Frascos tapa rosca para muestras de orina.

Cajas para baciloscopías.

PRÁCTICA BIOSEGURIDAD, NORMAS
Frascos para exámenes parasicológicos y laminas
DE SEGURIDAD, MANEJO para test de Graham.
DE MATERIAL BIOLÓGICO, Tórulas con medio de transporte para muestras

1 EQUIPOS Y TÉCNICAS.
Dr. Anabel D. González-Siccha
microbiológicas.
Rotulador.
Material de vidrio
I. INTRODUCCIÓN Tubos de ensayo
Placas Petri
La BIOSEGURIDAD en el laboratorio es el conjunto Fiolas
de medidas preventivas, destinadas a mantener el Balón
control de factores de riesgo laborales procedentes Probetas
de agentes biológicos, físicos o químicos, Matraces erlenmeyer
logrando la prevención de impactos nocivos, Vasos de precipitación
asegurando que el desarrollo de las actividades en Pipetas graduadas de 0.1, 1, 5 y 10 ml
el laboratorio no atente contra la seguridad y salud embudos
de los estudiantes y todo el personal que realice
Equipos
prácticas en el laboratorio.
Microscopio óptico
Las normas de bioseguridad no eliminan el riesgo de Espectrofotómetro:
un accidente; están elaboradas para prevenir factores Centrífuga refrigerada
de riesgo laborales procedentes de agentes Centrifuga para tubos de ensayo
biológicos, físicos o químicos, posibles accidentes en Microcentrifuga
el laboratorio, brindar las indicaciones reglamentarias Autoclave
evitar riesgos y proteger al personal docente, Balanza granataria
administrativo y estudiantes y conocer la utilización Balanza de dos platillos
de material biológico, equipos, y técnicas para un Micropipeta automática variable
buen desarrollo del trabajo Agitador magnético
Vórtex
El laboratorio de bioquímica, es el recinto en
Baño maría
donde se trabaja con material relativo a los seres
Termociclador Y Baño Termorregulador
vivos, e realizan prácticas a nivel celular de
Nevera
órganos, o tejidos, para determinar la actividad
Refrigeradora
enzimática, biomoléculas y otros elementos que
cámaras de electroforesis
se encuentran en el organismo.
Bomba al vacío
Objetivos de la práctica es: OTROS
Puntas sueltas de 10, 200, 1000 ul
• Inculcar a los estudiantes una mentalidad
Gradillas, Pinzas
preventiva que minimice la probabilidad de que
Bolsas de recolección de los desechos.
ocurran accidentes en el laboratorio de Bioquímica.
• Identificar los materiales y equipos más usados 2.2. Método
en el laboratorio y sus funciones.
• Manipular materiales y equipos de uso y cuidados a) Medidas Generales de Protección
específicos  El estudiante deberá utilizar equipo de protección
personal: bata con manga larga, guantes,
II. MATERIAL Y METODO masacarilla, gorro y lentes de seguridad.
2.1 Material y equipos:  Deberá lavarse las manos antes y después de
Materiales de laboratorio cada procedimiento.
Agujas: Para colección de sangre se utilizan agujas  Realizar la desinfección y limpieza del material y
de diámetro 21G (0.8 mm) x 1”. equipos antes y después de cada actividad.
Jeringas de 3, 5, 10 y 20 cc  No aspirar o pipietear sustancias tóxicas o
Adaptador para tubos al vacío. corrosivas, utilizar la pipeta automática.
Alcohol al 70%.
 Manejar con sumo cuidado el material
Algodón.
Guantes de procedimientos punzocortante y desecharlos en los contenedores
Frascos para hemocultivos. indicados. No recapsular agujas.
Tubos de exámenes.  Si hay derrame de sangre en el mesón de toma de
Sondas. muestra, limpiar con Hipoclorito de sodio al 0,1%.
  No reutilizar material contaminado, como agujas, e) Aspectos éticos
jeringas, hojas de bisturí y/o tubos.
 Usar mascarillas para toma de muestras de alto
riesgo (Ej. Virus respiratorios) o en caso de que el
paciente tosa constantemente.

b) Identificar y describir el material de vidrio

El vidrio empleado para uso de laboratorio tiene
propiedades especiales de acuerdo a su
composición y calidad de los mismos.
Las marcas kimax y pyrex utilizan vidrios de
borosilicato, los mismos que toleran temperaturas
de hasta 510ºC sin deformarse.
Corex fabrica vidrios de silicato de alúmina que
posee gran resistencia al impacto.
Vicor fabrica material de vidrio para uso donde
existen altas temperaturas, cambios térmicos
bruscos y tratamiento químico extremos con
ácidos y álcalis diluidos, puede resistir un choque
térmico desde 900ºC a la temperatura del agua
de hielo.
El vidrio de cristal estándar se usa a temperatura
ambiente o cercanas a ellas, es relativamente fácil
de fundir y moldear, también se emplea para
frascos y otros depósitos que van a desecharse.

c) Identificar y describir los equipos

El material de metal empleado para la fabricación
de equipos e instrumentos de laboratorio son alta
calidad, preferentemente acero y aleaciones que
toleran la actividad química de ácidos y álcalis,
asim mismo, son resistentes a la manipulación y
funcionamiento continuo.
La mayoría del material y equipo metálico es
costoso y mucho de ellos de difícil adquisición, por
ello se recomienda a los usuarios tomar la debida
precaución a fin de evitar su deterioro
d) Manejo de muestras biológicas
 El estudiante deberá utilizar equipo de protección
personal: bata con manga larga, guantes,
masacarilla, gorro y lentes.
 Antes de tomar la muestra, deberá conocer que
tipo y cantidad de muestra se requiere para el
análisis bioquímico respectivo.
 Disponer de los materiales necesarios en un área
de trabajo limpia y adecuada.
 Toda muestra es potencialmente patógena.
 Rotular el frasco que contiene la muestra,
colocando el nombre del paciente, edad y fecha
de recolección

2
 Informar al paciente sobre la toma de 1) 3) Identificar la
muestra, indicando que pruebas se van a Identificación ETIQUETA de un
Símboloresultados esperados
realizar, Leyenda
y firmando para de los producto químico.
símbolos
su constancia el consentimiento informado.
Las superficies pueden calentarse Símbolo Significado
durante su uso.
f)Toma de muestra
Esta es capaz
Sangre: extracción por depunción
generar corrientes
venosa, F+
letales.
capilar, arterial etc. Utilice las mismas
precauciones que con cualquier
Suero sanguíneo es el
dispositivo componente
eléctrico. No opere desinlala
cubierta en su lugar. No
sangre resultante tras permitir la coagulación opere en
humedad o ambientes
de ésta y eliminar el coágulo resultante. húmedos en
los cuales esta pueda causar daño O–
Plasma: es en unlos líquido componentestransparente y
eléctricos
ligeramente amarillento
internos, no que opere
representa
con el 55
cables
% del volumen conectores
total de con alambres
sangre. En elsueltos
plasma
se encuentran suspendidas las células
Radiación
sanguíneas: glóbulos ultravioleta
rojos, glóbulos que puede
blancos y
ser perjudicial para la piel y los E–
plaquetas. Es el suero más las proteínas de la
ojos, no se exponga a esta
coagulación (fibrinógeno).
radiación sin protección de ocular o
Anticoagulantes: dificultan o impiden la
coagulación Este
de laaviso
sangre,
alerta ejemplo: Esta,
de situaciones
citrato sódico,potencialmente
heparina, Warfarina etc.
peligrosas.
Los tubos con anticoagulante deben invertirse 4) Identific
suavemente y colocarlos en posición vertical, ar el
material de
para evitar el contacto prolongado con la tapa
vidrio
del tubo. usado en
 Orina: el
La muestra idónea es la primera micción de 2) Riesgos laboratorio
la mañana, ya que es la Descripción
más concentrada. de
de losNo alteración
Símbolo
obstante, Significado
en determinaciones urgentes, se
riegos de la salud
recogerá la primera orina que realice el
paciente. Es suficiente un volumen de orina de
R
5-10 mL, se utiliza un frasco de boca ancha
estéril.
 Heces:
AsegurarseT de que la persona defeque en un
recipiente aparte (bacinilla) cuidando que la
muestra no se mezcle con orina.
Tomar una parte de la muestra en un
X n de boca ancha y tapa rosca.
recipiente estéril
Introducir la(s) muestra(s) en una funda plástica
y cerrarla evitando que se derrame
y se mezcleXconI otras muestras
 Líquidos biológicos
La recolección de este tipo de muestra lo
realiza personal
C especializado en salud.
Corresponde al líquido cefalorraquídeo (LCR),
Sinovial, amniótico, pleural, pericárdico,
ascítico, secreciones genito urinarias etc.
III.RESUL TADOS
3
 EN
C
A
S
O
D
E
A
C
CI
D
E
N
T
E
O
R
O
T
U
R
A
D
E
L
M
A
T
E
RI
A
L
D
E
L
A
B
O
R
A
T
O
RI
O
Es
responsabilid
ad del
estudiante
informar al
docente
tutor, de
cualquier
rotura o
desperfecto
del material
asignado.

4
IV. DISCUSIÓN Describa el uso del material de vidrio usado en
el laboratorio
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
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14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
V.CONCLUSIONES

VI.BIBLIOGRAFÍA
 Sánchez Enríquez, Sergio y col. Manual de
prácticas de laboratorio de bioquímica, 3e. Mcgraw-
Hill Interamericana Editores, S.A. de C.V. 2014.
ISBN: 978-1-4562-2012-9
 OMS. Manual de bioseguridad en el laboratorio.
3e.2005.
 Aznar Javier y colaboradores. Manual de obtención
y manejo de muestras para el laboratorio clínico.
Plan de Laboratorios Clínicos y Bancos Biológicos.
Agosto, 2009. Servicio Andaluz de Salud.
Consejería de Salud. Junta de Andalucía-España.
 http://www.inr.gob.mx/Descargas/MOP-SIB-04.pdf
 https://www.monografias.com/trabajos93/materiales
-e-instrumentos-laboratorio/materiales-e-
instrumentos-laboratorio.shtml#equiposyoa
 https://es.123rf.com/photo_37102119_ilustración-
detallada-de-un-isométrico-sketch-biología-
molecular-laboratorio-conjunto.html
 ACTIVIDADES EXTRA-AULA: 3)Institución
Instrucciones en caso de accidente en el
Teléfono
laboratorio, avisar inmediatamente:
Dirección de Escuela
1) Medidas preventivas cuando se usa productos
Docente tutor
químicos inflamables
Compañía Bomberos:
Cuz Roja:
SAMU

4) I
en el laboratorio.

2) Medidas preventivas
cuando se usa productos
de riesgo para la salud
.5) Referencias
bibliográficas

5
 hígado entero para eliminar los residuos
PRÁCTICA de sangre hasta un color claro.
FRACCIONAMIENTO 2) Homogeneización: Pesar 2 a 4 gr. de la
SUBCELULAR muestra, triturar con tijeras y

1 Dr. Francisco M. Abanto Zamora homogenizar agregando 2 a 4 ml de

KCL 0,154M o Buffer Fosfato 0,02M
pH 7,0. si es necesario emplear más
muestra con solvente manteniendo la
misma proporción, todo en medio frío.
I. INTRODUCCIÓN 3) Centrifugación diferencial: Una porción
Diferentes estructuras subcelulares se separan adecuada de homogeneizado se agrega
por centrifugación de homogeneneizados. Los en un tubo de ensayo y se contrapesa en
homogeneizados se preparan rompiendo las una balanza, luego se centrifuga a
células de los órganos o tejidos, en medios diferentes velocidades.
apropiados que preservan los organelos, para lo 3.1 Obtención de la fracción nuclear:
cual se emplean soluciones de sacarosa u otros centrifugar a baja velocidad (1000
azúcares que permitan conservar la integridad gravedad) durante 10 minutos y se
de los organelos y evitar la tendencia de obtiene
estos a volverse agrupar después de sacarlos
- El sedimento, formado por núcleos y
de la célula.
células que no se rompieron durante
El método más empleado para separar los la homogeneización y fragmentos de
organelos celulares es la centrifugación membranas plasmáticas.
diferencial, que consiste en someter al
- El sobrenadante que se encuentran
homogeneizado a diferentes velocidades en la
partículas menos densas no
centrifuga para lograr las separaciones, basadas
sedimentadas. Separar el sedimento
sobre diferencia de densidad y tamaño de los
organelos. del sobrenadante en otro tubo.
El objetivo de la presente práctica es extraer 3.2 Obtención de la fracción
biomoléculas y los organelos subcelulares por mitocondrial: El sobrenadante
centrifugación diferenciada. anterior (3.1) se centrifuga a mayor
velocidad (10,000 gravedad) durante
30 minutos y se obtiene:
II. MATERIAL Y METODO - El sedimento, formado por
2.1 Material Reactivos: Sol. de sacarosa, mitocondrias y lisosomas.
Sol. NaCl 0,85 %, Sol. de KCl 0,154 M - El sobrenadante que se encuentran
2.2. Método partículas menos densas no
EXTRACCIÓN DE BIOMOLECULAS Y sedimentadas
ORGANELOS - Separar el sedimento del
a) A partir de una muestra de sangre: Obtener sobrenadante en otro tubo y
el plasma sanguíneo. contrapesar.
• Desinfectar el Pulpejo del Dedo con 3.3 Obtención de la fracción
alcohol microsomal: El sobrenadante de
• Pinchar con una lanceta, y tomar las (3.2) se centrifuga a 100,000
muestras en tubos capilares gravedad durante una o dos horas y
• Sellar los capilares con plastilina. se obtiene:
Centrifugar a 5,000 rpm x 6 minutos - El sedimento, formado por
• Separar el plasma en tubo eppendorf. microsomas, fragmentos de
Guardar a 4°C para su posterior análisis. retículos endoplasmático y
membrana plasmática.
b) A partir de un órgano (hígado):
3.4 El sobrenadante último que queda se
1) Perfusión: En una hipodérmica agregar
denomina fracción soluble o
KCl 0,154 M helado y perfundir y lavar el
citosol y contiene algunas enzimas
6
 que no
forman III.RESULTADOS
parte

de

las

estructuras
intracelular
es y de la
vía
glucolítica.

Célula eucariota

Fraccionamiento
subcelular

7
IV.DISCUSIÓN

V.CONCLUSIONES

VI. BIBLIOGRAFÍA
 Homogeneización de tejidos y células.
Técnicas instrumentales en bioquímica y
biología. Francisca Barceló Mairata.
Servicio de Publicaciones e Intercambio
Científico. Universidad de las Islas
Baleares, 2003.
 MURRAY RK, BENDER DA, BOTHAM
KM Y COL (2017): Bioquímica de
Harper. 29ava ed. Editorial Mac Graw-
Hill Interamericana, España. Capítulo 1.
 FLORIAN H., LINDENMEIR G.,
GRILLHÖSL C., Y COL. (2008). Biochimie
Humaine. Médecine-Sciencies Flamarion,
Paris, Francia. Capitule Cellule et chimie.
Pp 2-7.
 ACTIVIDADES EXTRA-AULA:
 Diferencia entre célula procariota y eucariota.

Funciones de las biomoléculas

Ácidos nucleicos

 Esquematizar una célula vegetal y animal

Proteínas

Carbohidratos

Lípidos

Vitaminas

Funciones de los orgánelos subcelulares

Núcleo
Definir
Sangre
Membrana plasmática

Suero
Aparto de Golgi

Plasma
Mitocondria
BIBLIOGRAFÍA
Cloroplasto

EXTRACCIÓN DE BIOMOLÉCULAS
- Explica la toma de muestra de sangre

a) b)