UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

DATOS INFORMATIVOS:

Carrera: Ingeniería en Biotecnología. Nivel: Cuarto “A”

Integrantes: Lucero Joel, Mieles Alexander, Palacio Luis, Paredes Jennifer
Asignatura: Biología Molecular
Docente: Helena de la Torre Fecha de presentación: 26 /04/2022
Ciclo académico: abril 2022 - septiembre 2022

“Extracción de ADN de una fruta”

1. INTRODUCCIÓN
El ADN o ácido desoxirribonucleico es una molécula compleja, se encuentra en
la parte interna del núcleo de la célula que contiene todo el material genético de todos
los organismos vivos . Está conformada por dos cadenas de nucleótidos formando una
doble hélice, los nucleótidos están formados por un grupo fosfato, una desoxirribosa y
una base nitrogenada (adenina, citosina, guanina y timina) (Portin, 2014). La extracción
de ADN permite separar y purificar el material genético, para poder obtener ADN sin
ninguna impureza, para realizar estudios y poder manipularlo.
Una característica principal e importante del ADN es que los grupos fosfatos se
encuentran con carga (–) y son polares, y el ADN posee una carga neta (-) y altamente
polar, permitiendo tener un aprovechamiento para su extracción (Vazquez-Lobo &
Morales, 2015). Para la extracción de ADN se emplean diversos protocolos como la
solución lisis que al estar formado de detergente y sal ocasiona una ruptura de la pared
celular desnaturalizando las proteínas sin ocasionar daño al material genético, mientras
que al aplicar alcohol frío permite precipitar el ADN, ya que, el ADN es insoluble en
altas concentraciones de alcohol y sal, provocando una separación de otros componentes
celulares para obtener fibras del material genético (Marcos Merino, et al., 2019).

2. OBJETIVOS
a. Objetivo General
• Extraer el ADN de una fruta mediante un protocolo similar a las técnicas usadas
en el laboratorio con elementos cotidianos.
 b. Objetivos Específicos
• Establecer la función de cada uno de los materiales empleados al momento de la
extracción, separación y reconocimiento del ADN.
• Comparar la cantidad de ADN extraído de diferentes frutas en el laboratorio y
seleccionar la más adecuada para la extracción.

3. MÉTODOLOGÍA
1) Preparación de la solución lisis: Añadir 1 cuchara de sal de cocina (11.7 gr), 1
cuchara de jabón líquido (8.6 gr) y agua (96.1 gr).
2) Calentar la solución lisis en microondas por 30 segundos.
3) Selección de fruta (1 plátano) para extraer el ADN.
4) Licuar la fruta con 100 mL de agua y 6 cucharadas de solución lisis durante 15
segundo para ocasionar una ruptura en la pared celular.
5) Filtrar o colar la solución mediante una gaza para separar las impurezas solidas.
6) Añadir en un vaso de cristal 70% de la solución filtrada y 30% de alcohol frío,
el cual permite que precipite las fibras de ADN.
7) Realizar movimientos circulares con el palillo chino para extraer el ADN.

4. DATOS Y RESULTADOS

Tabla 1. Soluciones y gramaje de cada una de los materiales utilizados para realizar
la solución que posteriormente se utilizó para separar el ADN.

SOLUCIONES PESO
Sal 11,7 g
Jabón 8,6 g
Agua 96,1 g
Fuente. Elaboración Propia.
 Tabla 2. Pasos y soluciones para la creación de la solución lisis.

PROCESO DESCRIPCIÓN
Sal Se procedió a realizar un gramaje de 11,7 g de sal y depositarlo en
un vaso de precipitación.
Jabón Posteriormente se procedió a depositar una cucharada de jabón
líquido con un peso de 8,6 g junto a la sal.
Agua El agua se lo utilizo al finalizar el proceso, la cual ayudara a que todas
las soluciones se mezclen y generar la solución lisis base para la
extracción del ADN de la fruta (guineo), se utilizó 96,1 g de agua, es
decir hasta llegar a los 100 ml en el vaso de precipitación.
Homogeneización Para finalizar, se procedió a calentar la solución por 30 segundos,
esto debido a que se necesita generar una activación de todos los
elementos antes mencionados dentro de la solución lisis.
Fuente. Elaboración Propia.

Figura 1. Incorporación de la sal al vaso de precipitación.

 Figura 2. Incorporación del jabón junto a la sal.

Figura 3. Incorporación del agua para homogeneizar la solución.

 Figura 4. Solución homogeneizada.

Figura 5. Proceso de calentamiento de la solución para su activación.

 Tabla 3. Proceso para la extracción del ADN del guineo.

PROCESO DESCRIPCIÓN
Extracción de la pulpa Primeramente, se procedió a cortar la mitad de un guineo para
posteriormente ponerlo en una licuadora, la cual se integró no
solamente el guineo también se procedió a insertar de 6
cucharadas de la solución antes preparada y 100 ml de agua,
siendo estos 3 los componentes principales para la preparación
de la pulpa los cuales destruirán los fosfolípidos y de esta forma
se liberará el ADN.
Filtrado Al tener la pulpa lista en la licuadora, se procede a utilizar un
colador o de preferencia papel filtro para una mejor extracción
del líquido necesario para la práctica.
Extracción del ADN Al tener ya la pulpa y la misma filtrada, se procedió a depositar
en un vaso de vidrio transparente alcohol frio, de preferencia a
8 grados centígrados, y se deposita el jugo filtrado del guineo,
procediendo a poner a flote el ADN del mismo y extraerlo con
un palillo de forma cautelosa para no romper su ADN.
Fuente. Elaboración Propia.

Figura 6. Incorporación del guineo a la licuadora.

 Figura 7. Incorporación de la solución lisis al guineo.

Figura 8. Proceso de licuado del guineo con la solución lisis y agua.

Figura 9. Filtrado del líquido resultante licuado.

Figura 10. Separación del alcohol con el ADN.

 Figura 11. ADN del guineo.

5. DISCUSIÓN

El estudio del ADN es un campo en donde existe la interacción de la

biotecnología y técnicas de modificación genética, en la actualidad es muy frecuente la
noticia de variaciones de los alimentos transgénicos presentando una mejora en su
calidad, resistencia a plagas, enfermedades y a factores externos (Marcos Merino, et al.,
2019). Sin embargo, el estudio de este campo se ha pronunciado como un trabajo
costoso y minucioso, por ello se han creado diferentes técnicas para la extracción del
ADN con materiales cotidianos de bajo presupuesto.

Añadir sal a la solución ayuda a que el ADN se haga menos soluble en el extracto
celular durante su filtración. El ADN al presentar carga negativa este se llega a unir con
los iones sodio que presentan carga positiva y así neutralizando la carga de ADN
evitando que se repelan entre ellas (Irurzun, 2005).

El uso del detergente Figura 2. en la extracción de ADN es importante debido a

la constitución de la membrana celular por estar constituido por lípidos organizados en
una bicapa. Esta característica de grasa que presenta la célula hace que el detergente sea
un buen agente para disolverlo. Cabe destacar que diferentes organismos presentan
diferentes componentes en su pared celular como la quitina en hongos, peptidoglicano
o mureína en bacterias y celulosa con lignina en vegetales (Marcos Merino, et al., 2019).
El ingrediente que actúa como disolvente de lípidos en el detergente es el lauril éter
sulfato de sodio conocido también como SDS, esto se debe a que la pared celular se
encuentra asociada con carbohidratos que son fácilmente degradable con el SDS
(Burgos Canul, 2019).

La trituración de la fruta (banana) permite incrementar la materia de extracción,

también ayuda a que la membrana sea más fácil de disolver con la solución lisis Figura
4. y permita mejor absorción de calor (Martínez Martín, 2015).

El uso del detergente en la extracción de ADN es importante debido a la

constitución de la membrana celular por estar constituido por lípidos organizados en una
bicapa. Esta característica de grasa que presenta la célula hace que el detergente sea un
buen agente para disolverlo. Cabe destacar que diferentes organismos presentan
diferentes componentes en su pared celular como la quitina en hongos, peptidoglicano
o mureína en bacterias y celulosa con lignina en vegetales (Marcos Merino, et al., 2019).

La filtración permite separar los restos del tejido del plátano y de las células que
se han roto durante el proceso de extracción. Este material no es de interés de estudio y
por ello se queda retenido en el filtro permitiendo que el ADN pase por el líquido
obtenido (Martínez Martín, 2015).

La presencia del alcohol frio Figura 10. permite la precipitación del ADN ya
que este no es soluble en alcohol. Se deja en reposo unos instantes y se podrá observar
el ADN en la superficie del alcohol para después ser extraído (Catalá, 2001).

Se observa una gran cantidad de ADN al momento de extracción, esto se debe a

la solución lisis actúa efectivamente para presentar un precipitado ADN, en la parte
inferior de nuestro recipiente se observa con claridad una gran cantidad de materia
orgánica siendo orgánulos y membranas no deseados sin posibilidad de precipitar. A
diferencia de las otras frutas se sabe que la banana presenta una gran cantidad de fibra
en su estructura y por ello se obtiene demasiada materia desechable y que no es de
interés. La frutilla es una de las frutas con las que se puede realizar la extracción
fácilmente debido a que presentan una mayor cantidad de ADN con respecto a la banana
y la manzana convirtiéndolas en frutas idóneas para la extracción casera de ADN, la
manzana presenta una cantidad menor con respecto a la frutilla con una cantidad de 34
cromosomas (Joselyn Briseño et al., 2017).
6. CONCLUSIONES
• La extracción del ADN sigue métodos similares, que de acuerdo con el protocolo
empleado se usan distintos reactivos y procesos distintos. Este proceso de extracción de
ADN de una fruta se puede realizar con materiales caseros que cumplen la misma
función que los reactivos usados en el laboratorio. La única diferencia es la pureza del
ADN extraído, ya que al hacerlo con materiales caseros la pureza no será tan alta.
• Los materiales caseros cumplen la misma función que los reactivos de laboratorio. El
proceso de trituración permite destruir parte de la membrana celular y eliminar parte de
la materia orgánica. La solución lisis permite destruir la membrana celular y la
membrana del núcleo, debido al jabón líquido. Además, permite la suspensión del ADN
por la carga que tiene la sal, provocando que el ADN se agrupe. Finalmente, el alcohol
da paso a la precipitación del ADN debido a las distintas densidades entre el alcohol y
el ADN.
• Las frutas son una excelente muestra para extracción de ADN, debido a las altas
concentraciones de cromosomas que estas contienen. De acuerdo a los resultados
obtenidos, se pudo identificar que las frutas que mayor concentración de cromosomas,
y de las cuales se pudo obtener mayor cantidad de ADN, fueron el banano y la frutilla.

7. RECOMENDACIONES
• Al triturar la fruta con la solución lisis se recomienda triturar en la licuadora por
menos de 20 segundos, porque si se tritura por más tiempo provocamos una ruptura
del ADN y no podremos obtener fibras de ADN.
• En la filtración de la fruta utilizar un cedazo de preferencia de malla fina o tela de
algodón para separar los sólidos indeseables de la solución y poder observar de mejor
manera el ADN.
• No utilizar toda la muestra en caso de que un paso salga mal y poder repetir.
8. BIBLIOGRAFÍA

Burgos Canul, Y. Y. (2019). Análisis proteómico de la pared celular del hongo

Pseudocercospora fijiensis. 127.

Catalá, R. M. (2001). Extracción del ADN del Kiwi Edición especial sobre las ciencias
del genoma. http://www.exploratorium.edu/ti/human_body/dna.html

Gómez Ochoa de Alda, J., Marcos-Merino, J. M., & Esteban Gallego, R. (2019).
Extracción de ADN con material cotidiano: desarrollo de una estrategia
interdisciplinar a partir de sus fundamentos científicos. Educación Química, 30(1),
58. https://doi.org/10.22201/fq.18708404e.2019.1.65732

Irurzun, A. (2005). Biotechnology ExplorerTM Kit de genes en una botella Módulo de

extracción de ADN.

Joselyn Briseño, Sofía Ocaña, Anahí Velín, & Natalia Villarroel. (2017, January 20).
Extracción de ADN casero de manzana (Malus domestica B.) y fresas (Fragaria sp.
L.), utilizando - StuDocu. https://www.studocu.com/ec/document/universidad-de-
las-fuerzas-armadas-de-ecuador/biologia-molecular-iii/extraccion-de-adn-casero-
de-manzana-malus-domestica-b-y-fresas-fragaria-sp-l-utilizando-shampoo-de-
manzanilla-y-jabon-de-manos-como-detergentes/5336828

Marcos Merino, J. M., Gallego, R. E., Ochoa de Alda, J. G., Marcos-Merino, J. M.,
Gallego, R. E., & Ochoa de Alda, J. G. (2019). Extracción de ADN con material
cotidiano: desarrollo de una estrategia interdisciplinar a partir de sus fundamentos
científicos. Educación Química, 30(1), 58–69.
https://doi.org/10.22201/FQ.18708404E.2019.1.65732

Martínez Martín, L. (2015). EXTRACCIÓN DE DNA.

Patricia, L., Velázquez, A., del Consuelo, M., Martínez, A., & Romero, A. C. (2010).
Extracción y purificación de ADN. www.eoearth.org/view/article/158858.

Portin, P. (2014). The birth and development of the DNA theory of inheritance: Sixty
years since the discovery of the structure of DNA. Journal of Genetics, 93(1), 293–
302. https://doi.org/10.1007/s12041-014-0337-4
Ríos Sánchez, E., Calleros, E., González Zamora, A., Rubio, J., Martínez, O. C., Martínez,
A., Hernández, S., & Pérez Morales, R. (2016). Comparative analysis of different
DNA extraction methods and their genotyping efficiency in Mexican population.
Acta Universitaria, 26(4), 56–65. https://doi.org/10.15174/au.2016.1078

Vazquez-Lobo, A., & Morales, A. (2015). The nature of resistance and tolerance to rust
pathogens in forest trees. View project Plant-pollinator interactions as restoration
indicators View project. https://www.researchgate.net/publication/280731680
9. CUESTIONARIO
1) ¿Cuál otro método para la extracción del ADN existe?

Hay dos métodos de extracción de ADN, el de separación de proteínas (usado en el

método casero) que tiene diferentes protocolos y materiales químicos de
laboratorio, y el que es por unión selectiva del ADN a la matriz inorgánica. En esta
última se usa una matriz inorgánica capaz de atraer el ADN y repeler todos los
componentes orgánicos de la muestra y se eliminan por procesos de lavado.
Posterior a ello se recupera la matriz, se la deshidrata y se vuelve a hidratar para el
posterior almacenamiento del ADN (Patricia et al., 2010)

2) ¿Porque usamos fruta?

Usamos la fruta por el hecho de que estas no solamente tienen localizado el ADN en
el núcleo celular, sino que también lo almacenan dentro de las mitocondrias, por lo
que la cantidad que se puede extraer de ellas es mayor. Además, hay ciertas frutas,
cuya concentración de cromosomas es muy alto, lo que permite que se pueda extraer
más cantidad de ADN, como fue en el caso del banano y la frutilla (Gómez Ochoa
de Alda et al., 2019).

3) Explique 3 diferencias entre los métodos de determinación de ADN de

laboratorio y los métodos caseros.
• Para la extracción de ADN se usan solventes orgánicos para separar los lípidos y las
proteínas, esto junto con ciclos de centrifugación, aislando así el ADN. Mientras que
en el método casero lo que se hace es triturar todo el material orgánico y separarlo
por un colador.
• Para la precipitación del ADN se usa alcohol tanto en el laboratorio como en el
método casero. Pero en el laboratorio se añade un paso más, el cual consiste en
centrifugar la muestra para enviar al fondo el ADN y eliminar el alcohol mediante
un lavado y de ser necesario mediante evaporación.
• El ADN obtenido de forma casera no tiene la misma pureza a comparación con el
que se obtiene un laboratorio. Además, los laboratorios buscan preservar el ADN
mediante la hidratación del ADN. Este proceso se lo realiza en agua y manteniendo
un pH de 7. De esta forma el ADN se conserva por mucho más tiempo, a comparación
del método casero en el cual la muestra de ADN es desechada inmediatamente.

(Ríos Sánchez et al., 2016)