Practica 5

Líquidos Corporales (LCR y otros)

I. Introducción
El sistema nervioso puede infectarse por diferentes microorganismos, incluyendo bacterias,
virus, hongos, protozoos y helmintos. Los agentes infecciosos pueden invadir los órganos
diana a partir de un foco infeccioso cercano como una otitis, por vía hematógena, siguiendo
diversas vías nerviosas, o bien ayudados por la existencia de sistemas de derivación del
líquido cefalorraquídeo (LCR) colocados en intervenciones de neurocirugía.
Se define como meningitis a la inflamación de las leptomeninges. Clásicamente se ha
citado a Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae como
los agentes más frecuentes, pero el uso sistemático de vacunas frente a H. influenzae
serogrupo b, N. meningitidis serogrupo C o la heptavalente para neumococo ha cambiado la
epidemiología en los países desarrollados. Actualmente se puede decir que en nuestro
medio los microorganismos más frecuentes en los recién nacidos son Streptococcus
agalactiae, Escherichia coli y Listeria monocytogenes; en niños y adolescentes los
meningococos, en adultos mayores de 30 años los neumococos y en mayores de 50 años e
inmunodeprimidos hay que tener en cuenta también a L. monocytogenes. Otras infecciones
bacterianas como la tuberculosis, la sífilis o las causadas por Borrelia burgdorferi afectan
las meninges con mucha menor frecuencia y suelen producir procesos subagudos o
crónicos. Los virus son causa frecuente de meningitis y meningoencefalitis agudas.
Distintos virus pueden infectar el sistema nervioso como enterovirus, herpes virus,
citomegalovirus, poliomavirus y otros.

II. Procesamiento
Tipo de muestra: Cerebroespinal o Líquido cefalorraquídeo, liquido articular
Medio de Cultivo:
Gelosa sangre (CO2)
Agar Chocolate (CO2)

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 Agar Tioglicolato
Coloración de Gram

III. Examen Citoquímico

Procedimiento:

o Verificar que la información en la boleta este completa y corresponda a la muestra

que se va a procesar.
o Verificar apariencia de la muestra, reportar si hay presencia de coagulo (es muy
importante reportar la presencia de coagulo), nivel de turbidez, si esta xantocrómico
o sanguinolento y si se encuentra algo anormal anotarlo en la boleta y libro de
registro
o Si la muestra viene en jeringa se debe tomar un tubo transferir la muestra requerida
al tubo y rotular el tubo con los datos del paciente o con el número de registro
correspondiente
o Rotular el tubo y la boleta con el número correspondiente de registro en el libro de
Citoquímicas del laboratorio
o Mezclar bien el líquido del tubo y cargar la cámara de Neubauer

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o Contar en el microscopio con el lente de 40x los leucocitos presentes en el líquido.
Sila muestra no fue diluida por ser transparente o no mostrar mucha turbidez, se
cuentan todos los cuadrantes de la cámara y se reporta la cantidad de leucocitos se
reporta por µL. Si las células no se pueden contar por ser muy abundantes hacer
dilución 1:20, cargar la cámara, contar como blancos y reportarlos por ml. Si se
observa algo anormal reportarlo en la boleta y en el libro de registro (como
presencia de muchos glóbulos rojos o levaduras).
o Rotular 2 tubos con el número de registro correspondiente a la muestra, uno para
realizar la glucosa y otro para proteínas.
o Para el tubo donde se realizará la glucosa colocar 2ml del reactivo de glucosa con
20 microlitros de la muestra, mezclar e incubar 10 min a temperatura ambiente o 5
min en baño maría, luego leer en el espectrofotómetro a 510nm, reportar los
resultados en la boleta y el libro de registro.

o No olvidar que todos los días se debe de montar el Estándar y el control de Glucosa
antes de comenzar a trabajar y estos resultados deben de ser anotados en el libro de
registros y en las hojas correspondientes al control de calidad.
o Para el tubo donde se realizará las proteínas debemos colocar 2ml del liquido para
proteínas con 500 microlitros de la muestra, mezclar e incubar 10 min a temperatura
ambiente, luego leer en espectrofotómetro a 605nm, buscar la absorbancia en la
tabla de conversión, reportar los resultados en la boleta y en el libro de registro.
o Si la muestra está muy turbia, antes de realizar la medición glucosa y proteínas se
debe hacer una dilución de la muestra ya sea 1:10, 1:20, 1:50 o 1:100 según se
considere necesario y esta dilución de debe multiplicar por el resultado obtenido
para tener el valor real del resultado en la muestra.
o Si se llega a observar bacterias al momento del conteo de leucocitos se debe
centrifugar la muestra por 15min/ 2500rpm, hacer una coloración de Gram y
sembrar la muestra siguiendo el procedimiento necesario para líquidos.

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 o Si al contar los leucocitos estos se encuentra por encima del valor normal
establecido para cada líquido se debe centrifugar la muestra por 15min/2500rpm,
hacer una coloración Wright, contar 100 leucocitos para reportar el porcentaje de
leucocitos mononucleres y leucocitos polimorfonucleares
o Guardar el resto del líquido en la refrigeradora por 10 días para hacer cualquier
verificación
o Copiar en la boleta y libro de registro todos los resultados obtenidos de la
Citoquímica.

IV. Valores de Referencia:

Glucosa:
Líquido cefalorraquídeo: 60-80 mg/dl (60-70% del valor en suero)
Líquido pleural: 60-80 mg/dl
Líquido peritoneal: 70-100 mg/dl

Proteínas:
Líquido cefalorraquídeo: 15-45 mg/dl
Líquido peritoneal: 0.3- 4.1 g/dl

Proteínas en Líquido Cefalorraquídeo. Pacientes pediátricos y neonatales

Valor Medio Intervalo
< 1500 g 142 mg/dl 45-370 mg/dl
Pre-termino 115 mg/dl 65-150 mg/dl
Neonato a término 90 mg/dl 20-170 mg/dl
>1 mes Hasta 40 mg/dl

Conteo de leucocitos:
Líquido Cefalorraquídeo: ≤ 10 células/ml
Liquido peritoneal y pleural: ≤ 100 células

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V. Interpretación de Resultados:

Si se observan al momento de contar leucocitos levaduras encapsuladas se debe

informar a la Dra. encargada de la sección de Micología para que ella le de
seguimiento a dicha muestra. Si dado el caso de que la Dra. No se encontrara,
realizar a la muestra una Tinta China y observar si son levaduras encapsuladas,
reportar se observan escasas, moderadas o abundantes levaduras encapsuladas y
siempre informar a la sección de Micología.

Todo resultado de la medición de glucosa o proteínas alterado por encima o por

debajo del valor normal deberá de ser confirmado.

VI. Procedimiento
a) Registrar el volumen y aspecto de la muestra (cristalino, xantocromico, turbio)

b) Vortex o centrifugue la muestra

- Si el volumen es menor a 1 ml, vortex
- Si el volumen es mayor a 1 ml, centrifugue por 20 minutos/1500-300g, luego
aspire el sobrenadante y vortex para resuspender el sedimento

c) Utilice una pipeta Pasteur y agregue 1-2 gotas de la muestra vortexeada en la

placa de agar. Agregue 1-2 gotas sobre una lámina porta objetos (evite contacto
entre la pipeta y la lamina), deje que se forme abundantemente y no lo extienda.
Utilizando la misma pipeta agregue 2-3 gotas del líquido en el fondo del tioglicolato

d) Utilizando una asa esteril, realice el estriado en la placa por el método de

Frobisher. Incinere el asa, tome una pequeña cantidad de S. aureus y realice una
linea diagonal (desde la primera area de estrias hasta la tercera area) atraviesela e
inoculela en agar Sangre

e) Incube apropiadamente. Incube el liquid LCR o articular de la siguiente manera

Agar sangre, agar chocolate (5-7 % CO2) : 5 dias

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 Caldo tioglicolato (aerobiosis 35-37 °C: 14 dias)

f) Realizar Gram de las colonias, fíjelo al calor, coloree por Gram y lea al
microscopio. Los resultados de la observación microscópica de las extensiones
(ausencia o presencia de leucocitos polimorfonucleares y la ausencia o presencia de
uno o varios morfotipos bacterianos) se informaran al médico peticionario y quedara
en la hoja de trabajo correspondiente a la muestra

g) Si no hay crecimiento visible en las placas en el caldo, reincube y examine el

siguiente día

VII. Interpretación de cultivo

Examinar las placas cada 24 horas, hasta un total de 5 días. Examinar el caldo cada 24
horas, para la detección de crecimiento macroscópico (turbidez), hasta un total de 14 días.
Si los cultivos presentan crecimiento:
1. Correlacionar los aislados con los morfotipos observados en la tinción de Gram.
2. Trasladar al facultativo peticionario un informe preliminar con la identificación
presuntiva
3. Identificar los aislados a nivel de especie y realizar pruebas de sensibilidad a los
antibióticos según las normas estandarizadas vigentes (CLSI, EUCAST)
4. Si el crecimiento se produce sólo en los caldos de cultivo y no en las placas,
realizar subcultivo del caldo en medios sólidos (agar sangre, agar chocolate) y
correlacionar el aislado con el morfotipo observado en la tinción de Gram
5. Cuando en un caldo crecido se observe por tinción de Gram microorganismos que
no crecen en el subcultivo, proceder a subcultivar en medios nutricionalmente más
ricos y en diferentes condiciones de incubación

VIII. Test de Susceptibilidad

1. Test de Beta lactamasas debe ser realizado en los aislamientos de H. influenzae y
Neisseriae sp
2. El antibiograma debe realizarse en todos los aislamientos de bacterias aerobias

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IX. Reporte
1. Reporte los resultados positivos e infórmelo al medico
2. Un reporte preliminar debe realizarse dentro de las primeras 24 horas, debe incluir
cuantificación e identificación descriptiva de todos los aislamientos
Si un cultivo es negativo pero se convierte en positivo, se debe preparar un nuevo reporte
de resultado preliminar
3. Reporte final, reporte cuantificación, Identificación definitiva y test de susceptibilidad de
todos los aislamientos

X. Otros

Métodos rápidos para detección de antígeno de Criptococcus

Serología de látex
Pruebas de aglutinación
Proteína C reactiva

Cuestionario
¿Por qué debe utilizar anticoagulantes en la obtención del líquido sinovial?

Describa la dilución del recuento del líquido sinovial

¿Qué significado tiene la xantocromía en un líquido cefaloraquídeo?

¿Cuáles pueden ser las causas de proteínas elevadas en el LCR?

Glucosa de 15 mg/ml. Recuento de leucocitos 5000. Neutrófilos 90%. Proteinas

80mg/dl. ¿Qué tipo de meningitis sugieren estos valores?

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