COD 11795 50 mL CONSERVAR A 2-8C Reactivos para medir la concentracin de citrato Slo para uso in vitro en el laboratorio clnico

CITRATE CITRATO
CITRATO LIASA/MALATO DESHIDROGENASA

FUNDAMENTO DEL MTODO

El citrato presente en la muestra consume, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, NADH que se cuantifica espectrofotomtricamente1.
CL

Decimales N Replicados Nombre de la tcnica en el informe de paciente PROCEDIMIENTO Volmenes Lectura Muestra Reactivo 1 Reactivo 2 Lavado Factor predilucin Factor postdilucin Principal Referencia Lectura 1 Lectura 2 Reactivo 2 Tipo de calibracin Replicados calibrador Replicados blanco Curva de calibracin Lmite absorbancia blanco Lmite blanco cintico Lmite de linealidad

0 1 monocromtica 4 240 60 1,2 2 340 75 s 390 s 90 s especfico 3 3 1,2 1250 (orina: 250)

0 1 monocromtica 4 240 60 1,2 2 340 72 s 384 s 96 s especfico 3 3 1,2 1250 (orina: 250)

Citrato Oxaloacetato + NADH + H+

Oxaloacetato + Acetato
MDH

malato + NAD+

CONTENIDO Y COMPOSICIN
A. Reactivo. 1 x 40 mL. Tris 40 mmol/L, NADH 0,4 mmol/L, conservantes, pH 9,5. B1. Reactivo. 1 x 10 mL. PIPES 600 mmol/L, conservantes, pH 6,5. Irritante (Xi): R43: Posibilidad de sensibilizacin en contacto con la piel. S36/37: Usen indumentaria y guantes de proteccin adecuados. B2. Reactivo. 1 para 10 mL. Malato deshidrogenasa > 40 KU/L, citrato liasa > 1 KU/L, una vez reconstituido. S. Patrn citrato. 1 x 3 mL. cido ctrico 100 mg/dL (5,20 mmol/L). Patrn primario acuoso. Irritante (Xi): R43: Posibilidad de sensibilizacin en contacto con la piel. S36/37: Usen indumentaria y guantes de proteccin adecuados.
Filtros Tiempos

CALIBRACIN

OPCIONES

CONSERVACIN
Conservar a 2-8C. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso. Indicaciones de deterioro: Reactivos: Presencia de partculas, turbidez, absorbancia del blanco inferior a 1,2 a 340 nm (cubeta de 1 cm). Patrn: Presencia de partculas, turbidez.

VALORES DE REFERENCIA
Plasma seminal: > 300 mg/dL = > 15,6 mmol/L3; > 10 mg/eyaculado = > 52 mol/eyaculado4 Orina3: Hombres: 116-924 mg/24h = 0,60-4,81 mmol/24h Mujeres: 250-1160 mg/24h = 1,30-6,04 mmol/24h Estos valores se dan nicamente a ttulo orientativo; es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia.

PREPARACIN DE LOS REACTIVOS

El reactivo A est listo para su uso. Reactivo B: Preparar un reactivo de trabajo reconstituyendo el Reactivo B2 con el contenido del vial de Reactivo B1. Agitar suavemente. Estable 2 meses a 2-8C.

CONTROL DE CALIDAD
Cada laboratorio debe establecer su propio programa de Control de Calidad interno, as como procedimientos de correccin en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias aceptables.

EQUIPO ADICIONAL
Bao de agua a 37C. Analizador, espectrofotmetro o fotmetro para lecturas a 340 20 nm.

CARACTERSTICAS METROLGICAS
Los datos siguientes se obtuvieron usando un analizador A25. Los resultados son similares a los del A15. Los detalles sobre los datos de evaluacin estn disponibles bajo solicitud. Lmite de linealidad: 1250 mg/dL = 65 mmol/L (pl.seminal); 250 mg/dL = 13 mmol/L (orina). Para valores superiores, diluir la muestra tratada 1/2 con agua destilada y repetir la medicin. Lmite de deteccin: 19 mg/dL = 1,0 mmol/L (pl.seminal); 3,8 mg/dL = 0,2 mmol/L (orina). Repetibilidad (intraserie):
Concentracin media (plasma seminal) 200 mg/dL = 10,4 mmol/L 750 mg/dL = 39,0 mmol/L Concentracin media (orina) 40 mg/dL = 2,08 mmol/L 150 mg/dL = 7,80 mmol/L CV 2,5 % 1,1 % n 20 20

MUESTRAS
Plasma seminal: Incubar el esperma a 37C durante 30 minutos, para su licuefaccin. Centrifugar para separar los espermatozoides2. El citrato es estable 6 meses a 20 C. Orina: Recoger la orina de 24 horas usando HCI como conservante. Estable 30 das a 2-8C. Centrifugar o filtrar antes de realizar la medicin.

PROCEDIMIENTO
Dilucin de la muestra (plasma seminal) El patrn y las muestras de orina no requieren tratamiento previo. 1. Pipetear en un tubo de ensayo:
Plasma seminal Agua desionizada 200 L 800 L

Reproducibilidad (interserie):
Concentracin media (plasma seminal) 200 mg/dL = 10,4 mmol/L 750 mg/dL = 39,0 mmol/L Concentracin media (orina) 40 mg/dL = 2,08 mmol/L 150 mg/dL = 7,80 mmol/L CV 3,8 % 3,3 % n 25 25

2. Agitar ligeramente. La muestra diluida es estable 8 horas a 15-25C, 24 horas a 2-8C. Procedimiento manual 1. Atemperar los reactivos a temperatura ambiente. 2. Pipetear en tubos de ensayo:
Blanco Agua desionizada Patrn Citrato (S) Muestra Reactivo A Reactivo B 20 L 1,2 mL 300 L Patrn 20 L 1,2 mL 300 L Muestra 20 L 1,2 mL 300 L

Veracidad: Los resultados obtenidos con este procedimiento no mostraron diferencias sistemticas cuando se compararon con un procedimiento de referencia. Los detalles de los experimentos de comparacin estn disponibles bajo solicitud.

CARACTERSTICAS DIAGNSTICAS
El citrato es producido por la prstata y est presente en el plasma seminal. El citrato es el anin principal de la postrata y desempea un papel importante como quelante de iones. La medicin de su concentracin en plasma seminal se utiliza como marcador determinante de la funcin secretora de la glndula prosttica. Valores bajos indican una alteracin anmala de la funcin secretora de la glndula, posiblemente como consecuencia de la obstruccin de los conductos debido a una inflamacin de carcter agudo o crnico.3,4 El citrato en orina inhibe la formacin de litiasis clcicas porque forma complejos solubles con el calcio. Los pacientes con clculos de calcio presentan una disminucin de su excrecin. El citrato urinario puede ser til en la evaluacin del riesgo de padecer litiasis clcica3.

3. Mezclar bien e incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25C) o 5 minutos a 37C. 4. Leer la absorbancia (A) del Patrn, de la Muestra y del Blanco a 340 nm. El color es estable durante al menos 30 minutos. 5. Calcular la concentracin de citrato usando la siguiente frmula: AMuestra - ABlanco APatrn - ABlanco Procedimiento automatizado (Nota 1) A25
GENERAL Tcnica Modo de anlisis Tipo de muestra Unidades Tipo de reaccin CITRATO Diferencial bir mg/dL decreciente Plasma Seminal x 500 = mg/dL citrato x 26,1 = mmol/L citrato Orina x 100 = mg/dL citrato x 5,21 = mmol/L citrato

NOTAS
1. Estos reactivos pueden utilizarse en la mayora de analizadores automticos. Solicite informacin a su distribuidor.

BIBLIOGRAFA
1. Mllering, H. & Gruber, W. Determination of citrate with citrate lyase. Anal.Biochem. 1966; 17: 369-376. 2. Poirot C, Cherruau. Infertilidad masculina. Aspectos clnicos e investigaciones biolgicas. Acta Bioquim Clin Latinoam 2005; 39: 225-241. 3. Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4th ed. Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE. WB Saunders Co, 2005. 4. WHO laboratory manual for the examination of human semen and sperm-cervical mucus interaction. Cambridge university press, 3th ed, 1992.

A15
CITRATO Diferencial bir mg/dL decreciente

M11795c-03

BioSystems S.A. Costa Brava 30, Barcelona (Spain)

Quality System certified according to EN ISO 13485 and EN ISO 9001 standards

02/2011