Practica No.

3 Determinación de Glucosa Pre y PostPrandial
Objetivos:
 Conocer los métodos de laboratorio útiles para la cuantificación de glucosa.  Conocer el fundamento de los métodos enzimáticos para determinar la glucosa.  Conocer las pruebas diagnosticas.  Interpretar resultados.

Introducción:
La determinación de la glucosa (azúcar) sanguínea es necesaria para establecer el diagnostico de la diabetes mellitus y otras enfermedades en que existen alteraciones en el metabolismo de los carbohidratos. En la diabetes mellitus hay una deficiencia de insulina, hormona que regula el proceso metabólico del azúcar en e le organismo. La cuantificación de glucosa en sangre es una de las pruebas mas comunes en el laboratorio. Se han desarrollado un gran número de pruebas, en los últimos 15 años, lo que hace posible medir la glucosa de una manera exacta en muestras tan pequeñas como 10 microlitros. Para la determinación de glucosa en sangre deben de tenerse en cuenta los siguientes factores:      Elección de la muestra. Elección del método. Especificidad del método. Interferencias. Facilidad de medición.

Material:
 Tubos de ensaye.  Pipetas 1 y 2 ml.  Micro pipetas.

Solución patrón de glucosa 100 mg/dl (5. --89. Cronómetro. Plasma Solución patrón Reac. p/glucosa BLANCO ----2 ml PATRON --20 microlitros 2ml PROBLEMA 20 microlitros --2ml Mezclar bien.83 99. Leer contra el blanco de reactivo a una longitud de 505 nm. Reactivos: Suero o plasma de 2 voluntarios por equipo que se presentaran en ayunas de 12 hrs. para la toma de muestra. Reactivo para glucosa (GOD-PAD). Valores Normales: 76-120 mg/dl. Centrifuga Espectrofotómetro.92 93.91 89.19 73.55mmol/l) Técnica: Numerar 3 tubos de ensaye y seguir las siguientes indicaciones. Cálculos: Concentración de Glucosa = Absorbancia del problema Absorbancia del patrón X 100 mg/dl. incubar a 37*C durante 10 minutos.03 85 .37 89.    Estufa para incubar a 37*C. Muestra Patrón Juan Pablo (Pre) Juan Pablo (Post) Edgar (Pre) Rata 1 (C1) Rata 2 (I1) Rata 3 (C2) Rata 4 (I2) Concentración mg/dl.

etc. y una alteración en el metabolismo de la glucosa puede causar determinadas patologías. se le pedirá que tome una solución de agua de 75 gramos de glucosa. ¿Cómo el paciente debe presentarse? El día del análisis deberá concurrir al laboratorio en ayunas y permanecerá sentado por lo menos 15 minutos antes de la primera extracción. Si dos glucemias en ayunas son mayores de 126 mg/dl se dice que el paciente es diabético. 2. La utilidad de la determinación de glucosa es que se pueden determinar ciertas enfermedades como la diabetes. glucogénesis.-Explique en consiste una curva de tolerancia a la glucosa y cual es su utilidad clínica. glucogenólisis. Debe ingerirlo en un lapso de 10 minutos.. después de estimular el páncreas con un a dosis de glucosa.Cuestionario: 1. Mencione técnicas para determinación de glucosa en sangre y en orina. previa administración de 75g de glucosa por vía oral. El objetivo de esta serie de pruebas es obtener muestras de sangre para cuantificar glucosa durante intervalos de tiempo determinados.-Explique la utilidad clínica de la determinación de glucosa. permite analizar en forma global el metabolismo de los glúcidos. como la glucólisis. las cuales pueden determinarse mediante la obtención de los niveles de glucosa en sangre. gluconeogénesis. Curva de tolerancia a la Glucosa ¿Por que se necesita hacerlo? Una prueba de tolerancia a la glucosa se realiza cuando se tiene duda de si un paciente es diabético o si tiene una intolerancia a la glucosa. Se le hará una nueva extracción de sangre a los 120 minutos contando a partir de que comience a ingerir la solución. La cuantificación periódica de la glicemia en el transcurso de alguna horas. debido a que la glucosa es la principal fuente energética para las células. por lo tanto interviene en muchos ciclos. ¿En que consiste la prueba? Luego de hacerle una extracción de sangre para determinar el nivel de glucosa basal. . Su estancia se prolongará por aproximadamente 3 horas.

Los factores de riesgo son la edad avanzada. Hipótesis: Si la glucemia en la rata es modificada por la insulina. . suspensión reciente de la administración de insulina o de agentes hipoglicémicos orales. Se caracteriza por la disminución del estado de conciencia. cuya una de sus funciones. el riñón. un ataque cardiaco. una insuficiencia renal subyacente. los riñones conservan el líquido y los niveles de glucosa se vuelven mas altos. cuando ocurre una deshidratación. insuficiencia cardiaca congestiva. sin embargo. Discutir la hipótesis apropiada. Explique en que circunstancias el riñón permite la eliminación de glucosa. la deshidratación extrema y niveles de glucosa en la sangre sumamente altos que no están acompañados de una cetoacidosis. en base a esto. excretando el exceso de glucosa en la orina. es la purificación de la sangre. Folin WV. comienza a tratar de reducir los niveles de glucosa y los elimina mediante la orina. las cuales causan otras complicaciones). ¿Cuáles son los hallazgos clínicos en SOC y coma diabético? Es una complicación de la diabetes mellitus tipo 2 (no insulinodependiente) que provoca niveles extremadamente altos de glucosa sin la presencia de cetonas (un subproducto de las grasas. Cuando la sangre está saturada con glucosa por la deficiencia de insulina. manejo inadecuado de la diabetes y un evento precipitante como una infección. una apoplejía o una cirugía reciente. Objetivos: Comprobar el efecto de la insulina sobre la glucemia de la rata. la rata control mostrará una glucemia diferente a la experimental.Técnica de la orto-toluidina. Los riñones pueden compensar los altos niveles de glucosa en la sangre. Relacionar los conocimientos sobre el metabolismo de la glucosa y los mecanismos del control de la glucemia en un modelo experimental sencillo. glucosa GOD-PAP. se pueden determinar los niveles de glucosa en la orina. La condición suele precipitarse por una infección o por ciertos medicamentos que deterioran la tolerancia a la glucosa o incrementan la pérdida de líquido. glucosa hexocinasa. De hecho. Efecto de la Insulina sobre ka glucemia de la rata. ocasionando una deshidratación aún mayor.

 Baña maría  Insulina 10u/ml. la sangre se vaciará en tubos que contienen EDTA.  Centrífuga.025 U de insulina por gramo de peso.  Solución patrón de glucosa 100mg/dl. una será el control y la otra el experimento. medimos la concentración de glucosa y obtuvimos los resultados esperados: la glucosa descendió en comparación con los datos obtenidos de la rata control.  Tijeras  EDTA (anticoagulante).  Éter.Discutir si los resultados obtenidos están de acuerdo con la hipótesis planteada.  Jeringas de 3ml.  Espectrofotómetro.  Esperar 20 minutos. Método:  Seleccionar al azar 2 ratas: una experimental y otra control.  Centrifugar la sangre.  Jeringas para insulina. por lo tanto pomos constatar en las ratas control una glucosa elevada en comparación con los niveles de glucosa en el hombre.  Tubos de ensaye. las ratas constantemente adquieren sus alimentos están a su disposición en el momento en que tengan hambre pueden consumirlos.  Inyectar a la rata problema por vía intraperitoneal 0.  Reactivo para glucosa (GOD-PAP). Después de que a las ratas se les suministró insulina..  Anestesiar las ratas con éter y sangrar por punción cardiaca.  Pesar las ratas en una balanza.  Inyectar a la rata testigo con un volumen igual de solución de cloruro de sodio 0.  Solución de cloruro de sodio 0.  Determinar la concentración de glucosa.  Pipetas.Material:  Se utilizaran 2 ratas. . aunque en las ratas es normal.9%.  Balanza granataria. Análisis de Resultados 1. Para identificarlas marcar cada rata.9% y marcarla. Si.

ALos Residuos Hidrofílicos se ubican hacia el exterior de la proteína. encontraríamos que estos valores se normalizan descendiendo los niveles de glucosa en sangre. Todas ellas están muy purificadas y tan solo contienen proteínas de insulina y no contaminaciones de otro tipo. es decir. A Esta es la distribución de los residuos en la molécula. permite disponer . intermedias y lentas..Ile10. ALa estabilidad de esta conformación es conferida por la formación de Puentes de Hidrógeno entre los átomos del enlace peptídico. 3. Las insulinas de origen bovino o porcino han desaparecido prácticamente del mercado. Mediante una cristalización: se añade Zinc y como las partículas son más grandes tardan en hacerse solubles.Gly20. Ser12 Glu17 AUn segmento en la Cadena B entre los residuos Ser 9 . los residuos de las a-Hélices. Dependiendo de cada sistema de retardo de su acción las insulinas pueden ser rápidas. Hoy en día todas las insulinas del mercado son insulinas humanas sintetizadas por ingeniería genética (DNA recombinante).¿Qué es la insulina? La molécula de Insulina presenta tres segmentos con estructura secundaría en a-Hélice ADos segmentos en la Cadena A entre lo residuos Gly1 . y al administrarles insulina. Todas las insulinas retardadas deben inyectarse vía subcutánea. donde interaccionan con las moléculas de agua y con el receptor Hormonal. La insulina es una hormona producida por una glándula denominada páncreas. por lo que va liberándose poco a poco. y sólo la no retardada se puede administrar vía endovenosa. Como la insulina sólo se mantiene activa en la sangre durante períodos cortos (menos de 15 minutos). ADe acuerdo con las propiedades químicas de las cadenas laterales.2. poseen una orientación particular : ALos Residuos Hidrofóbicos se orientan hacia el interior. La insulina ayuda a que los azúcares obtenidos a partir del alimento que ingerimos lleguen a las células del organismo para suministrar energía. se han utilizado diversas maneras para retardar su liberación y por ello su acción . En ratas diabéticas hubiéramos encontrado niveles mucho más altos de glucosa en las ratas control.Discutir cual sería el resultado esperado si se hubiera trabajado con ratas diabéticas. Estos sistemas se basan en preparaciones inyectables que retardan la liberación: Mediante la unión a otras proteínas (protamina). Es la hormona "anabólica" por excelencia. anormales de acuerdo a los niveles que manejan las ratas. El único factor que las diferencia es la duración de acción..

K. Bibliografía Murria. V. D. con aspecto lechoso. • La pluma para inyección de insulina.El cartucho se cambia cuando la insulina se acaba. P.tuotromedico . pero la pluma dura para siempre. La diabetes en México un grave problema de salud. Granner. Existen fundamentalmente dos tipos de insulina : De acción rápida. turbio.com/temas/inyección_insulina..Su acción dura entre 22 a 24 horas. pero está previamente cargado de insulina. actuando con mayor intensidad entre la 3 y 6 horas después de la inyección. • De acción retardada. por lo que considero que tanto médico como paciente. su determinación y la función de la insulina. Bioquímica de Harper 15a Edición.wikipedia..Es un aparato parecido al anterior.A. Rodwell. casi siempre de un sólo uso. www. deben conocer los fundamentos de esta enfermedad y los conocimientos básicos acerca del mecanismo de acción de la insulina. R.a las células del aporte necesario de glucosa para los procesos de síntesis con gasto de energía. que empieza a hacer efecto a los 60 minutos de haberse inyectado. • La jeringa precargada.Es un aparato con el aspecto de una pluma que tiene en su interior un cartucho que contiene la insulina.com . México.W. Mayes. que tiene un aspecto claro. Insulina de acción RÁPIDA que empieza a hacer efecto a los 30 minutos de haberse inyectado. • Conclusiones: La práctica fue de gran utilidad para comprender el metabolismo de la glucosa. actuando con mayor intensidad entre los 30 y los 70 minutos. como Su acción dura de 4 a 6 horas. 2000.html www. graduada en unidades internacionales entre 0 y 40.K. Una vez que se acaba la insulina se tira toda la jeringa. El manual moderno. actuando con mayor intensidad entre la 1 y 3 horas después de la inyección. que luego por glucolísis y respiración celular se obtendrá la energía necesaria en forma de ATP (pastillas concentradas de energía) para dichos procesos. Tambien tenemos otros tipos de insulina: Insulina de acción ULTRARRÁPIDA que comienza a hacer efecto a los 15 minutos de haberse inyectado. Insulinas de acción INTERMEDIA (NPH) o LENTA. • La insulina se puede inyectar con tres tipos de jeringa: • La jeringa de toda la vida.

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