ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD: CIENCIAS

ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICOS II

PRÁCTICA No 2

TEMA: MANEJO Y PIPETEO CORRECTO DE PIPETA AUTOMÁTICA

1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: (estudiante(s) CODIGO(S): (de estudiante(s)

CHICAIZA MOPOSITA YULISSA MISHELL 3562

CHUNATA MANOTOA YESSENIA PAOLA 3499
GUAMAN LOPEZ GRACE YAJAIRA 3468
MAJI CISLEMA EDISON FERNANDO 3488
VARGAS QUISNIA VALERIA ESTEFANIA 3685

GRUPO No.: 7

DOCENTE: Dra. Adriana Monge

NIVEL: Sexto PARALELO: “B”

LUGAR DE REALIZACIÓN: LABORATORIO DE DOCENCIA

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2021/11/09 2021/11/16
 2. OBJETIVO(S):

2.1. GENERAL
Conocer el uso y pipeteo correcto de pipeta automática.

2.2. ESPECÍFÍCOS
 Utilizar correctamente las pipetas automáticas
 Conocer las diferentes fases de pipeteo.

3. MARCO TEÓRICO:
PIPETAS AUTOMÁTICAS
Una pipeta o micro pipeta automática es un instrumento de laboratorio que se utiliza para medir
pequeños volúmenes y transvasarlos de un recipiente a otro. Las micro pipetas automáticas se
caracterizan por medir los líquidos con una gran exactitud, que se consigue girando una rueda
integrada en la pipeta, y nos marca el volumen en una pantalla digital. Es importante que hagamos
una calibración de micro pipetas de manera regular para asegurarnos que la pipeta mantiene la
exactitud. Lo habitual es colocar una punta de micro pipeta distinta cada vez que se usa.

BUEN USO Y CUIDADO DE PIPETAS AUTOMATICAS

Técnicas de buen uso de las pipetas

Lo primero a verificar al inicio del trabajo es que la mesada esté ordenada y los elementos cerca,
evitando así tener que salir de un laboratorio a otro a buscarlos en mitad del análisis, es decir que
organizar el lugar de trabajo es el primer paso para lograr la máxima eficiencia.

Respecto a la pipeta misma, lo primero es asegurarse que la punta está bien colocada y encaje
perfectamente antes de establecer el volumen.

Al setear el volumen de trabajo, el giro debe ser suave y no debe pasarse de los límites superior o
inferior, sostener el cuerpo de la micropipeta en una mano y usar la otra mano para girar la rueda.
También se puede usar el botón de volumen para ajustar fácilmente con una mano. Siempre finalice
el pipeteado girando el botón superior en sentido horario. Si se produjera un contragiro, éste
siempre sería en la misma posición. Al reducir el volumen, gire suavemente la rueda hasta que
aparezca en la pantalla el volumen deseado. No se exceda del volumen deseado. Al aumentar el
volumen, rote la rueda aproximadamente un tercio de vuelta por sobre el volumen deseado y luego
suavemente gírelo hacia el otro lado para disminuir el volumen hasta alcanzar el indicado.

Fases de pipeteado Preparación

Sostenga el instrumento en una posición casi vertical. Presione el émbolo suavemente hasta la
posición más alta primero.
Aspiración
Sumerja unos milímetros la punta de la pipeta en el líquido. Suelte con suavidad el émbolo para que
se mueva hacia arriba a la posición de reposo.

Estabilización
Espere un segundo, para que todo el líquido tenga tiempo de moverse hacia arriba en la punta (ver
abajo cuadro con tiempos de estabilización por modelos).

Dispensado
Coloque la punta de la pipeta en ángulo contra la pared interior del recipiente receptor. Presione el
émbolo suavemente hasta la primera posición.

Purga
Espere un segundo y luego presione el émbolo a la posición de la segunda parada. Este golpe elimina
cualquier resto de la muestra de la punta de la pared lateral de deslizamiento hacia arriba por la
pared.

Limpieza de las pipetas

Es de vital importancia este punto de manera de evitar que los contaminantes ingresen a la muestra.

Descontaminación
Se puede realizar a través de 2 procedimientos:

•Auto clavado "Ningún instrumento de precisión es totalmente auto clavable" Someter la pipeta
entera a 121° durante 20 minutos hace que se pierda su calibración.

Las partes auto clavables de la pipeta son el tip holder, el tip eyector y la rosca de conexión que son
las únicas que están en contacto con la muestra.

•Limpieza biológica. Se realiza sin desarmarla y evitando sumergir el contador.

Se debe proceder a sumergir las pipetas en las siguientes soluciones en el orden indicado:

1) En Ácido Clorhídrico 10% durante media hora. Así se realiza la llamada "limpieza catiónica".

2) Con Agua destilada durante media hora. Este es el primer enjuague con agua destilada.

3) Con Hipoclorito de Sodio (16.5%) durante media hora. Se produce así la descontaminación
biológica.

4)Luego Agua destilada durante media hora. Segundo enjuague con agua destilada.

5) Se coloca en un Baño Ultrasónico para realizar la limpieza a fondo.

6)Secar en estufa (40 – 50 ºC) aprox. 1 hora.

7) Rearmado y calibración.
Algunas consideraciones importantes.

 Las pipetas deben ser almacenadas siempre en posición vertical, en el rango de

medición máximo y en un área limpia.
 Guardarlas en el soporte (No en cajones).
 Limpiar bien las pipetas cuando se termina de trabajar.
 Sólo trabajar entre los rangos máximos y mínimos de cada modelo.
 Utilizar tips de calidad construidos en polipropileno puro que asegura un dispensado
completo, sin contaminación. Recuerde siempre que la punta está en contacto directo
con la muestra y puede contaminar la solución.
 El uso de filtros en las puntas ejerce también un efecto barrera contra los aerosoles
generados durante el pipeteo. Verificar su esterilidad mediante el certificado que
deben poseer en el envase.

4. METODOLOGÍA

1. asegurarse que la punta está bien colocada y encaje perfectamente antes de establecer el
volumen.
2. Al configurar el volumen de trabajo, el giro debe ser suave y no debe pasarse de los límites
superior o inferior
3. sostener el cuerpo de la micropipeta en una mano y usar la otra mano para girar la rueda
4. Siempre finalice el pipeteado girando el botón superior en sentido horario.
5. Al aumentar el volumen, rote la rueda aproximadamente un tercio de vuelta por sobre el
volumen deseado
6. luego suavemente gírelo hacia el otro lado para disminuir el volumen hasta alcanzar el
indicado.
5. EQUIPOS Y MATERIALES:

 Pipetas automáticas
 Tubos tapa roja
 Tubos eppendorf

6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:
PIPETA AUTOMATICA • Se logró realizar la práctica
satisfactoriamente, según Sánchez,
una pipeta automática o también
conocida como micropipeta es un
instrumento que se utiliza en los
laboratorios su función permite medir
o succionar el volumen de un líquido
establecido previamente en su dial con
gran exactitud y que carece de
depósito. (1)

PARTES DE LA PIPETA Una pipeta tiene dos grandes partes:

Empuñadora
 Pantalla de dígitos: que nos indica el
volumen que queremos pipetear.
 Rueda selectora de volumen: se utiliza
para el movimiento de la pantalla de
dígitos.
 Eyector de puntas: permite eliminar las
puntas de forma eficaz y sencilla.
Conjunto principal
 Punta de carga: son diferentes según
el tipo de pipetas. (1)

CLASES DE PUNTAS  Puntas blancas0.2-10µl.

 Puntas amarillas 10- 200 µl.

 Puntas azules 200-1000 µl (2)

CORRECTO PIPETEO Para empezar un correcto pipeteo siempre

debemos tener a mano todos los materiales:
 Pipeta
 Puntas adecuadas
 Recipiente receptor
 Basura (2)
 Realizar el ajuste de volumen con la rueda
selectora.
Ajuste de punta: asegurase que la punta este
bien colocada y encajada perfectamente.
(3)

ASPIRACION
1. Presionar el embolo suavemente hasta
la primera aspiración.
2. Sumergir unos milímetros la punta d la
pipeta en el líquido.
3. Soltar con suavidad el embolo hasta la
posición de reposo. (3)

DISPENSADO
1. Colocar la punta de la pipeta en el
ángulo contra la pared interior del
recipiente colector.
2. Presionar el embolo suavemente
hasta la primera posición.
3. Presionar el embolo a la segunda
posición.
4. Eliminación de la punta (3)

MANTENIMIENTO ANUAL
Desmontaje del conjunto principal:
 Limpiarle.
 Engrasarle
Este paso se realiza siguiendo las
instrucciones del fabricante. (3)

MANTENIMIENTO DIARIO Las pipetas deben ser almacenadas siempre:

 Posición vertical.
 En el soporte
 En el rango de medición máximo. (3)
 7. CONCLUSIONES
 Conocimos el uso de la pipeta automática que consiste en medir y trasvasar
volúmenes pequeños de líquidos de un recipiente a otro con exactitud y para
poder pipetear de manera correcta hay que hacerlo despacio y con suavidad,
mantener la pipeta en posición vertical al aspirar la muestra, sumergir la punta
suavemente al aspirar la muestra y dispensar el líquido suavemente sobre la
muestra.
 Para poder utilizar la pipeta de manera correcta se debe una buena técnica que
ayuda a incrementar la exactitud.
 Las diferentes fases del pipeteo son la preparación, aspiración, estabilización,
dispensado y eliminación.

8. RECOMENDACIONES
 Cumplir con las normas de bioseguridad personal que es: tener puesto el mandil,
guantes de látex, cofia, entre otros.
 Mantener el área de trabajo limpia y organizar los materiales y reactivos que se
van a ocupar.
 Asegurarse que la punta de la pipeta automática este bien colocada y encaje
perfectamente antes de establecer el volumen.
 No sobrepasar los límites del volumen marcado por cada pipeta automática.
 Revisar que las puntas de las pipetas sean desechables para minimizar los riesgos
de contaminación.
 Asegurarse que la punta desechable sea el correcto de acuerdo a la cantidad de
volumen que tenga la pipeta.

9. BIBLIOGRAFÍA:

1. Sanchez J. Bioquimicasrl. [Online]; 2016. Disponible en:

https://www.bioquimicasrl.com/archivos_productos/POS-D.PDF.

2. ibd Ciencia. ibd Ciencia. [Online]; 2018. Disponible en: https://www.ibdciencia.com/es/pipetas-

automaticas-c-181.

3. Masiá O. MOOC Iniciación a la investigación científica. [Online]; 2017. Disponible en:

https://www.uv.es/sfpie- correcto. pipetas automaticas,27.pdf.

4. Roque C. SCRIBD. [Online]; 2012. Acceso 14 de Noviembre de 2021. Disponible en:

https://es.scribd.com/doc/101152584/Tutorial-sobre-pipetas-automaticas.
5. Llopis J. TESTEXAMEN. [Online]; 2011. Acceso 14 de Noviembrede 2021. Disponible en:
https://www.testexamen.com/test/practicas-laboratorio/calibracion/metodo-calibrar-
micropipeta-gravimetrico.html.

6. Abba Metroligía. Calibraciones Abaa Metrología. [Online]; 2019. Acceso 14 de Noviembrede

2021. Disponible en: https://abaa.mx/blog/mantenimiento-y-calibracion-de-micropipetas-de-
laboratorio/.

7. Sandoval Nuñez M. FAMILIA 51100006 PIPETAS Y MICROPIPETAS. Ficha Estándar. Lima:

Ministerio de Economía y Finanzas, General de Tecnologías de la Información.34.

10. ANEXOS

CUESTIONARIO

1.- ¿Cómo se clasifican las pipetas automáticas?

Las pipetas automáticas se clasifican en:

Según su forma de uso en:
• Manuales o mecánicas
• Electrónicas
Según el tipo de medida en pipetas:
• Volumen fijo
• Volumen variable
A su vez se distinguen entre pipetas:
• Monocanal
• Multicanal
Según su principio de funcionamiento se
• Subtipo A, pipetas de desplazamiento por aire o neumáticas.
• Subtipo B, pipetas de desplazamiento positivo o de desplazamiento directo. (4)

2.- ¿Cómo calibrar una pipeta automática?

La pipeta automática (o micropipeta) es un instrumento de medición de precisión, por lo que

requiere una calibración periódica más o menos frecuente según determinadas condiciones como
son:
• Frecuencia del uso de la micropipeta.
• Tipo de uso de la micropipeta: algunos procedimientos requieren mayor exactitud.
• Naturaleza del líquido a operar.
• Número de personas que la utilizan.
• Recomendaciones del fabricante.
La calibración de la micropipeta consiste en comparar el volumen real que ésta proporciona con el
volumen teórico. (5)
3.- ¿Cómo saber si una pipeta está calibrada?

Una pipeta está calibrada cuando el volumen previsto y el volumen obtenido proporcionado por la
pipeta viene determinado de forma conjunta con la incertidumbre de medición asociada por una
institución acreditada. (4)

4.- ¿Cómo se realiza el mantenimiento de las micropipetas?

Para realizar el mantenimiento en estos instrumentos es muy importante conocer las partes para
poder desmontar pieza por pieza, recordemos que antes hay que contar con agua destilada para
hacer la limpieza de las partes sucias que tienen contacto con las soluciones a medir.

 Presionar el botón de eyección de puntas para ir quitando poco a poco las

otras piezas.
 Girar poco a poco el anillo de conexión.
 Extraer el conjunto pistón.
 La limpieza en estos instrumentos es de suma importancia contar con agua
destilada o etanol 60% es crítico para la limpieza de una micropipeta. (6)
5.- ¿Cuántos tipos de pipetas existen en el laboratorio?

 Pipeta aforada: están hechas para medir un solo volumen y su forma es de

un tubo largo, estrecho y ensanchado en la parte central.
 Pipeta graduada: sirve para medir cualquier volumen que no rebase su
capacidad máxima.
 Pipeta Pasteur: es una pipeta de vidrio o plástico por lo general, que se utiliza
para poder sacar líquido de alguna muestra.
 Pipeta de Shali:se utiliza para determinar la cantidad de hemoglobina
 Pipeta de Thomas: pipeta graduada echa de cristal, esta pipeta esta echa
para medir la cantidad de glóbulos.
 Micropipeta: estas pipetas están hechas para tomar pequeñas porciones de
líquido y medirlos, esto es de gran ayuda cuando se necesita medir partículas
muy diminutas tales como los glóbulos rojos. (7)