Titulo: Técnica Flotación

Concentración de huevos y quistes por flotación

Objetivo de flotación: Es disolver la materia fecal en soluciones de alta densidad, las que provocan
la flotación adecuada para la búsqueda de huevos de nematodes, cestodes, quistes de algunos
protozoos y ooquistes de coccidios, en el menor volumen de materia fecal, para asimismo
determinar su presencia e identificarlos correctamente.

Procedimiento:

1. Mezclar aproximadamente una cucharadita de heces con suficiente volumen de agua como para
hacer una suspensión semisólida. Usar un depresor de lengua y un vaso de papel desechable.

2. Poner dos capas de gasa simple sobre un segundo vaso de papel, y vaciar sobre ellas la
suspensión fecal. Devolver la gasa con los residuos sólidos al primer vaso de papel y desechar.

3. Pellizcar el borde del segundo vaso de papel para formar un pico que facilite el vertido y
transferir el contenido a tubos de centrífuga de 15ml.

4. Centrifugar durante 3 minutos y decantar el sobrenadante que contiene grasas y pigmentos

disueltos.

5. Añadir una solución concentrada de sacarosa (densidades pecífica 1,33) a 1 cm desde la boca
del tubo y resuspender el sedimento con una varilla aplicadora. Insertar un tapón y mezclar
invirtiendo el tubo cuatro o más veces. La viscosidad de la solución del azúcar dificulta la mezcla
pero, no obstante, la solución debe quedar completamente mezclada con el sedimento.

6. Centrifugar durante 5 minutos. Sin quitar el tubo de la centrífuga, recuperar la película

superficial que contiene los huevos y los quistes tocándola suavemente con una «uña de cristal» o
con un asa de platino. Transferir la película de superficie al portaobjetos de un microscopio y
colocar encima un cubreobjetos. Variante: alternativamente, tras haber realizado el paso 5, se
puede llenar el tubo de centrífuga hasta el borde con la solución saturada de sacarosa y aplicar
encima un cubreobjetos. Después de centrifugar, quitar el cubreobjetos levantándolo recto hacia
arriba y colocarlo con su película adherida de la solución de sacarosa sobre un portaobjetos. Esta
variante no se puede utilizar con centrífugas de cabezal de ángulo fijo inclinado.

7. Examinar el portaobjetos a 100 aumentos. A fin de evitar la omisión o el solapamiento de

algunos campos, iniciar el examen a lo largo de un borde del cubreobjetos desde una esquina a la
contraria. Desplazarse después el ancho de un campo y continuar el examen. Este desplazamiento
se puede realizar de forma bastante precisa fijándose en cualquier objeto que se encuentre en o
cerca del borde del campo y trasladar ese objeto al otro borde con el controlador de movimientos
de la platina. Conforme se va adquiriendo más habilidad en la identificación, se puede hacer el
examen a 50 aumentos con un considerable ahorro de tiempo.

Técnica de Fülleborn:

Materiales:

- Solución saturada de NaCl, δ 1150: 400 g de sal en 1 litro de agua destilada

- Mortero

- Embudo

- Colador de malla gruesa, 20 hilos por cm

- Tubo de 100 ml, de 3 a 4 cm de diámetro

- Ansa metálica

- Porta y cubreobjetos

Procedimiento:

- Mezclar en un mortero 3-5 g de materia fecal con 50 ml de solución saturada de NaCl.

- Filtrar la mezcla con un colador, recogiendo el líquido en el tubo a través del embudo.

- Dejar reposar 20 minutos y tomar luego una gota de la superficie utilizando un ansa metálica.

- Colocar la gota entre porta y cubreobjeto.

- Observar al microscopio.

Técnica de Sheather:

Materiales:

- Centrífuga

- Solución de Sheather, δ 1300: 550 g de azúcar, agua csp 1 l y 10 ml de Formol 40%

- Tubo de centrífuga

- Porta y cubreobjeto

- Mortero

- Colador

- Ansa metálica

- Embudo

Nota: Se agrega formol para evitar la formación de hongos.

Procedimiento:

- Disolver en un mortero 3-5 g de materia fecal con 50 ml de solución de Sheather.

- Filtrar la mezcla con un colador recogiendo 10 ml a través de un embudo, en el tubo de

centrífuga.

- Centrifugar 5 minutos a 2500 rpm.

- Tomar con un ansa una gota de la superficie.

Observar al microscopio entre porta y cubreobjeto, revisando todos los campos posibles

Género y especie:

1. Genero: Parascaris Especie: equorum

2. Genero: Ascaris Especie: Suum
3. Genero: toxocara Especie: Canis
4. Genero: Toxocara Especie: Cati
5. Genero: Toxocara Especie: Vitulorum
6. Genero: Ascaridia Especie: Galli
7. Genero: Heterakis Especie: Gallinarum
8. Gnero: Oxyrus Especie: equi
9. Gnero: Strongyloydes Especie: ransomi
10. Gnero: habroma spp
11. Genero: trichuris spp
12. Genero: Ancylostoma spp
13. Genero: Bunostomum spp
14. Genero: strongylus spp
15. Genero: Oesophagostumum spp
16. Genero: chabertia especie: ovina
17. Genero: haemonchus spp
18. Genero: Ostertagia spp
19. Genero: Nematodirus spp

Ventajas:

* Todas las técnicas de flotación aprovechan la diferencia de densidad de los parásitos con
respecto a los residuos alimentarios

*Utilidad más limpia de defecación

*Facilita la exploración microscópica

Desventajas

Es que no son adecuadas para algunos huevos de trematodos y alteran los trofozoítos y/o quistes
de algunos protozoos y ciertas larvas de nematodos dificultando su identificación.

Es que si presentan parasitos maduramente específicos no flotaran

Título: Técnicas de sedimentación
Sedimentación de heces
Objetivo: Es utilizado para la búsqueda de huevos, quistes, ooquistes y larvas de helmintos en
materia fecal con alto contenido en grasas y asi poder determinar su presencia e identificarlos
correctamente.

Procedimiento:

1. Mezclar aproximadamente una cucharadita de heces con 10ml de agua o formalina tamponada
neutra al 10%.

2. Colar la mezcla a través de un colador de té o de dos capas de gasa.

3. Pasar la mezcla filtrada a un tubo de centrífuga de 15ml.

4. Centrifugar durante 1 a 2 minutos a 1.500-2.000 rpm.

5. Decantar el sobrenadante

6. Resuspender el sedimento en 10ml de agua o formalina y repetir los pasos 4 y 5 hasta que el
sobrenadante esté claro.

7. Resuspender el sedimento en 10ml de agua o formalina y añadir 3ml de reactivo acetato de

etilo de grado analítico.

8. Insertar el tapón y agitar la preparación vigorosamente durante 30 segundos.

9. Quitar el tapón y centrifugar durante 1 minuto a 2.000 rpm.

10. Decantar el sobrenadante y examinar una porción del sedimento en un portaobjetos.

Técnica de Ritchie:

Se utiliza para la búsqueda de huevos, quistes u ooquistes en materia fecal con alto contenido en
grasas.

Materiales:

- Centrífuga

- Solución de formol-sal

- Mortero

- Colador común

- Tubos de centrífuga

- Eter sulfúrico

- Pipeta Pasteur
Solución de Formol-sal:

Formol comercial........ 50 ml

NaCl.......................... 5 g

Agua destilada csp..... 1 l

Procedimiento:

- Disolver 3 g de materia fecal en solución de formol-sal.

- Filtrar con el colador.

- Llenar las tres cuartas partes del tubo de centrífuga.

- Agregar 2 cm 3 de éter y agitar enérgicamente.

- Centrifugar a 1500 rpm durante 3 minutos.

- Eliminar el sobrenadante volcando con un movimiento rápido.

- Homogeneizar el sedimento y tomar una gota con pipeta Pasteur para observar entre porta y
cubreobjeto.

Técnica de Dennis, Stone y Swanson

Materiales:

- Solución de DSS: 5 ml de detergente común, 1 ml de alumbre de Hierro 1%, agua destilada csp 1
litro.

- Mortero

- Colador común

- Tamiz de 250 mm de abertura

- Bomba de vacío o tubo plástico de 3 mm de diámetro

- Tubo de 100 ml, 3-4 cm de diámetro

- Placa de Petri

Tinción de contraste:

- Azul de Metileno o Verde de Metilo 0,5%

Procedimiento:

- Disolver 3 g de materia fecal en 50 ml de solución de DSS.

- Filtrar por un colador, luego por el tamiz, y pasar al tubo.

- Dejar decantar 5 minutos.

- Sifonar las 3/4 partes del sobrenadante, puede utilizarse una bomba de vacío adosada a
una canilla o sifonar con el tubo de plástico de 3 mm de diámetro.

- Resuspender el sedimento en solución de DSS y repetir el proceso hasta obtener un líquido

totalmente libre de detritos.

- Volcar el sedimento en una placa de Petri.

- Agregar 2-4 gotas de Lugol o teñir por contraste con azul de metileno o verde de metilo al 0,5%
(optativo).

- Observar en lupa con 4X.

Técnica de Teuscher (modificada)

Conveniente para la búsqueda de huevos de cestodes, acantocéfalos en grandes cantidades de

materia fecal.

Materiales

- Mortero

- Colador común

- Vaso de decantación

- Tubos de centrífuga de 12 y 50 ml

- Solución de Sheather

Procedimiento

- Disolver con agua de grifo 2-4 g de materia frecal en un mortero.

- Filtrar con un colador en un vaso de decantación.

- Decantar durante 30 minutos.

- Descartar el sobrenadante y dejar un sedimento de 40 ml.

- Colectar el sedimento en un tubo de centrífuga de 50 ml.

- Centrifugar 5 minutos a 2000 rpm.

- Descartar el sobrenadante y resuspender el sedimento en solución de Sheather.

- Observar al microscopio entre porta y cubreobjeto, revisando todos los campos posibles.

- Pasar a tubos de centrífuga de 12 ml.

- Centrifugar 5 minutos a 2000 rpm.

- Completar con solución de Sheather, con cuidado, hasta formar un menisco convexo en el borde
superior y cubrir con un cubreobjeto.

- Dejar en reposo 5 minutos.

- Sacar el cubre con un movimiento vertical y colocar en un portaobjetos.

- Observar al microscopio.

Genero y especie:

Genero: Habronema spp

Genero: Faciola especie: hepática

Genero: Paramphistomum spp

Ventajas: detectan objetos que son demasiado pesados o demasiado delicados como para con
concentrarse por otras técnicas

La sedimentación es más sensible que el frotis directo desde el punto de vista del número de
organismos detectados, y la preparación es más fácil de leer al microscopio porque se elimina gran
parte de los residuos fecales.

Tienen baja probabilidad de errores técnicos y pueden recuperar un amplio rango de organismo

Desventaja:

Una de la desventaja consiste en que los preparados contienen más residuos que los procesados
por flotación

Son técnicas de larga ejecución que requieren muchas manipulaciones.