TECNOLOGÍA DEL ADN

RECOMBINANTE

B LG A . M A R I B E L H UAT U CO LOZ A N O
 TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
Aislamiento y manipulación de
fragmentos
de ADN de un organismo para
introducirlo
en otro (ADN recombinante)

Nathans D., Arber W., y Smith H.

(premio Nobel de Fisiología y
Medicina en 1978 por el
descubrimiento de las enzimas de
restricción y su aplicación en
Genética Molecular).
TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
 TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
5 Pasos para la obtención
ADN recombinante
Corte del ADN en posiciones precisas
(secuencias palíndromes)
con endonucleasas de restricción,

Unión de fragmentos por la ADN ligasa,

Selección de un fragmento de ADN capáz de

autoreplicarse,

Insertar los vectores de clonación a células

específicas que contienen toda la
maquinaria genética para la expresión de la
información contenida en el vector

Selección o identificación de las células que

contienen al ADN recombinante.
Preparación de la secuencia del ADN para su clonación
TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

Nathans D., Arber W., y Smith H.

(premio Nobel de Fisiología y
Medicina en 1978 por el
descubrimiento de las enzimas de
restricción y su aplicación en
Genética Molecular).
 Preparación de un vector de clonación

• Una pequeña secuencia de ADN fácil de aislar, como un

plásmido, también puede usarse un cósmido, un virus.

Cosmidos
1

Plásmido

gen de resistencia
a la ampicilina

2 3
Plásmidos
Extremos cohesivos

Molécula de ADN recombinante

1

Virus
2 3
 Manipulación del ADN
Las 2 moléculas de ADN son
digeridas con la misma
endonucleasa de restricción,
La enzima corta extremos
complementarios que se
aparean,
La ligasa repara hebras cortadas
de ADN y rehace las nuevas
bicatenarias.
Formación del ADN Recombinante

Introducción del ADN recombinante en la célula anfitriona

Propagación del cultivo

Detección y selección de los clones recombinantes
Molécula A Molécula B

Digestión de ambas moléculas con la

misma enzima de restricción, BamHI
Extremos
cohesivos
Mezclar

Tratar con ADN-ligasa

ADN recombinante