TÉCNICAS ANALÍTICAS

INSTRUMENTALES
4500- B C. Método del carmín

UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA NACIONAL – FACULTAD REGIONAL VILLA MARÍA

Alumnas: Conci, Florencia y Lerda, Eugenia

 Química Analítica

INTRODUCCIÓN
Los métodos instrumentales de análisis se basan en la medición de alguna propiedad física del
analito denominada señal analítica (conductividad, potencial, absorción o emisión de luz, etc.),
relacionada con la naturaleza del analito y su concentración.

Estos métodos se llevan a cabo con instrumentos específicos para captar y procesar cada uno de
los tipos de señales existentes. Estos equipos tendrán un rango de acción y una calibración
determinada.

El método a desarrollar en el siguiente trabajo será el método 4500-B C. o Método del Carmín por
medio de un espectrofotómetro.

ESPECTROFOTOMETRÍA
En este método se busca conocer la cantidad de analito presente en una sustancia mediante la
medición de la intensidad de luz absorbida cuando un haz luminoso pasa a través de la solución de
la muestra. Es decir, mide cuánta luz absorbe una sustancia química en una solución.

Se rige por la ley de Lambert-Beer que afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo
depende de la concentración del mismo en una solución. Por lo tanto, a mayor concentración,
mayor absorbancia.

En esta técnica se mide la cantidad de luz absorbida como función de la longitud de onda utilizada.
La parte de una molécula responsable de la absorción de la luz se llama cromóforo. Toda sustancia
que absorbe luz visible aparece coloreada cuando transmite o refleja la luz. Las sustancias
absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca, y nuestros ojos detectan las longitudes de
onda que no se absorben.

El espectro electromagnético se extiende desde la radiación de menor longitud de onda, como los
rayos gamma y los rayos X, pasando por la radiación ultravioleta, la luz visible y la radiación
infrarroja, hasta las ondas electromagnéticas de mayor longitud de onda, como son las ondas de
radio. Los espectrofotómetros más utilizados pueden captar ondas del espectro visible, o del
espectro visible y del ultravioleta.

Espectro electromagnético

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Un espectrofotómetro típico posee cuatro componentes básicos:

o Una fuente de radiación que tiene que tener una intensidad constante en el rango de
longitud de onda que cubre por el intervalo de tiempo necesario. Usualmente es una
lámpara de tungsteno para la luz visible y deuterio para ultravioleta.
o Un compartimiento para la muestra donde se colocan las cubetas o dispositivos de
muestreo que tienen por lo general 1 cm de espesor y son de materiales que no absorben
la radiación en la región de interés.
o Un monocromador que separa la banda de longitud de onda deseada del resto del
espectro.
o Un fotodetector que mide cuantitativamente la radiación que pasa por la muestra. Es un
transductor que convierte la radiación electromagnética en un flujo de electrones y,
posteriormente, en una corriente o voltaje en el circuito de lectura

Figura de un espectrofotómetro

Principio de funcionamiento

En general, los espectrofotómetros miden en porcentaje de transmitancia (T) y absorbancia (A). El

porciento de transmitancia se refiere a la cantidad de radiación que pasa a través de la muestra y
alcanza el detector, se define como la relación entre la intensidad de luz transmitida (lt) y la
intensidad de luz entrante (lo):

𝑙𝑡
𝑇=
𝑙𝑜

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Mientras que la absorbancia es el porcentaje de luz que fue absorbido por la muestra, definido
por:

𝐴 =𝜀∗𝑙∗𝑐

Dónde: ε es el coeficiente de absortividad molar, l es la longitud de la trayectoria recorrida por la

luz dentro de la muestra y c es la concentración de la muestra.

Una solución no absorbente presentará una lectura de 100% de transmitancia en un

espectrofotómetro calibrado.

La absorbancia y la transmitancia se relacionan por medio de:

1
𝐴 = log
𝑇

En las gráficas anteriores se observa que a medida que aumenta la concentración de una sustancia
disminuye la transmitancia y aumenta por consiguiente la absorbancia.

Para obtener una lectura del porcentaje de transmitancia, el indicador digital de lectura de salida
se coloca en cero con el compartimiento de la muestra vacío de tal manera que el oclusor bloquea
el haz, lo que impide que llegue radiación al detector. Este proceso se llama calibración o ajuste a
0% de T. Una celda que contiene el blanco, se inserta entonces en el contenedor de la celda, y el
puntero se lleva a la marca de 100% T ajustando la posición de la apertura de control de la luz, y
por lo tanto, la cantidad de luz que llega al detector. Este ajuste se denomina calibración o ajuste
al 100% de T. Por último, la muestra se coloca en el compartimiento de la celda y el porcentaje de
transmitancia o absorbancia se lee directamente en la pantalla de cristal líquido (LCD).

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Generalmente, los espectrofotómetros modernos son aquellos de barrido que presentan

relaciones entre absorbancia y longitud de onda mediante espectros de absorbancia, por ejemplo:

Figura de la absorbancia de una sustancia con distintas concentraciones

Al ser expuestos a la luz del espectrofotómetro, algunos electrones de los átomos que forman las
moléculas absorben energía entrando a un estado alterado. Al recuperar su estado original, la
energía absorbida es emitida en forma de fotones. Esa emisión de fotones es distinta para cada
sustancia, generando un patrón particular, que varía con el largo de onda usado. Dependiendo del
largo de onda, será la cantidad de energía absorbida por una sustancia, lo que logra generar un
espectro particular al graficar absorbancia vs longitud de onda.

Por lo tanto, se busca utilizar la longitud de onda que genere el mayor pico en estas curvas a fin de
lograr la mayor absorbancia y poder determinar la concentración del analito de manera correcta.

Para el método del carmín a estudiar se utilizará un espectrofotómetro con un recorrido mínimo
de luz de 1cm para uso a 585nm.

FUNCIONAMIENTO DE UN ESPECTROFOTÓMETRO
Los espectrofotómetros son instrumentos que tienen la capacidad de proyectar un haz de luz
monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha
muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:

1. Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra.

2. Indicar indirectamente qué cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la
muestra.

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Los espectrofotómetros puede ser de un solo haz o de doble haz:

o De un solo haz: Consta de una lámpara de tungsteno o de deuterio, la cual emite una luz
policromática, es decir, que contiene distintas longitudes de onda con distintas
intensidades, esta pasa por un monocromador, el cual selecciona la longitud de onda
deseada. Las cubetas o celdas de referencia pueden ser de cuarzo o silicio fundido para
que sean transparentes a la luz y permitan el paso de la radiación de la región espectral de
interés. Una vez que el haz pasó por las cubetas el fotodetector determina cuanta longitud
de onda logró pasar y el amplificador es aquel quien se encarga de convertir las señales
luminosas en señales eléctricas y el sistema de lectura es aquel que nos lee cuantas
longitudes de onda lograron pasar con la muestra deseada.

o De doble haz: Se obtienen dos haces de luz en un espejo en forma de V llamado divisor de
rayos. Un rayo pasa a través del blanco hacia un fotodetector, y el segundo pasa
simultáneamente a través de la muestra hacia un segundo fotodetector. Las dos señales

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de salida se amplifican y su relación se obtiene electrónicamente en el dispositivo de

salida.

La calidad de los datos espectroscópicos depende de manera crítica de la manera en que se

utilizan y mantienen las celdas. Las huellas digitales, la grasa y otros depósitos en las paredes
pueden alterar de manera significativa las características de transmisión de una celda, es por eso
que se realiza un blanco a fin de poder comparar la energía del haz y evaluar las imperfecciones.
Las cubetas de los espectrofotómetros pueden variar su tamaño, el más usado es 1 cm de espesor
para facilitar los cálculos, y no suelen ser cilíndricas sino más bien rectangulares.

Los espectrofotómetros contienen una curva de calibración que es una función que relaciona la
entrada con la salida, es decir se basa en la relación proporcional entre la concentración y la
absorbancia.

Para obtener la curva, se efectúan diluciones de muestras de contenido conocido y se produce la

lectura de cada una de ellas. Esos datos se los utiliza para ir formando una curva absorbancia vs
concentración. Una vez obtenida la curva, se coloca la muestra a estudiar en el espectrofotómetro
y mediante el valor obtenido de absorbancia, se interpolan los datos para obtener el valor de la
concentración del analito.

Los equipos espectrofotométricos actuales tienen incluida una curva de calibración, por tanto,
automáticamente interpolan el resultado y arrojan una aproximación muy certera de la
concentración del analito.

MÉTODO DEL CARMÍN

Es uno de los métodos más utilizados para la determinación de boro. Fue propuesto por Hatcher y
Wilcox en 1950 y se destaca por su simpleza, facilidad y rentabilidad.

En presencia de boro, una solución de carmín o ácido carmínico en ácido sulfúrico concentrado
vira de rojo brillante a rojo azulado o azul, dependiendo de la concentración de boro presente. En

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la siguiente figura se muestra a la izquierda la estructura del ácido carmínico y a la derecha el

complejo formado con el boro.

Este método se aplica tanto para aguas claras como para aguas residuales y los iones presentes en
ellas no interfieren en la detección del boro. Se emplea para un rango de concentraciones de boro
de 1 a 10 mg/L para aguas claras y de 1 a 100 mg/L para aguas residuales.

Los reactivos que se utilizan en este método son:

o Solución patrón de boro: Para la solución madre de boro disolver 571.6 mg de ácido bórico
anhidro en agua destilada y llevar a 1 L. (1 ml = 100 µg de B). Luego diluir 10 ml de la
solución madre en 1000 ml de agua destilada.
o Ácido clorhídrico concentrado.
o Ácido sulfúrico concentrado.
o Reactivo de carmín: Disolver 920 mg de carmín o ácido carmínico en 1 L de ácido sulfúrico
concentrado.

Las muestras deben conservarse en envases de polietileno o envases exentos de Boro.

PROCEDIMIENTO
Tratamiento previo de la muestra: Si la muestra contiene menos de 1 mg de Boro por litro, se debe
llevar con la pipeta una porción con 2 a 20 µg de Boro en una cápsula de platino; se debe
alcalinizar con NaOH 1N, con un pequeño exceso, y evaporar a sequedad en un baño de vapor o
agua caliente. Acidifíquese el residuo frío con HCl y tritúrese con un pistilo de goma para disolver.
Se obtendrá entonces una solución transparente. Trátese el blanco de la misma manera.

Desarrollo de color: Preparar una serie de soluciones de patrón de boro (100, 250, 500, 750 y 1000
µg) en 100 ml con agua destilada. Llevar con la pipeta 2ml de cada solución patrón en un matraz
pequeño o tubo de ensayo de 30 ml. Tratar el blanco y los patrones de calibrado exactamente
igual que la muestra.

Añadir 2 gotas (0.1ml) de HCl concentrado, introducir cuidadosamente el ácido sulfúrico

concentrado, mezclar y dejar enfriar a temperatura ambiente. Añadir 10 ml de reactivo de carmín,
mezclar bien y dejar reposar para que se realice bien la reacción.

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Después de 45 a 60 minutos, introducir la muestra en un espectrofotómetro y medir la

absorbancia a 585 nm en una cubierta de 1 cm o mayor recorrido de luz, utilizando el blanco como
referencia.

Para evitar errores, asegúrese que no existan burbujas en la cubeta mientras se hacen las lecturas
fotométricas. Las burbujas pueden aparecer como consecuencia de una mezcla incompleta de los
reactivos. Dada la tendencia a estropearse del reactivo de carmín, compruébese diariamente la
curva de calibrado.

Finalmente, para calcular la cantidad de boro presente en la muestra se realiza:

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐵 𝜇𝑔 𝐵
=
𝐿 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎