UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

UNIVERSIDAD DEL PERÚ, DECANA DE AMÉRICA

Informe de laboratorio -
Métodos para la
determinación de
hemoglobina glicosilada y
fructosamina

Curso: Bioquímica

Profesor(a): Doris Virginia Huerta Canales

Aaron Joel Camargo Mendoza

11/07/2021
1. Introducción
El trabajo experimental realizado el día jueves 08 de julio (8-11 am), consistió en la
interpretación de manuales pertenecientes a dos compañías proveedoras de kits de
diagnóstico, estas son Far y Wiener. Previamente se tuvo que realizar una revisión de
conceptos sobre la hemoglobina glucosilada y la fructosamina, y enfermedades que pueden
ocasionar en caso se encuentre en cantidades excesivas o deficientes. Al término de la
sesión se dio paso a las preguntas dirigidas a la docente por parte de los estudiantes y
viceversa.

1.1. Objetivos
Los siguientes objetivos están planteados en el protocolo de la práctica con el fin de lograr
determinadas competencias, entre las que están:

● Interpretar el significado clínico de la prueba de laboratorio.

● Explicar el fundamento de los métodos propuestos.
● Aplicar los procedimientos para su realización
● Conocer los valores de referencia de la prueba.
● Calcular sus valores de concentración.

2. Trabajos dentro de la sesión

2.1. Conceptos previos

● Hemoglobina (Hb): encargada de transportar varios elementos como por ejemplo el

oxígeno y la glucosa
● Glucosa: azúcar que sirve de fuente de energía del cuerpo en el ser humano, se
obtiene por medio del consumo de carbohidratos.
● Glicosilación: reacción de grupos amino primarios de aminoácidos, de péptidos de
proteínas con el grupo carbonilo de carbohidratos reductores. Consta de tres etapas:
asociación reversible de carbohidratos con proteínas, estabilización de la base de
Schiff y formación de compuestos coloreados y fluorescentes.
● Resina: sustancia orgánica que tiene intercambiadores catiónicos (+) y aniónicos (-).
● Hb glicosilada: Utilizada para el diagnóstico y control de diabetes tipo 1, un tipo de
Hb glicosilada es la Hb A1c. La prueba de esta hemoglobina refleja el promedio de
glucosa en sangre en los últimos tres meses.
● Fructosamina: Producto de la unión de glucosa con proteína (principalmente
albúmina), también es conocida como cetoamina y se da tras la estabilización de la
base de Schiff (parte de la glicosilación). Al ser una proteína glicosilada, su aumenta
indica alerta para hiperglicemia, ósea diabetes.
● Valores normales de Hb glucosilada: de 80 a 120 mg /dL
● Valores normales de fructosamina: de 1,8 a 2,8 mmol/L.

2.2. Procedimiento

Wiener laboratorio
-Significancia: Importante para diagnosticar la diabetes en los pacientes, dado que la
fructosamina sirve de indicador para la cantidad de glucosa en sangre en un lapso de
tiempo de 2 a 3 semanas.
-Fundamentos: El grupo cetónico de la proteína glicosilada reduce la sal dando paso a la
formación de formazán, este es medido en el espectrofotómetro a 530 nm. La velocidad de
formación del formazán es directamente proporcional a la concentración de fructosamina en
la muestra. Una vez determinada la concentración de fructosamina podemos determinar la
concentración de la glucosa dado que su relación es directamente proporcional, el hecho de
encontrar una cantidad considerable de proteína en estado de glicosilación nos indica una
alerta de hiperglucemia.

-Reactivos: consta de reactivos provistos (reactivo y standard) y reactivos no provistos

(agua desionizada). En el caso de los reactivos provistos es necesario mantenerlos en
refrigerador de 2 a 10 °C. En el caso del standard reconstituido, su temperatura de
conservación depende de si se encuentra en refrigeración, congelado o alicuotado.

-Muestras: como muestras se tiene el suero y el plasma, para ello se deben tomar en
cuenta los tres parámetros indicados; la recolección, las sustancias interferentes conocidas
y la estabilidad e instrucciones de almacenamiento.

-Equipo requerido: se hace uso del espectrofotómetro que sirva para medir cuanta luz
absorbe una sustancia química. Este instrumento debe tener la capacidad de leer
absorbancias a 530 nanómetros. También se hace uso de pipetas, timer o cronómetro y
baño termorregulado.

-Técnica: mezclar bien y colocar en baño de agua a 37°C. Disparar inmediatamente el

cronómetro. Leer la absorbancia de la Muestra y del Standard a los 10 minutos (S1 o D1) y
a los 15 minutos (S2 o D2) en espectrofotómetro a 530 nm con filtro verde (490-530 nm)
llevando el aparato a cero con agua destilada.

-Cálculos: una vez realizado el procedimiento espectrofotométrico a 530 nm, podemos

determinar el factor de calibración, para ello tomamos en cuenta aspectos teóricos de la
espectrofotometría, para ello aplicamos la concentración estándar dividida por la
absorbancia estándar.

S2 (absorbancia del estándar a los 15 minutos) = 0.91

S1 (absorbancia del estándar a los 10 minutos) = 0.76
C: (concentración del estándar en micromol por litro) = 101.47
f (factor de calibración) = 101.47 / 0.91 - 0.76 = 101.47 / 0.15 = 676.47
Una vez determinado el factor de calibración, pasamos a determinar la concentración de
fructosamina en umo/L o mmol/L.

D2 ((absorbancia de la muestra a los 15 minutos) = 0.88

D1 (absorbancia de la muestra a los 10 minutos) = 0.37
Concentración de la muestra problema = fructosamina en umo/L o mmol/L.

Resolución:
(0.88 - 0.37) * 676.47 = 345 umol/L

Valores de referencia:
205 - 285 umol/l (albúmina glicosilada)

El resultado final se ubica por encima de los valores de referencias, por lo que significa
alerta de hiperglucemia (diabetes).

FAR diagnostics laboratorio

-Significancia: importante para controlar la diabetes en los pacientes, dado que Hb
glicosilada refleja promedios de glucosa en sangre en los últimos 3 meses.

-Fundamentos: se basa en determinar la mediante el uso de la resina, esta resina nos

ayuda a separar la Hb glicosilada de las no glicosiladas gracias a los intercambiadores
catiónicos y aniónicos de la resina. La Hb glicosilada al tener un grupo amino sustituido por
glucosa tiene menos carga positiva que las Hb no glicosiladas, por lo que, se logra su
separación por adherencia de las Hb no glicosiladas a la resina. Una vez separada la Hb
glicosilada, esta se lleva al espectrofotómetro a 415 nm para obtener sus lecturas y
medición de concentración. A partir de determinar la concentración de la Hb glicosilada
podemos determinar también la concentración de la glucosa en sangre y saber si la
diabetes está siendo controlada por el paciente.

-Reactivos: Tenemos al reactivo 1 y el calibrador (estándar), se debe realizar una

reconstitución del calibrador.

-Muestras: como muestras se tiene a la sangre con EDTA, para ello se debe tomar en
cuenta la conservación durante 7 días de 2 a 8°C

-Equipo requerido: se hace uso del espectrofotómetro que sirva para medir cuanta luz
absorbe una sustancia química. Este instrumento debe tener la capacidad de leer
absorbancias a 415 nanómetros. También se hace uso de micropipetas, timer o cronómetro,
baño termorregulado y gradillas para tubos de ensayo.

-Técnica: consiste en la preparación del hemosilato, la separación de la hemoglobina

glicosilada y posteriormente la preparación de la hemoglobina total.
-Cálculos: una vez realizado el procedimiento espectrofotométrico a 415 nm, podemos
determinar el factor de calibración, para ello tomamos en cuenta aspectos teóricos de la
espectrofotometría, para ello aplicamos la concentración estándar dividida por la
absorbancia estándar.

-Ratio: Viene a indicar una proporción

-Ratio de la muestra: Lectura de la Hb glicosilada en la muestra problema dividida por la Hb
total de la muestra problema.
-Ratio del estándar (calibrador): Lectura de la Hb glicosilada del estándar dividida por la Hb
total del estándar.

Cálculo de los ratios:

-Ratio de la muestra = 0.20 / 0.10 = 2
-Ratio del estándar = 0.45 / 0.15 = 3

A partir del cálculo de los ratios, se determina la concentración de la muestra problema que
viene a ser el porcentaje de la muestra de hemoglobina glicosilada.

2 / 3 * %20 = 13.3 %

Intervalos de referencia de HbA1:

-NORMAL = 6.0 – 8.3 %
-PATOLÓGICO = >10.0 %

El resultado final se ubica por encima del 10.0% por lo que podemos decir que se encuentra
en niveles patológicos.

3. Conclusiones
● Ambos métodos son importantes para diagnosticar y controlar la diabetes en los
pacientes.
● Las diferencias radican en los fundamentos para determinar la concentración de
glucosa en la sangre.
● Las longitudes de ondas óptimas son distintas.
● En Wiener se mide en el espectrofotómetro: velocidad de formación del formazán.
● En FAR se mide en el espectrofotómetro: Hb glicosilada A1.
● Se diferencian en la muestra, Wiener emplea suero o plasma a diferencia de FAR
que emplea sangre.
 ● Ambos métodos nos indican tiempo e intervalos de temperatura específicos para
evitar resultados inexactos y mantener la estabilidad de los materiales.
● Se encuentran diferencias en los cálculos con respecto a la búsqueda de
concentraciones, en Wiener se busca la concentración de fructosamina, mientras
que en FAR la de Hb glicosilada.
● Podemos notar que ambas se basan en la espectrofotometría, específicamente en el
método analítico del factor de calibración para posteriormente determinar la
concentración de la muestra problema.
● Ambos métodos utilizan valores de referencia, importantes para ubicar nuestros
resultados finales y determinar si hay un correcto control de la diabetes.

4. Referencias bibliográficas
1. Nuñez M.A. 2021. Guía de Prácticas del Curso de Bioquímica - Nutrición. Perú.
2. FAR HbA1c.pdf [Internet]. [citado 11 de julio de 2021]. Disponible en:
https://unmsm.online/nutricion/pluginfile.php/34372/mod_resource/content/0/FAR%2
0HbA1c.pdf
3. WIENNER FRUCTOSAMINA.pdf [Internet]. [citado 11 de julio de 2021]. Disponible
en:
https://unmsm.online/nutricion/pluginfile.php/34371/mod_resource/content/0/WIENN
ER%20FRUCTOSAMINA.pdf