Enterobacter sakazakii

De la Cruz Mendieta Dulce Adriana

Esquivel Medina Alicia Karina
También denominado anteriormente Enterobacter
cloacae de pigmento amarillo, y actualmente
Cronobacter sakazakii.

Género: Enterobacter

Especies: E. aerogenes, E. cloacae, E.

sakazakii, E. agglomerans y E. gergoviae

son PATÓGENOS OPORTINISTAS.

 Microorganismo
Bacilo Gram negativo

No esporulado

Presenta movilidad por flagelo.

Mesófilo; Temperatura óptima de crecimiento: 30-37°C

Anaerobio facultativo

Quimioorganótrofo.

Metabolismo fermentativo y respiratorio.

Crecimiento y supervivencia
pH alrededor de 6 o 7

Termotolerante

Permanece viable a temperaturas entre 5.8 y

8 ºC, no se desarrolla a 4º C
Valor Z (°C) Valor D (min)
52 54.8
54 23.7
56 10.3
58 4.2
60 2.5
 Pruebas bioquímicas
Prueba Resultado
Rojo de metilo -
Voges- Proskauer +
Lisina -
Arginina +
Ornitina +
Lactosa +
Hidrólisis de gelatina -
Ureasa -
 Hábitat
Existe una escasez de datos respecto a la ecología
microbiana de E. sakazakii.

Muytjens y Kollee informaron que no fueron

capaces de aislar el microorganismo del agua de
superficie, tierra, lodo, madera en
descomposición, grano, roedores, animales
domésticos, ganado vacuno o leche de vaca sin
pasteurizar.

Por lo tanto, el nicho ambiental preciso de E.

sakazakii continúa siendo una incógnita. . .
 Sin embargo se ha aislado de los materiales
clínicos, incluyendo el líquido
cefalorraquídeo, sangre, piel, heridas, de las
vías respiratorias (esputo, la garganta y la
nariz), el tracto digestivo y la orina.

Los investigadores también han aislados de E.

sakazakii en la leche reconstituida basada en
la fórmula infantil.(1)

(1) http://www.defendingfoodsafety.com/food-safety-law/common-food-borne-pathogens/e-sakazakii/
 Vía de transmisión
Productos infantiles deshidratados, debido a
su contaminación después del tratamiento
térmico.
 Mecanismo de patogenicidad
Produce enterotoxinas
Aerobactinas (destrucción de la células
adyacentes) y
Hemaglutininas (adhesión)

Sin embargo, se desconoce su

mecanismo de patogenicidad.
Lehner A, Stephan R. Microbiological, epidemiological and food safety aspects of Enterobacter sakazakii. J Food Prot. 2004;67:2850-
7.
 Factor de virulencia
El lipopolisacárido (forma parte de la membrana externa)
en particular el lípido A, también llamado endotoxina.

Mecanismos que le permiten adaptarse a sobrevivir en los

productos desecados:

Tolerancia a los bajas concentraciones de vapor de agua

libre ( aw ), poniendo en juego un mecanismo bioquímico
adaptativo , permitiéndole ser más resistente en su fase
estacionaria al stress osmótico y a la desecación, que otras
bacterias que forman parte de la misma familia , como
Escherichia coli y Salmonella
 Resistencia

Antimicrobianos de la familia de los

betalactámicos, por la formación de
enzimas betalactamasas de espectro
expandido por el mecanismo de
inducción frente al mismo.
 Detección
El nivel de detección:

Rango de 0.36 a 66 UFC/100g

Dadas las condiciones de preparación de la

fórmulas y los tiempos que a veces permanecen
reconstituidas, permiten un crecimiento exponencial
del microorganismo, llegando a niveles de
concentración de unidades formadoras de colonias
por gramo, suficientes para causar enfermedades en
población de riesgo susceptible.
Supervivencia a largo plazo en los
preparados en polvo para lactantes
 Dosis Infectiva

Niveles bajos de E. sakazakii en los

preparados en polvo para lactantes.

< 3 UFC/100 g pueden aparecer

infecciones.
 Enfermedad
Ha estado relacionada con casos de pequeños brotes de sepsis
neonatales, meningitis, cerebritis y enterocolitis necrotizante.

Se han notificado tasas de mortalidad debida a la infección por E.

sakazakii de hasta el 50%.

La enfermedad suele responder a la terapia con antibióticos.

También se ha informado de la existencia de α-lactamasas y

cefalosporinasas procedentes de E. sakazakii. Son bien conocidas
las secuelas neurológicas a largo plazo.
 Meningitis
Es una inflamación de las membranas que cubren el cerebro y la
médula espinal. La meningitis bacteriana puede resultar en daño al
cerebro, pérdida del oído o discapacidad para el aprendizaje.

Síntomas:

En personas mayores de dos años:

Fiebre alta
Dolor de cabeza
Rigidez de cuello
 En recién nacidos (difícil detectarlos)

Náusea
Vómito
Observar luces
Confusión
Somnolencia.

Estos síntomas pueden aparecer después de varias horas,

o pueden tomar de 1 a 2 días.
 En lactantes

Pueden parecer lentos o inactivos

Vómito
Estar irritables o ser alimentado de forma deficiente.

A cualquier edad los pacientes pueden tener

convulsiones
 Enterocolitis necrotizante

Es una enfermedad grave que afecta a recién

nacidos, en especial prematuros.

Se presenta como un síndrome gastrointestinal y

sistémico.

Se caracteriza por necrosis de la mucosa o de

capas incluso más profundas del intestino, sobre
todo en el íleon terminal y con menos frecuencia
del colon y del intestino delgado proximal.
Síntomas:

Distensión e hipersensibilidad abdominal

Sangre en heces
Intolerancia a la alimentación
Apnea (problemas respiratorios que se caracterizan por la obstrucción de
las vías aéreas)
Letargia (estado de somnolencia profunda y prolongada. )

En casos avanzados

Acidosis
Sepsis
Shock.

Su fisiopatogenia no está todavía completamente aclarada.

La vía final es una cascada
inflamatoria que se desencadena en
recién nacidos con determinados
factores de riesgo y que lleva a una
necrosis de la pared intestinal.
 Brotes
Se ha reportado E. sakazakii como agente
causal de meningitis en países como Suiza,
España y Estados Unidos.

El primer brote de meningitis causada por E.

sakazakii fue reportado por Urmenyi y
Franklin en 1961.(1)

(1) Urmenyi, A.M.C. and Franklin, A.W. 1961. Neonatal death from pigmented coliform infection. Lancet 1:313-315.
 1983, Muytjens Simmons et al., identificaron a E.
sakazakii como agente etiológico asociado a un brote
ocurrido en Holanda, donde los utensilios empleados para
la preparación de la fórmula infantil estuvieron implicados
en su origen.

Se reportó en un estudio en el Hospital de Baltimore,

Estados Unidos, en el cual los utensilios utilizados para la
preparación de las fórmulas infantiles estaban contaminados
con E. sakazakii; debido a esto el hospital tomó medidas de
control con el fin de evitar la presencia de este
microorganismo (2)

(2)Iversen C, Forsythe S, Risk profile of Enterobacter sakazakii, an emergent pathogen associated with infant milk formula. T in Food
Science 2003;14:443-54.    
 2004, En Francia y Nueva Zelanda, dos brotes infecciosos
protagonizados por Enterobacter sakazakii, bacteria presente en leches
en polvo para lactantes causaron la muerte de tres bebes y dejaron con
secuelas neurológicas a otros cuatro.

2005, En Argentina Enterobacter sakazakii fue hallada en un lote de la

leche Enfamil AR, importada de México, lo que motivó, a principios de
esa semana, su retiro del mercado y la prohibición de su consumo.(3)

2008, En México, 2 niños hospitalizados por E. sakazakii, el varón

murió y la mujer permaneció hospitalizada, ambos niños habían sido
alimentados con leche en polvo y otros alimentos. Tenían diferentes
cepas de la bacteria. (4)

(3) La Nación Líen. Fecha de consulta: 20 de marzo de 2010,

Disponible en http://www.lanacion.com.ar/nota.asp?nota_id=725151

(4) http://www.enterobactersakazakiiblog.com/articles/e-sakazakii-watch/
 Control
Durante la producción
Monitorear materias primas, específicamente aquellos
ingredientes que no requieren tratamiento térmico antes
de la mezcla.
Reducir el nivel de las enterobacterias en las zonas
utilizadas para la producción, a fin de evitar
contaminación posterior.
Revisar las instrucciones para la preparación de la leche,
lo que sugiere una mayor temperatura de agua, pero no
superior a 80°C, para la solubilidad (>70°C). Una
temperatura demasiado alta podría dañar la
características nutricionales del producto.
En casa
Usar biberones limpios y descontaminados.
Preparar los alimentos sólo lo suficiente para la
comida, evitar la preparación de después de las
comidas, si es necesario limitar el número de
comidas preparadas con antelación a 1o 2.
Evite dejar sin utilizar leche reconstituida en
temperatura ambiente.
Conservar en el refrigerador el producto
reconstituido.
Reducir en lo posible el paso del tiempo entre la
reconstitución de la fórmula y la su uso.
En hospitales/ guarderías

Esterilizar todos los utensilios utilizados para la

preparación con tratamiento térmico (por ejemplo, el
lavado en lavavajillas) o con autoclave.
Siempre que sea posible uso de utensilios desechables.
Emplear personal cualificado y especializado.
Almacenar el producto reconstituido en un refrigerador.
Reducir en lo posible el paso del tiempo entre la
reconstitución del producto y su uso.
Debidamente sellado todos los contenedores con resto
de la leche, colóquelos en el refrigerador.
 
 Detección
Pesar 333g muestra

Diluirlo en Agua destilada estéril, agitar suavemente hasta que el polvo es

uniformemente suspendido

10 ml de la suspensión + 90 ml de caldo EE estéril. Incubar a 36ºC durante

24h

Se inocula 0,1 ml en placas de agar VRBG por duplicado

***Si se sospecha que la fórmula en polvo para lactantes contiene un alto
número de E. sakazakii, el caldo EE se deben diluir a 10-4 a 10-6
con caldo EE estéril.)

Aislamiento: Inocular colonias características de E. sakazakii en una placa de

TSA
Incubar a 25ºC durante 48-72 horas.

Realizar Pruebas Bioquímicas

 Medios de cultivo
Caldo de Enriquecimiento de Enterobacterias
(EE)
Se emplea para el enriquecimiento selectivo de todas las
Enterobacteriáceas en productos alimenticios y otras muestras
de interés Composición:

Bilis de Buey 20,0 g.

Por la presencia de la Bilis de buey y del Verde Brillante se inhibe el Glucosa 5,0g
crecimiento de la flora indeseable. Peptona de Gelatina10,0g
Potasio di-Hidrógeno Fosfato
A su vez la Glucosa permite el crecimiento de todas las 2,0g
Enterobacteriáceas, tanto lactosa-positivas como lactosa-negativas. di-Sodio Hidrógeno Fosfato
8,0g
La mezcla de fosfatos tampona el medio y evita que por efecto del Verde Brillante 0,015g
descenso del pH se pudieran frenar los crecimientos.

http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm114665.htm
 Agar Soja y Tripticaseína (TSA)

Medio muy rico en nutrientes empleado para el desarrollo de

gran variedad de microorganismos.

Por el contenido de peptona de soja y peptona de caseína

Fig1.http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/Laborator
resulta una aportación nutritiva que permite el desarrollo yMethods/ucm114665.htm

óptimo de un gran número de microorganismos, tanto

exigentes como no exigentes. Composición:

Peptona de Soja 5,0g

La lectura consiste en contar las colonias típicas que
aparecerán con pigmentos amarillos después de 48-72 h de Peptona de Caseína 15,0g
incubación a 25 ° C.
Cloruro de Sodio 5,0g

Agar 15,0g

http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm114665.htm
 Agar bilis rojo violeta glucosa (VRBG).

Medio selectivo utilizado en la identificación presuntiva y

enumeración de enterobacterias en alimentos, productos
lácteos y otras muestras de importancia sanitaria.

Las sales biliares y el cristal violeta del medio inhiben la

Fig2.http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMe
flora acompañante Gram positiva. thods/ucm114665.htm

La fermentación de la glucosa hace que vire el indicador Composición:

rojo neutro a un color rojo púrpura.
Extracto de levadura 3,0 g.
También. se produce una precipitación de las sales biliares. Peptona 7,0 g.
Cloruro sódico 5,0 g.
Sales biliares 1,5 g.
Rojo neutro 0,03 g.
La lectura consiste en contar las colonias rojo púrpura Cristal violeta 0,002 g.
rodeadas de una zona de precipitación de las sales biliares Glucosa 10.0 g
color violeta. Agar 15,0 g.

http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm114665.htm
 Otros medios ( Métodos Rápidos)

Agar Chromocult ® Enterobacter sakazakii

Gracias a su sistema de detección cromogénico, basado en la

alfa-D-glucosidasa (una enzima específica para E. sakazakii)
sólo las colonias de E. sakazakii aparecen de color turquesa,
mientras que otras bacterias tienen colonias incoloras. Fig.3 http://www.rapidmicrobiology.com/news/1054h11.php

El Agar Chromocult ® Enterobacter sakazakii permite una

detección rápida y fiable en tan sólo 24 horas

http://www.rapidmicrobiology.com/news/1054h11.php
 Medio RAPID'sakazakii

Es un medio cromogénico selectivo utilizado para el aislamiento y

detección de Cronobacter spp. (anteriormente clasificados como
Enterobacter sakazakii).

La hidrólisis del sustrato cromogénico 5-bromo-4-cloro-3-indol

glucopiranósido conduce a la formación de colonias de color
turquesa, típica.
Fig. 4 www.rapidmicrobiology.com/news/1027h26.php

El medio incluye compuestos cuidadosamente seleccionados para

promover el crecimiento de las especies de Cronobacter, mientras que
suprime la flora a interferir, dando al medio un aumento de
selectividad.

Sin embargo la flora acompañante no es completamente inhibida y

puede formar colonias de luz violeta o gris.

www.rapidmicrobiology.com/news/1027h26.php
 Referencias
http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/
ucm114665.htm
http://www.cdc.gov/meningitis/about/faq.html
http://www.sccalp.org/boletin/46_supl1/BolPediatr2006_46_sup
l1_172-178.pdf
http://www.who.int/foodsafety/publications/micro/es_sp.pdf
http://www.fao.org/docrep/009/y5502s/y5502s07.htm
http://ftp.fao.org/codex/ccfh36/fh04_12s.pdf
David Hendricks Bergey,John G. Holt, et. al., Bergey’s manual
of Determinative Bacteriology, 9ª. Edición, 1994.
http://www.alertanutricional.org/interior.php?num=103
http://www.iss.it/binary/publ/cont/275%20-
%20ANN_08_39%20Fiore.1224498732.pdf