplo: Enzimas, Toxinas bacterianas, etc.
Óxido de Etileno
Es un gas reactivo, inflamable, incoloro, se combina con el agua dando etilenglicol (Producto toxico).
Tiene gran poder de penetración y no produce calor por lo que se pueden esterilizar materiales
plásticos. Como es muy toxico luego de su ciclo de esterilización se debe dejar el material esterilizado
airear en cámara por 8 horas antes de ser empleado.
METODOS DE ESTERILIZACION
Incineración
Flama directa
Calor seco
(fuego)
Aire caliente
(estufa)
Vapor de agua
Ebullición
Calor húmedo
Metodos fisicos
Pasteurización
Tindalización
Rayos UV
Radiaciones
Rayos Gamma
Filtración
Métodos químicos Oxido de etileno
CONTROLES DE ESTERILIZACION
Estos controles son necesarios para cerciorarnos de la correcta esterilización del material:
➢ Controles Físicos: Son los más simples y menos precisos. Ej: Termómetro, Manómetro, Reloj.
➢ Controles Químicos: Son más precisos. Son cintas que cambian de color con la correcta
esterilización.
➢ Controles Biológicos: Son los más exactos, pero lleva más tiempo realizarlos. Son bolsas selladas
que contienen microorganismos. Estas bolsas se colocan conjuntamente con el material a esterilizar,
y luego de finalizado el proceso de esterilización se cultivan.
MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en condiciones ambientales adecuadas en

los que crecen y se multiplican los microorganismos in vitro con el objeto de aislarlos, identificarlos y
poder realizar otros estudios complementarios.
Constituyentes de los Medios de Cultivo:
Los medios de cultivos están compuestos por:
• Base de amino-nitrógeno (proteína digerida. Ej. Peptona)

• Factores de crecimiento. Ej. Sangre, suero, extracto de levadura
• Sales para tamponamiento. Ej. Fosfato, citrato
• Fuente de energía. Ej. Azúcares e hidratos de carbono
• Sales minerales. Ej. calcio, magnesio, hierro
• Agentes selectivos. Ej. Colorantes, antimicrobianos
• Indicadores. Ej. Rojo fenol
• Agentes gelificantes (para los medios sólidos). Ej. Agar
Clasificación de los Medios de Cultivo:
a. Medios Enriquecidos: Favorece el crecimiento de un determinado tipo de microorganismo,

sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto
Agar Sangre (AS): Permite el crecimiento de Gram (+) y (-) y permite observar el tipo de
hemólisis. Sirve para: Estreptococos, Estafilococos, Haemophillus influenzae, Gardnerella
vaginalis.
Agar Chocolate (AC): Este medio es más rico en nutrientes que el anterior y resulta
adecuado para el cultivo de organismos delicados, por ejemplo Estreptococos.
Müller Hinton (MH): Es utilizado para antibiogramas porque desarrollan tanto Gram (+) y
(-).
b. Medios Selectivos: Permiten el crecimiento de un determinado tipo de microorganismos,

inhibiendo el desarrollo de los demás
Mac Conkey (Mac): Útil para Enterobacterias
Medio de Cisteina y Lactosa deficiente en electrolitos (CLDE):Para bacterias patógenas

en orina.
Azul de Metileno (AME): Los tres son selectivos para Enterobacterias, contienen lactosa
y un indicador, por lo tanto permiten la diferenciación entre gérmenes que fermentan y que
no fermentan la lactosa, una reacción importante para la identificación de las
Enterobacterias.
Salmonella- Shigella (S-S): Para desarrollo de Salmonella o Shigella.
Thayer Martin (TM): Para desarrollo de Neisseria Gonorrhoeae y Neisseria Meningitidis.
Agar sangre con Violeta Cristal: Sirve para la diferenciación de Estreptococos cuando en
la muestra pueden existir otros gérmenes.
c. Medios Para Microorganismos Anaerobios:
Caldo de Tiogliconato:
Caldo para Anaerobios delicados (CAD): Ambos medios contienen agentes reductores
que ayudan a mantener el estado anaerobio .sirven para Clostridium.
d. Medios Especiales: Son aquellos en los que se ponen de relieve propiedades que un
determinado tipo de microorganismo posee.
Sabouraud (Sap): Este medio tiene pH bajo que facilita el desarrollo de hongos e inhibe el
desarrollo de la mayoría de las bacterias.
Lowenstein Jensen y Middlebrook: Ambos medios contienen glicerol y verde malaquita

constituyentes que favorecen el crecimiento de la Micobacterias como el Mycobacterium
tuberculosis.
Agar con Tiosulfito, Citrato, Sales Biliares y Sacarosa (TCBS): Para desarrollo de Vibrio
cholerae.
e. Medios de Identificación y/o Pruebas Bioquímicas:

Kligler o TSI (agar triple, azúcar, hierro): Sirve para observar la fermentación de azúcares
y producción de ácido sulfhídrico.
Urea: Para observar la utilización de urea.
Citrato: Para ver la utilización de citrato.
Indol: Para observar el uso de triptófano.
Fenilalanina: Para ver la utilización de fenilalanina.
f. Medios de Transporte:
Stuart: Para transportar las muestras hasta el laboratorio.
2. COMPETENCIA(S)
✓ Identifica las características de esterilización, métodos físicos como calor seco, calor húmedo
y su uso en el campo de trabajo profesional
✓ Identifica la composición, esterilización y clasificación de los medios de cultivo y su relación
en el campo de trabajo del profesional.
✓ Aplica el métodos esterilización por presión de vapor para la esterilización de los medios
de cultivo
3. MATERIAL, INSUMOS Y EQUIPOS.
Autoclave de Chamberland 1 Pieza
1
2 Mechero Bunsen 4 Pieza
3 Cajas Petri 20 Pieza
4 Pipetas 10ml 3 Pieza
5 Tubos de ensayo con tapa rosca 10 Pieza
6 Frasco lavador o piceta 2 Pieza
7 Balanza 2 Pieza
8 Probeta de 100 ml 2 Pieza
9 Estufa de esterilización 1 Pieza
10 Frascos Scott 250 5 Pieza
11 Ligaduras ( 2 Pieza
INSUMOS
1 Hilo de caña 2 m
2 Algodón 25 gramos
3 Agar Mac Conkey 10 gramos
4 Agar Müller Hinton 10 gramos
5 Agar Kligler 5 gramos
6 Agar EMB 10 gramos
7 Agar citrato de Simmons 5 gramos
8 Agar SIM 5 gramos
9 Papel madera o papel sábana
10 Jeringas de 5 ml 3 Pieza
4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
➢ Trabajo en grupos pequeños
➢ Flama directa
La flama directa empleada para esterilizar el asa bacteriológica, se flamea con un mechero de alcohol o
Bunsen, hasta que el filamento del asa tome color Rojo vivo. De atrás hacia delante.
Calor húmedo
Para esto se utiliza el autoclave.

Se debe colocar agua en el fondo de la caldera. Acomodar el material en la cesta metálica. Adaptar la
tapa y ajustar los tornillos para asegurar el cierre hermético del autoclave. Verificar si el orificio de escape
está abierto. Encender el autoclave y calentar hasta la salida de un chorro continuo de vapor de agua por
la válvula de escape, (para eliminar el aire residual). Cerrar la válvula de escape.
Cuando se alcance la Temperatura deseada por ejemplo 121ºC, regular la temperatura del autoclave,
manteniendo la misma por 15 a 20 minutos. Concluida la esterilización, apagar el autoclave y dejar enfriar
espontáneamente. Esperar que la presión del manómetro marque 0. Abrir la válvula de escape para
asegurarse de que no hay presión en el autoclave.
Abrir el autoclave y retirar el material esterilizado. Dispensar los medios de cultivo en el material de
laboratorio.
En autoclave se pueden esterilizar: material de vidrio, materiales metálicos, medios de cultivos, sustancias
oleosas liquidas, pijamas médicos, hisopos de algodón, etc.
PRECAUCION
No abrir nunca la válvula de escape del autoclave antes de que enfríe, porque la presión elevada podría
proyectar la tapa y el agua caliente hasta el exterior, con riesgo para el operador, además los líquidos
podrían entrar en ebullición expulsando los tapones de algodón y mojarlos.
PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.-

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados, normalmente bajo la
forma de liofilizados que es preciso rehidratar. En general, la preparación de un medio de cultivo se reduce
simplemente a pesar la cantidad deseada del mismo y redisolverla en agua destilada (libre de inhibidores
del crecimiento microbiano) siguiendo las instrucciones del fabricante.

El estudiante registrara en una tabla las características de cada medio preparado.
7. CUESTIONARIO
1. ¿De qué forma se esterilizarían mejor los siguientes materiales

MATERIAL MÉTODO DE TIPO DE OTROS
ESTERILIZACIÓN CALOR-TIEMPO (ESPECIFIQUE)
Pipeta vidrio
Caja petri de vidrio
Medios de cultivo
solido
Guantes
Jeringas desechables
Ropa quirúrgica
Pinzas quirúrgicas
tijeras
Hojas de bisturí
Mango de bisturí
Asa bacteriológica
Sala de quirófano
PRÁCTICA Nº 5
CULTIVO DE MICROORGANISMOS Y SIEMBRA
Las bacterias y los hongos crecen en la superficie de medios nutrientes sólidos, para producir colonias
compuestas por miles de células procedentes de una sola célula implantada en la superficie del agar. Las
colonias de las diferentes especies tienen con frecuencia aspectos característicos, que pueden
proporcionar un indicio sobre su probable identidad. Las colonias de la mayoría de las especies tardan de
12-48 horas en hacerse visibles a simple vista, pero algunos organismos se multiplican con mucha más
lentitud y pueden requerir varias semanas para producir colonias visibles. Los cultivos se pueden hacer
también en medios líquidos (caldo) y el crecimiento se detecta por desarrollo de turbidez. Sin embargo,
no es posible saber si existe más de una especie en un cultivo líquido, ni si existen pocos o muchos
organismos y, por tanto, los medios sólidos tienen más utilidad en microbiología diagnóstica. Es posible
cultivar la mayoría de las especies de bacterias y hongos con importancia médica en medios artificiales,
pero no existe un medio de cultivo universal que permita el desarrollo de todas ellas, y hay algunas
especies que solo pueden cultivarse en animales de experimentación, por ejemplo, Mycobacterium leprae
y Treponema pallidum. Ciertas bacterias imposibles de cultivar en medios artificiales, por ejemplo, las
clamidias y las rickettsias, crecen en cultivos de células. Muchos medios de cultivos están diseñados no
sólo para prestar soporte al crecimiento de los organismos deseados, sino también para inhibir el
crecimiento de los demás, es decir, son medios selectivos.
El cultivo es el proceso de proliferación de microorganismos al proporcionarles un entorno con condiciones

apropiadas. Los microorganismos en proliferación producen réplicas de sí mismos y necesitan los
elementos presentes en su composición química. Los nutrientes deben proporcionar estos elementos en
una forma que sea accesible desde el punto de vista metabólico. Además, los microorganismos requieren
energía metabólica para sintetizar macromoléculas y mantener gradientes químicos esenciales a través
de sus membranas. Los factores que deben controlarse durante la proliferación incluyen nutrientes, pH,
temperatura, aireación, concentración de sales y fuerza iónica del medio.
TÉCNICAS DE SIEMBRA.-
La siembra del material en los medios de cultivo puede hacerse por distintas técnicas:
Agar inclinado
En tubo Pruebas bioquímicas
Pico de flauta
En superficie Barrido con hisopo Antibiograma
En placa Agotamiento por estrías Recuento de colonias
Siembra con pipeta Aislamiento
En tubo Punción o Picadura Pruebas bioquímicas

En profundidad
En placa Siembra con pipeta Recuento de colonias
2. COMPETENCIA (S):
✓ Realiza los diferentes tipos de siembra que se presentan en el campo de trabajo profesional.
✓ Aplica la metodología para realizar un cultivo bacteriológico de una muestra biología
1 Estufa de cultivo 1 Pieza
2 Asa bacteriológica 4 Piezas
3 Aguja bacteriológica 2 Piezas
INSUMOS
Placas con medios de cultivo xx
preparados en la practica anterior
1
Trabajo en grupos de 5, sembrando en los medios de cultivo y cultivando por 24 a 48 h.
Lectura de las placas cultivadas
Inoculación Por Estría en la Placa de Agar:
a. Flamear el asa bacteriológica hasta la incandescencia en el mechero Bunsen, manteniéndola

verticalmente y dejar enfriar.
b. Disponer la caja de Petri sobre la mesa de trabajo detrás del mechero con la tapa hacia abajo.
c. Quitar el tapón del tubo que contiene la muestra con el dedo meñique de la mano derecha.
d. Tomar con el asa bacteriológica una porción del espécimen.
e. Pasar la boca del tubo por la llama del mechero.
f. Colocar el tapón en el tubo que contiene la muestra.
g. Levantar el fondo de la caja y sostener con la mano izquierda.
h. Estriar con el asa cargada en la cuarta parte de la superficie del medio.
i. Girar la placa un cuarto de vuelta y estriar nuevamente arrastrando inicialmente la muestra
tres veces y realizando a continuación estrías perpendicularmente a la siembra anterior.
j. Girar nuevamente la base de la caja sobre la tapa.
k. Colocar nuevamente la base de la caja sobre la tapa.
l. Flamear el asa bacteriológica para esterilizar.
m. Incubar.
Inoculación en Medio de Cultivo en Tubo:
a. Flamear el asa bacteriológica como se describió anteriormente y dejar enfriar.

b. Quitar el tapón del tubo que contiene la muestra.
c. Flamear la boca del tubo en el mechero.
d. Tomar el tubo donde se va realizar la siembra y quitar el tapón.
e. Pasar la boca del tubo por la llama del mechero.
f. Introducir en el tubo de siembra el asa bacteriológica con la muestra hasta aproximadamente un
cuarto de la profundidad.
g. Flamear la boca del tubo en el mechero.
h. Tapar el tubo flamear el asa bacteriológica para esterilizar.
i. Incubar.
Nota: si el material ha sido tomado con hisopo, hacer rodar éste en un tercio de la superficie del medio
de cultivo y continuar como se describe. Trabajar abrasando la llama del mechero Bunsen.

El estudiante registrara en una tabla las características de cada medio preparado.
7. CUESTIONARIO
1. Diga que medios de cultivo utilizaría para cultivar los siguientes microorganismos:
Agente etiológico enfermedades Medio Muestra

Staphylococcus
aureus
Neisseria
gonorrhoeae
Streptococcus
pyogenes
Salmonella typhi
Escherichia coli
Mycobacterium
tuberculosis
Clostridium tetani
Neisseria
meningitidis
Pseudomona
aeroginosa
Giardia lamblia
2. Llene la siguiente tabla:

Muestra biológica Medio
Heces con sospecha de cólera
Sangre con sospecha de salmonella
Aspirado traqueal
Secreción faríngea
Secreción de herida postquirúrgica
(paciente que recibe ciprofloxacina y
ceftriaxona)
PRÁCTICA Nº 6
SEMINARIO DE ANTIMICROBIANOS

Las enfermedades infecciosas, por su número, severidad y frecuencia, constituyen una prioridad de salud
en Latinoamérica y en particular en Bolivia. Los avances en este campo son constantes. En las últimas
décadas se han descubiertos o reconocido nuevos patógenos capaces de producir severas infecciones.
Nuevas alternativas terapéuticas han sido desarrolladas introducidas a la práctica cotidiana incluyendo
múltiples antimicrobianos y vacunas. Sin embargo, el entusiasmo generado por dichos avances ha sido
por fuerza moderado por la aparición de cepas multiresistentes y aparición de enfermedades como el SIDA
para la cual no existe tratamiento curativo.
Por la aparición de resistencia, la mortalidad y morbilidad van en aumento. Es por ello que de este proceso
de rápido cambio, emerge la necesidad de actualizar los conocimientos médicos en infectología en forma
casi constante
2. COMPETENCIA (S)
✓ Clasifica a los antimicrobianos de acuerdo a su mecanismo de acción

✓ Indica el uso de los principales antimicrobianos que se presentan en la resolución de problemas
3. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS.-
• Data display
• Discusión en grupos pequeños.

El estudiante registrara en una tabla los antimicrobianos más empleados
7 CUESTIONARIO
1.- Llenar el siguiente cuadro:
Enfermedad Agente etiológico primera elección Segunda

elección
Faringitis
Meningitis
Osteomielitis
Pielonefritis
Gonorrea
Fiebre tifoidea
Gastroenteritis
Tuberculosis
Acné
Septicemia
2. Investigue el esquema de antibióticos de elección en el tratamiento de la meningitis bacteriana en niños,
mencione el tratamiento de acuerdo con agente etiológico (neumococo, meningococo, tuberculosis, H.
influenzae)
3. Antibiótico de elección para Salmonella Tiphy aislada de un hemocultivo.
PRÁCTICA Nº 7
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS

QUIMIOTERAPIA ANTIMICROBIANA
Una vez aisladas las bacterias en cultivo puro es posible determinar su sensibilidad o resistencia a los
antibióticos en el laboratorio. Eso se suele hacer exponiendo una cepa de los organismos sometidos
a prueba, sembrados en una placa de agar, a los antibióticos contenidos en discos de papel de filtro.
Durante la incubación por 18 a 24 horas, los organismos crecen y se multiplican, y los antibióticos
difunden desde los discos e inhiben el crecimiento alrededor del disco
Esta prueba está basada en la inhibición del crecimiento de un microorganismo en la superficie de un

medio de cultivo inoculado alrededor de un disco de papel de filtro impregnado con un agente
antimicrobiano. El germen aislado se siembra en un medio de cultivo cuya composición asegura el
desarrollo óptimo del microorganismo y no interfiere con la acción del antibiótico, se pone en contacto
con discos de papel de filtro impregnados con agentes antimicrobianos en concentraciones ya
establecidas y se miden los diámetros de las zonas de inhibición del desarrollo del microorganismo.
Los tamaños de las zonas se comparan con las tablas de referencia llamadas CLSI (clinical and
laboratory standards institute actualizado), y los resultados se registran como: S (susceptible o
sensible), I (intermedio) o R (resistente).
2. COMPETENCIA (S)
✓ Interpreta y analiza la repuesta de los microorganismos a los antimicrobianos a través de la

resolución de problemas en relación con su contexto.
✓ Determina la importancia del antibiograma en el análisis microbiológico y su aplicación en el
tratamiento.
✓ Selecciona en antibiótico más adecuado de acuerdo con los resultados de un antibiograma, a
través de la resolución de problemas en relación con su contexto.
1 Estufa de cultivo 1 Piezas
2 MicroPipetas 100 a 1000 ul 2 Piezas
3 Tubos de tapa rosca esteril 10 ml 8 Piezas
4 Asa bacteriológica 3 Piezas
5 Pinza anatómica diente de raton 3 piezas
INSUMOS
1 gentamicina 10 unidades
2 ciprofloxacino 10 Unidades
3 sulfametoxazol trimetoprima 10 Unidades
4 nitrofurantoina 10 Unidades
5 tetraciclina 10 Unidades
6 acido nalidixico 10 Unidades
7 eritromicina 10 Unidades
8 cefalexima 10 Unidades
9 vancomicina 5 Unidades
10 cloranfenicol 5 Unidades
11 ceftriaxona 5 Unidades
12 amoxicilina /acido clavulanico 5 Unidades
13 cefoxitina( 5 unidades
Preparación del inóculo:
La cepa se obtiene de la placa original donde se sembró el material problema. La colonia aislada
se suspende en solución fisiológica de manera de obtener una turbiedad final equivalente al 0,5
de la escala de Mac Farland, es decir, 150 millones de gérmenes por ml
Preparación de la placa:
Antes de la siembra la placa deberá estar a temperatura ambiente.

Siembra en placa:
Por escobilladura: Se distribuye el material uniformemente en tres direcciones, con hisopo de

algodón previamente mojado en el inóculo y eliminado el exceso de caldo por presión contra las
paredes del tubo.
Aplicación de los Discos:
Se los coloca sobre la superficie, oprimiéndolos suavemente contra ella. La distancia que separe
los discos debe ser suficiente para impedir una superposición de los halos de inhibición, y nunca
será inferior a 1,5 cm del borde de la placa.
Incubación:
Debe ser de 18 a 24 horas a 37 C, colocada la cápsula en posición invertida. Dependiendo del
tipo de bacteria identificada.
Lectura e Interpretación de los Resultados:

Con una regla se miden los halos de inhibición al milímetro más cercano, recurriéndose luego a
la tabla correspondiente para determinar si el germen es sensible, resistente o intermedio para
cada antibiótico. Así cepa sensible es aquella que, después de ser tratada en el curso de una
infección general a las dosis habituales del antibiótico, responde favorablemente al tratamiento,
cepa intermedia es la que en las mismas condiciones necesita dosis superiores a las habituales
para obtener una respuesta terapéutica adecuada y cepa resistente es la que en las condiciones
antedichas no se obtiene ninguna respuesta terapéutica.
5. . TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA


Medición de los halos de inhibición y comparación con tablas de referencia
7. CUESTIONARIO.-
Interprete los resultados de los siguientes antibiogramas comparándolos con la tabla que aparece al
final e indique el tratamiento antimicrobiano adecuado:
1. Paciente femenino de 24 años, se solicita urocultivo el cual reporta crecimiento de Escherichia coli,
el antibiograma:
• Trimetoprim y Sulfametoxazol: Resistente

• Ceftriaxona: Sensible
• Ampicilina: Resistente
• Gentamicina: Sensible
• Acido Nalidixico: Sensible
• Amikacina: Sensible
• Nitrofurantoína: Sensible
¿Que antibiótico elige? Debe justificar su elección ( vía de administración, costo, toxicidad, etc)
2. Paciente masculino de 18 años, en un coprocultivo se Salmonella tiphy , el antibiograma reporta:
• Trimetoprim y Sulfametoxazol: Resistente

• Cloranfenicol: Sensible
• Gentamicina: Sensible
• Ampicilina: Resistente
• Ciprofloxacina: Sensible
• Amoxicilina- acido clavulanico: Sensible
¿Que antibiótico elige? Debe justificar su elección (vía de administración, costo, toxicidad, etc.)
El paciente le solicita que como antibiótico de gentamicina, porque lo tiene en su casa usted que le
respondería?
3. Paciente femenino de 9 años, con faringoamigdalitis, refiere 3 episodios al año. Solicita estudio de
secreción faríngea: especie encontrada Streptococcus pyogenes, el antibiograma reporta:
• Penicilina: sensible
• Eritromicina: sensible
• Cefalexina: sensible
• Vancomicina: sensible
¿Cree usted que está justificado un antibiograma en este caso, porque?

¿Cuál es la conducta que seguiría con su paciente?
4. Paciente femenino de 28 años, embarazada. Muestra de flujo vaginal, reporta Enterococcus ssp
• Es necesario un antibiograma, por que?
• Que tratamiento indicaría?
PRÁCTICA Nº 8
FLORA NORMAL DEL CUERPO
La población comensal normal de microorganismos participa en la metabolización de los productos

alimentarios, proporciona factores esenciales para el crecimiento, protege frente a las infecciones
provocadas por gérmenes de alta virulencia y estimula la respuesta inmunitaria. En ausencia de estos
microorganismos, la vida tal como la conocemos sería del todo imposible.
La flora microbiana presente tanto en la superficie como en el interior del organismo humano se
encuentra en un continuo estado de flujo determinado por factores diversos como edad, dieta, estado
hormonal, estado de salud e higiene personal. Mientras que el feto humano se desarrolla en un
ambiente estéril y protegido, el recién nacido se ve expuesto a microorganismos procedentes tanto
de la madre como del
medio ambiente. Lo primero que colonizan los microorganismos es la piel del lactante, seguida de la
bucofaringe, el aparato digestivo y otras mucosas. Asimismo, esta población de microorganismos
experimenta cambios continuos durante toda la vida de una persona. Los cambios del estado de salud
también pueden alterar de forma espectacular el delicado equilibrio que existe entre el ser humano y
los microorganismos heterogéneos que subsisten en su interior. Por ejemplo, la hospitalización de un
paciente puede hacer que microorganismos normalmente no virulentos de la bucofaringe sean
sustituidos por bacilos gramnegativos (p. ej., Klebsíella, Pseudomonas) que invaden los pulmones y
producen la aparición de una neumonía. De igual modo, la proliferación de Clostrídium difflcile en el
aparato digestivo se encuentra controlada por las bacterias presentes en el intestino.
La comprensión de la microbiología médica exige conocer no sólo las diferentes clases de
microorganismos existentes, sino también su predisposición a causar enfermedades. Unas pocas
infecciones se deben a patógenos estrictos, es decir, microorganismos que se asocian siempre a
enfermedad en el ser humano. Algunos ejemplos de patógenos estrictos y la enfermedad que provocan
son Mycobacte-ríum tuberculosis (tuberculosis), Neisseria gonorrhoeae (go-norrea), Francisella
tularensis (tularemia) y otros.
2. COMPETENCIA (S)
✓ Identifica la flora normal presente en la piel y mucosas

✓ Determina la importancia de la flora normal del cuerpo
✓ Diferencia la flora normal de la patógena
1 Microscopios 6 Piezas
INSUMOS
1 Hisopos esteriles 15 piezas
2 Bajalenguas 10 Piezas
4 Varrillas de tinción 1 Par
5 Aceite de inmersión 5 ml
Trabajos en grupos de 5 estudiantes para realizar una tinción de Gram y observar la flora normal de
la faringe
6.MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS
El estudiante elaborara un cuadro comparativo de lo observado
7. CUESTIONARIO
1.- llene el siguiente cuadro
Microorganismo Flora normal del Que lugar del

cuerpo Si o No cuerpo
Staphylococcus
epidermidis
Peptostreptoccus
Corynebacterium
Enterococcus
Difteroides
Fusobacterium
Candida albicans
Escherichia coli
Enterobacter
Neiserria
Staphylococcus
aureus
Propionobacterium
Neisseria
meningitidis
Acinetobacter
Streptococcus alfa
hemoliticos
Mycoplasma
Moraxella catarrhalis
Streptococcus
pyogenes
PRÁCTICA Nº 9
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE COCOS GRAM POSITIVOS Y COCOS GRAM NEGATIVOS
Los cocos Gram positivos son células esféricas que se tiñen fundamentalmente con colorantes
derivados de la anilina, se acumulan formando cadenas o racimos. Pertenecen a dos géneros:
Staphylococcus y Streptococcus. En las placas de agar sangre, éstos crecen formando colonias
características específicas que posibilitan la clasificación preliminar del género.
La capacidad de los Staphylococcus de producir una enzima llamada catalasa permite diferenciarlos
de los Streptococcus , que se caracterizan por ser catalasa negativa.
STAPHYLOCOCCUS.-
Este género es el responsable de la mayoría de las infecciones supurativas y de gran porcentaje de

casos de envenenamiento alimentario. Los más comunes en la patología humana son: St. aureus, St.
Epidermidis, St. Saprophyticus y St. Haemolyticus.
a. Muestras:
Heridas varias, en lesiones cerradas se recolecta por punción, en casos de meningitis LCR.
b. Examen Microscópico:
Se presentan como células esféricas, Gram positivas, agrupadas en racimos. Este examen es
presuntivo.
c. Cultivo:
Se realiza en Agar sangre donde producen hemólisis y en agar manitol. Se debe especificar
para que bacteria es el cultivo.
d. Prueba de Coagulasa:
Esta prueba se basa en la capacidad que poseen los estafilococos patógenos de producir la
enzima coagulasa que transforma el fibrinógeno en fibrina. Esta prueba es positiva si se forma
una coagulo. En un tubo se realiza una suspensión del germen y se agrega 1 ml de plasma
citratado estéril y se incuba a 37 C y se observa a la hora y a las 4 horas. Esta prueba sólo
es positiva para St. Aureus.
e. Prueba de Catalasa:
Se realiza con un asa estéril con la que se recoge del centro de la colonia y se coloca sobre
un portaobjetos y se agrega una gota de peróxido de hidrógeno al 30% con pipeta estéril o
gotero. Observar la formación de burbujas, si hay burbujas es catalasa positiva y son
Staphylococcus. Solo confirma género.
f. Resistencia a la Novobiocina:
Es para confirmar al St. saprophyticus, pues es el único que presenta resistencia a este agente
antimicrobiano.
STREPTOCOCCUS.-
Son células esféricas, Gram positivas, agrupadas es cadenas o en pares. Pueden producir distintos
tipos de hemólisis:
Estructura antigénica de estreptococo
Hemólisis: Se produce destrucción parcial de eritrocitos alrededor de las colonias, dando una
coloración verde-marrón en el medio agar sangre géneros
Hemólisis: Se observa una zona clara decolorada alrededor de la colonia en la placa de agar sangre
por destrucción total de eritrocitos
Hemólisis: No hay actividad hemolítica, hay falta de hemólisis
a. Muestras:
Nariz, garganta, lesiones de piel, LCR, esputo, secreción bronquial, etc.
b. Examen Directo:
Células esféricas u ovoideas dispuestas en cadenas, Gram positivos. Esto no permite

diferenciar especies patógenas de las no patógenas.
c. Cultivo:
Se realiza en agar sangre de carnero.
Prueba de susceptibilidad a la Bacitracina:
Se basa en la inhibición del crecimiento del germen por la Bacitracina que difunde desde
discos de papel de filtro. La prueba es utilizada para la identificación de Streptococcus beta
hemolítico del grupo A. (Streptococcus pyogenes)
Streptococcus pyogenes
Causa faringitis, escarlatina, pyoderma, erisipela, celulitis, fascitis necrosante, síndrome del
shock toxico estreptocócica, septicemia puerperal, linfangitis, neumonía, infecciones no
supurativas fiebre reumática y glomérulo nefritis.
Streptococcus pneumoniae:
Causa neumonía, otitis, sinusitis, bronquitis, meningitis y otros procesos. Es una célula esférica,
Gram positiva, lanceolada y agrupada en pares y en cadenas. Poseen una cápsula formada de
polisacáridos que permite una fácil tipificación con antisueros. Las muestras pueden ser: esputo,
LCR, hisopado de oído, etc. Se cultiva en agar sangre dando colonias pequeñas, redondas y 
hemolíticas. Para diferenciarlo del Streptococcus viridans se realiza la prueba de Optoquina (utiliza
discos de Etilhidrocupreína) y la prueba de solubilidad en bilis (utiliza Deoxicolato de sodio).
Streptococcus viridans
Causa formación de abscesos en tejidos profundos, septicemia en pacientes neutropenicos,

endocarditis subaguda, caries dental, neoplasias del aparato digestivo, meningitis.
Los microorganismos integrantes del género Neisseria, son cocos que tienen forma característica de
granos de café o arriñonada. Las especies patógenas para el hombre son: Neisseria gonorrhoeae
(gonorrea) y Neisseria meningitidis (meningitis cerebro espinal).
Ambas especies de Neisserias son semejantes en su morfología, se encuentran de manera típica

dentro de los polimorfonucleares.
Estructura de N. gonorrhoeae, mostrando los pelos (fimbrias) y las tres capas de la envoltura celular.
(Tomado de Brooks y col.9).
NEISSERIA MENINGITIDIS.-
Los meningococos son aislados comúnmente de la garganta o nasofaringe de portadores

asintomáticos. Puede causar cuadros de meningococemia, siendo la meningitis la complicación más
grave. Las muestras que se obtienen son: nasofaringe, LCR. En el examen directo se observan
diplococos lanceolados, Gram negativos intra o extracelulares en los polimorfonucleares. Se cultiva en
agar Thayer Martin. Se realiza la prueba de Oxidasa que se basa en que los miembros del género
Neisseria producen una enzima oxidasa que en presencia del aire actúa sobre ciertas aminas
aromáticas produciendo compuestos coloreados. También se realiza la prueba de la fermentación de
azúcares, que es importante cuando se desea confirmar el diagnóstico. La Neisseria meningitidis
fermenta la glucosa y la maltosa.
NEISSERIA GONORRHOEAE.-
El gonococo es el agente etiológico de la Gonorrea. La infección se contrae por regla general mediante
relaciones sexuales. Las complicaciones más frecuentes son: orquitis, epididimitis, cervicitis, proctitis,
etc. Las muestras obtenidas son las siguientes: en el hombre (secreción uretral, en los casos crónicos
tratados o asintomáticos es necesario un masaje prostático previo. Se puede recolectar el primer
chorro de orina matinal), en la mujer (secreción de uretra o endocervix). Dependiendo del hábito sexual
del paciente también se puede obtener muestra de: recto, ojo y garganta. En el examen directo se
observan diplococos lanceolados, Gram negativos, preferentemente intracelulares. El cultivo se realiza
en agar Thayer Martin. Son oxidasa positiva. Fermenta solamente la glucosa.
2. COMPETENCIA(S)
✓ Explica los procedimientos empleados para la obtención de muestras destinadas a la investigación

de Staphylococcus, Estreptococos y Neisserias
✓ Determina la importancia clínica de los cocos Gram positivos y negativos .
✓ Indica el fundamento de las pruebas bioquímicas utilizadas en el laboratorio para la identificación
de estos gérmenes.
✓ Indica tratamiento y profilaxis de las diferentes patologías producidas por estos microorganismos
3. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS.-
1 Asas bacteriológicas 4 Piezas
2 Microscopio 6 Piezas
4 Cajas petri 10 Piezas
5 Mechero bunsen 4 Piezas
7 Autoclave 1 Piezas
8 Frasco Scott 250 ml 2 Piezas
9 Espátula 2 Piezas
10 Balanza 2 Piezas
11 Probeta de 100 ml 2 Piezas
12 Hornilla 1 Piezas
13 Piceta de agua 2 Piezas
INSUMOS
Laminas teñidas de Estafilococo y 5
1 estreptococos Piezas
2 Peróxido de hidrógeno 30 % 5 Ml
3 Colorantes de Gram 1 kit Kit
4 Base de Agar sangre 10 gramos
5 Hisopos esteriles 10 Piezas
6 Baja lenguas 10 Piezas
7 Jeringas 5 ml 5 Piezas
8 Algodón 20 Gramos
9 Alcohol al 70 %( 10 ml
• Trabajo en grupos pequeños.

• Observación al microscopio de las placas teñidas
• Realización de la prueba de la catalasa.
• Realización de la prueba de la coagulasa
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA

6. MEDICION; CALCULOS Y GRAFICOS
El estudiante medirá los halos de inhibición y compara con tablas referencia

7. CUESTIONARIO.-
1. Enumere 5 enfermedades y tratamiento para Staphylococcus aureus.

2. Cite y explique los mecanismos de resistencia de Staphylococcus aureus.
3. Investigue la sensibilidad a los antimicrobianos actualmente de Staphylococcus aureus.
4. Enumere 5 enfermedades y tratamiento actual para Streptoccocus pyogenes.
5. Cite 3 fármacos para el tratamiento de neumonía neumococica.
6. Enumere 5 enfermedades y tratamiento para Streptococcus viridans.
7. Un frotis de LCR reporta diplococos gram positivos intracelulares lanceolados y abundantes PMN
y MN, ¿Cuál sería sus sospecha diagnostica y posible tratamiento?.
1. Como diagnostica una gonorrea (tipos de muestras y la observación microscópica en una infección
aguda y crónica).
2. Enumere 5 fármacos actuales para el tratamiento de la gonorrea
3. mencione los factores de riesgo y medidas preventivas para la gonorrea
4. ¿Cuáles son los agentes etiológicos de la meningitis?
5. Realiza un esquema de tratamiento para la meningitis y justifique
6. Un frotis de LCR reporta diplococos gram negativos intracelulares y abundantes
polimorfonucleares (PMN), ¿Cual sería sus sospecha diagnostica y posible tratamiento?.
7. Un frotis de secreción vaginal reporta diplococos gram negativos intracelulares sin
polimorfonucleares. ¿Cual sería sus sospecha diagnostica y posible tratamiento?
8. Un frotis de secreción uretral reporta diplococos gram negativos intracelulares y abundantes PMN,
¿Cual sería sus sospecha diagnostica y posible conducta?
9. Mencione los antibióticos, medio de cultivo para realizar antibiograma y tratamiento para las
siguientes bacterias ( si corresponde)
a. S. Pyogenes aislado de secreción faríngea.
b. S, aureus aislado de un paciente con prótesis de rodilla.
c. S. pneumoniae aislado de líquido pleural en un niño de 3 años y que recibía ceftriexona.
d. N. meningitidis aislada de LCR en un paciente inmunodeprimido.
e. N. gonorrheae aislada de secreción uretral de un paciente de 50 años y que recibía hace 3 días
atrás azitromicina. Por que cree usted que recibía este antibiótico?.
PRÁCTICA Nº 10
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM POSITIVOS ESPORULADOS Y NO

ESPORULADOS
Estos dos géneros pertenecen a la familia Bacillaceae que está formada por bacilos grandes y
esporulados. El esporo está formado por una parte central, rodeado de una capa de peptidoglucano y
otra externa con ácido dipicolínico. La mayoría son móviles, aunque hay especies inmóviles. Son
aerobios facultativos y anaerobios.
BACILLUS ANTHRACIS.-
La enfermedad que produce se denomina Carbunco y es una zoonosis (enfermedad transmitida por
un animal vertebrado al hombre). Se obtiene material de la zona vesiculosa de la pústula o por punción
del edema. Se efectúan extendidos, coloración de Gram y cultivos. La presencia de bacilos Gram
positivos, en cadenas y capsulados, nos da casi la seguridad de un diagnóstico positivo.
Son bacilos rectos, esporulados, Gram positivos, rodeados por una cápsula que puede envolver a un
solo bacilo, aunque lo más común es que rodee a varios. Es un germen de desarrollo fácil, no es
exigente, aerobio. Desarrolla en caldo nutritivo o agar nutritivo.
CLOSTRIDIUM TETANI.-
Es el agente etiológico del Tétano. Se obtiene material de las heridas y debe ser obtenido en
profundidad con jeringa o con hisopo cuidando la anaerobiosis. Son bacilos de lados paralelos y
extremos redondeados, Gram positivos, esporulado (la espora deforma la bacteria como palillo de
tambor). Es un germen anaerobio estricto. Se lo puede cultivar en agar sangre con tiogliconato, donde
produce  hemólisis que luego pasa a  hemólisis por la producción de tetanolisina.
CLOSTRIDIUM BOTULINUM:
Produce Botulismo. El material a cultivar puede ser: restos de alimentos y vómito del paciente
intoxicado. La toxina puede manifestarse por Hemoaglutinación pasiva o RIA. Son bacilos grandes
aislados o en cadenas cortas, ciliado, esporulado, Gram positivo, anaerobio. Su cultivo puede hacerse
en: caldo nutritivo, agar nutritivo en anaerobiosis
CLOSTRIDIUM PERFRINGENS.-
Es el agente etiológico de la Gangrena gaseosa debido a infecciones asociadas con heridas de

accidentes o post operatorios con complicaciones. También puede producir Intoxicaciones
alimentarias por ingestión de carne dando: diarrea, sin vómito ni fiebre que suele durar solo 1-2 días.
Son bacilos gruesos, inmóviles, capsulados, Gram positivos, no son anaerobios estrictos ya que
pueden desarrollarse en presencia de pequeñas cantidades de oxígeno.
CLOSTRIDIUM DIFFICILE.-
Es el productor de Colitis Pseudomembranosa

2. COMPETENCIA (S)
✓ Indica que tipos de muestras recolectaría para las patologías producidas por estos
microorganismos.
✓ Determina la importancia clínica de los bacilos Gram positivos en la resolución de problemas que
se presentan en el campo de trabajo del profesional.
✓ Establece tratamientos y profilaxis adecuados para las patologías producidas por estos
microorganismos.
3. MATERIALES, INSUMOS Y REACTIVOS.
1 Microscopio 6 Piezas
INSUMOS
Láminas teñida. Clostridium 5
1 perfringens, Laminas
Clostridium tetani 5 Laminas
2
3 Bacillus cereus 5 Laminas
4 Aceite de inmersión 2 laminas
• Trabajo en grupos pequeños.
• Observación al microscopio. De placas teñidas
• Observación de placas bacilos Gram positivos
5. DURACION DE LA PRACTICA

El estudiante registrara las características de bacilos Gram positivos y comparara con tablas de
Referencia
7. CUESTIONARIO.-
1. .- Llene el siguiente cuadro
enfermedad Agente etiológico Tratamiento prevención
2.- Resuelva casos clínicos planteados por el docente.

PRÁCTICA Nº 11
IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM NEGATIVOS FERMENTADORES
Los bacilos Gram negativos pertenecientes a la familia de la Enterobacterias son los microorganismos
que con más frecuencia se hallan en el laboratorio de microbiología clínica. No son esporulados,
pueden ser móviles o no, reducen los nitratos a nitritos, son oxidasa negativa. Como su nombre lo
indica, miembros de este grupo son naturales del tracto gastrointestinal sin embargo, las
Enterobacterias se pueden recuperar de todos los sitios anatómicos. La morfología observada por la
coloración de Gram no es útil para separar a las Enterobacterias de otros microorganismos Gram
negativos, ni para identificar la especie. La clasificación está basada en la determinación de la
presencia o ausencia de diferentes enzimas. Los sustratos sobre los que estas enzimas actúan son
incorporados al medio de cultivo, junto con un sistema indicador que detecta ya sea la utilización del
sustrato o la presencia de productos metabólicos específicos.
Todos los miembros de la familia Enterobacteriaceae exhiben las siguientes características

bioquímicas:
a. Metabolizan la glucosa por fermentación.

b. Carecen de actividad de la citocromo-oxidasa (son oxidasa negativa).
c. Reducen los nitratos a nitritos.
En cuanto a la selección de los medios de cultivo se pueden elegir:
a. Agares de aislamiento primario: Mac Conkey y EAM, todos estos medios contienen en general
peptona, lactosa y un indicador de pH.
b. Agares de aislamiento selectivo: Salmonella-Shigella, CLDE y Agar sulfito de bismuto. Los
medios se hacen selectivos agregándoles a sus fórmulas inhibidores
c. Agares de enriquecimiento: Caldo de selenito. Se utilizan para acrecentar el desarrollo de
ciertas especies bacterianas inhibiendo el de los microorganismos superfluos.
Pseudomona
a. Bacilo Gram negativos, se dispone en pares.

b. Móviles, no esporulados.
c. Distribuyen ampliamente en suelo, agua, plantas, animales, materia orgánica en
descomposición, en la vegetación
d. Medio ambiente hospitalario reservorio húmedo como alimentos, sumideros, equipo de terapia
respiratoria, soluciones desinfectantes, equipos de diálisis.
e. Medios de cultivo produciendo olor dulzor semejante a jugo de uva o de maíz, formando colonias
redondas y lisas de color verde fluorescente
f. Oxidasa positivo. Aerobios, crecen a 37ºC.
g. Pigmentos: piocianina (azul), fluoresceína ( Amarillo), pioverdina (verde amarillento), piorrubina
(pardo rojizo), piomelanina(negro)
2 COMPETENCIA (S):
✓ Indica que tipos de muestras recolectaría para las patologías producidas por estos
microorganismos.
✓ Determina la importancia clínica de los bacilos Gram positivos y Enterobacterias a través de la
resolución de problemas
✓ Interpreta adecuadamente un informe microbiológico sobre dicho grupo bacteriano y su relacon
con el campo de trabajo del profesional
✓ Establece tratamientos y profilaxis adecuados para las patologías producidas por estos
microorganismos.
3 MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS.
1 Portaobjetos 10 piezas
2 Cajas Petri 20 piezas
3 Asas bacteriológicas 3 piezas
4 Microscopios 6 piezas
5 Frascos Scott de 250 ml 4 piezas
6 Autoclave 1 piezas
7 Espátula ( 2 piezas
8 Balanza 2 piezas
9 Probeta 100ml 2 piezas
10 Piceta de agua 2 piezas
INSUMOS
1 Láminas teñidas de Escherichia coli, 5 Piezas
2 klebsiella 5 Piezas
3 enterobacter 5 Piezas
4 pseudomona 5 Piezas
5 Agar Mac Conkey 10 gramos
6 Agar EMB 10 Gramos
7 Agar de CLED 10 Gramos
8 Agar verde brillante 10 Gramos
10 Papel aluminio 3 metros
4 TECNICA O PROCEDIMIENTO
Cultivo de orina, heces, líquidos orgánicos, heridas.
Identificación bioquímica:
a. Kligler o TSI:
Esta prueba sirve para ver la acción de las Enterobacterias sobre los azúcares, el azufre de
los aminoácidos y la producción de gas. La aparición de coloración amarilla tanto en
profundidad como en superficie indica que el microorganismo fermenta la lactosa, la aparición
de color rojo en la superficie y amarillo en profundidad indica que el microorganismo no
fermenta la lactosa.
b. Test de Urea: Sirve para ver la presencia de ureasa. Color púrpura indica una prueba
positiva.
c. Test de Citrato: Sirve para observar la utilización del citrato. Una coloración azul intensa es
un resultado positivo.
d. Test de SIM: Para ver la producción de ácido sulfhídrico, producción de indol y motilidad.
Dos periodos académicos de 50 minutos
6. MEDICION, CÁLCULO Y GRAFICOS
El estudiante registrara las características bioquímicas de enterobacterias y comparara con tablas

de
Referencia
7. CUESTIONARIO
1.- Llene el siguiente cuadro
Agente etiológico Enfermedad Tratamiento

Salmonella typhi
Escherichia coli
Shigella dysenterie
Pseudomona aeroginosa
Yersinia enterocolitica
Helicobacter pylori
Klebsiella pneumoniae
Serratia marcenscens
Vibrion cholerae
Campylobacter yeyuni
Klebsiella oxytoca
2.- Paciente femenino de 85 años con diabetes y fractura de cadera, se encuentra en cama durante los
últimos 3 meses. El resultado de la prueba a la glucosa en sangre es de 250 mg/ dl y su médico solicita
análisis de orina y urocultivo.
Los resultados son:
Examen químico:
Color: Amarillo oscuro
Aspecto: Turbio
Densidad. 1.025
pH. 7.5
Examen Microscópico: Células descamadas 10 x campo
Leucocitos 30 x campo
Levaduras abundante
Flora microbiana abundante
Cultivo: Germen aislado: Proteus mirabilis
Numero de colonias 100.000 colonias/ ml
Antibiograma:
Sensible: Acido nalidixico, nitrofurantoina, ciprofloxacino
Resistente: Acido pipemidico, norfloxacino, ampicilina, cefalexina, ceftriaxona,ceftazidima, gentamicina,
sulfatrimetoprima
a) Porque la infecciones por levaduras son comunes en los pacientes con diabetes mellitus.
b) Que antibiótico elige para realizar el tratamiento a la paciente y cual la dosis.
c) El antibiótico que elige que mecanismos de acción tiene
d) La bacteria aislada del cultivo tienen relación con el pH de la orina. Fundamenta
PRÁCTICA Nº12
UROCULTIVO Y COPROCULTIVO
En general, se define como una infección urinaria que afecta el sistema colector y los riñones
(pielonefritis) o tan solo a la vejiga (cistitis). En los últimos años se prefiere utilizar el término infección
urinaria a pielonefritis o cistitis, ya que en muchos de los casos el médico no tiene la seguridad, si la
infección se halla limitada a la vejiga o involucra también uno o ambos riñones. La infección de la uretra
sola o Uretritis se relaciona frecuentemente con enfermedades de transmisión sexual.
a. Factores defensivos:
❖ pH urinario: ácido, evita la proliferación de gérmenes y evita que los gérmenes de la uretra
anterior y media lleguen a la uretra posterior que es estéril
❖ Frecuencia miccional: a medida que aumenta el tiempo de retención urinaria existe mayor
tiempo para colonizar
❖ Urea: la concentración en que se elimina urea por orina es toxica para las bacterias
❖ Tonicidad muscular
❖ Presencia de Ig As
❖ Poder bactericida del líquido prostático en el hombre
❖ Osmolaridad: cuando esta aumentada predispone a infecciones urinarias. Por ello cuando
existe infección urinaria se debe tomar mucho liquido
b. Factores predisponentes:
❖ Retención urinaria: puede deberse a obstrucción por cálculos o divertículos o reflujo
vesicoureteral (común en niños y niñas)
❖ Edad y sexo: en la lactancia por el uso de pañal es igual la frecuencia de infecciones en niños
que en niñas. En la infancia son más frecuentes las infecciones urinarias en las niñas por
poseer una uretra más corta. En ancianos existe más frecuencia en hombre debido a
hipertrofia prostática que obstruye los conductos quedando restos de orina. Con el comienzo
de la actividad sexual aumenta la frecuencia de infecciones urinarias
❖ Embarazo: el pH urinario es alcalino, la vejiga se aprisiona, el tono muscular aumenta
❖ Presencia de obstrucciones: obstrucciones en uréteres congénitos o anatómicos y presencia
de cálculos urinarios
❖ Presencia de instrumentación: como sondas.
❖ Presencia de bacteriuria como complicación de otras enfermedades: Diabetes (existe
glucosuria y la innervación de la vejiga esta alterada)
c. Indicaciones previas:
Recordar recolección y valores de toma de muestra de MBL I.
d. Falsos positivos:
❖ Muestra no refrigerada y mantenida a temperatura ambiente
❖ Contaminación por NO realizar higiene
❖ NO recolección de chorro medio
e. Falsos negativos:
❖ NO suspension de antibiótico
❖ Restos de jaboncillo
❖ Orina con menos de 3 horas de retención
❖ Orina refrigerada por más de 48 horas
Se entiende por diarrea al aumento de la masa de las heces, la frecuencia de las deposiciones o del
contenido líquido de estas, se acompaña con frecuencia con dolor, urgencia, molestias perianales e
incontinencia. Una diarrea con poco volumen, dolorosa y hemática se conoce como disentería.
Recordar:
❖ La frecuencia con que aparecen bacterias causantes de diarreas en los cultivos solo es del
30%.
❖ Gran porcentaje de diarreas es de origen viral
❖ En muchos casos el régimen dietario, el reposo transitorio del tubo digestivo y la medicación
sintomática resulta útil.
❖ Tener en cuenta que algunos antibióticos tiene asociados caolín o carbón o algún otro
antidiarreico.
a. Flora patógena: (agentes más comunes implicados en diarreas)
❖ Salmonella
❖ Shigella
❖ Escherichia coli (algunas)
❖ Vibrio cholerae
❖ Yersinia enterocolitica
❖ Staphylococcus aureus
❖ Pseudomona aeruginosa
❖ Candida albicans
❖ Rotavirus
❖ Giardia
❖ Ascaris
❖ Trichuris
❖ Entamoeba
CLASIFICACIÓN DE LAS DIARREAS
❖ DIARREA ACUOSA: La diarrea acuosa puede ser secretora u osmótica y la diarrea con
sangre puede ser invasiva o no invasiva.
❖ DIARREA SECRETORA: Se define como un cuadro diarreico, que se caracteriza por la
secreción de líquido intestinal, que es isotónico con el plasma y persiste durante el ayuno.
❖ DIARREA OSMÓTICA: La diarrea osmótica es aquélla que se produce por un incremento
de solutos (carbohidratos) en el lumen intestinal, y disminuye con el ayuno.
❖ DIARREA CON SANGRE O EXUDATIVA: La diarrea con sangre se presenta con una
elevada frecuencia en niños menores de 5 años. Constituye un problema de salud en los
países subdesarrollados y puede expresarse con manifestaciones clínicas severas que
pueden llevar al paciente a la muerte y, en otras ocasiones, su cuadro clínico es más
benigno por tener sus agentes causales una vida autolimitada. Es la emisión de heces
purulentas y hemáticas que persisten con el ayuno, son frecuentes las deposiciones pero
su volumen puede ser pequeño o grande. De una manera práctica, la diarrea con sangre
puede ser invasiva y no invasiva.
❖ DIARREA POR MALA ABSORCIÓN: Son deposiciones con heces voluminosas, con osmolaridad
aumentada que son el resultado de nutrientes no absorbidos y exceso de grasa (esteatorrea),
usualmente disminuye con el ayuno. (Giardiasis)
❖ DIARREA POR MOTILIDAD ALTERADA: Características muy variables de las deposiciones,
volumen y consistencia; Deben descartarse otras formas de diarrea. (Colon irritable, estrés,
medicamentos, etc.)
▪ De acuerdo con el tiempo de evolución las diarreas pueden clasificarse en;

❖ Agudas: Cuando la diarrea tiene una evolución de menos de 15 días.
❖ Crónicas: Cuando la diarrea persiste por más de 28 días.
2. COMPETENCIA(S):
✓ Identifica los gérmenes que causan infecciones urinarias y su relación con el contexto de trabajo
que le permita diferentes formas de intervención clínica al problema.
✓ Emplea la técnica adecuada para efectuar Urocultivo, como proceso de análisis de casos clínicos
✓ Determina la importancia clínica del Urocultivo a través de la resolución de problemas
✓ Reconoce las diferentes clases de diarrea y su tratamiento, a través de la resolución de problemas
que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
✓ Analiza la importancia para efectuar un coprocultivo en la práctica médica diaria, a través de la
resolución de problemas que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
2 Asas bacteriológicas 3 piezas
INSUMOS
Placas Agar de CLED preparadas en Preparadas
la práctica anterior clase
1 anterior
Placas de agar Shigella- Salmonella Preparadas
clase
2 anterior
Se realizará siembra de la orina obtenida por micción media según las indicaciones del práctico de
medios de cultivo y cultivo de muestras, para ello el alumno deberá saber todos los tipos de siembras
que pueden realizarse y deberá recordar de Microbiología I como debe recolectarse un uro cultivo
Pasos a realizar:
• Análisis físico químico de orina (pH, aspecto, color, densidad, nitritos)
• Sedimento en fresco (leucocitos, eritrocitos, células descamadas, flora microbiana)
• Dilución de la orina
• Siembra de la orina
• Incubación en estufa de cultivo
• Recuento de colonias
• Identificación
• Antibiograma

El estudiante registrara las bacterias causantes de infección urinarias y realizara una gráfica de
comparación
7. CUESTIONARIO.-
1. Enumere los agentes etiológicos responsables de las infecciones urinarias

2. En caso de sospechas de infecciones urinarias que examen solicita y que instrucciones debe dar
al paciente.
3. Caso clínico: Paciente femenino de 30 años tratada por una infección urinaria con un
antimicrobiano de amplio espectro por 7 días, trae una muestra de orina al laboratorio del hospital
Univalle de “urgencia” a las 4:00 p.m. El técnico que recibe la muestra, refrigera hasta el día
siguiente. Los resultados del laboratorio:
Examen químico:
Color: Ámbar
Aspecto: Turbio
Examen microscópico: Células descamadas 10 x campo
Leucocitos 5 x campo
Flora microbiana abundante
Cultivo: negativo en 48 horas de incubación
a. Justifique el resultado negativo del cultivo
b. Porque persisten los síntomas de infección urinaria a pesar del tratamiento por 7 días.
c. Es recomendable refrigerar la muestra de orina. Explique.
4. Paciente femenino de 80 años, con sonda uretral durante 7 días, presenta bacteriuria crónica:
a. ¿Qué bacterias se aísla de esta muestra?
b. ¿Qué recomendaciones para la toma de muestra?
c. Si el paciente ya recibió imipenem y no sede al tratamiento ¿cual la alternativa de tratamiento,
fundamente?
d. Si la bacteria aislada es Klebsiella pneumoniae productora de BLEE ¿Cuál la alternativa de
tratamiento?
1. Llene el siguiente cuadro
Enfermedad Agente etiológico Tratamiento

Disentería bacilar
Salmonelosis
Cólera
Disentería amebiana
Síndrome de mala absorción
Diarrea del viajero
Colitis hemorrágica
Gastritis
Gastroenteritis
2. ¿Qué tipo de flora patógena se puede encontrar en una diarrea y cual es su posible tratamiento?
3. El diagnostico de una infección gastrointestinal se hace:
a. Por interrogatorio y examen clínico, justifique
b. Por coprocultivo, jusfique
4. En que situaciones clínicas se indica el coprocultivo, mencione por lo menos dos.
5. Indique la resistencia natural de shigella y salmonella spp.
6. Complete el cuadro:
Agente etiológico Tratamiento antimicrobiano

E. Coli enteropatogenica
Shigella dysenteriae
Salmonella spp
Campylobacter spp
7. Esta recomendado administrar antibióticos en diarreas en forma empírica, justifique su respuesta.

8. Elabore un algoritmo de tratamiento de diarrea aguda ( moco y sangre) en un niño sano de 3 años
de edad, considerando que se aisló del coprocultivo las siguientes bacterias:
a. Shigella spp
b. Salmonella spp
c. E. Coli enterohemorragica
PRÁCTICA Nº 13
HEMOCULTIVO
La bacteriemia produce sepsis, dando como resultado fiebre intermitente, decaimiento y postración,
llegando hasta la muerte por septicemia. En los niños y lactantes el porcentaje de bacteriemias es
elevado, no siendo así en adultos.
Podemos considerar la sepsis como una severa enfermedad sistémica caracterizada por alteraciones
hemodinámicas y mal funcionamiento orgánico, provocada por la interacción de ciertos productos
microbianos con las células fagocíticas mononucleares del huésped. La sepsis no deja indemne ningún
órgano o aparato.
Para que se produzca sepsis parecen ser necesarios tres factores: Una gran población de
microorganismos infecciosos o colonizadores, la presencia de productos bacterianos capaces de
estimular la liberación de las citoquinas del huésped y una amplia diseminación de estos productos
microbianos hacia el sistema fagocítico mononuclear del huésped.
a. Focos:
❖ Focos exógenos: inyecciones repetidas, transfusiones, catéteres urinarios (Sondas), catéteres
permanentes, respiradores, traqueotomías, endoscopias repetidas, flebotomías, prótesis,
válvulas hidrocefálicas, válvulas cardiacas, abortos sépticos
❖ Focos endónenos: Forúnculos, abscesos (pulmón, hígado, riñón), obstrucción a nivel de las
vías biliares, neumonías, salpingitis, endometritis, endocarditis, peritonitis
b. ¿Cuando se realiza hemocultivo?
❖ Sepsis del recién nacidos y niños o adultos comprometidos inmunológicamente.
❖ Infecciones severas: meningitis, neumonía, abscesos profundos o infecciones biliares
❖ Infecciones crónicas: gonorrea y meningitis
❖ Infecciones intravasculares localizada: válvula cardiaca o vaso sanguíneo trombosado o
infectado. Endocarditis subaguda
❖ Fiebre entérica, brucelosis, fiebre de origen desconocido
❖ Traumatismos o cirugías de superficies infectadas
❖ Episodios traumáticos menores: extracción dentaria o endoscopias
c. Interpretación de resultados:
❖ Dos hemocultivos por paciente, previos al tratamiento antimicrobiano. El intervalo de tiempo
entre las extracciones es suficiente con una hora, pero cuando exista una gran urgencia en
iniciar el tratamiento, este intervalo puede acortase hasta 15 minutos, o se pueden extraer dos
muestras simultaneas de diferentes sitios de punción. En casos de endocarditis subaguda se
recomienda aumentar a tres frasco de hemocultivo repartidos en 24 horas.
❖ Si las 2 o 3 muestras indican un mismo microorganismo: Es una bacteriemia.
❖ Si las 2 o 3 muestras indican diferentes microorganismos y entre ellos encontramos flora
normal de piel: contaminación
❖ Si las 2 o 3 muestras indican diferentes microorganismos y es un paciente
inmunocomprometido: Bacteriemia multimicrobiana
❖ Si dentro encontramos gérmenes anaerobios y aerobios diferentes y el paciente ha tenido
una cirugía abdominal no programada: Bacteriemia
2. COMPETENCIA(S):
✓ Aplica la técnica apropiada para la toma de muestra de sangre a través de la resolución de

problemas que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
✓ Realiza correctamente un Hemocultivo a través de la resolución de problemas que se presentan
en el campo de trabajo del profesional.
✓ Interpreta los resultados posibles obtenidos a través de la resolución de problemas que se
presentan en el campo de trabajo del profesional.
3. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS.
1 Estufa de cultivo 1 pieza
2 Torniquete 2 Piezas
INSUMOS
1 Jeringas de 10 ml 2 piezas
2 Algodón 20 gramos
3 Alcohol yodado 2 ml
Frascos de hemocultivo con Caldo 2
4 Tripticase-soya Piezas
Frascos de hemocultivo con Caldo 2
5 Tiogliconato piezas
Se debe desinfectar previamente la zona antes de la punción venosa. Cuando se ha extraído la sangre
se introduce en condiciones de asepsia en el caldo de cultivo y se lleva a estufa. Se recomienda tomar
tres muestras con intervalo de media hora y en el pico de fiebre.
Una vez incubado por 24 horas en estufa a 37 C se debe observar el resultado, si hay desarrollo se
deberá ver la morfología, coloración, tipo de hemólisis y realizar las pruebas bioquímicas
correspondientes de acuerdo al cuadro que se coloca al final del práctico

El estudiante registrara las bacterias causantes de gastroenteritis bacteriana y realizará una gráfica de
Comparación.
7. CUESTIONARIO.-
1. ¿Cuáles son las precauciones que se deben tomar al obtener muestras de sangre con sospecha
de sepsis?
2. ¿Qué entiende por sepsis?
3. Enumere los agentes etiológicos causante de septicemia.
4. ¿Cuándo debe realizarse un Hemocultivo?
5. ¿Qué volumen de sangre se debe tomar para realizar un hemocultivo en: Neonatos, niños de 5
años y adultos?
6. Caso clínico: Paciente masculino de 45 años que presenta síntomas y signos de endocarditis, en
los resultados de laboratorio se observa elevación de la VSG y PCR, el hemocultivo dio negativo.
a. ¿ Porque el cultivo de sangre es negativo?
b. ¿Qué bacteria habitualmente se aíslan?
c. ¿Qué medios de cultivo se deberían usar para realizar la siembra en caso de sospecha de una
endocarditis aguda?
d. ¿Existen medios de cultivo especiales para realizar el hemocultivo cuando el paciente recibe
tratamiento antimicrobiano?
7. Se toma una muestra de sangre para hemocultivo y no se dispone del medio de cultivo, se envía
al laboratorio de microbiología en la jeringa con anticoagulante (EDTA).
a. Es correcto el uso de este anticoagulante, ¿Por qué?
b. ¿Cuál es el anticoagulante ideal?

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GUIA DE PRÁCTICA CIENCIAS DE LA SALUD

Código de registro: RE-10-LAB-034 Version 3.0

NORMAS BASICAS DE BIOSEGURIDAD, MATERIALES E INSTRUMENTOS DE

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:

➢ Se usarán en todo momento batas o guardapolvos especiales para el trabajo de laboratorio.

➢ Está estrictamente prohibido pipetear con la boca.

Zonas de trabajo del laboratorio:

➢ El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el trabajo.

Clasificación de los residuos:

➢ Desechos cortopunzantes agujas, hojas de bisturí, hojas de afeitar, objetos de vidrio y

➢ Desechos especiales frascos de antibióticos y sachett de medicamentos

3. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

➢ Manual de Higiene y seguridad en Microbiología.

➢ Trabajo en grupos pequeños

5. PERIODO DE DURACION DE LA PRACTICA

6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS

1. Realizar un mapa conceptual sobre normas de bioseguridad.

Residuos Infeccioso Cortopunzante Comunes

MATERIALES USOS DIBUJO

6. ¿Qué otros tipos de materiales e instrumentos de laboratorio utilizados en Microbiología se

1. CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO.-

3. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

Trabajo en grupos 5 estudiantes para la extracción de muestras

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA

6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS

1. CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO.-

1.1 Fundamento de la coloración de Gram:

1.2 Integridad de la Pared Bacteriana

Si bien se ha demostrado que la pared no toma el colorante, desempeña un importante papel en el

1.3 Intervención de los componentes químicos:

Es muy probable que la composición química y la permeabilidad de la bacteria, intervengan en la

1.4 Importancia de Otros Componentes:

b. Alcohol-acetona: es en esta etapa donde realmente tiene lugar la diferenciación. En las

c. En consecuencia, la disolución del precipitado Cristal Violeta-Yodo se efectúa

3. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA

1. Complete el siguiente esquema:

2. Llenar el siguiente cuadro

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:

Métodos químicos Oxido de etileno

Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en condiciones ambientales adecuadas en

Constituyentes de los Medios de Cultivo:

Los medios de cultivos están compuestos por:

• Base de amino-nitrógeno (proteína digerida. Ej. Peptona)

Clasificación de los Medios de Cultivo:

a. Medios Enriquecidos: Favorece el crecimiento de un determinado tipo de microorganismo,

b. Medios Selectivos: Permiten el crecimiento de un determinado tipo de microorganismos,

Mac Conkey (Mac): Útil para Enterobacterias

Medio de Cisteina y Lactosa deficiente en electrolitos (CLDE):Para bacterias patógenas

Salmonella- Shigella (S-S): Para desarrollo de Salmonella o Shigella.

Thayer Martin (TM): Para desarrollo de Neisseria Gonorrhoeae y Neisseria Meningitidis.

c. Medios Para Microorganismos Anaerobios:

Lowenstein Jensen y Middlebrook: Ambos medios contienen glicerol y verde malaquita

e. Medios de Identificación y/o Pruebas Bioquímicas:

Urea: Para observar la utilización de urea.

Citrato: Para ver la utilización de citrato.

Indol: Para observar el uso de triptófano.

Fenilalanina: Para ver la utilización de fenilalanina.

3. MATERIAL, INSUMOS Y EQUIPOS.

➢ Trabajo en grupos pequeños

Para esto se utiliza el autoclave.

PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.-

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA