COLEGIO DE ESTUDIOS CIENTÍFICOS Y

TECNOLÓGICOS
DEL ESTADO DE MICHOACÁN

PLANTEL 05 GUACAMAYAS.

Especialidad: Producción Industrial de los Alimentos.

Módulo I: Submódulo 3: Realiza análisis
microbiológicos.
Práctica 4. Métodos de esterilización.
Alumno: Erick Gael Aquino Mancilla.
Docente: Janay Lobato Pérez.
Fecha de entrega:
Grupo: 224-A Equipo: 3
Práctica 4. Métodos de esterilización.

Objetivo: Conocer el proceso de operación y cuidados que se deben tener en las

autoclaves.

Introducción:

El presente reporte, tiene el fin de adherir el aprendizaje acreditado, mantener un orden

metodológico y ser la herramienta como prueba de la validez retroalimentada de la práctica;

Un autoclave es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre

hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una
cocción o una esterilización con vapor de agua a fin de desinfectar materiales e
instrumentos quirúrgicos. Su construcción debe ser tal que resista la presión y temperatura
desarrollada en su interior. La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas
superiores a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce la
desnaturalización de las proteínas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para
la vida y la reproducción de éstos, hecho que lleva a su destrucción.

Marco teórico:

En el laboratorio de Microbiología es imprescindible trabajar con material y soluciones

estériles con objeto de que los resultados que se obtengan correspondan al microorganismo
o microorganismos que están presentes en la muestra en estudio y no a contaminantes que
procedentes del medio o los materiales, puedan desarrollarse y falsear las pruebas. Para
ello antes de comenzar el trabajo práctico se esterilizará, junto con los medios de cultivo, el
material que posteriormente va a ser utilizado. Se entiende por esterilización los
procedimientos por los cuales se eliminan todas las formas vivas de microorganismos, sean
patógenos o no, que se hallen en un material. Esta esterilización suele efectuarse con calor
húmedo en unos aparatos denominados autoclaves.

La autoclave es un instrumento habitual en los laboratorios de Microbiología. Es un sistema

cerrado donde se forma vapor de agua que se somete a una presión elevada, una
atmósfera, lo que hace que el agua alcance una temperatura de 121ºC causando la
desnaturalización de enzimas lo que conlleva a la muerte de los microorganismos y la
destrucción de las esporas. Habitualmente, se esteriliza a 121ºC durante 20 minutos.

El proceso completo de esterilización en una autoclave se compone de diferentes fases:

1. Fase de purgado: A medida que la resistencia calienta el agua del fondo del calderín,
se va produciendo vapor que desplaza el aire, haciéndolo salir por la válvula de
purgado que está abierta. Esta fase termina cuando se alcanza la temperatura de
esterilización.
2. Fase de esterilización: Una vez cerrada la válvula de purgado y alcanzada la
temperatura de esterilización previamente seleccionada se inicia el proceso de
esterilización.

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3. Fase de descarga: Terminado el proceso de esterilización, deja de funcionar la

resistencia calefactora, con lo que deja de producirse vapor y la presión y
temperatura del calderín empieza a bajar poco a poco.

Etapas de Funcionamiento del Autoclave

Puesta en Marcha Se cierran las puertas herméticamente para que la cámara quede sellada.

En esta fase se eliminara el aire contenido en la cámara y se favorecerá a la

eliminación posterior del aire dentro de los paquetes y de los contenedores. Para
Expulsión de Aire ello se inyecta vapor en la cámara y se activa el sistema de vacío.

Para la extracción del aire de los productos y de la cámara, se realiza una serie de
fases (hasta cuatro) de inyección de vapor (de recámara a cámara) seguidas de
fases de vacío (prevacío), mediante el sistema de vacío, para eliminar
Preparación completamente el aire restante.

Se introduce vapor en la cámara y en el interior de los contenedores, hasta alcanzar

Calentamiento la temperatura y presión de esterilización.

Se mantiene constante la temperatura y presión en la cámara durante

Esterilización el correspondiente tiempo de esterilización.

El vapor de la cámara es eliminado por el sistema de vacío y se produce un

Desvalorización descenso de la presión.

Se inicia un vacío final, profundo y duradero. Se mantiene el vapor en la recámara,

para mantener caliente la cámara y ayudar a secar el producto a fin de evitar todo
Secado tipo de re contaminación bacteriana durante el transporte y el almacenamiento.

Entrada de aire atmosférico a la cámara, a través de un filtro de aire estéril, para

compensar la presión de la cámara (que estaba en depresión) con la atmosférica.
El vapor utilizado se condensa y se convierte en agua transportándose a un
Igualación depósito.

Finalización del
Proceso Se liberan las puertas para que puedan ser abiertas.

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Existen indicadores físicos, químicos y biológicos que pueden usarse para asegurar
que una autoclave alcance la temperatura correcta durante el tiempo correcto.
Algunos indicadores físicos consisten en una aleación diseñada para derretirse solamente
después de ser sometida a una temperatura dada durante el tiempo de retención
correspondiente. Si la aleación se funde, el cambio será visible. Los indicadores
biológicos contienen esporas de una bacteria resistente al calor, Geobacillus
stearothermophilus . Si la autoclave no alcanza la temperatura adecuada, las esporas
germinarán cuando se incuban y su metabolismo cambiará el color de un producto químico
sensible al pH.

Consideraciones

Las autoclaves utilizan vapor de alta presión y alta temperatura para la esterilización. Los
riesgos son potenciales y por tanto es necesario seguir ciertas consideraciones.

Posibles Peligros:
 Se pueden provocar quemaduras en la piel al manipular las paredes y la puerta de la
cámara del autoclave.
 El vapor residual que sale del autoclave y los materiales al finalizar el ciclo de uso.
 Lesiones de manos y brazos al cerrar la puerta.
 Lesión corporal si hay una explosión.
Para asegurar la salud y seguridad del personal que usa el autoclave, es importante:
 Capacitar al personal respecto al uso adecuado del autoclave.
 El nombre de la persona responsable del autoclave debe ser colocado cerca del
autoclave.
 Es responsabilidad del supervisor asegurar que los empleados estén entrenados
antes de operar cualquier unidad de autoclave.
 Se deben seguir los documentos de procedimiento y de instrucción proporcionados
por el fabricante.
 Se debe usar ropa y equipo de protección personal cuando se carga y descarga el
autoclave.
 Las autoclaves deben ser inspeccionadas al menos una vez al año.
 Las tiras de esporas pueden usarse para validar la eficacia del funcionamiento del
autoclave.
Es muy importante para la esterilización que el vapor sea:
 Limpio: Es decir un vapor formado a partir de agua limpia, es decir, agua filtrada y
libre de sustancias contaminantes como el cadmio, magnesio, plomo o cloro entre
otras.
 Puro: Esto quiere decir que la presencia de agua en forma líquida sea muy baja, esto
se considera cuando es menor al 3%.
Para que sea efectiva la esterilización:
 El vapor tiene que estar en contacto directo con el material a esterilizar (por lo que la
carga de los elementos es muy importante).
 Crear el vacío efectivo con el fin de desplazar todo el aire presente inicialmente en el
autoclave y su sustitución por vapor.

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Material y equipo:

MATERIALES EQUIPO

4. Cajas de Petri Autoclave

2. Tubos de ensayo

1. Mortero
OTROS

4. Pipetas Papel estraza

1. Agitador Marcador negro

1. Espátula

2. Matraz Erlenmeyer.

Reactivos químicos:

Agua (H2O)

Procedimiento:
1. Controlamos el nivel de agua.
2. Introducimos los materiales.
3. Cerramos la tapa.
4. Encendimos la fuente de calor.
5. Purgamos para eliminar el aire,
6. Cerramos la válvula.
7. Cuando se alcance la presión deseada, comenzamos a tomar el tiempo de
esterilización.
8. Una vez que haya terminado el tiempo, apagamos la fuente de calor.
9. Cuando la presión deseada llegue a cero, abrimos la espita para que se equilibre.
10. Abrimos la autoclave y esperamos a que esté a temperatura ambiente para poder
sacar los materiales.

Normatividad aplicada:
‘Reglamento e higiene del laboratorio de usos múltiples’

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Conclusiones:
Finalmente se llegó a la conclusión de que es importante conocer e identificar los usos de
una autoclave para poder esterilizar los materiales del laboratorio de microbiología.
Identificamos los riegos y medidas a considerar en el manejo de una autoclave.
Actividades:
1. Realiza una consulta en libros o internet sobre los tipos de esterilización
que se utilizan para el material de laboratorio:
 Autoclave: Es el método de referencia, utiliza calor húmedo en equipos que se
denominan autoclaves, formados por un recipiente o cámara de esterilización de paredes
gruesas y cierre hermético que permite usar vapor a presión y temperatura elevada.

 Vía seca: La esterilización por vía seca o calor seco es una variante de la autoclave en la
que no se usa vapor, al ser menos agresivo (en ausencia de agua el calor se transfiere
peor al material) se utiliza a más alta temperatura y durante más tiempo.

 Métodos químicos: Puede conseguirse desinfectar y/o esterilizar material de laboratorio

usando diversos productos químicos tanto en fase gaseosa como en fase líquida por su
capacidad para eliminar microorganismos.

 Radiaciones ionizantes: Las radiaciones ionizantes pueden usarse para esterilizar por su
capacidad para destruir microorganismos. La radiación gamma se caracteriza por su alta
energía y poder de penetración que permite su uso con los materiales y productos
envasados, característica muy importante para los materiales destinados a cultivos y
preparaciones biológicas como las Placas de Petri estériles.

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Práctica 4. Métodos de esterilización.

A) Realiza un esquema de las autoclaves que tiene tu laboratorio:

B) ¿Cuáles son los tipos de esterilización que se utilizan para material

de laboratorio?
Dentro del laboratorio de microbiología, implementamos los métodos de
autoclave y métodos químicos.
C) ¿Qué temperatura y que tiempo se requiere para la esterilización?
Las condiciones de temperatura y presión de un proceso de
esterilización por vapor de agua en una autoclave van de 121 °C a 134
°C y 275-350. Para el tratamiento de residuos hospitalarios se emplean
tiempos de operación entre 20 y 30 minutos.

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Práctica 4. Métodos de esterilización.

Referencias:
 quercusblog. ( 09 de junio del 2016). Esterilización del material de laboratorio. . El
blog de QuercusLab Recuperado de https://quercuslab.es/blog/esterilizacion-del-
material-de-laboratorio/ el 16/03/2020

 (23 febrero del 2020). Esterilización (microbiología). . Wikipedia ORG Recuperado

de https://es.wikipedia.org/wiki/Esterilizaci%C3%B3n_(microbiolog%C3%ADa) el
16/03/2020

 Garrido Abate N.. (2015). MANUAL BÁSICO DEL USO DE AUTOCLAVES. Arica,
Chile. UNIVERSIDAD DE TARAPACÁ Recuperado de
http://sb.uta.cl/libros/Apuntes%20ba%CC%81sico%20de%20uso%20de%20autocl
ave.pdf el 16/03/2020

 Manuel Sánchez Marina Torreblanca Kika Colom Ana Belén Martín C. Catálogo de
Prácticas de laboratorio para la docencia en Microbiología. España. Universidad
UMH Recuperado de https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/esterilizacion-desinfeccion-y-antisepsis/autocave el
16/03/2020

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