Estación Marina Bahía Málaga

PROTOCOLO
CULTIVO MASIVO DE ROTIFERO “BRACHIONUS PLICÁTIL” EN LA ESTACION MARINA
BAHIA MALAGA

CULTIVO DE ALIMENTO VIVO “ROTÍFERO”

El alimento vivo es usado como un componente esencial durante los estadios

larvarios de la mayoría de las especies de peces de agua salada en acuicultura
(Mzimba, 2014). Estadísticas globales muestran como el cultivo intensivo de
determinadas especiesde alimento vivo en criaderos es uno de los principales retos
a los que se enfrenta la acuicultura.

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En cultivo, las larvas de los peces son alimentadas con dos o tres organismos durante
los primeros 10 a 30 días de alimentación exógena. Éstos incluyen rotíferos del
género Brachionus (Støtrrup & McEvoy, 2003).

En el caso de las larvas de peces marinos, el alimento vivo juega un papel esencial
debido al carácter altricial de las larvas. Al eclosionar, se encuentran en estado poco
desarrollada, ciegas y todavía se alimentan de las reservas de su saco vitelino.
Durante los dos siguientes días, ocurren una serie de cambios anatómicos y
morfológicos (apertura de la boca y el ano, las mandíbulas se vuelven
progresivamente funcionales, etc.) que posibilitan la ingesta de alimento.

El filo Rotífero consiste en un pequeño grupo de invertebrados acuáticos de pequeño

tamaño, no segmentados, pseudocelomados y con simetría bilateral. A pesar de que
los rotíferos conforman un filo pequeño, contribuyen a un 30% de la biomasa
planctónica total (Støtrrup & McEvoy, 2003).

Los rotíferos, integrantes del zooplancton, son los organismos que mejor se adaptan
para la alimentación de especies de interés comercial. Dentro de los rotíferos más
usados para la alimentación de larvas, se encuentra la especie Brachionus plicatilis,
debido a su pequeño tamaño (60 a 300 µm), su forma y color. Adicionalmente
presentan baja motilidad, y la característica más importante por su capacidad de
incorporar elementos nutricionales esenciales como son los grasos poli-insaturados
que se agregan directamente al cultivo, los cuales promueven la sobrevivencia y
calidad de las larvas de peces.

Se han desarrollado e implementado con éxito, gran variedad de técnicas para lograr
masificar el cultivo de estos organismos y, por consiguiente, mejorar la larvicultura
de más de 60 especies de peces marino y 18 especie de crustáceos. Sin embargo, el
rotífero por sí solo, contiene un inadecuado contenido nutricional que impide el
correcto desarrollo de las larvas. Por lo tanto, se hace necesario potenciar el valor
nutritivo de los rotíferos de acuerdo a los requerimientos de cada especie, mediante
procesos de enriquecimiento, ya sea con microalgas, levaduras, aceites u otras dietas
formuladas (Kotani et al., 2009; Watanabe et al., 1983).

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ASPECTOS GENERALES DE (BRACHIONUS PLICÁTIL)

El nombre rotífero hace referencia a la corona de cilios en la parte anterior del

cuerpo, la cual crea pequeñas corrientes que facilitan el transporte de alimento hacia
la cabida bucal, y que además usan para la locomoción (Fulks y Main 1991). estos
filtran pequeñas partículas de la columna de agua (bacterias o microalgas) por lo
que se consideran polífagos, que no seleccionan su alimento. Figura 1 (Imagen de
rotífero Brachionus plicatilis.)

Glándula vitelina estomago

lorica

Corona de cilios
huevo

Figura 1 (Imagen de rotífero Brachionus plicatilis.)

CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA BRACHIONUS PLICATILIS

La taxonomía que agrupa a los rotíferos dentro del cual se encuentra el B. plicatilis

Phylum: Aschelminthes

Clase: Rotatoria Familia: Brachionidae

Subclase: Eurotatoria Género: Brachionus

Orden: Monogonota Especie: Brachionus plicatilis

Sección: Brachionida

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CICLO DE VIDA Y DESARROLLO

El ciclo de vida comprende la vía partenogenética y la vía sexual, En la primera, que

ocurre en condiciones ambientales normales, las hembras producen huevos
diploides (2n), que dan lugar a hembras genéticamente iguales a sus progenitoras.
La vía sexual ocurre en condiciones desfavorables como respuesta fisiológica a la
calidad del agua, altas densidades de cultivo y cambios en la cantidad y/o calidad del
alimento (Lubzens et al. 1985). En este caso se producen hembras mícticas y
amícticas. Aunque ambas no son morfológicamente diferentes, las hembras mícticas
producen huevos haploides (n) que originarán machos haploides, predominando la
reproducción sexual y la producción de huevos resistentes, que estarán en latencia
hasta cuando las condiciones ambientales sean mejoradas.

Este tipo de alimento es capaz de flotar en la columna de agua y está constantemente

disponible para las larvas, a diferencia de las dietas formuladas que tienden a formar
agregados en la superficie o bien a precipitar al fondo del tanque.

El alimento vivo (rotífero) parece estimular las respuestas alimenticias de las larvas
ya que su historia evolutiva las ha adaptado para atacar a la presa en movimiento en
su hábitat natural. Además, una presa viva, con un delgado exoesqueleto y un alto
contenido en agua puede resultar más sabrosa para la larva en comparación a las
duras y secas dietas formuladas.

Es importante que el alimento que se proporciona a las larvas sea adecuado

nutricionalmente. a los rotíferos se les debe alimentar con emulsiones lipídicas
comerciales, ricas en ácidos grasos altamente poliinsaturados de la serie n-3. El
alimento vivo por tanto actúa como una microcápsula de nutrientes, con la
capacidad de ser enriquecida incluso con antibióticos o bacterias probióticas (Civera
et al., 2004).

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CULTIVO DE ROTÍFERO EN LA ACUICULTURA

Los rotíferos están firmemente establecidos como el alimento preferido para las
larvas de muchos peces y crustáceos de la acuicultura, ya que son el único
zooplancton vivo que puede ser criado de forma fiable en cantidades masivas,
gracias a la aplicación de los protocolos de cultivo desarrollados por la industria
acuícola en los últimos años (Henry, 2016).

Los rotíferos utilizados en la acuicultura son casi invariablemente cepas de agua

salada del género Brachionus, más a menudo llamado B. plicatilis (el más grande,
“tipo L”) o B. rotundiformes (el más pequeño, “tipo S”) (Henry, 2016).

Estas cepas de Brachionus spp. poseen ciertos atributos que los hacen
especialmente adecuados como alimento vivo en la acuicultura:

• Toleran rangos amplios de temperatura y salinidad, así, los mismos rotíferos

se pueden utilizar para larvicultura de agua dulce o marina (Henry, 2016).

• Su pequeño tamaño (100–300μ) y forma redondeada, permite a las larvas de

peces y crustáceos ingerirlos cuando todavía no pueden ingerir nauplios de
artemia (Torrentera & Tacon, 1989).

• Su alimentación es relativamente fácil y barata ya que es posible alimentarlos

con fitoplancton, levaduras y dietas artificiales.

• Un enorme número de rotíferos puede ser requerido cada día para criar
larvas en criaderos comerciales (Støtrrup & McEvoy, 2003). La alta tasa de
reproducción bajo condiciones óptimas de cultivo, duplica la población en
menos de 24 horas, permitiendo obtener altas densidades (Torrentera &
Tacon, 1989).

• Los rotíferos pueden ser cultivados intensivamente en densidades de hasta

3-10 millones/L y por esto, requieren volúmenes de cultivo más pequeños y
ocupan menos espacio en los criaderos. lo que permite un mejor control de
las condiciones de cultivo y la exclusión de contaminantes (Henry, 2016).

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• Los rotíferos actúan como una “cápsula viva” que provee los nutrientes
requeridos por el cultivo larvario de peces para un adecuado desarrollo
(Støtrrup & McEvoy, 2003). Los cultivos de rotíferos se pueden alimentar de
manera efectiva con una gran variedad de alimentos, incluyendo dietas que
contienen componentes de “enriquecimiento” (ácidos grasos omega-3 y
omega-6, vitaminas, etc.), que son absorbidos por los rotíferos para
proporcionar una nutrición óptima a los peces (Henry, 2016).

• la duración de vida de los rotíferos ha sido estimada de 3.4 a 4.4 días.

Generalmente las larvas llegan a ser adultas después de 0.5 a 1.5 días después
de lo cual las hembras comienzan a producir huevos aproximadamente cada
cuatro horas. Se cree que las hembras pueden producir diez generaciones de
descendientes antes de morir.

La experiencia de la estación marina Bahía Málaga, (AUNAP) han desarrollado e

implementado con éxito un paquete técnico, creando un procedimiento que permite
mejorar la producción masiva de rotíferos, bajo un modelo practico de técnicas para
masificar el cultivo de estos organismos y, por consiguiente, mejorar la larvicultura.
El objetivo de este protocolo es dar a conocer la metodología aplicada para la
produccion de rotífero.

MATERIALES Y METODOS

Inicio de un cultivo de rotíferos

Para iniciar un cultivo de rotíferos se puede partir de poblaciones naturales que

crecen particularmente en aguas con altos contenidos de materia orgánica como
lagunas o ciénagas. Este método requiere bombeo de hasta 500 litros de agua con
motobombas, filtrando a través de mallas de 40 micras y concentrándolas en
galones. Inmediatamente se pasa al laboratorio, donde se homogeneizan las
muestras de agua y se toman alícuotas para observar e identificar los rotíferos con
el microscopio. Se deben escoger aquellos individuos que muestren nado libre
porque algunas especies de rotíferos se fijan por el pedúnculo al sustrato,
organismos sésiles. Una vez se identifican los individuos se separan usando pipetas
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y capilares y se transfieren a tubos de ensayo (160 mm) con algas como Tetracelmis,
Nannochloropsis o Rhodomona a una densidad de 1rot/mL. Los tubos se
monitorean a diario para observar la fertilidad y desarrollo de los rotíferos

Las cepas comerciales son huevos resistentes (cistos) que se obtienen bajo
condiciones controladas en laboratorio. Se pueden obtener cepas para agua salada
o dulce, y aún especies de tamaños específicos denominados S (small) o L (large) por
sus siglas en inglés, en referencia a pequeños y grandes respectivamente. A la hora
de cultivar rotífero, es imprescindible que este crezca sano y que tenga una tasa de
crecimiento elevada para generar altas densidades que nos permitan el
mantenimiento de la producción y la alimentación del cultivo larvario. Figura 2
(rotíferos alimentados con Rhodonoma).

Cepario de rotífero alimentados con Rhodonoma

La estabilidad promueve la salud de los rotíferos y una alta productividad. Todas las
fluctuaciones en las condiciones del cultivo (temperatura, pH, dosificación de
alimento, tasa de cosecha, etc.) deben ser minimizadas (Henry, 2016).

la temperatura y la aireación, son parámetros esenciales para el crecimiento óptimo

de los cultivos y es necesario establecer un control adecuado y rutinario de los
mismos.

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Temperatura: Según Mzimba (2014), los cultivos de Brachionus spp. requieren una
temperatura de entre 22 y 28 °C. y la aireación de los tanques debe ser fuerte para
favorecer la homogeneización del rotífero y mantener la resuspensión de la materia
orgánica precipitada, y el pH ha sido establecido entre 6,6 y 8,0. (hoff y snell 1999)

Preparación de tanques

Se debe contar con un área exclusiva para el manejo de rotíferos, evitando el traslado
de elementos con otras áreas, además de contar con utensilios de limpieza de uso
exclusivo para esta zona. Evitando así la contaminación con otros cultivos.

A continuación, se mencionan los principales elementos que se requieren para esta

actividad:

• Tanques cilíndrico cónicos de 400 litros en fibra de vidrio con válvula

inferior de 1 pulgada.

• Suministro de aire (manguera con piedra difusora)

• Cosechador con malla de 40 micra

• Valdés plástico 10L para el lavado y concentración de rotíferos

• Filtros de 10, 5 y 1 micra

• Hipoclorito

• hiposulfito

• Formol

• Manguera

• Ortotolidina

Antes de iniciar un cultivo de rotíferos, a los tanques se les realiza una limpieza con
agua filtrada y escoba de celdas dura, después se enjuaga con abundante agua,
abriendo y cerrando la válvula inferior. Adicionalmente y dado que algunas
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bacterias tienden a formar biofilms, es recomendable lavar las paredes de los

tanques con una concentración de cloro de 10 ppm y a continuación se enjuaga con
abundante agua filtrada.

Es preciso que la calidad del agua sea óptima para el cultivo, por lo que es
previamente desinfectada con hipoclorito para evitar el afloramiento bacteriano y
posteriormente neutralizarla con hiposulfito. Antes de la siembra debe
comprobarse siempre, mediante reactivos, que no queden rastros de cloro, se
recomienda la prueba de ortotolidina, producto que en medio clorhídrico y en
presencia de cloro libre se oxida, dando un compuesto de coloración amarilla. La
prueba consiste en utilizar tubos de ensayo donde se colocan 10 ml del agua a
analizar y 0,2 ml del reactivo dejando en reposo por 1 minutos.

Se le coloca al tanque la aireación, que consiste en una manguera con una piedra
difusora que abraza un tubo de PVC de 1pulgada y se procede a la siembra. Figura 3
(tanques cilindroconico en fibra de vidrio).

Tanques cilíndrico cónicos de 400 litros en fibra de vidrio con válvula inferior de 1 pulgada.

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Manejo de población, conteo y estimación de densidad

Los elementos que se requiere en esta actividad son:

• Microscopio

• Cámara de conteo Sedgwick Rafter

• Pipetas 1mL

• Lugol

• Contador de organismos

• Agenda de apuntes

Para estimar la densidad de la población se toma 1mL de muestra con la pipeta y se

sirve sobre la cámara de Sedgwick Rafter, la cual consiste en una lámina con una
cuadrícula de 50 filas por 20 columnas. Se fija el objetivo del microscopio en 10x y
se realiza una observación general de los organismos registrando motilidad,
presencia de alimento o algas, y de ciliados. Con una pipeta se le agrega a la placa
una gota de Lugol, se homogeniza y una vez cesa la actividad de los organismos, se
procede a hacer el conteo de toda la placa leyendo la totalidad de los campos,
registrando el número total de rotíferos y simultáneamente el de aquellos que
presentan huevos, pues el número de ovadas predice el estado del cultivo para las
próximas 24 horas. Por lo tanto, el porcentaje de ovada es determinado por el
número de huevos dividido entre el número total de hembras de la muestra y es
indicativo del estado de nuestro cultivo (Støtrrup & McEvoy, 2003).

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cámara de conteo de rotífero, Sedgewick Rafter

Preparación del alimento

El valor nutricional de los rotíferos depende de lo que se alimentan. En la práctica

convencional, un cultivo se puede hacer crecer a la densidad de cosecha utilizando
un alimento de bajo costo y valor nutritivo (Henry, 2016) basado en algas, levadura
seca, harinas y aceites de pescado. No obstante, si su destino es la alimentación de
las larvas, es necesario enriquecerlo con otro tipo de alimento rico en vitaminas,
nutrientes y ácidos grasos poliinsaturados del grupo n-3.

levadura, emulsiones, protein pluss, algamac3050, spirulina y aceite de pescado.

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Debe mantenerse un cuidadoso balance entre la densidad, número de rotíferos y la

ración de comida aportada, para evitar la acumulación de un exceso de materia
orgánica en los tanques de cultivo (Støtrrup & McEvoy, 2003).

Es necesario, por tanto, calcular la cantidad de alimento en base a los contajes

realizados, prepararlo, y guardarlo en un sistema de alimentación computarizado
que debe ser previamente ajustado de acuerda a la necesidad.

Mantenimiento diario del cultivo

A menudo se debe recambiar el 40% del volumen del tanque con alga, para esta
labor existe un modelo que permite bajar suavemente el nivel de los tanques de
cultivo. recambio lateral, se le introduce una manguera flexible de ¼ a un
cosechador de 40 micras, este recambio se hace por gravedad, con este descenso de
agua no se forma aglomeración de rotífero en la malla ya que se mantiene la
aireación constante dentro del tanque de cultivo, En la medida que desciende el nivel
del tanque se enjuagan suavemente las paredes del mismo para evitar que queden
organismos adheridos.

Recambio lateral en tanque de cultivo en la estación bahía Málaga

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Uso de Trampas de floc

El exceso de materia orgánica puede generar severos problemas en los tanques de

cultivo relacionados con la proliferación de bacterias y protozoos y pérdida de
motilidad del rotífero, Es hay cuando es necesario el uso de las trampas, es un
mecanismo diseñado para la captura del floc que se producen dentro del tanque de
cultivo debido a la alimentación con dietas seca, como levadura, protein pluss,
algamac3050, spirulina y aceite de pescado. Este mecanismo está diseñado a partir
de sabrás, las cuales se confeccionan formando un paño de 50cm x 60cm, estas son
introducidas como redes dentro de los cultivos de rotíferos. El cambio de estas
trampas se hace diariamente,

Trampas de floc, (paño de 50cm x 60cm utilizado en la estación Bahía Málaga)

Purga de tanques

El rotífero es cultivado en tanques cilindro cónicos de 400L, debido a la naturaleza

del organismo y a su alimentación, se genera una gran cantidad de materia orgánica
que puede provocar la aparición de bacterias y ciliados en el cultivo. Es necesario,
por tanto, hacer una purga de los tanques abriendo durante unos segundos la válvula
inferior de los mismos, para eliminar la suciedad que ha decantado al fondo.

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Probiótico

Los probióticos utilizado en los cultivos de peces y camarones, son bacterias

beneficiosas que comúnmente se agregan a los sistemas de cultivos para
contrarrestar la aparición de bacterias y ciliados que afectan nuestros cultivos, el
probiótico contribuye a mejorar la salud, al desempeño productivo y el crecimiento
de nuestros cultivos,

Es preciso que nuestros cultivos de rotíferos, se encuentren en óptimas condiciones

por lo que es necesario suminístrale cierta cantidad de probiótico, para ello
utilizamos el EcoPro a una preparación de 1.5g en 200ml de agua, con abundante
aireación y con el recipiente tapado lo dejamos actuar por un lazo de 12 a 24 horas,
para su correcta activación, luego se adiciona a nuestros cultivos, especialmente en
horas de la mañana antes de alimentar.

Lavado del cultivo de rotíferos

A continuación, se enumeran los principales elementos que se requieren para este

lavado:

• Tanques 400 litros en fibra de vidrio con válvula inferior de 1 pulgada.

• Suministro de aire tanque (piedra difusora conectado a la derivación

de aire)

• Cosechador con malla de 40 micras

• baldés de 10L

• formol

• oxitetraciclina

• baldes

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A partir de la muestra que se toma para los contajes, se extrae una pequeña cantidad
para su observación a microscopio. Durante esta, se evalúa el estado del rotífero,
porcentaje de fertilidad, la presencia o ausencia de ciliados, alimentación y la
cantidad de materia orgánica presentes en la muestra. Toda esta información es
anotada para su comprobación y archivado.

En caso de ser elevada, es preciso hacer un decantado del mismo, quitándole la

aireación y el oxígeno durante un breve período de tiempo. Durante este, el rotífero
se mantiene en suspensión y la materia orgánica se precipita permitiendo que se
haga una purga de la misma y liberando al tanque de ese exceso de materia que
puede generar incrustaciones en el rotífero y fomentar aparición de bacterias y
protozoos.

En los cultivos de rotíferos sanos y bien manejados, los protozoos por lo general se
mantienen en niveles bajos. Su proliferación es generalmente un signo de que los
rotíferos están bajo estrés, o, especialmente, que la alimentación no está siendo
asimilada de manera eficiente por los rotíferos (Henry, 2016). lo recomendable es
realizar el lavado de todo el cultivo, ósea cosechar el tanquen.

Para esto se suspende la aireación en el tanque de rotíferos y se espera por espacio

de 30 a 45 minutos hasta que se observa la concentración de los rotíferos en el
extremo superior de la columna de agua, y los residuos alimenticios se depositan en
el fondo del tanque.

La cosecha consiste en pasar los rotíferos del tanque a un recipiente circular de

menor volumen llamado cosechador. Este posee una malla circular de 40 micras en
su interior que permite el paso del agua, pero no del rotífero lo que habilita la
limpieza y desinfección del volumen cosechado. Por gravedad a través de una
manguera se hace descender el volumen del tanque y se limpian suavemente con
agua filtrada las paredes del tanque en la medida que va descendiendo. En el
cosechador fluye continuamente el agua de mar filtrada de forma que van quedando
los rotíferos concentrados y por la malla se desechan las algas y los ciliados. Tras la
desinfección y el aclarado de la cosecha se toma una muestra del cosechador y se

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estima de la densidad que hay en ese volumen para determinar si es la misma que
en el tanque o ha variado debido al proceso de bajada, limpieza y desinfección.

Esquema de Lavado del cultivo de rotífero en la estación Bahía Málaga

Esta cosecha puede luego enviarse para su enriquecimiento, para el inicio de nuevos
tanques de producción o si estuviéramos cosechando rotíferos ya enriquecidos, para
la alimentación del cultivo larvario.

Para el tratamiento de los ciliados, se recomienda concentrar los rotíferos después

del lavado en un balde de 12L con aireación, y aplicarle un 1mL de formol, por 1
minuto, o también en un baño con oxitetraciclina, de 0,5 a 1g en 12L, el cual afecta a
estos protozoos, sin generar un efecto adverso sobre los rotíferos.

La cosecha se realiza cada 5 días normalmente, pudiendo alargarse hasta 8 días en

el calendario de cosecha de los tanques.

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ACTIVIADES DIARIAS

• Revisar el cultivo; parametros (temperatura, pH, etc.)

• Alimentacion (levadura)

• Toma y observación de muestra de rotífero

• Conteo del cultivo

• Cosecha de rotífero

• Preparación de alimento

• Entrega de rotífero al área de larvicultura cuando se requiere

• Inoculo de rotífero

• Alimentacion y aumento de volumen (micro alga)

• Recambio lateral

• Lavado de material y piso

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