1. Porqué se usan las sales como nutrientes.

Las sales minerales son la fuente de aniones (p. ej. el Cl -) y de cationes para la célula. Los
siguientes cationes, concretamente, se necesitan en cantidades relativamente grandes: K +,
Mg++, Ca++, Fe++.

El ión potasio (K+):

Interviene en la activación de una variedad de enzimas, incluyendo las que participan en

la síntesis de proteínas.
En Gram-positivas está asociado con los ácidos teicoicos de la pared.
El ión magnesio (Mg++):

estabiliza ribosomas, membranas y ácidos nucleicos;

como cofactor en muchas reacciones, especialmente las que implican transferencia de
grupos fosfato. Por ejemplo, en las reacciones que requieren ATP, el Mg ++ puede unir la
enzima al sustrato durante el mecanismo de acción de la primera.
Participa de las clorofilas y bacterioclorofilas de bacterias fotosintéticas.
El ión calcio (Ca++):

es un cofactor de ciertas enzimas, como proteinasas.

El hierro (principalmente como ión ferroso, Fe ++) suele estar acomplejado en la
naturaleza, formando sales insolubles. Las bacterias disponen de una serie de moléculas,
denominadas sideróforos, capaces de captar ese hierro (p.ej., hidroxamatos y
enterobactina). El hierro

participa en muchas moléculas implicadas en procesos de respiración, como citocromos

y ferroproteínas no hémicas (proteínas con Fe-S);
interviene como cofactor en ciertas enzimas.

Aparte de estos iones que se requieren en cantidades relativamente grandes, las bacterias
necesitan minúsculas cantidades de otros elementos (oligoelementos), a los que también
se denomina como micronutrientes o elementos traza:

El manganeso (Mn++) es un cofactor de ciertas enzimas, y a veces puede sustituir al Mg ++.

El cobalto (Co++) se requiere casi exclusivamente para la vitamina B 12 (de hecho, si
suministramos esta vitamina al medio, la bacteria se vuelve independiente del Co ++ libre).
El zinc interviene en la estabilización de complejos enzimáticos como las ADN- y ARN-
polimerasas.
El molibdeno participa en las llamadas molibdoflavoproteínas, implicadas en la asimilación
de nitratos. Por otro lado, participa como cofactor, junto con el Fe, en el complejo
nitrogenasa de las bacterias fijadoras de N2 atmosférico.
El níquel participa en hidrogenasas, enzimas que captan o liberan H 2.

2. Por qué se esteriliza por separado la fuente de carbono y

fuente de nitrógeno. Porqué durante la práctica se tiene que
esterilizar por separado

Los nutrientes con los cuales se formulan los medios de cultivo deben estar disueltos para
que los mismos se encuentren disponibles para ser utilizados por los microorganismos. Los
medios de fermentación utilizados en la industria son casi siempre complejos y a menudo
son sólidos en suspensión, de manera tal que los cambios que se producen durante la
esterilización pueden ser importantes. Las modificaciones pueden ser beneficiosas o
perjudiciales. La naturaleza de las interacciones que tienen lugar entre los componentes de
un medio, durante la esterilización por calor, dependerá no solamente de la naturaleza de los
componentes sino también de la temperatura, duración del calentamiento, pH del medio y de
la agitación. De modo que la disponibilidad de los nutrientes puede modificarse tanto
cuantitativamente como cualitativamente debido a reacciones entre componentes, antes,
durante o después de la esterilización.

Algunos de los ejemplos son:

 Dentro de los macroelementos, los azúcares pueden descomponerse por la acción del
calor en presencia de sales inorgánicas y compuestos amínicos.

ø sales

sacarosa hidroliza

H+

 Los grupos carbonilos de los azúcares con los grupos amino de las proteínas,
aminoácidos, etc., dan productos de condensación (reacción de Maillard), los cuales
disminuyen significativamente las cantidades de carbohidratos y N amínico disponible.

azúcares reductores + -NH2 condensación

Por este motivo es necesario que los carbohidratos se esterilicen por separado de los
compuestos nitrogenados orgánicos.

 La esterilización de los HPO4= utilizados como fuente de P y buffer, debe realizarse

separada de las sales de Mg, Na, o K, ya que las sales de PO4 con Mg y Na o Mg y NH 4 al
calor poseen baja solubilidad, lo que disminuye la disponibilidad de todos los nutrientes
mencionados.
NaMgPO4

NH4MgPO4 poseen baja solubilidad

KMgPO4

 El Fe puede precipitar, y por lo tanto no estar disponible cuando el medio no es

suficientemente ácido. Para aumentar su disponibilidad se usan quelantes que lo atrapan
y lo mantienen disuelto (EDTA), o ácido cítrico.

 Los aminoácido, factores de crecimiento y vitaminas son lábiles al calor, por lo tanto se
los prepara disolviéndolos separadamente en pequeños volúmenes de agua, en soluciones
muy concentradas y luego se los esteriliza por filtración. Finalmente se los incorpora a los
medios de cultivo ya esterilizados (en general 1ml de solución por cada litro de medio) en
condiciones de asepsia.

 Si la fuente de N utilizada son sales de NH4+ se deben autoclavar a un pH menos que 7

para evitar su volatilización como NH3. Si ésta es urea debe esterilizarse por filtración ya
que a pH bajos (cercanos a 5) por la acción del calor se descompone en NH 3 y CO2, no
quedando disponible urea disuelta para ser utilizada por el microorganismo.

3. Porqué la absorbancia es menor que uno.

4. Qué pasaría si no hubiera la solución tampón

Los organismos vivos soportan muy mal las variaciones del pH, aunque tan solo se trate de
unas décimas de unidad, y por ello han desarrollado en la historia de la evolución sistemas
tampón o buffer que mantienen el pH constante, mediante mecanismos homeostáticos. Las
variaciones de pH, afectan a la estabilidad de las proteínas y, en concreto, en la actividad
catalítica de los enzimas, pues en función del pH, pueden generar cargas eléctricas que
modifiquen su actividad biológica.
Los sistemas tampón que tienden a impedir la variación del pH cuando se añaden pequeñas
cantidades de iones H+ o OH- consisten en un par ácido-base conjugada que actúan como
dador y aceptor de de protones, respectivamente.

5. Porqué el pH aumenta en el medio de fermentación.

Porque el microorganismo consume NH+3 y lo que deja es H+, además también el pH

aumenta debido al metabolito que se encuentre en mayor proporción que H+

6. Porqué se realiza o se pasa de un medio de mantención a un

medio de activación y luego a fermentación

7. De sus resultados originales, como determinó el umax

TABLA Nº 02: Crecimiento Microbiano de Pichia stipitis NRRL Y-7124.

t (horas) ABS (640 nm)

0 0.024
1.5 0.031
3.5 0.043
5.5 0.03
6.5 0.026
7.5 0.037

FIGURA 1: Curva de Crecimiento Microbiano de Picchia stipitis NRRL Y-7124, utilizando como fuente de
carbono a la xilosa.

0.05
0.05
0.04
Absorbancia (640 nm)

0.04
0.03
0.03
0.02
0.02
0.01
0.01
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Tiempo (horas)

TABLA N° 03: DATOS DEL ANÁLISIS PESO SECO

 Peso inicial Peso final X(g/30mL)
N° Muestra (g) (g)
1 0.2385 0.239 0.0005
2 0.2446 0.2452 0.0006
3 0.2401 0.2406 0.0005
4 0.2476 0.248 0.0004
PROMEDIO 0.0005

El método se basa en el aumento de la turbidez del medio al incrementar la concentración de

microorganismos, lo que puede ser detectado fácilmente por un espectrofotómetro a una densidad
óptica de 640 nm. Para esta determinación fue necesario previamente confeccionar una curva de
calibrado, lo cual, la concentración celular en el medio fue determinado por peso seco.

El peso seco promedio (g/L) en el volumen del matraz de 30 mL se realiza mediante la conversión
mostrada a continuación:

g 1000 mL
X =0.0005 x =0.5 g/ L
30 mL 1L
TABLA N° 04: Datos De La Curva De Calibrado De Biomasa

[ ] ABS (640 nm) X (g/L)

0.317 0.5
0.313 0.6
01:01
0.308 0.5
0.312 0.4
 
01:01 0.3125 0.5
01:02 0.167 0.2672
01:04 0.079 0.1264
01:08 0.042 0.0672
01:10 0.036 0.0576

FIGURA 02: Curva De Calibrado De Biomasa

 0.35

0.3 f(x) = 0.63 x + 0

R² = 1
Absorbancia (640 nm)
0.25

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
X (g/L)

Dónde:

y = 0.625x – 4*10-17

y: Absorbancia 640 nm

x : Biomasa g.L-1

R2 = 1

TABLA Nº 05: Crecimiento Microbiano de Pichia stipitis NRRL Y-7124.

ABS (640
t (horas) X (g/L)
nm)
0 0.024 0.0384
1.5 0.031 0.0496
3.5 0.043 0.0688
5.5 0.03 0.048
6.5 0.026 0.0416
7.5 0.037 0.0592

FIGURA 3: Curva de Crecimiento Microbiano de Picchia stipitis NRRL Y-7124, utilizando como fuente de
carbono a la xilosa.
 0.08
0.07
0.06
Absorbancia (640 nm) 0.05
0.04
0.03
0.02
0.01
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Tiempo (horas)

TABLA Nº 06: Linealización de la fase exponencial del Crecimiento Microbiano de Pichia stipitis
NRRL Y-7124 de la tabla Nº 05

t (horas) X (g/L) Ln (X/X0)

1.5 0.0496 0.2559
3.5 0.0688 0.5831

FIGURA 04: Linealización de la Fase Exponencial del Crecimiento Microbiano de Pichia

Stipitis NRRL Y-7124.

0.7000

0.6000
f(x) = 0.16 x + 0.01
0.5000 R² = 1
0.4000
Ln (X/X0)

0.3000

0.2000

0.1000

0.0000
1 1.5 2 2.5 3 3.5 4
tiempo (h)

Para determinar el µ max , luego de linealizar la curva de la fase exponencial se procedió a trabajar con
la ecuación que obtuvimos, y la relacionamos con la ecuación de Monod.

X
ln =μ . t
X 0 max
 La ecuación lineal es: y = 0.1636x + 0 .0105

Reemplazando las variables según las gráficas:

X
ln =0. 1636 t+0. 0105
X0

Entonces:

µ máx. = 0.1636 h-1

8. Cuáles con los parámetros y fundamentos para realizar la

curva de calibrado de biomasa
9. Por qué es importante la fase de adaptación durante el
crecimiento de m.o.

Fase lag o de adaptación durante la que los microorganismos adaptan su metabolismo a

las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de cultivo)
para iniciar la fase de crecimiento exponencial. En esta fase no hay incremento en el
número de células, pero hay gran actividad metabólica, aumento en el tamaño individual
de las células, en el contenido proteico, ADN y peso seco de las células.

10. Cuáles son sus parámetros en la cinética y porque no

creció m.o. ni se tuvo los resultados esperados.
11. Como determinó la concentración de azucares en una
muestra cuya absorbancia es de 1.25
12. Qué le hace a la muestra con sacarosa para medir sus
azúcares reductores.
13. Porqué el DNS viró de color

Este procedimiento se fundamenta en la reacción de los grupos reductores de los

azúcares con el reactivo oxidante ácido dinitrosalicílico (DNS).

El reactivo consiste en una disolución formada por los siguientes compuestos: ácido
dinitrosalicílico (ácido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzóico), que actúa como oxidante; Sal de
Rochelle (tartrato sódico-potásico), que impide la disolución de oxígeno en el reactivo y
hidróxido sódico, que aporta el medio requerido para que se produzca la reacción redox.
De esta forma, el ácido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzóico se reduce, en presencia del grupo
reductor de la glucosa, formando el ácido 3-amino-5-nitrosalicílico, mientras que el
grupo aldehído reductor se oxida, para formar un grupo carboxílico. En este método
analítico el DNS está en exceso frente a los grupos reductores y en todas las muestras se
adiciona la misma cantidad, de tal forma que mayores concentraciones de azúcares
reductores provocan una mayor coloración de la muestra. Estas diferencias de coloración
pueden determinarse por espectrofotometría visible, a la longitud de onda de máxima
absorbancia de 540 nm.

14. Cómo explica el cambio de color amarillo a color rojo en

el DNS en el laboratorio
Los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseen su grupo carbonilo (grupo
funcional) intacto, y que a través del mismo pueden reaccionar como reductores con otras
moléculas. Azúcares reductores: Los monosacáridos y muchos disacáridos, (excepto
Sacarosa). Monosacáridos: Ej Glucosa, Fructosa Disacáridos reductores Ej: Lactosa, Maltosa,
Iso-maltosa, Celobiosa, etc

DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN CELULAR DE LA MUESTRA SI SU D.O ES

1.22

SI INCIALEMNTE TENGO UNA MUESTRA DE 10 ML Y TOMO 6 ML DE ESTA

MUESTRA Y LO ENRASO A 10 ML, LUEGO TOMO 4 ML DE ESTA NUEVA
MUESTRA Y LO ENRASE A 6 ML. EN ESTA SOLUCIÓN SU ABSORBANCIA FUE
DE 1.22

ABS X
0.11 0.2
0.23 0.4
0.39 0.6
0.46 0.8
0.8 1.2

SE REQUIERE ENCONTRAR UNA SOLUCIÓN TAMPÓN [A][B] = MOL/L PARA

NEUTRALIZAR UNA SOLUCIÓN DE CLORURO DE AMONIO DE 3.5 G/L PARA
UNA VARIACIÓN DE PH=3.5. DETERMINAR EL PH FINAL SI NO HUBIERA
UNA SOLUCIÓN TAMPÓN.