PRÁCTICA 3.

OPERACIÓN DE EQUIPO
E INSTRUMENTAL DE LABORATORIO
USO DE MICROPIPETAS Y EQUIPO DE LABORATORIO

EQUIPO 1:
CORTÉS FUENTES JOSÉ ÁNGEL
ESPINO OLMOS EDGAR ENRIQUE
HERNÁNDEZ SILVA FRIDA TAMARA
LÓPEZ JIMÉNEZ ALEXIS ALBERTO

PROFESORES:
DRA. ESTELA FLORES GÓMEZ
DR. GERMÁN GUTIÉRREZ HERNÁNDEZ

GPO. 4BM1

MARTES 1 DE MARZO DE 2022

INTRODUCCIÓN

Las micropipetas en el laboratorio

 Las micropipetas son instrumentos de laboratorio útiles para la toma de muestras cuyos
volúmenes son muy pequeños (comúnmente en el rango de μL). Este volumen puede ser
diferente dependiendo de la pipeta que se use y su capacidad.
 Las pipetas están conformadas por un pistón que se pulsa y presenta resistencia de un
resorte, un tornillo que conecta al pistón y al resorte, una rueda que gradúa el volumen a
medir, un botón expulsor de las puntas, un cuerpo de la pipeta que une todas las piezas, y
una punta desechable que almacena la sustancia.
 Las micropipetas más comunes se encuentran en volúmenes de 20, 200 o 1000 μL y
presentan una vitalidad mayúscula para los laboratorios de medicina, química analítica y
biotecnología.
 El mantenimiento de este equipo de laboratorio resulta importante para garantizar su
funcionamiento. Por ejemplo, es necesario limpiar todo polvo que pueda ingresar al equipo,
no soltar de golpe el pistón para que se evite el ingreso de líquidos a la micropipeta, así
mismo no presionar hasta el segundo tope dicho pistón para que se garantice la precisión y
Micropipeta de volumen fijo - ReactLab exactitud del volumen, o no sobrepasar el volumen máximo de la micropipeta.
EXACTITUD Y PRECISIÓN

 De acuerdo con la página MideBien, la precisión es

“el grado de coincidencia existente entre los
resultados independientes de una medición,
obtenidos en condiciones estipuladas, ya sea de
repetitividad, de reproducibilidad o intermedias”1.
Dicho valor se expresa en términos numéricos
generalmente. En pocas palabras, de haber una
diferencia mínima en las distribuciones de los
resultados, se tiene una mayor precisión.
 Ahora bien, la misma página define a la exactitud
como “el grado de concordancia entre el resultado
de una medición y un valor verdadero del
mensurado”. Con esto, una medición será cercana
al valor verdadero mientras más exacta sea.
 Error detectado Causa Solución

Goteo de la pipeta Punta de pipeta suelta Colocar nuevamente la punta

TIPOS DE ERROR Uso de punta de pipeta incorrecta Utilizar una punta original

Pistón dañado Sustituir el pistón y la junta

 De acuerdo con el Standard Junta dañada Sustituir la junta

Operating Procedure de Uso de líquido con una presión de vapor Prehumectar la punta de la pipeta
Eppendorf, una pipeta puede ligeramente alta varias veces
presentar los siguientes
Uso de líquido con una presión de vapor Usar un dispositivo para dispensar
errores con sus posibles alta con desplazamiento directo
soluciones
Volumen dispensado Punta de dispensador no hermética Utilizar un punta nueva
erróneo en dispensadores
múltiples Punta de dispensador caliente Mantener una temperatura
uniforme

Dificultad de movimiento Pistón sucio Limpiar y engrasar el pistón

del botón de mando
Junta sucia Limpiar la junta

Junta dañada Sustituir la junta

Pistón dañada Cambiar el pistón

Vapores de solución que ingresaron a la Desmontar la parte inferior y

pipeta desensamblarla, limpiar el pistón

Cuadro 1. Tipos de errores al usar una micropipeta

CÁLCULO DEL VALOR MEDIDO DEL VOLUMEN ARITMÉTICO

 A fin de aumentar la confiabilidad de los resultados σ𝑥𝑖=1 𝑉𝑖

de un procedimiento análitico y de obtener 𝑉ത =
información sobre la variabilidad de los mismos, lo
más común es someter de dos a cinco porciones a
𝑛
𝑉ത = Valor medio del volumen
replicas de la muestra al procedimiento análitico
completo. 𝑉𝑖 = Valor del volumen
 Valor central. 𝑛 = 𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠
 Análisis sobre la variación.
ERROR SISTEMÁTICO Y ERROR ALETORIO
ERROR SISTEMÁTICO
Es aquel que se puede evitar, corregir o compensar. Se
puede originar por:
 Defectos o falta de calibración del instrumento de
medición.
 El medio ambiente en el que se realizan los
experimentos.
 Mala observación del espectador.
Un ejemplo puede ser la medición de la presión
sanguínea si cada vez que tomáramos la presión algo
causara que esta subiera.
ERROR ALEATORIO
Es aquel que por lo general se debe a un gran número
de perturbaciones individuales y fluctuantes que se
combinan para dar lugar a que la repetición de una
medición de cada ocasión da un valor distinto
 No se puede corregir.
 Siempre están presentes.
 No se pueden eliminar.
Un ejemplo puede ser la medición de la masa de una
muestra en una balanza analítica puede diferir si está
afectada por corrientes de aire.
CÁLCULO EL ERROR DE MEDICIÓN SISTEMÁTICO

• Inexactitud. Desviación del valor medio relativo a

 Error de medición sistemático relativo
los volúmenes dosificados del volumen
seleccionado.
• Es la medida para la desviación del valor medio de 𝑉ത − 𝑉𝑠 ∙ 100%
volumen del valor teórico del volumen dispensado. 𝑒𝑠 =
• Un error sistemático se obtiene por una 𝑉𝑠
calibración deficiente en el aparato de medición,
por defectos del instrumento o por mediciones  Error de medición sistématico absoluto
inadecuadas del observador.
• Este error está relacionado con la exactitud en un 𝑒𝑠 = 𝑉ത − 𝑉𝑠
sistema de medición
𝑒𝑠 = Error de medición sistemático
𝑉ത = Valor medio del volumen
𝑉𝑠 = Volumen de prueba
CÁLCULO DEL ERROR DE MEDICIÓN ALEATORIO
 Error de medición aleatorio absoluto
• Imprecisión. Medida para la dispersión de los valores
medidos en torno al valor medio. ത 2
• Depende del tamaño de la muestra: cuando éste aumenta,
σ𝑛𝑖=1(𝑉𝑖 −𝑉)
el error disminuye.
𝑆𝑟 =
• Las principales razones de los errores aleatorios se asocian
𝑛−1
a limitaciones de los instrumentos, factores ambientales y a
ligeras variaciones en el procedimiento de medición.  Error de medición aleatorio relativo
• Afecta principalmente a la precisión de la medición de la 100% ∙ 𝑆𝑟
muestra. 𝐶𝑉 =
𝑉ത
𝑆𝑟 = Desviación estándar de repetición
𝑉ത = Valor medio del volumen
𝑉𝑠 = Volumen de prueba
CV = Coeficiente de variación
n = Número de mediciones
OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS

General:
 Conocer el uso adecuado de equipo e instrumental de laboratorio, principalmente micropipetas de diversos
volúmenes.
Específicos:
 Adquirir destreza en la utilización de equipo e instrumental general de laboratorio.
 Conocer los tipos, las partes y el funcionamiento de las micropipetas que utilizará en el laboratorio de
Biotecnología.
 Determinar la calibración de su juego de micropipetas de acuerdo con el CV y el %E.
METODOLOGÍA
 Número de pesada Peso registrado (g)
RESULTADOS 1 0.1934

 La presente práctica hizo uso de 2 0.1973

diferentes sustancias para medir
con las micropipetas. (agua
3 0.1983
teñida de morado, etanol y Tabla 1. Pesos de un volumen de 200 μL de agua medidos con micropipeta P200 y pesado en balanza analítica
glicerol.
 Para estos resultados se
consideró el valor del peso de
agua tomado tres veces 20 μL
con la pipeta P100, tres veces
Número de pesada Peso registrado (g)
10 μL con la misma pipeta, 200 1 0.0188
μL con la pipeta de P200 y 1000
μL con la pipeta P1000. 2 0.0192
 Estos volúmenes de agua fueron
pesados en una caja de Petri con
3 0.0176
ayuda de una balanza analítica. Tabla 2. Pesos de un volumen de 20 μL de agua medidos con micropipeta P100 y pesado en balanza analítica
 Número de pesada Peso registrado (g)
1 0.0102
2 0.0099
3 0.0100
Tabla 3. Pesos de un volumen de 10 μL de agua medidos con micropipeta P100 y pesado en balanza analítica

Número de pesada Peso registrado (g)

1 1.0003
2 0.9898
3 0.9823
Tabla 4. Pesos de un volumen de 1000 μL de agua medidos con micropipeta P1000 y pesado en balanza analítica
MEMORIA DE CÁLCULO

 Valor medio:
σ𝑋𝑖
El valor medio se calcula con ayuda de la ecuación 𝑋 = 𝑛 donde Xi son las pesadas y n el número de pesadas, de
forma que sustituyendo los valores:
σ(0.1934 + 0.1973 + 0.1983)
𝑋1 = = 0.1963
3
σ(0.0188 + 0.0192 + 0.0176)
𝑋2 = = 0.0185
3
σ(0.0102 + 0.0099 + 0.0100)
𝑋3 = = 0.0100
3
σ(1.0003 + 0.9898 + 0.9823)
𝑋4 = = 0.9908
3
MEMORIA DE CÁLCULO
 Volumen medio
Dicho valor se calcula con la expresión siguiente 𝑉 = 𝑋 ∗ 𝑍 donde X es el valor medio y Z es el factor de corrección, el cual se consideró de 1.0032 como viene
en el manual de laboratorio, de manera que
𝑉1 = 0.1963 ∗ 1.0032 = 0.1969
𝑉2 = 0.0185 ∗ 1.0032 = 0.01859
𝑉3 = 0.0100 ∗ 1.0032 = 0.01006
𝑉4 = 0.9908 ∗ 1.0032 = 0.9939
 Exactitud
𝑉−𝑉𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
Este valor es calculado con la ecuación 𝐸 % = 𝑉𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
∗ 100, de manera que sustituyendo los valores:

0.200 − 0.1969
𝐸1 % = ∗ 100 = 0.01542
0.1969
0.0200 − 0.01859
𝐸2 % = ∗ 100 = 0.07756
0.01859
0.0100 − 0.0106
𝐸3 % = ∗ 100 = 0.00754
0.0106
1.0000 − 0.9939
𝐸4 % = ∗ 100 = 0.00606
0.9939
MEMORIA DE CÁLCULO
 Desviación estándar
σ 𝑋𝑖 −𝑋 2
Este valor se determina con la expresión 𝑆 = 𝑍 ∗ , de manera que tenemos los valores
𝑛−1

σ 0.1934 + 0.1973 + 0.1983 − 0.1963 2

𝑆1 = 1.0032 ∗ = 0.1969
3−1
σ 0.0188 + 0.0192 + 0.0176 − 0.0185 2
𝑆2 = 1.0032 ∗ = 0.01859
3−1
σ 0.0102 + 0.0099 + 0.0100 − 0.0100 2
𝑆3 = 1.0032 ∗ = 0.01006
3−1
σ 1.0003 + 0.9898 + 0.9823 − 0.9908 2
𝑆4 = 1.0032 ∗ = 0.9939
3−1
 CV
𝑆∗100
Este valor es calculado con la expresión 𝐶𝑉 = 𝑉
, al sustituir tenemos que
0.1969 ∗ 100
𝐶𝑉1 = = 0.09848
200
0.01859 ∗ 100
𝐶𝑉2 = = 0.01859
100
0.01006 ∗ 100
𝐶𝑉3 = = 0.01006
100
0.9939 ∗ 100
𝐶𝑉4 = = 0.09939
1000
EXACTITUD Y COEFICIENTE DE VARIACIÓN

PIPETA EXACTITUD (E%) CV%

P200 a 200 μL 0.01542 0.09848
P100 a 20 μL 0.07569 0.01859
P100 a 10 μL -0.00650 0.01006
P1000 a 1000 μL 0.00606 0.09939
Tabla 4. Resultados de exactitud y CV de las pipetas usadas a diferentes volúmenes
  La presente práctica se llevó a cabo de forma presencial e hizo uso de
micropipetas de distintos volúmenes por cada equipo. Nuestro equipo
trabajó con dos micropipetas, la P100 y la P200, con las cuales tomamos
distintos volúmenes de agua. Con la P100 se tomó un volumen de 20 μL
tres veces y posteriormente 10 μL tres veces, finalmente se midió un
volumen de 200 μL con la micropipeta P200.
 La tabla de resultados de la diapositiva 10 indica los pesos de dichos
volúmenes con sus micropipetas correspondientes haciendo uso de una
ANÁLISIS DE balanza analítica.
RESULTADOS  A partir de dichos valores logramos determinar la exactitud (E%) y
coeficiente de variación (CV) de cada volumen manejado en las
micropipetas correspondientes. Esto a través de una memoria de cálculo
que requirió de un valor medio (X), un volumen medio (V), un factor Z
y la desviación estándar (S).
 Teniendo estos valores, es necesario compararlos con los límites de
tolerancia para micropipetas que se encuentra en el manual de
laboratorio
 ANÁLISIS DE RESULTADOS
 Observando los límites de tolerancia para las micropipetas,
notamos que para una pipeta P200 se considera un rango de
volumen de 100-1000 μL, en la cual el error (0.01542) es menor al
señalado en la tabla de límites de tolerancia (0.5). Por otro lado, el
CV (0.09848) igualmente se encuentra debajo del límite
establecido (0.2).
Cuadro 2. Límites de tolerancia para micropipetas
 La siguiente pipeta P100 igualmente se considera en un rango de
volumen de 100-1000 μL. Para el volumen de 20 μL se obtuvo un PIPETA EXACTITUD CV%
(E%)
error menor (0.07569) al señalado en la tabla (0.5), al igual que un
valor de CV menor (0.01859) al indicado (0.2). P200 a 200 μL 0.01542 0.09848

 Para la pipeta P100 con volumen de 10 μL se obtuvo igualmente un P100 a 20 μL 0.07569 0.01859
error menor (-0.00650) al señalado en la tabla (0.5), al igual que un P100 a 10 μL -0.00650 0.01006
valor de CV menor (0.01006) al indicado (0.2). Hacemos el
señalamiento del valor negativo del error puesto que su valor de P1000 a 1000 0.00606 0.09939
volumen nominal fue mayor al volumen medio, produciendo un Tabla 4. Resultados de exactitud y CV de las pipetas usadas
error negativo. a diferentes volúmenes
ANÁLISIS DE RESULTADOS

 Para la pipeta P1000 con volumen de 1000 μL se obtuvo un error menor (0.00606) al señalado en la tabla (0.5), al
igual que un valor de CV menor (0.09939) al indicado (0.2). Los valores igualmente son un indicio que la
micropipeta se encuentra dentro de los parámetros establecidos por el manual.
 Una vez observado esto, es necesario recalcar que, a primera instancia, los valores de error y CV se encuentran
en un marco de tolerancia bastante considerable, de manera que podemos afirmar que las micropipetas funcionan
adecuadamente y se encuentran calibradas.
 Sin embargo, nos llamó la atención considerablemente que estos valores se encontraran en el terreno de las
centésimas, siendo especialmente pequeños al contrastarse con los límites esperados para las micropipetas.
 De esta manera, puede resultar importante poner atención a los cálculos que se realizaron para tener la certeza
que, si bien los valores son un buen indicio, éstos son correctos por igual.
CONCLUSIONES
 La práctica tenía contemplado alcanzar tanto un objetivo general que estipulaba conocer el uso adecuado de equipo e
instrumental de laboratorio, principalmente micropipetas de diversos volúmenes. Dicho objetivo se cumplió puesto que
el practicar presencialmente el uso de este equipo nos facilitó entender cómo ocuparlo apropiadamente al realizar la
práctica.
 Por otro lado, se consideraron objeticos específicos como conocer los tipos, las partes y el funcionamiento de las
micropipetas que utilizará en el laboratorio de Biotecnología. Esto se cumplió a través de las investigaciones previas que
llevamos a cabo, al igual que el uso presencial de éstos, nos familiarizamos con los tipos de micropipetas que se manejan
en el laboratorio y su funcionamiento.
 Otro objetivo fue el determinar la calibración de su juego de micropipetas de acuerdo con el CV y el %E. Como se
mencionó en el análisis, dichos valores se calcularon con ayuda de los resultados obtenidos a través de una práctica
presencial.
 Con esto en mente, es importante mencionar que los resultados obtenidos de la exactitud y el CF fueron ser un indicio
de una exactitud y precisión destacables para el equipo utilizado en la práctica, confirmando que dicho equipo presenta
una utilidad innegable para trabajar con muestras que distintas disciplinas requieren.
 Las micropipetas son exactas ya que cumplen con su función de acercarse al valor real, pero no precisas, debido a que la
precisión también depende del operador y en este caso los operadores fuimos nosotros y al no ser expertos en esto,
pudimos cometer errores sin habernos dado cuenta.
BIBLIOGRAFÍA Y FUENTES CONSULTADAS

 Epppendorf. (2019).“Standard Operating Procedure”. Eppendorf AG, 21. Recuperado en febrero de 20220.
 Fuentes, A., Fernández, I., Fuentes, C. (2020). “Consideraciones en el uso y mantenimiento de micropipetas”.
Universitat Politècnica de València. Recuperado en febrero de 2022 de Portada del documento (upv.es)
 Materiales de Laboratorio. (2020). “Micropipeta”. Materiales de Laboratorio.com. Recuperado en febrero de 2022
de Micropipeta - ¿Qué es, cómo funciona y para qué sirve? 🥇 (materialeslaboratorio.com)
 1. MideBien. ¿Cuál es la diferencia entre exactitud y precisión?
 Maldonado C.“Error sistemático y aleatorio”. Recuperado en febrero de 2022 de Errores (unam.mx)