Universidad de la Amazonia

Facultad de Ingenieria
Programa de Ingenieria de Alimentos
Laboratorio de Química Analítica
! !

PRACTICA Nº7

D E T E R M I N A C I O N D E A C I D O A S C O R B I C O E N F R U TA S P O R T I T U L A C I Ó N C O N 2 , 6 -
DICLOROFENOLINDOFENOL

1. OBJETIVO

Determinar el contenido de acido ascórbico en una fruta expresado como mg acido ascórbico /100 ml jugo

2. FUNDAMENTO

Los métodos volumétricos para determinar ácido ascórbico libre se basan en su fuerte acción reductora sobre
agentes quiímicos como el yodo o sobre colorantes como el 2,6-diclorofenol-indofenol soódico.
El método recomendado por la AOAC para la determinacion de vitaminca C, conocido tambien como el método de
Tillmans; el cual se basa en la reducción del 2,6 diclorofenol-indofenol (cuya sal sódica es de color rosa fuerte en
medio ácido y azul en medio alcalino, neutro o débilmente aácido) por el ácida ascórbico, pasando a la leucobase
incolora. Tillmans titulaba en medio neutro, pero se encontró que en esas condiciones una serie de cuerpos
reductores, presentes en los productos naturales, interfieren en la titulación. Para hacer más específico el método
otros autores propusieron hacer las titulaciones en medio fuertemente ácido. Este método se adapta a frutas y
verduras con 3 a 20 mg de ácido ascórbico directamente reductor.
3. CONSULTA PREVIA

3.1 Escribir el nombre de cuatro métodos para determinar el contenido de vitamina c de un vegetal
3.2 Escribir la ruta metabólica que origina ácido ascórbico a partir de glucosa
3.3. Para carbohidratos, explicar los términos ácido, aldárico, aldónico y urónico
3.4. Escribir tres funciones del acido ascórbico, tanto en animales como vegetales
3.5. Cuál es el fundamento del método de 2,6-diclorofenolindofenol para determinar vitamina C
3.6. Porque la vitamina C es poco estable?

4. MATERIALES

Muestra: Guayaba pera

REACTIVOS (Para los 8 grupos) CANTIDAD

Acido Oxalico 0,15% 250 mls
2,6-Diclorofenolindofenol 100 mls
Acido acetico 5% 1000mls
Acido ascorbico (55mg en 50ml acido oxalico) 50mls
 MATERIALES x GRUPO (Para 8 Grupos) CANTIDAD
Vasos de precipitado x 250 mls 1
Vortex 1
Erlenmeyer por 250 mls 2
Bureta por 25 mls tornillo negro o azul 1
Probeta graduada x 100 mls 1
Pipeta graduada por 5 mls 1
Papel filtro 1
*Barra de agitacion 1
Balon afordo 5ml 1
Frasco lavador 1
Papel aluminio 1
*Plancha de agitacion 1

5. PREPARACION DE REACTIVOS

5.1. Preparacion del 2,6-Diclorofenolindofenol

Pesar 22 mg de 2,6-diclorofenolindofenol (DCFI) (color azul) y disolver cuidadosamente en agua destilada recién
hervida a 100 ml en balón aforado. Si es del caso filtrar y aforar. Usar barra agitación y plancha de agitación.
refrigerar y no almacenar más de siete días en recipiente oscuro.

5.2. Preparacion del acido ascorbico

Pesar 55 mg de acido ascórbico y disolver a 50 ml de solución con acido oxálico al 0.15%p/v

5.3. Preparacion de la muestra

Pesar 20 g pulpa fresca, triturar la muestra. Agregar 20 ml de acido oxálico 0.15%, Agitar, lavar el beaker con 10 ml
de acido oxálico 0.15% y pasar al tubo de centrifuga. Usar la centrifuga para tubo de 100 ml. Del sobrenadante
tomar 10ml extracto, Agregar 10ml de acido acético al 5%, Agregar 50 ml de agua destilada,

6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

6.1. Titulacion del acido ascorbico

Tomar 2 ml de solución patrón de acido ascórbico, agregar 10 ml acido acético al 5% y agregar 50 ml de agua
destilada en erlenmeyer de 250 ml. Agitar. (No se usa indicador). 3.4.5 Colocar en la bureta, la solución del 2,6-
diclorofenolindofenol (color azul) y titular directamente hasta aparición de color rosado. Anotar volumen. Repetir el
procedimiento por triplicado.

6.2. Titulacion de la muestra problema

Poner la muestra previamente preparada en el erlenmyer. Colocar en la bureta, la solución del 2,6-
diclorofenolindofenol (color azul) y titular directamente hasta aparición de color rosado. Anotar volumen. Repetir el
procedimiento por triplicado.

6.3. Titulacion del blanco

Poner en el erlenmeyer 10 ml acido acético 10% y 50 ml agua destilada (Blanco). Colocar en la bureta, la solución
del 2,6-diclorofenolindofenol (color azul) y titular directamente hasta aparición de color rosado. Anotar volumen.
Repetir el procedimiento por triplicado.

7. RESULTADOS

Tabla 1. Datos para la cuantificación de acido ascórbico por 2,6-diclorofenolindofenol

ENSAYOS
1 2 3 4
H Peso de la pulpa (g)
E mg DCFIF/ml 110,8g/500ml
C ml DCFIF titulacion de patron de vitamina C
B ml DCFIF titulacion del blanco
D ml DCFIF titulacion de muestra
A mg vitamina C/ml 266,6mg/250ml
Color de la cascara (organoleptico)
G ml acido oxalico antes de licuar
F ml de acido oxalico despues de licuar
I ml vitamina C patron para titular

Calculo del contenido de vitamina C, usada en el ensayo:

! mg VitaminaC/ml =A
Determinación del contenido de acido ascórbico por el método de 2,6-diclorofenol-indofenol (Hernández y Pineda.
2003)

(C − B) F H
I*A G 100
mg A
! . A /100g pulpa = (D − B)* * *

8. CUESTIONARIO

Determinar el contenido de vitamina C en la muestra

Determine media y desviación estandar
Revisar los conceptos de precisión (desviación estándar) y exactitud (error) con base a los resultados obtenidos.
Revisar el porcentaje de error con base al valor teórico. Justificar el rechazo de algunos datos. Comparar contra el
valor teórico. Indicar el valor teórico de vitamina C teniendo en cuenta el método usado. Revisar limitaciones de éste
método.

Escribir el contenido de vitamina C expresado como mg vitamina c/100 g de muestra fresca (media ± d. e.)

9. BIBLIOGRAFIA

CONFERENCIAS PARA EL LABORATORIO DE BIOQUIMICA BIOLOGIA Y FARMACIA. Universidad Nacional de

Colombia. Santafé de Bogotá, agosto 1993.
BOHINSKY, Robert. Bioquímica . 5 ed. Bogotá. Addison – Wesley Iberoamericana. 1991.
CHURCH, D. Fisiología y nutrición de los ruminates. España. Acriba, 1986.
LENINGHER, A.; NELSON, D. y COX, M. Principles of Biochemistry. 2ed. España. Omega, 1993.
MILLER, I. C. y MILLER, J. N. Estadística para química analítica. Addison wesley. 211 p.
CLAVIJO, D. Alfonso. Fundamentos de química analítica, equilibrio iónico y análisis químico. Universidad Nacional
de Colombia. 1009 p.
UNDERWOOD, A. L. y DAY, R. A. Química analítica cuantitativa. Prentice hall. 841 p.
DEVLIN, Robert, M. Fisiología vegetal. Omega. 517 p.
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GIL, M. Francisco. Elementos de fisiología vegetal. Relaciones hídricas. nutrición. mineral. transporte. Metabolismo.
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ROVALO. M. Magdalena y ROJAS, G. Manuel. fisiologia vegetal experimental. Prácticas de laboratorio. Limusa. 269
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Hernández Vásquez, R. E., & Pineda Cornejo, R. C. (2003). Estudio comparativo de la cuantificación del ácido
ascórbico, vitamina c, en jugo de naranja utilizando el método de titulación yodométrica a microescala y yodométrica
a macroescala(Doctoral dissertation, Universidad de El Salvador).