BILIRRUBINA

METODO JENDRASSIK – GROF.

Para la determinación “in vitro” de la Bili. Total y Directa en suero o plasma.

Principio BILIRRUBINA DIRECTA

La Bilirrubina Total se determina por reacción con el ácido
sulfanílico diazoado, en presencia de cafeína, que da lugar a la
formación de un azopigmento. La Bilirrubina Directa se
Técnica BL PR
determina mediante la reacción anterior, en ausencia de
ml ml
cafeína.
Ac. Sulfanílico 0,2 0,2
Nitrito sódico --- 1 gota
Reactivos Salina 2,0 2,0
Kit 1 x 245 ml. (Ref. 99 20 93). Contiene: Muestra 0,2 0,2
A. 1 x 40 ml. Disol. Ac. Sulfanílico. (Ref. 99 29 04). Mezclar e incubar a (15 - 25ºC).
B. 1 x 100 ml. Disolución de Cafeína. (Ref. 99 23 82). Leer exactamente a los 5 min.
C. 1 x 100 ml. Disolución de Tartrato. (Ref. 99 29 46). Lectura
D. 1 x 5 ml. Disol. Nitrito de sodio. (Ref. 99 25 25). Longitud de onda: 546 nm.
Blanco: el contenido del tubo BL.
Kit 1 x 490 ml. (Ref. 99 98 01). Contiene: Cubeta: 1 cm. de paso de luz.
A. 1 x 80 ml. Disol. Ac. Sulfanílico. (Ref. 99 91 03).
B. 2 x 100 ml. Disolución de Cafeína. (Ref. 99 23 82).
Cálculos
C. 2 x 100 ml. Disolución de Tartrato. (Ref. 99 29 46).
D.O. PR x 14,4 = mg Bilirrubina Directa/dl.
D. 1 x 10 ml. Disol. Nitrito de sodio. (Ref. 99 84 01).
Unidades S.I.
Todos los reactivos están listos para su uso.
Las concentraciones en las disoluciones reactivas son: (mg/dL x 17,1 = µmol/L.
A. Ac. Sulfanílico 30 mM
HCl 0,17 M Valores normales
B. Cafeína 0,25 M En Adultos: hasta 0,25 mg/dl.
Benzoato sódico 0,50 M
C. Tartrato potásico 0,80 M
NaOH 1,85 M
D. Nitrito de sodio 30 mM Prestaciones. Caracteristicas de funcionamiento.

Conservación y estabilidad El método es lineal hasta 25 mg/dl. Para concentraciones

Los componentes del kit, mantenidos a temperatura ambiente (≤
25ºC),son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta.
Muestra
Suero o plasma exentos de hemólisis. La Bilirrubina sérica
disminuye en un 50 % después de 1 hora a temperatura
ambiente (≤ 25ºC), y expuesta a la luz solar. Las muestras
mantenidas en la oscuridad y a 2-8º C son estables 3 días.
superiores a 15 mg/dl, el desarrollo de color obtenido (D.O. >
a 1.500 aprox.) puede resultar de difícil lectura en
espectrofotómetros no digitales. Se aconseja diluir 1/10 la
muestra con salina (Na Cl 0,9%). Multiplicar el resultado final por
10.
Las características de funcionamiento del producto dependen
tanto del reactivo como del sistema de lectura manual o
automático empleados. Los siguientes datos se han obtenido de
forma manual:

Precauciones Coeficiente de Variación en la serie: 1,64%

Los reactivos contienen Azida sódica al 0,09%, manipular
con precaución. La eliminación de residuos debe hacerse
según la normativa legal vigente.
BILIRRUBINA TOTAL
Coeficiente de Variación entre series: 1,98%
Exactitud: 96,3 de porcentaje de recuperación.
Cuando se determina Bilirrubina Directa, y para evitar errores es
muy importante efectuar la lectura exactamente a los 5
minutos de haber añadido el último reactivo.

Técnica BL PR
ml ml NOTA
Ac. Sulfanílico 0,2 0,2 En caso de disponer de poca muestra, se puede
Nitrito sódico -- 1 gota utilizar 50 µl, en lugar de 0,2 ml, manteniendo los
Cafeína 1,0 1,0 volúmenes de los reactivos, y multiplicar los
Muestra 0,2 0,2 resultados por:
Mezclar y dejar 10 min a temp. ambiente. F= 43,2 (Bilirrubina . Total)
Tartrato 1,0 1,0 F= 57,6 (Bilirrubina Directa)
Mezclar y dejar 5 min a temp. ambiente.
Lectura
Longitud de onda: 578 nm.
Blanco: el contenido de BL.
Cubeta: 1 cm de paso de luz. Control de calidad
Estabilidad del color: un mínimo de 1 h. Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) y Seriscann Anormal (Ref. 99
46 85).
Cálculos
D.O. PR x 10,8 = mg de Bilirrubina Total / dl. Bibliografía
Unidades S.I. Jendrassik,L.,Grof,P.(1938). Biochem.Z., 297, 81-89.
(mg/dl) x 17,1 = µmol/L. Doumas, B. T., Perry, B. W., Sasse, E. A., Straumfjord
Valores normales Jr.,J.V.(1973). Clin.Chem. 19, 984-993.
Adultos: hasta 1,1 mg/dl.

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

A 7 Km 1081 – Apartado 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 14. 39 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: Julio 2004
BILIRUBIN
JENDRASSIK - GROF METHOD.
For the “in vitro” det. of Direct and Total Bilirubin in serum or plasma.

Principle DIRECT BILIRUBIN

Total Bilirubin is determined by reaction with diazotized sulfanilic
acid, in the presence of caffeine, with the final production of an
azopigment. The same reaction, but in the absence of caffeine, is
Procedure BL SA
used to measure Direct Bilirubin.
ml ml
Sulfanilic acid 0.2 0.2
Reagents Sodium nitrite --- 1 drop
Kit 1 x 245 ml. (Ref. 99 20 93). Contents: Saline 2.0 2.0
A. 1 x 40 ml Sulfanilic acid solution. (Ref. 99 29 04). Sample 0.2 0.2
B. 1 x 100 ml Caffeine solution. (Ref. 99 23 82). Mix and let stand at room temperature.
C. 1 x 100 ml Tartrate solution. (Ref. 99 29 46). Read after exactly 5 min.
D. 1 x 5 ml Sodium nitrite solution. (Ref. 99 25 25). Reading
Wavelength: 546 nm.
Kit 1 x 490 ml. (Ref. 99 98 01). Contents: Blank: BL contents.
A. 1 x 80 ml Sulfanilic acid solution. (Ref. 99 91 03). Cuvette: 1 cm light-path.
B. 2 x 100 ml Caffeine solution. (Ref. 99 23 82).
C. 2 x 100 ml Tartrate solution. (Ref. 99 29 46).
Calculations
D. 1 x 10 ml Sodium nitrite solution. (Ref. 99 84 01).
O.D. SA x 14.4 = mg Direct Bilirubin/dl.
All reagent are ready-to-use.
S.I.Units
The concentrations in the reagent solutions are:
A. Sulfanilic acid 30 mM (mg/dl) x 17.1 = µmol/L.
HCl 0.17 M
B. Caffeine 0.25 M Normal values
Sodium benzoate 0.50 M Adults: up to 0.25 mg/dl.
C. Potassium tartrate 0.80 M
NaOH 1.85 M
D. Sodium nitrite 30 mM
Performance Characteristics
Storage and stability
When kept at room temperature (≤ 25ºC), the components of the kit The method is linear up to 25 mg/dl. Concentrations higher than
will remain stable until the expiration date stated on the label. 15 mg/dl may produce an absorbance value (O.D. > to 1.500)
that can hardly be read in non-digital photometers. It is
Sample recommended in such a case, to carry out a 1/10 dilution of the
Serum or plasma free from hemolysis. Serum bilirubin will decrease sample with saline, (NaCl 0,9%) and then to multiply the final
50% in one hour if stored at room temperature (≤ 25ºC) and at result by 10.
direct sunlight. On the contrary, samples stored in the dark at 2 - The analytical performance characteristics of the product
8ºC will remain stable for up to 3 days. depend both of the reagent and the reading system used,
manual or automatic. The following data have been obtained
Caution manually.
The reagents contains Sodium azide at 0.09%. Handle with care.
The disposal of the residues has to be made according to legal Intraseries Variation Coefficient: 1.64%
local regulations. Interseries Variation Coefficient: 1.98%
Recovery: 96.3 %.

TOTAL BILIRUBIN To avoid possible errors, it is very important, when assaying for
Direct Bilirubin, to read the corresponding absorbances exactly 5
min. after the reagents have been added.
Procedure BL SA
ml ml
Sulfanilic acid 0.2 0.2
Sodium nitrite --- 1 drop NOTE
Caffeine 1.0 1.0 In case of small-volume samples, please use 50 µl, in
Sample 0.2 0.2 place of the 0,2 ml as herein indicated, but keeping the
Mix and let stand 10 min. at room temp. same reagent volumes, and multiply the results by the
Tartrate 1.0 1.0 following:
Mix and let stand 5 min. at room temp. F= 43,2 (Total Bilirubin)
Reading F= 57,6 (Direct Bilirubin)
Wavelength: 578 nm.
Blank: BL contents.
Cuvette: 1 cm light-path.
Color stability: a minimum of 1 hour.
Calculations Quality control
O.D. SA x 10.8 = mg Total Bilirubin / dl. Seriscann Normal (Normal Control Serum)
S.I. Units (Ref. 99 41 48) and Seriscann Anormal (Abnormal Control
(mg/dl) x 17.1 = µmol/L. Serum) (Ref. 99 46 85).
Normal values
Adults: up to 1.1 mg/dl.
References
Jendrassik,L.,Grof,P.(1938). Biochem.Z., 297, 81-89.
Doumas, B. T., Perry, B. W., Sasse, E. A., Straumfjord
Jr.,J.V.(1973). Clin.Chem. 19, 984-993.

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Revision: July 2004