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¿En qué medida la Valeriana Officinalis tiene un impacto en los niveles de cortisol en
sujetos en condiciones de estrés?
Índice
Introducción ......................................................................................................................... 3
Hipótesis ........................................................................................................................................3
Capítulo I - Marco Teórico................................................................................................. 4
Elección del procedimiento .........................................................................................................5
Capítulo II - Metodología ................................................................................................... 6
Estudio de inmunoensayo ELISA ..............................................................................................8
Determinación de la concentración de cortisol ........................................................................8
Riesgos de seguridad ..................................................................................................................9
Capitulo III – Descripción de resultados ....................................................................... 10
Capitulo IV - Análisis de datos y conclusión ................................................................. 12
Referencias bibliográficas ............................................................................................... 16
Anexos ................................................................................................................................. 18
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Introducción
Hipótesis
Se estima que el grupo que consume Valeriana Officinalis presentará una disminución
significativa de los niveles de cortisol en comparación con los grupos placebo y control. El
análisis y contrastación de los datos obtenidos mostrará la magnitud del efecto que tiene la
Valeriana Officinalis en los niveles de cortisol en alumnos que cursan el programa Diploma.
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El cortisol es una hormona esteroidea producida por las glándulas suprarrenales debido a
una situación estresante, las hormonas se pueden considerar “mensajeros químicos” del
cuerpo. Se encargan de regular distintos procesos fisiológicos, como el desarrollo del
cuerpo humano, almacenamiento de energía, entre otros. Por otro lado, se encuentran los
neurotransmisores que son biomoléculas que se encargan de transmitir información de una
célula nerviosa (neurona). La mayor parte de las neuronas se encuentran en el sistema
nervioso central (SNC) compuesto por el cerebro y la médula espinal. Aunque existen
diferentes tipos de neurotransmisores para distintos tipos de células, el principal que se
relaciona con el cortisol es el neurotransmisor ácido gamma aminobutírico (GABA). GABA
es un aminoácido que funciona como un neurotransmisor que se produce en el cerebro,
específicamente en el cerebelo y los ganglios basales. El principal efecto que produce este
neurotransmisor es la reducción de la actividad neuronal y el sistema nervioso, por lo que
en óptimas condiciones ayuda a una mayor relajación, reducción del estrés y una mejoría
en el sueño. El trabajo del neurotransmisor GABA es de los más afectados al momento de
presentar cortisol crónico, ya que después de una situación estresante la función de este
neurotransmisor es nivelar ese exceso de hormonas después de que pasó la situación.
Pero cuando la situación dura un periodo de tiempo indefinido, GABA no funciona
adecuadamente y no puede relajar al sistema nervioso central que se encuentra en un
estado de alerta constante por el exceso de cortisol, por este motivo, esta hormona y el
neurotransmisor dependen de si. (Ramírez, 2007)
Este estudio resulta pertinente dadas las consecuancias de un nivel alto de cortisol
crónico. El sistema inmunológico se ve afectado en la presencia de exceso de cortisol ya
que los glóbulos blancos disminuyen, lo que hace que el cuerpo quede susceptible a
enfermedades. Al afectar el sistema inmunológico se podría lastimar al sistema
cardiovascular y gastrointestinal ya que están relacionados entre ellos, conllevaría
consecuencias como una malabsorción en los alimentos, indigestión, inflamación de la
mucosa intestinal y que a su vez pueden terminar generando problemas cardiacos como
los infartos. Así mismo, el metabolismo se ve afectado por los problemas intestinales, ya
que los altos niveles de cortisol ocasionan una retención de grasa en las células ya que no
la pueden metabolizar, causando aumento de peso. Cabe recalcar que el cortisol influye
como estabilizador de la glucosa por lo cual, un desequilibro en el cortisol puede llevar a un
desequilibro de glucosa en sangre, que a largo plazo puede aumentar el riesgo de contraer
diabetes tipo 2. Estas consecuencias pueden suceder a cualquier edad, por lo cual si los
estudiantes experimentan periodos largos de estrés pueden contraer estas consecuencias,
y en su adultez experimentar un agravamiento de estas consecuencias llegando a generar
enfermedades crónicas irreversibles.(Fuentes, 2019)
Múltiples autores como (Mesch, V & Maidana, P 2013) y (Romero, 2010) coinciden en que
los inmunoensayos enzimáticos son una forma accesible y relativamente de poca inversión
económica en comparación con otros ensayos, como la cromatografía líquida de masa que
requieren equipos más costosos y sofisticados, por este motivo se decidió realizar un
inmunoensayo enzimático tipo ELISA. A su vez, se eligió utilizar saliva como muestra para
medir el cortisol ya que como afirma Maidana (2013) es un método no invasivo y además
el cortisol se difunde libremente a través de las glándulas salivales por lo que su
concentración es independiente de la tasa de flujo salival , lo que hace este método eficaz
para obtener cortisol libre, además de que el pico de cortisol diario en las personas sucede
30 minutos después de despertarse, por lo cual este método facilita la recolección de la
muestra por los mismos individuos.
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El método salival podría considerarse mejor que el sanguíneo, ya que hace que la
muestra no se vea afectada por factores inmediatos, por ejemplo, existen personas que les
da nervios o le tienen miedo a las agujas por lo que el individuo liberará cortisol en ese
momento, afectando la prueba y la investigación. Además la saliva es práctica de recolectar,
aunque se debe de tener precauciones para no contaminar la muestra, ya que si el sujeto
come algo o se cepilla los dientes se afectada la misma.
Como afirma (Abyntek, 2019) la técnica ELISA de inmunoensayos resulta ser uno
de los mejores métodos debido a su fácil implementación, versatilidad y por los resultados
certeros que ofrece en comparación con un RIA1 que tienen el potencial peligro de trabajar
con materiales radiactivos. Adicionalmente, el colegio mantiene vínculos de colaboración
académica con la UASLP, misma que facilitó un lector de placas ELISA.
Capítulo II - Metodología
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Radioinmunoensayo
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Los estudiantes fueron asignados al azar en los grupos, esto con el objetivo de mayor no
sesgar a la hora de obtener los resultados.
Cabe mencionar que para reducir al máximo posible que variables como el peso,
enfermedades crónicas, antecedentes familiares, presión, frecuencia cardiaca o adicciones
afectaran los resultados de la investigación, se tomó historia clínica a cada uno de los
sujetos con el propósito de detectar dichas variables, si es que algún sujeto tenia una
anomalía o no cumplía con la media de estándares de salud, se eliminaría de la
investigación y se buscaría otro sujeto que si cumpliera con todo lo requerido. Finalmente
se entregaron los contenedores de las muestras junto con instrucciones precisas del
procedimiento a seguir para recolectar y almacenar cada muestra.
Por tanto, el lunes de cada semana todos los sujetos tomaron la muestra
correspondiente, y en caso de ser necesario, la pastilla proporcionada. Dicha muestra se
guardó en el congelador de la casa de cada sujeto, ya que debido a las medidas sanitarias
por la pandemia por COVID – 19 era imposible que se fueran a refrigerar al colegio. El
proceso se repitió durante tres semanas para observar si existen cambios significativos en
la producción de cortisol. Se tomó solamente una muestra de saliva a la semana, ya que
las hormonas esteroideas tardan un tiempo específico en producirse, en el caso del cortisol,
los cambios significativos surgen después de dos o tres semanas, por lo que si se toma
diariamente la muestra no se observaran cambios significativos. (Guerrero, 2017).
El procedimiento se realizó en la Universidad Autónoma de San Luis Potosí, la cual
tiene un convenio con nuestro colegio para obtener la cantidad exacta de cortisol en cada
muestra, se tuvo que acudir a un tercero ya que no se contaba con el equipo necesario para
realizar dicho procedimiento.
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1. Es necesario dejar las muestras a temperatura ambiente por 30 minutos para que
se descongelen.
2. Se debe preparar el reactivo Cortisol-Horeseardish-Peroxidasa(HPR) y calibrador.
3. Posteriormente es necesario colocar 50 𝜇𝐿 de cada muestra en un espacio de la
placa proporcionada.
4. Colocar 100 𝜇𝐿 de la Solución Activadora en cada muestra.
5. Colocar la placa durante 45 minutos en un agitador de placa, temperatura ambiente.
6. Posteriormente, lavar la placa con 300 𝜇𝐿 de Solución Limpiadora. (3 veces)
7. Colocar 150 𝜇𝐿 del sustrato TMB en cada muestra
8. Colocar nuevamente durante 15 minutos en el agitador de placa.
9. Colocar 50 𝜇𝐿 de Solución Paro en cada muestra y dejar reposar 20 minutos.
10. Finalmente, utilizar un lector de placas a una onda de 450 nm para medir la
absorbancia.
Tras haber obtenido las absorbancias de las muestras, que no son más que la intensidad
de la luz con una longitud de onda específica, es necesario calcular la cantidad de cortisol
en cada muestra, el eje central de la investigación.
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nanometros
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Para realizar esto se debe de crear una curva de calibración, con la fórmula punto-
pendiente que determinara una ecuación algebraica que permitirá encontrar la cantidad de
cortisol ya que, al sustitir x con la absorbancia de cada muestra, dará la cantidad de cortisol
de cada una.
Los valores de (x-y) son valores conocidos por los calibradores, al despejar la
fórmula punto-pendiente se obitene m
(𝑦 − 𝑦1) = 𝑚(𝑥 − 𝑥1)
Riesgos de seguridad
Resultado del análisis estadístico de ANOVA, que compara las medias de concentración
de cortisol entre los diferentes grupos, encontrándose diferencias significativas en el grupo
placebo contra el tratamiento y el control.
estrés, debido a que el ácido valérico el cual es el encargado de disminuir los niveles de
cortisol se encuentra mayormente en la raíz de la Valeriana Officinalis, además de que los
valepotriatos son escasamente efectivos por vía oral ya que no se absorben correctamente
en el organismo, por lo cual es necesario utilizar otra técnica de consumo. Además se
encontró un efecto negativo en el grupo placebo, denominado efecto nocebo, el cual se
debe a las expectativas negativas del tratamiento consumido, generando cierto grado de
miedo o ansiedad al consumirlo, que termina en híper-estimular ciertos ejes del cerebro,
generando nuevas hormonas que aumentan los niveles de cortisol.
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Anexos