PRÁCTICA 9

HONGOS FITOPATÓGENOS

INTRODUCCION

La mayor parte de enfermedades que se conocen sobre plantas cultivadas están provocadas por
hongos, una especie puede atacar a muchas especies de una familia de vegetales superiores, o varias
especies pueden estar afectando a un solo hospedante, haciendo mucho más difícil su diagnóstico y
control. Los diferentes grupos de hongos fitopatógenos pueden caracterizarse por los síntomas o
signos que ocasionan en algunos hospedantes.

OBJETIVOS:

o Reconocer la sintomatología de las principales enfermedades fungosas de nuestra región

o Relacionar los hongos fitopatógenos con la sintomatología o signos que ocasionen

MATERIALES DE LABORATORIO:

- Muestras herborizadas
- Muestras frescas
- Montajes permanentes
- Microscopio estereoscopio

Resultados:

El alumno deberá presentar un informe documentado (Gráficos, fotografías, etc.) en el que indique las
muestras y colocar el nombre del hospedante, el/o los síntomas que observe y el agente causal que
podrá observar al microscopio.
Hongos y pseudohongos, los medio deben de ser ricos en azúcares, (las abolladuras son blandas y se
hunden si se tocan), se hace un corte y se toma la parte que están en contacto directo con la parte
sana, se corta 1mm (4 muestras) y se pone con cloranfenicol, terramicina o oxitetraciclina, de esta
forma se aísla (se eliminan bacterias para que solo queden hongos), luego se separa con un estilete
limpio y se pone en una placa limpia, se puede ver como ocupa todo el diámetro, de esta forma se
obtiene una colonia pura.
Permite aislar de una mancha necrótica, se lava y se coloca con agua, a nivel de la raíz se anuda con
la bolsa, en una cámara simple se pone la muestra con algodon humedo (para retener la humedad), no
se recomiendo hacerlo directamente de la planta, sino hacer la cámara de humedad.

Se cortan los trocitos negros con un pcoo de área verde, se producen alos de resistencia de los hongos.

Es un pseudo hongo biotrofo (requiere un medio biótico, no puede ser artificial), se infecta por los
pelos radicales, cuando hay una gran cantidad de zooesporangios con zoosporas, una vez madura son
liberadas e infectan a la raíz, de esta forma producen la hipertrofia, en estas estructuras se encuentran
en un estado de latencia, recién al degradarse el tejido los zooesporangios producen zoosporas
haploides.
Es biotrofo, se ve como un afelpamiento sobre las hojas, este es un crecimiento uniforme, en el lado
contrario hay manchas amarillas o necrosis, la forma del hongo parece un arbolito, los “frutos” serían
los esporangios, los esporangioforos se dividen en 2, este tiene un ciclo asexual.

Puede pasar al haber un exceso de humedad en el riego, en el caso de plantas susceptibles a este
patógeno y que requieren una gran cantidad de agua se debe de controlar el riego, cada esterigma
sostienen el esporangio. (Chenopodium murale)
Se observa en la superficie de las raíces estructuras con forma de copita, tenctaculata afecta a plantas
aromáticas.

HONGOS VERDADEROS

Es del filo zygomycota, (saprófito, necrotrofo) cuenta con un esporangio bastante grande, se pueden
observar sobre los órganos carnosos en los que se presenta. Lo recomendable es coger los de color
blanco, ya que los negros se caen. El rizoide emite una especie de látigos (estoloides), de cada nodo se
emiten 3 o 4 esporangióforos y cada uno sostiene un solo esporangio, para que se de la reproducción
sexual de deben de reunir 2 cuerpos diferentes, en el sitio de unión se produce la plasmogamia, al
germinar el esporangióforo se produce una estructura con melanina, también da funciones de
protección (haploide).
Moho, en las heridas se producen las infecciones, para llegar a ese nivel de esporulación todo el
interior del limón ya está dañado, (moniliaceae) el conidióforo tiene una terminación penicilado, con
conidias en cadena (fianoconideas que vienen de las fianosporas), se ven algunos cuerpos negros (eran
Cleistotecio) son estructuras cerradas.

En tomate, raspado o corte, se ven las conidias en cadena, se produce desde la epidermis de forma
subcuticular.
En cebolla, daño a nivel de flores y frutos, produce aborto, produce manchas a nivel de hojas, las
conidias se desprenden bastante rápido al momento de hacer el montaje, por es difícil.

Produce antracnosis, es un acérvulo con conidias y conidióforos.

Presenta un ascostromo, tejido del hongo, en el interior se encuentran las ascas, estructura de
reproducción asexual, conidioforos oscuros, angostamiento a nivel de la cintura en las conidias.
Forma cancro en el tallo, afecta también a la hoja, la masa negra es una pycnidia con forma de botella,
en el interior habían conidias con 2 células (bicelulares), estas se encuentran adheridas a la hoja.

Daño a nivel del cuello del tallo, en el cuellos habían micelios, el esporodoquio es un colchón de hifas
aglutinada que perdieron su color, de este emergen conidióforos.
Las manchas se sometieron a la cámara de humedad, apículo largo y conidia uniforme.

Manchas rojizas, se sometió a cámara de humedad, conidias con filamentos (pestalotia).

Santocmonas - amarillas
Saccharomyces - blancas

Parte práctica

Prender el mechero, ver que no haya un exceso de alcohol.

PDAO agar papa + tetraoxaciclina.

Adicional pensando que era bacteriocis.

Micelio viejito.
Repique del medio de cultivo, como si fuera una cámara de humedad.
Luego se hará el montaje.
Siempre se trabaja con material flameado, se trabaja cuando se enfría, porque el hongo muere por el
calor.
Con estilete.

Para que no haya exposición directa se abre de espaldas.

Y se coloca en un cultivo nuevo, no es necesario sacar mucho. Generalmente se piden 4 puntos, pero
en este caso son 2, ya que con 4 se puede elegir y sacar un cultivo puro.

Mediante corte con bisturí.

Se corta un cuadradito (muestra del bulbo de la cebolla) y se coloca en un rincón con forma de cruz.
También serán 2.

Al final quedarán 2 y 2 de cada cultivo.

Se selló con parafilm y se rotula “Bulbo de cebolla 26/11/2021”

Montaje

1 gota de lactofenol
No agarrar la parte central de la cinta.

Se usa la cinta para sacar un poco del cultivo (que sea lo mínimo).
Para magnificar se puede echar otra gota, y colocar un cubreobjetos. Finalmente se rotula “Bulbo de
cebolla 26/11/2021”.
 PRÁCTICA 10

MORFOLOGIA DE NEMÁTODOS FITOPARÁSITOS

INTRODUCCION

Los nematodos tienen gran importancia en la agricultura por causar pérdidas cuantiosas en diversos
cultivos. Para poder observarlos se hace necesaria aplicación de técnicas especializadas de extracción
a través de tejido vegetal o de suelo. Bajo estéreo-microscopio lo primero que se observa es la
motilidad que, como norma general en nematodos fitoparásitos, puede decirse es más lento que para
los restantes grupos de nematodos de suelo, incluso algunos son prácticamente inmóviles; pero su
determinación e identificación se realiza en base a las distintas características morfológicas que
presentan los nematodos, y principalmente en lo que se refiere al sistema digestivo, como es la parte
del estoma (tipos, presencia o ausencia de estilete) y esófago (tipos), que puede distinguirse a
pequeños aumentos y sólo en algunos casos requiere de observación microscópica.
Al microscopio estereoscopio, los nematodos son delgados traslúcidos de forma ahusada. Según la
especie y la edad, la hembra varía morfológicamente del macho, pero todos tienen una característica
común que es la de presentar un estilete con el cual producen heridas en su hospedante.

OBJETIVOS:

o Reconocer las diferentes formas que presentan los nematodos fitoparásitos

o Distinguir las diferentes estructuras que conforman los cuerpos de los nematodos

MATERIALES DE LABORATORIO:
- Microscopio estereoscopio. - Estiletes
- Microscopio. - Caza nematodos
- Montajes - Porta objetos
- Muestras frescas - Agua

Resultados:
El estudiante deberá presentar un informe documentado (Gráficos, fotografías, etc.) en el que indique
las muestras y colocar el nombre del hospedante, el/o los síntomas que observe y el agente causal que
podrá observar al microscopio.
Síntomas de tcw amarillamiento, a la planta se aplicó el carborundum para la infección como planta
indicadora del tomate, el virus vive 8 horas, pero este lleva más de una semana, así que probablemente
sea otro muy parecido, el fruto concentra una gran cantidad de virus, puede que esto sea la razón por
la que el tcw siga vivo.
Para trabajar nematodos se usa una muestra de suelo y frijoles. Se deben de codificar las muestras con
el plumón
01 suelo

02 frijoles
Se necesitan 2 cuadernos para codificar
Ejemplo de codificación, hay fecha de inicio de la prueba, fecha de muestreo, y la última es de cuando
se envía el informe.

Se coloca código y todos los datos de la muestra (verde).

En el siguiente cuaderno (azul) se ponen los resultados de los géneros, grupos, familias o especies
(Sería el cuadro del ejemplo).

Método de la bandeja muestra 02

Materiales: Bandeja, contenedor (Tubo de PVC) con una malla para funcionar como tamizA, papel
higiénico (Con división, 3 cuadraditos), espátula, vasito medidot, marcador de la muestra.
Suelo + raíz, se separa la raíz y se esparce el suelo, se eliminan las piedras, ya que estas pueden
ocupar espacio de tierra donde podrían estar los nematodos, esto para aumentar las probabilidades.
Se pueden encontrar nódulos o agallas de bacterias fijadoras de nitrógeno.
Se hace el método de las tres cruces para homogeneizar la muestra, superior a inferior, esquina sup I a
la inferior D y viceversa. Luego se esparce de nuevo.
Se coge la tierra con el vaso y se echa en la bandeja, se tiene que extender en esta, luego se echa agua
entre la bandeja y el contenedor, hasta que cubra la tierra, tiene que ser agua limpia, esto por 2 días
como mínimo y máximo 5 días, ya que después de estos el agua se empieza evaporar y aparecen
hongo antagónicos.
Se pone el marcador en la jarra, luego se levanta el contenedor y se echa el agua de la bandeja a la
jarra (el agua tiene que estar limpia, si no es así se hizo mal el proceso), luego se agregan unas gotitas
de detergente para romper la tensión superficial.
En el caso de un suelo sedimentario se usa un tamiz fino (45) para que no pasen los nematodos, no se
puede usar para separar huevos, para esto se debe de usar uno de 38.
Se pone una barra de maderita para que esté inclinada y decantar.
Se toman 10 ml y a la placa, esto es algo que no se debe de hacer, ya que puede generar un conteo
erróneo de nematodos. (no hacer esto)
Marcador en la boca de la jarra, se espera unos minutos y luego se empieza a eliminar el agua hasta
antes del sedimento, y este finalmente se echa a la placa, con su marcador.

Y ya está listo. Ahora al estereoscopio.

Tapitas graduadas, las líneas marcadas ayudan para no volver a pasar por el mismo sitio.
Método de la centrífuga muestra 01.
Tubos de centrífuga, 2 tamices 500 um (para tierra) y 45 um (no pasan nemátodos), gradilla, azúcar al
34.5% para que en esta se queden los nematodos flotando, 2 valdes para procesar el suelo, espátula y
el vaso medidor.

Para detectar huevos se usa el tamiz de 38.

Se esparce la tierra, se limpian las piedras, y se hace el método de las cruces para homogeneizar.
Se toma la muestra de distintos lugares de la bandeja.
Siempre con algo que los marque, para no confundir las muestras.

La muestra del vaso se echa a un balde.

Se echa agua (200-300 ml), y se disgregan los grumos, luego se pasan por el tamiz grueso al otro
balde.

Nos quedamos con eso (lo del tamiz), lo del primer balde se elimina.
Se mueve el segundo balde y se tamiza con el fino.
Se mueve de I a D para que caigan las piedras grandes.
Quedan los nemátodos y sedimentos.
Se hace lo mismo con la muestra 2.
Se agrega el azúcar a los 2 tubos, se pasan al tubo de la centrífuga hasta la mitad y en la otra mitad se
echa el azúcar.
Se pone a 2500 rpm por un minuto.

Estereoscopio y contometro
Los tubos con sus respectivos marcadores luego de haber pasado por la centrífuga.

Los nemátodos están flotando ya que están en un medio hipotónico.

Se echa el sobrenadante, y se lava el tamiz para que no haya azúcar.

Se echa en una placa y se repite el proceso para el tubo 2. Luego se procede al reconocimiento de los
nemátodos en el laboratorio.

Estereoscopio a 40x. Modificado para que tenga un espejo en la base.

20x, se pueden ver las líneas de las tapitas marcadas.
40x
Caza Nemátodos, con una pestañita en la punta para que ahí se pegue el nemátodo, en caso de no
poder reconocer al nematodo se lleva al microscopio en un portaobjetos.
Caza nemátodos limpiando la tierra alrededor de los nemátodos.
https://docs.google.com/presentation/d/1DFldq3Pepwg9qctqm93igc0sDpTipKq2rHshrpdr5GU/edit?u
sp=sharing
Sacar las fotos de ese power point
Observados al microscopio.