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TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE LA CUENCA DEL PAPALOAPAN

BOTÁNICA SISTEMÁTICA

UNIDAD 4. Fisiología y metabolismo microbiano

PRÁCTICA N°7
Tinción de Gram

PRESENTA
Martínez Sánchez luz yareli

CARRERA
Ingeniería en Agronomía

ASESOR
M. C. JOSÉ ALFREDO GARCIDUEÑAS PAZ

SEMESTRE

GRUPO
A
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ÍNDICE

INTRODUCCIÓN ........................................................................................................ 3

OBJETIVO............................................................................................................... 3

MATERIALES .......................................................................................................... 3

METODOLOGÍA ...................................................................................................... 4

RESULTADOS ............................................................................................................ 5

DISCUSIÓN ................................................................................................................ 5

CONCLUSIÓN ............................................................................................................ 6

REFERENCIA ......................................................................................................... 6
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INTRODUCCIÓN

tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con
el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el
medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de
colorantes. Éstos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células o
para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos,
esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc.

La morfología de los microorganismos puede examinarse de dos formas: observando

microorganismos vivos sin colorear (en fresco) y observando células muertas teñidas con
colorantes.

El examen en fresco de los microorganismos permite conocer algunas de sus

características (morfología, tamaño, movimiento, etc). Sin embargo, los microorganismos
vivos son casi incoloros y no se pueden visualizar fácilmente al microscopio óptico normal
cuando se encuentran suspendidos en agua, de ahí que se utilicen colorantes para
incrementar su contraste con el entorno que los rodea y de esta forma hacerlos visibles.

Identificaremos las diferentes morfologías coloniales y de cada una haremos una tinción
de Gram, relacionando cada una de ellas con la morfología celular. Haremos el Gram a
partir de las colonias aisladas, poniendo una gota de agua destilada en el portaobjetos y
observando una pequeña muestra de la colonia.

OBJETIVO
• Observar las bacterias de E. coli en el microscopio
• Conocer cómo se realiza la tinción de gram.

MATERIALES
• Cajas Petri con la siembra de E. coli
• Mechero Fisher
• Asa bacteriológica
• Alcohol 70 %
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• Agua destilada
• Cloruro de benzalconio
• Guantes de látex
• Gorro quirúrgico
• 3 porta objetos
• 3 cubre objetos
• Microscopio
• Reactivos

METODOLOGÍA

TINCIÓN DE GRAM

Es uno de los métodos de coloración diferencial más importante para las bacterias, ya
que divide a éstas en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas, según las
diferencias estructurales en la pared o envoltura, que permiten retener o no uno de los
colorantes. La capacidad de retener este colorante es extremadamente limitada en la
naturaleza, ya que la mayoría de las células animales y vegetales son Gram negativas.

En este método de coloración se coloca en primer término un colorante violeta que

reacciona con todas las células bacterianas (tanto las Gram positivas como las
negativas), coloreándolas de azul oscuro.

1. Esterilizar el asa flameándola en el mechero hasta conseguir un rojo

incandescente, dejar enfriar
2. Flamear el porta objetos previamente lavado.
3. Tomar una porción de la muestra.
4. Tomar una pequeña muestra y esparcirlo por el porta objeto.
5. Teñir 1 minuto con azul de metileno
6. Enjuagar con agua destilada
7. Teñir 1 minuto con lugol
8. Enjuagar con agua destilada
9. Desteñir 30 segundos con acetona
10. lavar con agua
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11. teñir 1 minuto con safranina

12. enjuagar con agua destilada y esperar a que seque
13. colocar el cubre objeto
14. observar en el microscopio

RESULTADOS

Imagen 1: Gram negativo de Imagen 2: levaduras

la bacteria E. coli

DISCUSIÓN
Para observar al microscopio a 100x es conveniente hacerlo con aceite de inmersión.

Si el extendido bacteriano no se fija adecuadamente, las células bacterianas se pierden

durante el proceso de tinción que involucra varios lavados y trae como consecuencia la
ausencia de bacterias teñidas. Por el contrario, un sobrecalentamiento puede ocasionar
la aparición de artefactos y la ruptura de la morfología de las células bacterianas.
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CONCLUSIÓN
En esta práctica aprendimos las diferencias entre una bacteria Gram positiva y una Gram
negativa ya que con ayuda de la tinción se pueden observar ciertos factores que son muy
distintivos como por ejemplo: su color ya que unas se tiñen de color morado o violeta (
positivas) y otras de color rosa (negativas).

Los métodos de tinción son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaución,
ya que pueden conducir a errores. Las moléculas de colorante forman en ocasiones
precipitados o agregados que parecen estructuras celulares auténticas, pero que son
formaciones completamente artificiales inducidas por el mismo colorante. Tales
estructuras se denominan artefactos, y deben tomarse precauciones para tener la
seguridad de que no nos estamos equivocando al creer que un artefacto es una
estructura realmente existe.

REFERENCIA

Tortora GJ, Case CL, Funke Berdell R. Introducción a la Microbiología. 9na ed. Buenos
Aires: Editorial Médica Panamericana, 2007.

Koneman E, Winn W, Allen S, Janda W, Procop G, Schrenckenberger P, Woods

G. Diagnóstico Microbiológico. Texto y atlas color. 6ta ed. Buenos Aires: Editorial
Médica Panamericana, 2008.

Forbes, Bailey and Scott. Diagnóstico Microbiológico. 11º ed. Buenos Aires: Editorial
Médica Panamericana, 2004.

Brooks Geo F. Microbiología Médica de. Jawetz, Melnick y Adelberg 1º ed. México DF.
Editorial Manual Moderno 2008.

Vullo DL. Microbiología en Práctica. Manual de Técnicas de laboratorio para la

enseñanza de Microbiología básica. Buenos Aires: Editorial Atlante, 2000.