UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS
QUÍMICAS
CARRERA: QUÍMICA Y
FARMACIA
Número de la
práctica:28 PRÁCTICAS PRE PROFESIONALES
LABORATORIO CLÍNICO JOSÉ DARÍÓ
MORAL
Integrante: Karla Melany Lindao Domínguez.

PERFIL LIPIDICO

Un perfil lipídico, también denominado lipidograma y perfil de riesgo coronario, es un

grupo de pruebas o exámenes diagnósticos de laboratorio clínico, solicitadas
generalmente de manera conjunta, para determinar el estado del metabolismo de los
lípidos corporales, comúnmente en suero sanguíneo.

Los lípidos son sustancias naturales que no se disuelven en agua. Realizan un conjunto
extraordinario de funciones en los seres vivos.

Algunos lípidos son reservas energéticas vitales. Otros son los componentes
estructurales primarios de las membranas biológicas.

Los lípidos son un grupo heterogéneo de biomoléculas. A causa de su diversidad, el

término lípido tiene una definición más operativa que estructural.

Un perfil lipídico, también conocido como "panel de lípidos", mide las concentraciones
de distintos tipos de grasas en la sangre.

• El colesterol total es la suma de los distintos tipos de colesterol. El colesterol es

una sustancia grasa que el cuerpo necesita en cierta medida. Pero un exceso de
colesterol puede causar problemas.
• La lipoproteína de alta densidad, o colesterol HDL (por sus siglas en inglés), se
suele llamar colesterol "bueno". El colesterol HDL ayuda al cuerpo a librarse del
colesterol que le sobra.
• La lipoproteína de baja densidad o colesterol LDL (por sus siglas en inglés), se
suele llamar colesterol "malo". El colesterol LDL que se acumula en el torrente
 sanguíneo pueden obstruir vasos sanguíneos e incrementar el riesgo de padecer
enfermedades cardíacas.
• Los triglicéridos almacenan energía hasta que el organismo la necesita. Si el
cuerpo acumula demasiados triglicéridos, se pueden obstruir vasos sanguíneos,
lo que puede provocar problemas de salud. (kidshealth, 2018)

CLASIFICACIÓN

Dependiendo de la presencia o no de ácidos grasos (unidos por enlaces éster) en su

estructura, los lípidos se pueden clasificar en:

• Ácidos grasos : Son moléculas que presentan un único grupo carboxílico unido a
una cadena hidrocarbonada (cola no polar), en la cual el número de átomos de C
es ≥ γ. Los ácidos grasos difieren entre sí en la longitud de la cadena y en la
presencia, número y posición de dobles enlaces.
• Triacilglicéridos (triglicéridos): ésteres de glicerol con tres ácidos grasos. Se
liberan tres moléculas de agua., Los triacilglicéridos son simples si los tres
ácidos grasos son iguales, y se denominan según el ácido graso.
• Ceras
• Químicamente se definen como ésteres de ácidos grasos de cadena larga unidos
mediante un enlace éster a un alcohol de cadena larga. Su función principal es de
protección ya que es repelente del agua (ya que generalmente son sólidas e
insolubles en agua), pero también puede metabolizarse y ser fuente de energía
 • Fosfolípidos : Los también llamados fosfoglicéridos, fosfoacilglicéridos o
glicerofosfolípidos están constituidos por dos ácidos grasos esterificados al
primer y segundo -OH del glicerol. El tercer grupo -OH está unido por un enlace
fosfodiéster a un grupo de cabeza muy polar o cargado.
• Esfingolípidos : Una segunda clase importante de componentes de la membrana
es la de los esfingolípidos. También tienen una cabeza polar y dos colas apolares
pero, a diferencia de los fosfoglicéridos, no contienen glicerol.

De acuerdo con su clasificación:

Lípidos simples

Se llaman lípidos simples a los lípidos que son insaponificables, debido a que no
contienen ácidos grasos esterificados en su molécula. En este grupo se incluyen
moléculas formadas a partir de la unión de dos o más unidades de isopreno como los
terpenoides y terpenos o derivados de ellos como los esteroides.

Terpenos y terpenoides

Los terpenoides y los terpenos son compuestos aromáticos que se encuentran en miles
de
especies de plantas, y son responsables de los diferentes sabores y aromas del cannabis.
Hemos sabido de su presencia en el cannabis desde hace décadas, pero solo
recientemente ha comenzado a ampliarse el conocimiento de sus potenciales
propiedades terapéuticas. Los terpenos son una amplia clase de compuestos orgánicos
de origen natural; también se conocen como isoprenoides, ya que su estructura se basa
en la repetición de unidades de isopreno (C₅H₈). Los terpenos son los principales
componentes de la resina de las plantas y de los aceites esenciales extraídos de dichas
plantas.
Sin embargo, es común que el término “terpeno” incluya también a los terpenoides. Los
terpenoides, ya que también son isoprenoides. Terpenos y terpenoides son el mayor
grupo de compuestos orgánicos encontrados hasta el momento, comprende al menos
20.000 moléculas diferentes.

Los terpenos son hidrocarburos (moléculas exclusivamente de carbono e hidrógeno),

mientras que los terpenoides contienen grupos funcionales adicionales que podrían estar
comprendidos de una variedad de elementos químicos.

En general los terpenos se clasifican según el número de unidades isopreno presentes en

su molécula. Así tenemos:

a) Hemiterpenos. Que son los terpenos más pequeños, con una sola unidad de
isopreno. El hemiterpeno más conocido es el isopreno mismo, un producto volátil que
se desprende de los tejidos fotosintéticamente activos.

b) Monoterpenos. Los cuales constan de dos unidades de isopreno (terpenos de 10

carbonos).
Los monoterpenos son mejor conocidos como componentes de las esencias volátiles de
las flores y como parte de los aceites esenciales de hierbas y especias.

c) Sesquiterpenos. Son terpenos de 15 carbonos; es decir, terpenos de 3 unidades de

isopreno. Al igual que los monoterpenos, están presentes en los aceites esenciales.
Muchos de ellos actúan como fitoalexinas, compuestos antibióticos producidos por las
plantas en respuesta a la presencia de microorganismos y que también actúan como
inhibidores de la alimentación de los herbívoros oportunistas. La ácido abscísico (una
hormona vegetal) que se produce del rompimiento asimétrico de un carotenoide de 40
unidades.
d) Diterpenos. Terpenos de 20 carbonos. Entre ellos se incluye el fitol, que es el lado
hidrofóbico de la clorofila, las giberelinas, los ácidos de las resinas de las coníferas y las
especies de legumbres, algunas fitoalexinas, y una serie de metabolitos
farmacológicamente importantes.

e) Triterpenos. Terpenos de 30 carbonos. Son por lo general generados por la unión

cabeza- cabeza de dos cadenas de 15 carbonos, cada una de ellas formada por unidades
de isopreno unidas cabeza-cola. Esta gran clase de moléculas incluye a los
brassinoesteroides, componentes de la membrana que son fitoesteroles, algunas
fitoalexinas, varias toxinas y componentes de las ceras de la superficie de las plantas,
como el ácido oleanólico de las uvas.

f) Tetraterpenos. Terpenos de 40 carbonos (8 unidades de isopreno). Los tetraterpenos

más prevalentes son los pigmentos carotenoides accesorios que cumplen funciones
esenciales en la fotosíntesis.

g) Politerpenos. Los politerpenos, que contienen más de 8 unidades de isopreno,

incluyen a los transportadores de electrones que son quinonas preniladas como la
plastoquinona y la ubiquinona, también poliprenoles de cadena larga relacionados con
las reacciones de
transferencia de azúcares (por ejemplo el dolicol), y también a enormemente largos
polímeros como el caucho o goma natural, usualmente encontrado en el látex.
Esteroides
Son lípidos derivados de un hidrocarburo tetracíclico saturado, llamado
ciclopentanoperhidrofenantreno o esterano. Los esteroides se forman por la aparición en
distintas posiciones de este hidrocarburo de dobles enlaces, y grupos sustituyentes (OH,
cadenas carbonadas, etc.).

Los principales esteroides son:

Esteroles: Son esteroides que 5tienen un grupo OH en el carbono 3

y una cadena de 8 carbonos ramificada en el carbono 17.
El más abundante de todos es el colesterol. Este se encuentra en las
membranas de las células animales e influye en su fluidez.
También se encuentra en la sangre donde suele estar unido a proteínas
formando las lipoproteínas.

Es necesario para las células, pero en exceso es perjudicial ya que se puede depositar en
las paredes internas de las arterias, endureciéndolas y reduciendo la luz arterial, dando
lugar a una enfermedad llamada arterioesclerosis.

El colesterol se sintetiza en el hígado y es el precursor de otros esteroides (ácidos

biliares,
hormonas sexuales).

Ácidos biliares: Se forman en el hígado a partir del colesterol. Las sales de estos ácidos
forman parte de la bilis y su función es la de emulsionar a las grasas en el intestino
favoreciendo su digestión y posterior absorción.

Vitamina D: Regulan el metabolismo del Ca y del P y su absorción intestinal, su falta

ocasiona raquitismo en niños y osteomalacia en adultos. Existen varios tipos de
vitaminas D. a) Vitamina D2: se forma a partir del ergosterol (esterol de origen vegetal)
que actúa como provitamina, en el organismo por irradiación de los rayos ultravioleta se
transforma en vitamina, b) Vitamina D3: se forma a partir del colesterol, que actúa
como provitamina, mediante los rayos ultravioleta se transforma en vitamina.
Hormonas esteroidales: Derivan del colesterol, dentro de ellas hay que destacar:
Hormonas producidas por la corteza de las cápsulas suprarrenales. Aquí se incluye la
aldosterona que regula el funcionamiento del riñón y el cortisol que interviene en el
metabolismo de los glúcidos.
Hormonas sexuales: producidas por los órganos sexuales. Regulan el funcionamiento
de los mismos y la aparición de los caracteres sexuales secundarios. Aquí se incluyen: la
testosterona en el hombre y los estrógenos y progesterona en las mujeres. El estradiol es
una hormona femenina que promueve la diferenciación de los caracteres sexuales
secundarios femeninos

Eicosanoides
Se llama así a los grupos de compuestos llamados prostaglandinas, leucotrienos y
tromoxanos. Los cuales derivan de de ácidos grasos esenciales de 20 carbonos que
contienen 3, 4 ó 5 dobles ligaduras: ácido eicosa-8,11,14-trienóico (ácido
dihomolinolénico); ácido eicosa-5, 8,11,14 -tetraenóico (ácido araquidónico) y Ácido
eicosa-5,8,11,14,17-pentaenóico. En humanos el ácido araquidónico es el precursor más
abundante. El ácido araquidónico se puede obtener de la dieta o se sintetiza a partir del
ácido linoléico (18:2) que está presente en los aceites vegetales. Se absorbe en el
intestino y circula unido a la albúmina. En la membrana
celular se encuentra esterificado a glicerol formando parte de los fosfolípidos.
Los eicosanoides, lo mismo que las hormonas, ejercen efectos fisiológicos importantes
actuando en concentraciones extremadamente bajas. Por ejemplo, median: la respuesta
inflamatoria, sobre todo cuando afecta a las articulaciones (artritis reumatoide), a la piel
(psoriasis) y a los ojos. Actúan en la reacción anafiláctica lenta, la producción de dolor
y fiebre.
Como reguladores de la presión sanguínea y la inducción de la coagulación de la sangre.
Además en el control de varias funciones reproductoras tales como la inducción del
parto; así como en la regulación del ciclo sueño/vigilia.

Las prostaglandinas. Tienen 20 átomos de carbono y un anillo de cinco carbonos

(ciclopentano) en la parte media de la molécula como parte de su estructura, excepto la
prostaglandina I2 (prostaciclina), que tiene un anillo adicional.
Los tromboxanos. Son moléculas heterocíclicas con un anillo formado por 5 carbonos
con 1 oxígeno (oxano). Tienen estructuras parecidas a las prostaglandinas y siguen la
misma nomenclatura. Constan de un anillo y dos colas. Son formados "in vivo" a partir
de endoperóxidos de prostaglandina.

Los leucotrienos. Son moléculas completamente lineales. Se identificaron en leucocitos

y por ello se les conoce como leucotrieno. Aunque tienen cuatro enlaces dobles,
inicialmente se pensaba que tenían 3 dobles enlaces conjugados (de allí trieno)
En los siguientes diagramas se ofrece una visión general y algunas consideraciones
acerca de la síntesis de eicosanoides: (Moreno, 2017)

METABOLISMO DE LOS LÍPIDOS

Al menos en el hombre, entre el 95 y el 98 % del total de los ácidos grasos presentes en

el plasma sanguíneo está contenido en los ésteres de ácidos grasos como los
triglicéridos, los fosfolípidos y los ésteres del colesterol. Estos esteres de ácidos grasos
se encuentran principalmente en forma de lipoproteínas plasmáticas.

a) transportar las grasas de la dieta desde la mucosa intestinal, donde son absorbidas,
hacia los tejidos del organismo animal; esta función la desempeñan los quilomicrones y
los residuos de quilomicrones

b) transportar los triglicéridos desde el hígado hacia el resto de los tejidos del cuerpo,
para almacenarse o ser oxidados para obtener energía.

c) actuar como mediador en el transporte inverso del colesterol; esta tarea recae en las
lipoproteínas de alta densidad (high density lipoproteins), o HDL, y en las LDL, que
devuelven al hígado el exceso de colesterol formado en los tejidos extrahepaticos.
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL

FUNDAMENTO

Este método para la determinación de colesterol total en suero, se basa en el uso de tres
enzimas: colesterol esterasa (CE), colesterol oxidasa (CO) y peroxidasa (POD). En
presencia de este último la mezcla de fenol y 4-aminoantipirina (4-AA) se condensan
por acción del peróxido de hidrógeno, formando una quinonaimina coloreada
proporcional a la concentración de colesterol en la muestra.

REACTIVOS

Reactivo A: solución de 4-aminofenazona 25 mmol/l.

Reactivo B: solución de fenol 55 mmol/l.

Reactivo C: suspensión conteniendo lipasa fungal 300 U/ml, colesterol oxidasa (CHOD)
3 U/ml y peroxidasa (POD) 20 U/ml. S. Standard: solución de colesterol 2 g/l.

MUESTRA : Suero o plasma

TÉCNICA
VALORES DE REFERENCIA

SIGNIFICANCIA CLINICA

El colesterol sanguíneo se presenta en forma de esterol libre y en forma esterificada. El

desequilibrio del nivel de lipoproteínas plasmáticas conduce a las
hiperlipoproteinemias, grupo de desórdenes que afectan los niveles de lípidos séricos
causantes de la enfermedad cardíaca coronaria (ECC) y la arterioesclerosis, en las que
los niveles de colesterol son importantes en su diagnóstico y clasificación.

VALORES ALTOS Y BAJOS

La ictericia de tipo obstructivo va acompañada por lo general de una tasa de colesterol

total elevada, con una fracción normal de colesterol esterificado. La diabetes, el
hipotiroidismo y ciertas enfermedades renales exhiben el mismo tipo de desequilibrio.

Valores bajos de colesterol total con tasas normales de colesterol esterificado se hallan
en el hipertiroidismo y casos de malnutrición.
REACCIÓN

CALCULOS

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL HDL

FUNDAMENTO

Esta técnica emplea un método de separación basado en la precipitación selectiva

de las lipoproteinas conteniendo apoproteinas-B (VLDL, LDL y (a)Lpa) por acción
del ácido fosfotúngstico/Cl2Mg, sedimentación del precipitado por centrifugación y
subsiguiente análisis enzimático como colesterol residual de las lipoproteinas de
alta densidad (HDL) contenidas en el sobrenadante claro

MUESTRA

Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estándar.

• El Colesterol HDL en suero o plasma es estable 7 días a 2-8ºC.

• Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro, no
interfieren.
• REACTIVOS
 • R2 Reactivo precipitante. Acido fosfotúngstico 0,63 mmol/L, cloruro de
magnesio 25 mmol/L. Estabilizantes.
• CAL Patrón de Colesterol. Colesterol 50 mg/dL (1,30 mmol/L).
• R2 Colesterol MR. Optativo. Ref: 1118005, 1118010, 1118015

REACCIÓN

TECNICA

1. Equilibrar el monoreactivo auxiliar de Colesterol MR y el patrón (50

mg/dL) del kit a temperatura ambiente
2. Pipetear en tubos rotulados:

3. Mezclar y reposar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente ó 5

minutos a 37ºC.
4. Leer la absorbancia (A) del sobrenadante y el patrón a 500 nm frente al
blanco de reactivo.
5. El color es estable como mínimo 30 minutos protegido de la luz.

SIGNIFICANCIA CLINICA

La función principal de las lipoproteínas de alta densidad o HDL (high density

lipoprotein) en el metabolismo lipídico es la captación y transporte de colesterol desde
los tejidos periféricos al hígado en un proceso conocido como transporte reverso de
colesterol (mecanismo cardioprotectivo).

PATOLOGIAS

Existen diversos estados patológicos o influencias ambientales asociados con niveles

reducidos de HDL: enfermedades hepatocelulares agudas o crónicas, hiperalimentación
intravenosa, malnutrición severa, diabetes, anemia crónica, alteraciones
mieloproliferativas, enfermedad de Tangier, analfalipoproteinemia, estrés agudo,
algunos medicamentos y el tabaco.

CALCULOS

VALORES DE REFERENCIA

DETERMINACIÓN DE LDL COLESTEROL

FUNDAMENTO

Esta técnica emplea un método de separación basado en la precipitación específica de

las lipoproteinas de baja densidad (LDL) por acción del sulfato de polivinilo en el suero,
sedimentación del precipitado por centrifugación y subsiguiente ensayo como colesterol
residual del resto de lipoproteinas (HDL + VLDL) contenidas en el sobrenadante claro.

El colesterol-LDL se calcula por diferencia, restando el colesterol del sobrenadante del

colesterol total de la muestra.

MUESTRA : Suero libre de hemólisis

Reactivo precipitante. Sulfato de polivinilo 1 g/L, polietilenglicol 170 g/L.

Estabilizantes.

CAL Patrón de Colesterol-LDL. Colesterol 50 mg/dL (1,30 mmol/L).

TECNICA
PATOLOGIA

Niveles altos de colesterol LDL están relacionados con obesidad, diabetes y nefrosis.

Hipolipidemia

La hipolipidemia consiste en concentraciones anormalmente bajas de lípidos en la

sangre (colesterol total inferior a 120 mg/dL [3,1 mmol/L] o colesterol de lipoproteínas
de baja densidad (LDL) inferior a 50 mg/dL [1,3 mmol/L]).

SIGNIFICANCIA CLINICA

Las partículas de LDLc son lipoproteínas que transportan el colesterol a las células.
Niveles elevados de colesterol LDL son un factor de riesgo de desarrollo de
enfermedades cardiovasculares, a menudo se le denomina “colesterol malo”.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

CALCULOS

VALORES DE REFERENCIA
COLESTEROL VLDL

FUNDAMENTO

El colesterol VLDL es un tipo de grasa en la sangre. Se lo considera una de las formas

de colesterol “malo”, junto con el colesterol LDL y los triglicéridos. Esto se debe a que
los niveles altos de colesterol pueden obstruir las arterias y provocar un ataque al
corazón.

SIGNIFICANCIA CLINICA

Son partículas ricas en triglicéridos sintetizadas y secretadas por el hígado. Tienen un

diámetro variable de 30 a 100 nm.

Se separan por ultracentrifugación en el rango de densidades de 0,95 a 1,006 g/ml y

electroforéticamente tienen una movilidad de pre ßo 2-globulinas.

Los triglicéridos de las VLDL son de origen endógeno, principalmente hepático, y

constituyen alrededor de la mitad de la masa de las partículas de VLDL.

En condiciones anabólicas se almacenan como triglicéridos

Muestra

• suero o plasma con heparina

VALORES DE REFERENCIA

• <30 mg/100 ml

CALCULOS
Para estimar el VLDL-C, se divide el valor de los triglicéridos entre 5 si está en mg/dL
o entre 2,2 si está en mmol/L. En la mayoría de los casos, esta fórmula proporciona una
buena estimación del VLDL-C.

TIPOS DE VLDL

• ß-VLDL
• VLDL muy rica en triglicéridos (TG)
• VLDL muy rica en colesterol

PATOLOGIA

Valores altos

Estrés
Hepatitis viral
Obesidad
linfoma no Hodgkin
hepatitis crónica activa
hepatitis tóxica
síndrome nefrótico
falla crónica renal,
hiperlipoproteinemia tipo IV, III; IIb, V.
enfermedad arterial coronaria
hepatitis tóxica

Valores bajos

❖ Hipotiroidismo
❖ a-ß-lipoproteinemia
❖ cirrosis hepática
❖ enfermedad celíaca.

TRIGLICÉRIDOS

FUNDAMENTO
El método está basado en hidrólisis enzimática de triglicéridos séricos a glicerol y
ácidos grasos libres por acción de la lipoprotein lipasa. El glicerol es fosforilado por el
ATP en presencia de glicerolquinasa para formar glicerol-3-fosfato y adenosin difosfato
(. El G-3-P es oxidado por la glicerofosfato oxidasa en dihidroxiacetona fosfato
(DHAP) y H2O2. En presencia de peroxidasa el fenol y la 4-aminoantipirina se
condensan por acción del H2O2 formándose un cromógeno rojo proporcional a la
concentración de triglicéridos presentes en la muestra.

SIGNIFICANCIA CLINICA

Son lípidos absorbidos en la dieta y también producidos en forma endógena a partir de

los carbohidratos. Su medición es importante en el diagnóstico y manejo de las
hiperlipidemias. Estas enfermedades pueden tener origen genético o ser secundarias a
otras tales como nefrosis, diabetes mellitus y disfunciones endócrinas.

REACCIÓN

MUESTRA

▪ Suero o plasma (heparina o EDTA) libre de hemólisis.

REACTIVOS

• Reactivo A: solución conteniendo buffer Good (pH 6,8), clorofenol, lipoprotein

lipasa (LPL), glicerol kinasa (GK), glicerol fosfato oxidasa (GPO), peroxidasa
(POD), adenosina trifosfato (ATP) y 4-aminofenazona (4-AF).
• Standard: solución de glicerol 2,26 mmol/l (equivale a 2 g/l de trioleína).

EQUIPOS
 ✓ Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
✓ Baño de agua a 37°C

MATERIALES

➢ Espectrofotómetro
➢ Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
➢ Cubetas espectrofotométricas.
➢ Baño de agua a 37ºC.
➢ Reloj o timer

TECNICA

1. Homogeneizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros lechosos.

2. En tres tubos o cubetas espectrofotométricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y

D (Desconocido) colocar:

3. Mezclar, incubar 5 minutos a 37o C o 20 minutos a temperatura ambiente (18-25o

C).

4. Enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm o en fotocolorímetro con filtro verde

(490- 530 nm) llevando el aparato a cero con agua destilada.

VALORES DE REFERENCIA

Deseable: < 1,50 g/l

Moderadamente elevado a elevado: 1,50 - 1,99 g/l

Elevado: 2,00 - 4,99 g/l Muy elevado: ≥ 5,00 g/l

CALCULOS

APOLIPOPROTEÍNA A

FUNDAMENTOS

La Apo A-I reacciona con el anticuerpo específico formando inmunocomplejos

insolubles. La turbidez causada por estos inmunocomplejos es proporcional a la
concentración de Apo A-I en la muestra y puede ser medida
espectrofotométricamente.

MÉTODO:

• Test inmunoturbidimétrico
• Determinación de la concentración de Apo A1 mediante medición fotométrica
de la reacción antígeno anticuerpo entre anticuerpos contra Apo A1 y la Apo A1
contenida en la muestra.

SIGNIFICANCIA CLINICA

La es el principal componente de las lipoproteínas de alta densidad (HDL). Se

sintetiza en el intestino delgado, en el hígado y en pequeña proporción en los
riñones y gonadas. La Apo A posee un rol fisiológico importante: actúa como
cofactor en la actividad de la lecitin colesterol acil transferasa y además extrae el
colesterol libre de las células.

REACTIVOS

❖ Reactivo A: buffer fosfato, pH 7,4.

❖ Reactivo B: anticuerpos policlonales anti-Apo A-I humana (cabra) en buffer
fosfato, pH 7,4

❖ Solución fisiológica

MATERIALES

❖ Espectrofotómetro
❖ Cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.
❖ Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados
❖ Tubos de Kahn o hemólisis.
❖ Cronómetro.

EQUIPO

❖ Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
❖ Baño de agua a 37°C

MUESTRA

❖ Suero

TÉCNICA (CURVA DE CALIBRACION)

1) Realizar en tubos de Kahn, las siguientes diluciones en solución fisiológica del

Apo Calibrator Turbitest AA: 1:1, 1:2, 1:4, 1:8 y 1:16, empleando solución
fisiológica como punto cero.
2) Adicionar 30 uL del Calibrador diluido
3) Adicionar 1500 uL del Reactivo A
4) Homogeneizar y leer la absorbancia de cada dilución a 340 nm (DO1) llevando a
cero con agua destilada
5) Luego agregar 300 uL del Reactivo B
6) Mezclar e incubar 15 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia a 340
nm (DO2) llevando a cero con agua destilada

PROCEDIMIENTO ( MUESTRAS)
1. Realizar una dilución 1:10 de las muestras en solución fisiológica.

2. Adicionar 30 ul de la muestra diluida

3. Adicionar 1500 ul del Reactivo A

4. Homogeneizar y leer la absorbancia de cada dilución a 340 nm (DO1) llevando a

cero con agua destilada

5. Luego agregar 300 ul del Reactivo B.

6. Mezclar e incubar 15 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia a 340

nm (DO2) llevando a cero con agua destilada.

CALCULOS

Calcular la diferencia de absorbancia (∆A = DO2 - DO1) correspondiente a cada

muestra analizada. Interpolar esta ∆A en la curva de calibración para determinar la
concentración en mg/dl (g/l) correspondiente a la muestra estudiada.

VALORES DE REFERENCIA

❖ Hombres: 111 - 157 mg/dl (1,11 - 1,57 g/l)

❖ Mujeres: 126 - 182 mg/dl (1,26 - 1,82 g/l)

APO B

Fundamento

La Apo B reacciona con el anticuerpo específico formando inmunocomplejos

insolubles. La turbidez causada por estos inmunocomplejos es proporcional a la
concentración de Apo B en la muestra y puede ser medida
espectrofotométricamente.

MÉTODO: Método inmunoturbidimétrico

SIGNIFICANCIA CLINICA
Es una de las proteínas humanas de mayor tamaño. Representa aproximadamente el
95% del total del contenido proteico de las lipoproteínas de baja densidad (LDL). Es
también el componente proteico de las lipoproteínas de muy baja densidad y de los
quilomicrones. Apo B es esencial en la formación y liberación al plasma de las
lipoproteínas e interactúa con los receptores de LDL presentes en las células
periféricas lo que resulta en la remoción y degradación de las LDL.

REACTIVOS

❖ Reactivo A: buffer fosfato, pH 7,4.

❖ Reactivo B: anticuerpos policlonales anti-Apo B humana (cabra) en buffer

fosfato, pH 7,4.

MUESTRA

❖ Suero

EQUIPO

❖ Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
❖ Baño de agua a 37°C

MATERIALES

❖ Cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.

❖ Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados
❖ Tubos de Kahn o hemólisis.
❖ Cronómetro.

PROCEDIMIENTO (CURVA DE CALIBRACION)

1. Realizar en tubos de Kahn, las siguientes diluciones en solución fisiológica del

Apo Calibrator Turbitest AA: 1:1, 1:2, 1:4, 1:8 y 1:16, empleando solución
fisiológica como punto cero.

2. Adicionar 10 uL del Calibrador diluido

3. Adicionar 1500 uL del Reactivo A

4. Homogeneizar y leer la absorbancia de cada dilución a 340 nm (DO 1) llevando a

cero con agua destilada

5. Luego agregar 300 uL del Reactivo B

6. Mezclar e incubar 15 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia a 340

nm (DO2) llevando a cero con agua destilada

MUESTRAS

1. Adicionar 10 ul de la muestra diluida

2. Adicionar 1500 ul del Reactivo A

3. Homogeneizar y leer la absorbancia de cada dilución a 340 nm (DO1) llevando a

cero con agua destilada

4. Luego agregar 300 ul del Reactivo B.

5. Mezclar e incubar 15 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia a 340

nm (DO2) llevando a cero con agua destilada.

CALCULOS

Calcular la diferencia de absorbancia (∆A = DO2 - DO1 ) correspondiente a cada

muestra analizada. Interpolar esta ∆A en la curva de calibración para determinar la
concentración en mg/dl (g/l) correspondiente a la muestra estudiada

VALORES DE REFERENCIA

Hombres: 79 - 127 mg/dl (0,79 - 1,27 g/l)

Mujeres: 70 - 122 mg/dl (0,70 - 1,22 g/l)

 Equipo HUMASTAR 100

HumaStar 100 es la primera elección de laboratorios que procesan hasta 500 mediciones
por turno. Su facil manejo supera al de la mayoría de instrumentos. El instrumento ha
sido laureado con el Premio Internacional de Diseño de Productos iF y con el Premio de
Diseño de Alemania. La carga continua de muestras y el procesamiento STAT en
cualquier momento, hace de HumaStar 100 el compañero perfecto para laboratorios de
pequeñas rutinas o emergencias. Su extraordinario bajo consumo de agua, inferior a
1L/h, le garantiza autonomía respecto a unidades de suministro de agua. (Gmcliniclab,
2018)

• Producción constante de 100 pruebas / hora

• Software optimizado para monitor con pantalla táctil
• Refrigeración de reactivos independiente del interruptor principal de
alimentación.

MODOS DE ANÁLISIS

Los modos de análisis se dan por: punto final, punto final diferencial, tiempo fijo,
cinético, factor, lineal, no lineal.

PRUEBAS PROGRAMADAS

El equipo cuenta con 54 metodologías pre programadas listas para su uso, solamente se
requiere posicionar los reactivos en el equipo y asegurarse de que los calibradores y
controles de calidad, tengan programados las metodologías
CARACTERISTICAS

• Entre sus principales características destaca el ser un economizador de agua, con

un consumo menor de 1 L/hora.
• El mismo cuenta con cubetas de reacción reutilizables, estas son lavadas por el
equipo.
• Cuenta con una capacidad para 30 posiciones de reactivos, los cuales se pueden
mantener refrigerados dentro del equipo y 60 posiciones de muestras.
• El equipo también cuenta con un sensor de nivel de líquido capacitivo y un
detector de impacto de aguja para evitar cualquier accidente mayor antes del
inicio del mismo

VENTAJAS

El HumaStar 100 es un equipo de química clínica automatizado de carga

continua y procesamiento de muestras de emergencia, excelente para
laboratorios con flujos de muestras pequeñas o medianas. Las muestras pueden
ser cargadas de forma ininterrumpida con la ventaja de que se puede utilizar,
tanto tubos primarios y copas para muestras escasas.

DESVENTAJAS

Es recomendable que el tacho de desecho no de llene en su totalidad debido a que puede

ser muy pesado para su manipulación y pueden ocurrir accidentes.
ANEXO
Bibliografía
Garcia. (2022). Obtenido de https://www.marca.com/claro-
mx/trending/coronavirus/2022/01/16/61e471b8e2704e83ae8b457a.html
Gmcliniclab. (2018). Obtenido de https://gmcliniclab.com/producto/humastar-100/
Harel, O. (2018). Reglas de Westgard.
kidshealth. (2018). Obtenido de https://kidshealth.org/es/parents/blood-test-lipid-panel.html
Moreno, S. (2017). Obtenido de https://dagus.unison.mx/smoreno/3%20L%C3%ADpidos.pdf
unicef. (2021). Obtenido de https://www.unicef.org/es/coronavirus/todo-lo-que-debes-saber-
sobre-la-variante-delta