Universidad Estatal del Sur de Manabí

CREADA EL 7 DE FEBRERO DEL AÑO 2001, MEDIANTE REGISTRÓ OFICIAL # 261

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE LABORATORIO CLINICO

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 8

INFORMACION GENERAL
ESTUDIANTE: Karina Dayana Pincay Reyes SEMESTRE/PARALELO: 5”B”

ASIGNATURA: BACTERIOLOGÍA FECHA: 31-07-2022

DOCENTE: LIC. TERESA VÉLIZ CASTRO, Mg. MB HORA: 2:00 a 5:00

TEMA DE LA PRÁCTICA:

Diagnóstico en el laboratorio clínico de Enterobacterias (Escherichia coli)

OBJETIVO:

Fundamentar el Diagnóstico en el laboratorio clínico de Enterobacterias (Escherichia coli)

FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA (Bibliografía)

➢ Escherichia coli
La E. coli es una bacteria que se encuentra en los intestinos de las personas y los animales, en el
medioambiente y, a veces, también en los alimentos y el agua sin tratar.
La mayoría de los tipos de E. coli son inofensivos y son parte de un tracto intestinal sano. Sin
embargo, algunos causan enfermedades que a veces son graves, como diarrea, infecciones urinarias,
enfermedades respiratorias e infecciones del torrente sanguíneo (1).
➢ Características
E. coli se caracteriza por poseer bacilos Gram negativos, no esporulaste, producción de indol a partir
de triptófano, no utilización de citrato como fuente de carbono y no producción de acetona. Además,
fermenta la glucosa y la lactosa con producción de gas.
Como todas las bacterias Gram -, la cubierta de E. coli consta de tres elementos: la membrana
citoplasmática, la membrana externa y, entre ambas, un espacio periplásmico constituido por
péptido-glucano. Esta última estructura confiere a la bacteria su forma y rigidez, y le permite resistir
presiones osmóticas ambientales relativamente elevadas (2).
➢ Epidemiologia
Las infecciones por E.coli se producen en todo el mundo, se han informado infecciones en todos los
continentes, excepto en la Antártida. El E.coli probablemente también estén ampliamente
distribuidas. La importancia de algunos serotipos puede variar con la región geográfica (3).
➢ Taxonomía
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o Reino: Bacteria
o Filo: Proteobacteria
o Clase: Gammaproteobacteria
o Orden: Enterobacteriales
o Familia: Enterobacteriaceae
o Género: Escherichia
o Especie: E. coli ((E. freundi)) (4).
➢ Síntomas
o Náuseas o vómitos
o Fuertes cólicos abdominales
o Diarrea líquida o con mucha sangre
o Cansancio
o Fiebre (5).
➢ Diagnostico
o Cultivo de muestras de orina, heces u otro material infectado
➢ Tratamiento
No hay tratamientos actuales que curen la infección, alivien los síntomas o eviten
complicaciones. Para la mayoría de las personas, el tratamiento consiste en lo siguiente:
o Reposo
o Líquidos para ayudar a prevenir la deshidratación y la fatiga (6).

Urocultivo
El urocultivo, también llamado cultivo de orina, es un examen que tiene como objetivo confirmar la
presencia de una infección urinaria, como una cistitis o pielonefritis, e identificar al microorganismo
responsable de la infección, lo que ayuda a determinar el tratamiento adecuado.
Para la realización de este examen se recomienda recolectar la primera orina de la mañana y descartar
el primer chorro, sin embargo el urocultivo puede realizarse a partir de orina obtenida durante el día
(7).
Medios de cultivos

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Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas, con el
din de identificarlas y realizar estudios complementarios.

• Agar sangre

Es un medio de cultivo sólido enriquecido, diferencial pero no selectivo. Es utilizado para la

recuperación y crecimiento de una gran variedad de microorganismos provenientes de muestras
clínicas o para subcultivos. En cuanto a la sangre, normalmente se requiere tener contacto con un
bioterio para la obtención de sangre de animales, tales como carnero, conejo o caballo. Sin embargo,
esto no siempre es posible y en ocasiones se usa sangre humana (8).

• Agar MacConkey
Es un medio selectivo diferencial utilizado para el aislamiento y diferenciación de bacilos gram
negativo fermentadores y no fermentadores de lactosa. Se utiliza con frecuencia para el aislamiento
de coliformes (9).
• Agar Müeller Hinton
Este base suplementado con sangre se usa para realizar el antibiograma de microorganismos
exigentes y es útil para el aislamiento de bacterias.
Tipos de estriado
Estriar para aislar implica una sola inoculación de una sección de la placa de Petri y a continuación,
disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos o tres secciones
adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos.
Los principales tipos de estriados.
o Estriado básico: Se calienta el asa de inoculación hasta que quede color rojo intenso para
eliminar cualquier microorganismo, dejar que el asa se enfrié durante 3-5 segundos. Recoger una
muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o una placa Petri. Levantar la tapa de la placa
Petri que se va a sembrar en un ángulo de 45°, colocar el asa en la parte de atrás de la caja, tocar
con el asa el medio y pasarlo a través de la superficie de la placa con un movimiento en forma
de S desde atrás hacia adelante.
o Estriado para aislar: implica una sola inoculación de una sección de la placa Petri y a
continuación disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos a tres
secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos.

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o Estriado por cuadrantes: se divide la parte inferior de la caja Petri en cuatro partes iguales con
un marcador. Se esteriliza el asa y se estría el 1er cuadrante con el procedimiento básico de S. Se
trabaja en el sentido de las agujas del reloj, estriando cuadrante por cuadrante, esterilizando el
asa antes de seguir a otro.
Tinción gran
Es una de las tinciones diferenciales de más uso en bacteriología. Como es sabido, el distinto efecto
de la combinación de colorantes, mordiente y disolventes sobre los distintos microorganismos está
relacionado con la composición química de su pared celular. Por ello, las bacterias a las que se va a
aplicar esta tinción deben proceder de cultivos jóvenes (12 a 18 horas para las bacterias más
comunes) con células en fase exponencial de crecimiento. Las bacterias Gram +en fase de
crecimiento más tardío dan resultados irregulares en esta tinción.
Prueba de Oxidasa
La prueba de oxidasa es un método diagnóstico que evidencia la presencia del complejo enzimático
denominado citocromo oxidasa c. Este sistema induce la transformación del citocromo reducido a
oxidado, ya que capta el oxígeno y este a su vez actúa como último aceptor de electrones (H+) en la
cadena respiratoria. El termino oxidasa es una forma resumida de hacer referencia a la enzima
citocromo oxidasa.
Pruebas bioquímicas
Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias de
objeto de identificación. Algunas son rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada
y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura
el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a 48 horas.
o TSI
TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar) (agar triple azúcar hierro) es un medio de diferenciación
para organismos entéricos gram negativos basada en su capacidad para fermentar dextrosa,
lactosa y sacarosa y para producir sulfuro.
o LIA
El Medio de Lisina y hierro (L.I.A.) es un medio de cultivo ampliamente utilizado para la
diferenciación de bacilos Gram negativos entéricos, especialmente miembros del género
Salmonella, sobre la base de la producción de H2S y la actividad de la enzima Lisina
decarboxilasa. También es posible observar cambios debidos a la actividad de la enzima
lisina deaminasa, característica del género Proteus y Providencia (10).

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o SIM
El medio SIM es un agar semisólido y diferencial, especialmente diseñado para ayudar a la
identificación de algunas bacterias, principalmente de la familia Enterobacteriaceae. Está
compuesto por tripteína, peptona, sulfato de hierro, sulfato de amonio, tiosulfato de sodio y
agar. Este medio permite la ejecución de tres importantes pruebas: la producción de sulfuro
de hidrógeno (H2S), la formación de indol y la motilidad, de allí proviene el acrónimo SIM.
Por su gran utilidad no puede faltar en un laboratorio de bacteriología (11).
o CITRATO
Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única
fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su
metabolismo, provocando una alcalinización del medio.
Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio contiene citrato de
sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente, y azul
de bromotimol, como indicador de pH.
o UREA
Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando una molécula de
dióxido de carbono y dos moléculas de amoniaco por acción de la enzima ureasa. Esta
actividad enzimática es característica de todas las especies de Proteus y se usa sobre todo
para diferenciar este género de otras enterobacterias que dan negativo o positivo retardado.
Se cultiva el microorganismo en slant en agar urea de Christensen.

Antibiograma- pruebas de susceptibilidad

Las pruebas de sensibilidad o antibiogramas determinan la susceptibilidad de un microorganismo
frente a los medicamentos antimicrobianos, a partir de la exposición de una concentración
estandarizada del germen a estos fármacos. Las pruebas de sensibilidad pueden hacerse para
bacterias, hongos o virus. Para algunos microorganismos, los resultados obtenidos con un fármaco
permiten predecir los resultados que se obtendrán con fármacos similares. Así, no todos los
medicamentos potencialmente útiles necesitan probarse (12).

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Bibliografía
1. Centro para el Control y la Prevencion de enfermedades. cdc.gov. [Online].; 2022 [cited 2022 08 03. Avai
https://www.cdc.gov/foodsafety/es/communication/ecoli-and-food-safety.html.

2. Juan C. Betelgeux. [Online].; 2016 [cited 2022 julio 27. Available from: https://www.betelgeux.es/blog/20
coli-caracteristicas-patogenicidad-y-prevencion-i/.

3. Cfsph. [Online].; 2009 [cited 2022 julio 27. Available from: https://www.cfsph.iastate.edu/Factsheets/es/e

4. Abigail R. [Online]. [cited 2022 julio 27. Available from: https://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011

i.pdf.

5. medline plus. [Online]. [cited 2022 julio 27. Available from: https://medlineplus.gov/spanish/ecoliinfectio

6. clinic M. [Online].; 2020 [cited 2022 JULIO 27. Available from: https://www.mayoclinic.org/es-es/diseas
coli/diagnosis-treatment/drc-
20372064#:~:text=coli%20%2C%20no%20hay%20tratamientos%20actuales,la%20deshidrataci%C3%B3

7. Marcela L. Tua Saude. [Online].; 2022 [cited 2022 julio 27. Available from: https://www.tuasaude.com/es

8. Marielsa G. lifeder. [Online].; 2019 [cited 2022 JULIO 27. Available from: https://www.lifeder.com/agar-

9. Ucv.ve. [Online]. [cited 2022 julio 27. Available from:

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/macconkey.pdf.

10. valtek. [Online].; 2022 [cited 2022 julio 28. Available from: https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/20
Valtek-Versi%C3%B3n-3.pdf.

11. Marielsa G. lifeder. [Online]. [cited 2022 julio 28. Available from: https://www.lifeder.com/medio-sim/.

12. msdmanuals.com. msdmanuals.com. [Online].; 2018 [cited 2022 08 03. Available from:
https://www.msdmanuals.com/es/professional/enfermedades-infecciosas/diagn%C3%B3stico-de-laborato
enfermedades-infecciosas/pruebas-de-sensibilidad-o-
antibiogramas#:~:text=Las%20pruebas%20de%20sensibilidad%20o,para%20bacterias%2C%20hongos%

13. Salud OMdl. [Online].; 2018 [cited 2022 Julio 27. Available from: https://www.who.int/es/news-room/fac

MATERIALES/INSUMOS Y EQUIPOS A UTILIZAR

MATERIALES INSUMOS EQUIPOS MUESTRA
Cajas Petri Tensión de Gram Microscopio Orina
Isopos Suero fisiológico Balanza
Gasas Agua destilada
Algodón Cristal Violeta
Mechero Solución Yódica
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Gotero Cetona
Fucsina

DESARROLLO:
Aquí deben describir o detallar el cultivo Enterobacterias (Escherichia coli)

Dia 1
Criterios de rechazo
Tubos o contenedores de muestras sin identificación.
atos de la muestra no coinciden con los datos de la solicitud
Criterios de transporte
Contenedor no estéril
Muestra derramada
Toma de muestra
Para la recogida, transporte y manipulación de muestras podrán tenerse en cuenta los protocolos
establecidos.
La correcta recogida y conservación de la orina para urocultivos es fundamental para que puedan
obtenerse resultados fiables.
Los puntos clave son:
- Mujeres: Obtención de la orina después de separar los labios vaginales de manera que el chorro de
orina no toque genitales externos.
- Hombres: Retracción del prepucio de manera que el chorro de orina salga directamente.
Siembra en agares
Se sembrará cuantitativamente, generalmente con asa calibrada de 1 ó 10 ml. en uno de los
siguientes medios en placa:
Agar sangre + agar MacConkey
Describir el Asa calibrada
Asa en argolla o anillos – Calibrada
Generalmente son de alambre de nicromo. Sirve para la siembra por estrías e inoculaciones en
general.
Asa de platino en anillo – Calibrada

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Para tomar 0.001 ml, para urocultivo

Tinción de Gram de sedimento urinario
La coloración de Gram en las muestras de orina para Urocultivo permite evaluar el tipo de bacteria,
la presencia de píuria y determinar si hubo una adecuada recolección de la muestra.
Técnica de sedimento urinario
✓ Tomar el recipiente de orina del paciente y mezclar suavemente.
✓ Traspasar 10 ml a un tubo para centrifugar en un tubo de ensayo.
✓ Centrifugar por 5-10 minutos a 3500 RPM.
✓ Descartar el sobrenadante y resuspender el sedimento urinario por agitación manual.
Frotis del sedimento urinario
✓ Tomar una gota del sedimento resuspendido y colocar en un portaobjeto limpio.
✓ En el borde de un portaobjeto se ubica la gota de sedimento y con la base del otra porta se
pone en la gota y se extiende hasta el otro borde, el poco sedimento debe quedar bien
deslizada.
✓ Después llevamos al portaobjeto a fijar con calor y le damos ligeras pasadas hasta lograr que
el líquido se seque con la ayuda del mechero.
Tinción Gram
Procedimiento a seguir es el siguiente, luego de preparar y fijar el frotis.
✓ Teñir con cristal violeta 1 minuto y lavar con abundante agua
✓ Cubrir con solución salina yódica 1 minuto y lavar con abundante agua
✓ Decolorar con alcohol cetona durante 10 segundos y lavar con abundante agua
✓ Teñir con Fucsina durante 1 minuto y lavar con abundante agua
✓ Secar la preparación
✓ Observar al microscopio con objeto 100x, empleando aceite de inmersión
Incubación
18-24 horas de incubación a 35'5 º C

Dia 2
Describir el procedimiento del frotis de las colonias
Frotis de las colonias
✓ Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica hasta el rojo vivo y esperar a
que se enfrié un poco.
✓ Tomar con el asa una gota de agua estéril y agregarla en un portaobjeto.

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✓ Flamear nuevamente el asa y esperar a que enfrié.

✓ Tomar con el asa un poco de muestra bacteriana a partir de una colonia aislado.
✓ Después agregar la muestra en la gota de agua que está en el portaobjeto y homogenizar
suavemente con movimientos circulares .
✓ Esperar que seque al aire libre o poner durante uno o dos segundos con la llama de un
mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (solo se
pasa para llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las
bacterias a observar.
Pruebas de identificación
✓ Con un asa de siembra tiene una colonia y extiéndala en un porta con el fin de preparar un
frotis bacteriano y fije la preparación.
✓ Tiña el exceso de colorante.
✓ Añadir Lugol, esperar un minuto.
✓ Decolorar con etanol al 95% 20 segundos.
✓ Lavar con agua.
✓ Añadir el colorante de contraste, safamina, esperar 1 minuto.
✓ Lavar con agua.
✓ Observar al microscopio 100x.

Dia 3
Pruebas bioquímicas

Oxidasa 0
Producción de indol 98
Rojo de metilo 99
Voges-Proskauer 0
Citrato de Simmons 1
H2S (TSI) 1
Hidrolisis de urea 1
Acido de Glucosa 100
Lisina descarboxilasa 90
Ornitina descarboxilasa 65

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GRÁFICOS:

RESULTADOS OBTENIDOS/INTERPRETACIÓN:

Agar MacConkey
• Si crecen colonias rosas-rojas el microorganismo es lactosa positiva
• Si crecen colonias incoloras el microorganismo es lactosa negativa
Fundamento: Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Rojo Neutro. Si el
microorganismo fermenta la lactosa el pH del medio disminuye y el indicador vira a rosa-rojo.
Si el número de colonias en la placa es más de 300 el resultado será: más de 150.000 UFC/mL de
orina.
Si el número de microorganismos es:
Mayor de 105 /mL. Hay infección urinaria
Menor de 103/mL. No hay infección urinaria.
Entre 103 y 104/mL. Resultado dudoso. Se aconseja repetir el análisis.
Entre 104 y 105/mL. Posible infección, continuar con el análisis.

CAUSAS DE ERROR:
Romper el agar al momento de hacer el estriado
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Mal conteo de las colonias

El frotis con poca muestra
Sembrar en el agar equivocado

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:

Conclusiones
En conclusión las pruebas como el uroanálisis y la Tinción de Gram pueden apoyar en muchos de
los casos el diagnóstico, y en combinación, por su alto valor predictivo negativo, establecer quiénes
realmente ameritan o no tratamiento y la solicitud de pruebas más específicas como el urocultivo.

Recomendaciones
• Volumen recomendado a recolectar: 25 a 50 ml.
• Volumen mínimo: 3 ml.
• Preferentemente se debe obtener la primera orina de la mañana (ya que se trata de una muestra
más concentrada). De no ser posible, el paciente debe abstenerse de orinar durante las 3 horas
previas al examen.

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