UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú. DECANA DE AMÉRICA.

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

PRÁCTICA N°5:

EXTRACCIÓN DE ADN

Asignatura : Biología celular

Grupo : 4

Integrantes : - Castañeda Condori, David Gonzalo

- Chirinos Mejico, Anely Rocio
- Huacho Inca, Claudia Sofía
- Rodriguez Bravo, Javier Augusto
- Villantoy Ramos, Wesly Said

Docentes : - MSc. Edwin Hualpa Cutipa

- Mg. Julio Reynaldo Ruiz Quiroz

Lima, Perú

2021

INTRODUCCIÓN
 Los ácidos nucleicos son macromoléculas importantes que se encuentran en todas las células y virus. La
función del ácido nucleico está involucrada en el almacenamiento y expresión de información genética. El
ácido desoxirribonucleico (ADN) codifica la información que las células necesitan para producir proteínas. Un
tipo de ácido nucleico relacionado, llamado ácido ribonucleico (ARN), se presenta en muchas formas
moleculares diferentes y participa en la síntesis de proteínas. (1)

❖ El ADN presenta algunas funciones aparte de proveer la información genética que nos determina son
la de replicación, debido a que posee la capacidad de hacer copias de sí mismo; la codificación, gracias
a la información que provee el ADN y participa en el metabolismo celular.
❖ El ARN tiene 3 tipos con funciones específicas: ARN mensajero, transmite la información codificante
del ADN, el ARN de transferencia, transporta aminoácidos para la síntesis de proteínas y el ARN
ribosómico, ayuda a leer los ARNm y catalizan la síntesis de proteínas.

La doble hélice de ADN está formada por la alternancia de azúcares y grupos fosfatos. Las dos cadenas se
mantienen unidas por bases complementarias, los enlaces de hidrógeno entre la adenina y la timina, y la
citosina y la guanina. Cada molécula de ADN está formada por dos cadenas y hay cuatro tipos de nucleótidos
en el ADN: A, C, T y G. Cada nucleótido de una cadena interactúa con un nucleótido específico de la otra. Las
fibras, y por tanto la doble hélice, se mantienen unidas. Los nucleótidos siempre se complementan entre sí,
van complementando las cadenas antiparalelas, una de ellas sigue la dirección 5’ a 3’ y la otra va en sentido
de 3’ a 5’, además, los pares de bases se pueden usar para contar la cantidad o longitud de ADN y ADN. (2)

OBJETIVOS

● Observar la hélice de ADN, realizando una extracción a partir de hígado de pollo, cebolla y plátano.

METODOLOGÍA

EXPERIMENTO 1A:

Materiales Biológicos

● Hígado de pollo

Materiales Químicos

● Alcohol de 96º
● Cloruro sódico 2M
● Dodecilsulfato de sodio (SDS)

Equipos y otros

● Pipetas
● Probeta
● Varilla de vidrio
● Mortero
● Vasos de precipitación
● Arena
● Trozos de tela para filtrar o gasa
Procedimiento

1. Triturar un fragmento pequeño de hígado de pollo en un mortero. Añadir arena para que al triturar se
puedan romper las membranas y se liberen los núcleos sueltos.
2. Añadir al triturar, 50 mL de agua destilada. Remover hasta hacer una especie de papilla o pure.
3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper.
4. Medir el volumen del filtrado con una probeta.
5. Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con esto conseguimos producir el estallido
de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina.
6. A continuación se añade 1 g de SDS. Así nos quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas.
7. Añadir mediante una pipeta 50 mL de alcohol de 96º. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale
por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN.
8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. Sobre la varilla se van
adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de
muchas fibras de ADN.

EXPERIMENTO 1B:

Materiales Biológicos

● Plátano (Musa paradisiaca).

Materiales Químicos

● Agua mineral fría.

● Alcohol de 96º frío (guárdelo en refrigeración un día antes).
● Cloruro de sodio (sal de mesa).
● Detergente líquido.
● Un poco de enzimas conocidas como “ablandador de carne”.

Equipos y otros

● Licuadora y si no se cuenta, tenedor para chancar el plátano.

● Un vaso de precipitados de 250 mL.
● Un Tubo de ensayo.
● Un colador casero.
● Un Embudo.
● Un papel de cocina.
● Un palillo largo (de aproximadamente 10 cm).

Procedimiento

1. Verter en la licuadora la taza de agua fría, la media taza de plátano y un poco de sal.
2. Licuar a la velocidad máxima por exactamente 10 segundos. Después de licuar colar el contenido.
3. Agregar al producto resultante del colado una sexta parte de detergente líquido y dejar reposar la
mezcla durante 10 minutos.
4. Colocar en el tubo de ensayo 3 mL del licuado anterior y añadir una pizca de la enzima “ablandador de
carne”. Agitar suavemente.
5. Agregar alcohol frío hasta la mitad del tubo de ensayo, el ADN se elevará en el tubo como un hilo
blanco, que se puede extraer de manera cuidadosa con el palillo.
DIAGRAMAS DE FLUJO:

EXPERIMENTO 1A:

EXPERIMENTO 1B:
RESULTADOS:

EXPERIMENTO 1A:

MUESTRA OBSERVACIÓN RESULTADOS IMAGEN

Hígado de pollo Pure de pollo Se pudo apreciar las

hebras de ADN en la
+ interfase, la cual se
pudo observar con la
Cloruro sódico ayuda de una bagueta,
2M y también, del alcohol,
el cual permitió que
+
estas hebras “floten”.
1 g de SDS

50 mL de alcohol
de 96º

EXPERIMENTO 1B:

MUESTRA OBSERVACIÓN RESULTADOS IMAGEN

Plátano Trozos de plátano La homogenización de

y agua la muestra (plátano),
requiere de trituración
(Trituración del con el fin de romper
tejido) tejidos y liberar células.

+ Con el fín de liberar el

ADN de las células, se
Adición de prepara una solución
detergente de detergente y agua,
el cual arrastrará los
(lisis celular)
lípidos y proteínas de la
 membrana celular y los
lípidos de la membrana
+ nuclear.

Cloruro de sodio Se añadió sal de cocina

(sal de cocina) a la solución de
detergente, pues la sal
(conservación del son iones positivos que
ADN ) permitirán que las
hebras del ADN se
mantengan juntas.
+
La liberación del ADN
se da al colocar la
muestra de plátano
Liberación del triturado en el
ADN recipiente que contiene
la solución de
detergente y sal.

+ La separación de los
componentes celulares
y tejidos no digeridos
se realiza con ayuda de
Separación físico un embudo con papel
del ADN filtro o papel de cocina,
permitiendo el pase de
macromoléculas entre
+ ellos el ADN.

Separación A la solución filtrada en

químico del ADN un volumen de 5mL se
por adición de coloca 15mL de alcohol
alcohol frío frío para poder separar
el ADN del resto de las
macromoléculas. Como
el ADN no es soluble
+ se precipita.

Observación del La acción del alcohol

ADN aglomerado permite que se
aglomere al precipitar,
la cual flota al mover el
tubo y puede ser
guardado en un
recipiente seco a
temperatura ambiente.
DISCUSIONES:

Experimento 1A:

En el la extracción de ADN del hígado de pollo hemos podido apreciar las hebras del ADN en la interfase y la
razón por la que se debe esto es porque el ADN está constituido por dos cadenas de nucleótidos unidas entre
sí formando una doble hélice y los nucleótidos están integrados por un azúcar, un grupo fosfato y una base
nitrogenada. Los grupos fosfatos están cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al ADN una
carga neta negativa y lo hace altamente polar, características que son aprovechadas para su extracción, estos
grupos fosfatos tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite disolver el
ADN en disoluciones acuosas y formar una capa hidratante y quedan expuestos los grupos fosfatos. Bajo estas
condiciones se favorece la unión con cationes como Na + que reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas
de nucleótidos y permiten que el ADN precipite. Esta carga negativa del ADN le permite unirse a moléculas y
matrices inorgánicas cargadas positivamente.(3)
Y por qué se tiene que usar el alcohol líquido esa una interrogante de este experimento y la respuesta a esto
es que el ADN al ser una molécula polar, pero la reacción con el etanol a muy baja temperatura hace que se
vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un precipitado justo entre la capa con etanol líquido y la
capa con el extracto. Como hemos observado el ADN es el único componente de la solución que no es soluble
en el etanol y el ADN se hace visible porque las diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar
debido a la acción de fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre la
capa del extracto tal como podemos observar al mezclar agua y aceite que el agua al ser más densa se hundirá
debajo del aceite.
Y a toda esta solución la sal es muy importante para la extracción del ADN porque la molécula del ADN al ser
soluble en agua y podemos observar que es invisible, pero si se pone en contacto ADN que haya estado en un
medio salado y alcohol frío el ADN se vuelve insoluble y precipita. En conclusión el agua salada ayuda a la
precipitación en el alcohol y también la sal ayuda a separar el ADN de las histonas. (4)

Experimento 1B:
En este experimento se utilizó una muestra vegetal la cual tiene en su composición una pared celular y una
membrana celular que protegen todos los componentes que se encuentran dentro de la célula, entre los
cuales se encuentra incluído el ADN. Para lograr la correcta extracción del ADN en dicha muestra es necesario
primero destruir todos los componentes que lo protegen, para lo cual fue necesario triturar la muestra en una
licuadora, luego el uso de detergente, el cual interfiere con los enlaces químicos que sostienen las proteínas de
las membranas que se encuentran juntas, rompiendo de esta manera la bicapa de fosfolípidos de la membrana
celular y la envoltura nuclear. El uso de estos materiales dan como resultado la liberación de los componentes
intracelulares (5). Una vez que el ADN se encuentra libre es necesario separarlo de sus histonas para lo cual es
muy necesario el uso de cloruro de sodio, el cual a su vez hace que el ADN se torna insoluble en alcohol debido
a que el sodio neutraliza la carga negativa que le brindan los grupos fosfatos al ADN lo que favorece su
precipitación (6). Luego de esto, se procede a agregar el ablandador de carne, este se utiliza debido a que en
su composición química contiene papaína la cual es una enzima proteolítica. Debido que al ocurrir la lisis de las
células se liberan una gran cantidad de proteínas que pueden degradar al ADN, es necesario agregar el
ablandador de carne para evitarlo ya que contiene proteasas, las cuales degradan otras proteínas (7). Por
último al añadir alcohol, sus moléculas se unen a las moléculas de agua, desplazando de esa manera a las
moléculas de agua que interaccionan con el ADN, lo que favorece su neutralización. Así mismo el alcohol es
menos denso que el agua, por lo cual este se encuentra flotando por encima del agua y al estar frío enfría
también al agua haciendo que aumente su densidad y favoreciendo su inmiscibilidad (7). Todo ello facilita la
precipitación de ADN como filamentos blancos en la interfase entre alcohol y agua(8).

CUESTIONARIO

1.¿En qué difieren el ADN y el ARN?

A continuación puedes ver las diferencias básicas que hay entre estos dos tipos de ácido nucleico.(9)

ADN ARN

Tipo de molécula Ácido desoxirribonucleico Ácido ribonucleico

Estructura Doble cadena Cadena simple

Bases Adenina, timina, citosina y guanina Adenina, uracilo, citosina y guanina

nitrogenadas

Bases ● Adenina-timina ● Adenina-uracilo

complementarias ● Citosina-guanina ● Citosina-guanina

Azúcar Desoxirribosa Ribosa

Tipos ● ADN nuclear ● ARN mensajero

● ADN mitocondrial ● ARN de transferencia
● ARN ribosomal
● ARN no codificante

Funciones Almacenar y transferir la información Interpretar el código genético del

genética ADN para conducir la síntesis de
proteínas.

Localización en Citoplasma Citoplasma

procariontes

Localización en Núcleo, mitocondrias Núcleo, citoplasma

eucariontes
2. Elabora una tabla comparativa entre los diferentes tipos de ADN
● Comparación entre ADN-A, ADN-B y ADN-Z.(10, 11)

ADN-A ADN-B ADN-Z

Sentido de giro de Dextrógiro Dextrógiro Levógiro

la hélice

Forma y tamaño Más ancha y corta Intermedia Más estrecha y larga

Surco mayor Estrecho, profundo Amplio, profundidad Sin profundidad

media

Surco menor Amplio, no profundo Estrecho, profundidad Estrecho, profundo

media

Diámetro de la 2,55 nm 2,37 nm 1,84 nm

hélice
Unidad estructural Par de bases Par de bases Dos pares de bases

Pares de 11 10,4 12
bases/vuelta
Distancia entre 0,23 nm 0,34 nm 0,53 nm (G·C) / 0,41 nm
pares de bases (C·G)

Paso de hélice o 2,53 nm 3,54 nm 4,56 nm

vuelta completa
 Rotación por 32,7º 34,6º –30º
residuo
Inclinación de los 19º 1,2º 9º
pares de bases

Balanceo 5,9º -1º –3,4º

Alabeo 15,4º 11,7º 4,4º

Plegamiento del E C3'-endo E C2'-endo E C2'-endo

azúcar (pirimidinas) / E C3'-
endo (purinas)
Conformación Anti Anti Anti (pirimidinas) / Syn
enlace N- (purinas)
glucosídico
Conformación + Sinclinal + Sinclinal + Sinclinal (pirimidinas) /
enlace C4'-C5' Antiperiplanar (purinas)

3. ¿Por qué es importante realizar una buena trituración de la muestra?

Es importante triturar la muestra utilizando un mortero o la licuadora para que permita la lisis
mecánica para homogeneizar el tejido de la muestra y lograr un buen filtrado.(12)

4. Describa 5 ejemplos de tejidos del cuerpo humano de los cuales se pueda extraer ADN
para su estudio molecular.
Se puede extraer siguientes tejidos(13).(14)
● Pelo
● Uñas
● Saliva
● Sangre
● Dientes
● Semen
● Cera de las orejas

5. ¿Qué aplicaciones potenciales tiene la aplicación de técnicas basadas en ADN en el

campo farmacéutico?

● Entre los usos de la biotecnología en la industria farmacéutica está el uso de la tecnología de

ADN recombinante para modificar la bacteria Escherichia coli para la producción de insulina,
que fue elaborada por Genentech en 1978(15).
● En el caso de la biotecnología, la industria farmacéutica ha optado por el camino de la
ingeniería genética o metodología del ADN recombinante. Mediante esta tecnología se
pueden obtener grandes cantidades de una proteína, completamente aislada de los
componentes celulares del organismo de origen. Esto se consigue por introducción de un
gen (por ejemplo: el gen de la insulina humana) en un organismo hospedador fácil de cultivar
(por ejemplo: una bacteria). Este organismo se denomina entonces "organismo
genéticamente modificado" y la proteína obtenida, "proteína recombinante".(16)
 ● La aplicación más conocida en el campo farmacéutico es que se pueden adquirir las pruebas
de ADN en farmacias, además de en los laboratorios específicos donde se realizan este tipo
de pruebas genéticas de parentesco. Este kit casero para la prueba de ADN contiene las
herramientas necesarias para la extracción de la muestra genética mediante la cual
determinar el parentesco entre dos personas. Este kit casero, con una eficacia del 99,9%
permite poder extraer las muestras para la prueba genética desde casa, de forma sencilla y
rápida.(17)

CONCLUSIONES:

● Se observó la hélice de ADN, realizando los procedimientos para la extracción a partir de hígado de
pollo, cebolla y plátano.

● El uso de sal, detergente y alcohol es útil para extraer completamente la hélice de ADN en las
muestras biológicas mencionadas.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Lawrence C. Brody. Ácido nucleico [Internet]. 2020 [citado el 29 de junio de 2021]. Disponible en:
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/acido-nucleico
2. Lawrence C. Brody. Par de bases [Internet]. 2020 [citado el 29 de junio de 2021]. Disponible en:
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Par-de-bases
3. Patricia L, Velázquez A, Del Consuelo M, Martínez A, Romero AC. Extracción y purificación de ADN
[Internet]. [cited 2020 Jul 18]. Available from: www.eoearth.org/view/article/158858.
4. EXTRACCIÓN DE DNA.[Internet]. [cited 2020 Jul 18]. Available from:
http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez%20Mart
%C3%ADn2015_4_19P21_19.pdf
5. Patton K., Thibodeau G. Estructura y función del cuerpo humano. 13 ed. [Internet]. España: Elsevier;
2008. [Citado el 19 Jul 2020]. URL disponible en: https://books.google.com.pe/books?
id=3tdLbY3FA4AC&printsec=frontcover&hl=es&source=gbs_ge_summary_r&cad=0#v=onepage&q=lis
is&f=false
6. Malajovich M.A. Extracción de ADN (2). Guías de actividades de Biotecnología: enseñanza y
divulgación [Internet]. [Recuperado 19 Jul 2020]. Disponible en:
https://bteduc.com/guias_es/69_Extraccion_de_ADN_(procedimiento_basico).pdf
7. Amaru Calzada Ariel, Arené Hochkofler Javier Fabricio, Ballón Cossío David, Callisaya Mamani Hugo,
Cuevas Heriberto. Extracción de DNA con Papaína. Ciencia y Medicina [Internet]. [citado 20 Jul 2020].
Disponible en: http://www.revistasbolivianas.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1816-
29082004000100003&lng=es.
8. Marcos-Merino J. M., Gallego Rocío E., Ochoa de Alda J. Extracción de ADN con material cotidiano:
desarrollo de una estrategia interdisciplinar a partir de sus fundamentos científicos. Educ. quím
 [Internet]. 2019 [citado 2020 Jul 20] ; 30( 1 ): 58-69. Disponible en:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-893X2019000100058&lng=es
9. Bermejo MZ. Diferencias entre ADN y ARN [Internet]. Psicologiaymente.com. 2017 [citado el 28 de
junio de 2021]. Disponible en: https://psicologiaymente.com/salud/diferencias-adn-arn
10. Wikipedia contributors. ADN-A [Internet]. Wikipedia, The Free Encyclopedia. [citado el 29 de junio de
2021]. Disponible en: https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=ADN-A&oldid=129740829
11. Contreras CF. Clase de ADN A, B, Z y H [Internet]. Slideshare.net. [citado el 29 de junio de 2021].
Disponible en: https://es.slideshare.net/claudiiheco/clase-de-adn-a-b-z-y-h
12. Velázquez LPA, del Consuelo Aragón Martínez M, Romero AC. Extracción y purificación de ADN
[Internet]. Gob.mx. [citado el 29 de junio de 2021]. Disponible en:
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf
13. Cervantes Gonzales JL. Obtención de ácido desoxirribonucleico (ADN) útil para análisis genético, a
partir de uñas recortadas. Rev Medica Hered. 2003;14(4):229–32
14. Tipos de muestras de ADN [Internet]. Com.mx. [citado el 29 de junio de 2021]. Disponible en:
https://www.easydna.com.mx/articulos/muestras-adn-para-prueba-paternidad/
15. Wikipedia contributors. Biotecnología en la industria farmacéutica [Internet]. Wikipedia, The Free
Encyclopedia. [citado el 30 de junio de 2021]. Disponible en: https://es.wikipedia.org/w/index.php?
title=Biotecnolog%C3%ADa_en_la_industria_farmac%C3%A9utica&oldid=128655092
16. La biotecnología y la industria farmacéutica: el ejemplo de la insulina [Internet]. Argenbio.org. [citado
el 30 de junio de 2021]. Disponible en: https://www.argenbio.org/biotecnologia/aplicaciones-de-
la-biotecnologia/179-la-biotecnologia-y-la-industria-farmaceutica-el-ejemplo-de-la-insulina
17. Pruebas de ADN en farmacias: fiabilidad y especificaciones [Internet]. Labgenetics.es. 2017 [citado el
30 de junio de 2021]. Disponible en: https://www.labgenetics.es/pruebas-de-adn-en-farmacias/