TEMA 3:

ANÁLISIS DE
CITOLOGÍA
GINECOLÓGICA

0
Índice
1.- Técnicas de estudio citológico ................................................................................................. 2
1.1.- Triple toma ........................................................................................................................ 2
1.2.- Citología en medio líquido ................................................................................................ 3
2.- Técnicas de procesamiento, tinción y diagnóstico .................................................................. 3
3.- Recursos tecnológicos en citodiagnósticos .............................................................................. 4
3.1.- PCR in situ (reacción en cadena de la polimerasa) ........................................................... 4
3.2.- Inmunohistoquímica ......................................................................................................... 4
3.3.- Microscopio con lectura automatizada ............................................................................ 5
3.4.- Microscopía electrónica .................................................................................................... 5
4.- Idoneidad de la muestra y adecuación del frotis ..................................................................... 5
4.1.- Identificación. Información clínica .................................................................................... 6
4.2.- Técnica correcta: extensión, fijación y tinción .................................................................. 6
4.3.- Tipos de muestras según el grado de idoneidad .............................................................. 6
5.- Evaluación hormonal ............................................................................................................... 7
5.1.- Índices celulares de acción estrogénica: ........................................................................... 8
5.2.- Índices celulares de acción progesterónica: ..................................................................... 8
6.- Citología normal del aparato genital femenino ....................................................................... 8
6.1.- Células epiteliales.............................................................................................................. 8
6.2.- Epitelio escamoso ............................................................................................................. 9
6.3.- Epitelio plano poliestratificado ......................................................................................... 9
6.4.- Epitelio glandular del endocérvix.................................................................................... 10
6.5.- Epitelio glandular del endometrio .................................................................................. 11
7.- Ciclo menstrual normal .......................................................................................................... 12
8.- Patrones hormonales fisiológicos. Citología de las alteraciones hormonales ....................... 13
8.1.- Menopausia .................................................................................................................... 13
8.2.- Embarazo ........................................................................................................................ 14
8.3.- Posparto .......................................................................................................................... 15
9.- Artefactos contaminantes en la citología cérvico-vaginal ..................................................... 15
9.1.- Artefactos ........................................................................................................................ 15
9.2.- Contaminantes ................................................................................................................ 16

1
1.- Técnicas de estudio citológico
− Para hacer un estudio citológico debemos realizar una citología exfoliativa, que consiste
en la descamación por raspado de la superficie de un tejido.
- El estudio citológico recoge muestras de tres zonas representativas:
• Fondo de saco vaginal: parte superior de la vagina en contacto con el cuello
uterino.
• Exocérvix: porción del cuello uterino que está en contacto con la vagina.
• Endocérvix: porción del cuello uterino que se encuentra inmediatamente
después del orificio cervical externo.
- La citología cérvico-vaginal se utiliza principalmente:
• Para la detección precoz de cáncer de cuello uterino y lesiones precancerosas.
• Para una valoración hormonal.
• Diagnóstico microbiológico.
- Es importante coger una muestra adecuada y representativa del cérvix porque es donde
se desarrollan la mayor parte de las lesiones preneoplásicas.
- Actualmente, existen dos técnicas para el estudio citológico: triple toma y citología en
medio líquido.

1.1.- Triple toma

− La muestra recogida se deposita en un portaobjetos en forma de capa unicelular y se
dispone desde el extremo del portaobjetos, etiquetado con los datos de la paciente,
hasta el extremo más alejado, con el siguiente orden:
− Fondo de saco vaginal
− Exocérvix
− Endocérvix.
− Una vez extendida la muestra, debe fijarse rápidamente con un citoespray para evitar
que las células se deterioren.

2
1.2.- Citología en medio líquido
− Después de recoger la muestra cérvico-vaginal con cepillo, en lugar de extenderla
directamente sobre el portaobjetos, se introduce en un bote con líquido conservante

2.- Técnicas de procesamiento, tinción y diagnóstico

− La triple toma no tiene un procesamiento, posterior a su recogida, en el laboratorio de
anatomía patológica. En cambio, la citología en medio líquido debemos procesarla de
manera automatizada antes de teñirla.

− Los aparatos comercializados y automáticos que se utilizan para su procesamiento

constan de tres fases claves:

• Dispersión: homogeneiza aleatoriamente la población celular dentro del vial.

• Recolección celular: el programa detecta cuando los poros están bloqueados
por el material (hematíes, células escamosas, moco, etc.).
• Transferencia celular: se transfiere las células al portaobjetos, a través de una
presión aérea, en una capa fina y uniforme.

Posteriormente, debemos pasar los cristales por una solución de etanol de

96° durante 10-15 minutos, para fijar las células al portaobjeto y prepararlas
para su tinción y montaje.

El método de tinción más empleado para la citología ginecológica es el

Papanicolaou, que utiliza hematoxilina de Harris, que tiñe de azul oscuro los
núcleos; y Orange G y EA50, que son colorantes citoplasmáticos que los tiñe
de verde a naranja.

3
 − Una vez preparados los portaobjetos, se realiza una lectura del frotis citológico a través
del microscopio:

• Primero, ajustamos el microscopio (el enfoque, la corrección de las dioptrías y

una posición ergonómica).

• revisamos la información clínica básica (nombre y apellido, edad, fecha de la

última regla (FUR), fecha de la toma, cirugías e informes previos), los datos
específicos (síntomas relacionados) y las sospechas diagnósticas en la hoja de
petición.

• Después, se coloca la muestra y se sigue el sistema de lectura, que consiste en

el desplazamiento en sentido vertical por todo el portaobjetos cubriendo la
totalidad del campo, que nos permite ver el cristal en su totalidad. Para ello,
utilizaremos el objetivo por excelencia en el screening citológico de 10x,
cambiando progresivamente a 20x o 40x cuando queramos matizar detalles o
zonas que requieran una observación detenida.

• Cualquier hallazgo que tenga interés citopatológico deberá marcarse, con

rotulador permanente, para poder localizarlo con facilidad.

3.- Recursos tecnológicos en citodiagnósticos

3.1.- PCR in situ (reacción en cadena de la polimerasa)
− Es una técnica de biología molecular que se basa en la
detección específica de secuencias de ADN del VPH en
el material que se va a estudiar.

− Su fundamento consiste en multiplicar el número de

copias de un segmento de ADN viral, proceso que se
conoce como amplificación; y posteriormente, la
detección mediante hibridación con sondas específicas
para cada uno de los tipos de VPH que se desee
identificar.

3.2.- Inmunohistoquímica
− Es un procedimiento que se basa en la utilización de un
anticuerpo específico, previamente marcado con una
enzima, para formar un complejo con el anticuerpo.

− En el caso del virus del papiloma humano, se utiliza la

inmunodetección de p16 (proteína involucrada en la
regulación de la apoptosis), que está presente de forma
exclusiva en las infecciones por virus del papiloma
humano de alto riesgo.

− En definitiva, la determinación de p16 nos informa de la

interacción del VPH con las proteínas reguladoras del ciclo celular.

4
3.3.- Microscopio con lectura automatizada
− La lectura automatizada en citología ginecológica requiere de citología en monocapa o
citología líquida y un microscopio específico. El microscopio realiza un precribaje que
consiste en realizar un screening del portaobjeto, señalando 22 campos. El método se
basa en los cambios tintoriales que experimentan las células anormales al aumentar el
núcleo y al contener mayor ADN que las células normales.

− Posteriormente, el citotécnico observa y valora no solamente la célula señalada, sino

todo el campo. El sistema no realiza interpretación automática alguna de las células que
detecta y solo sirve como soporte para los citotécnicos que, de esta forma, se liberan de
una parte del trabajo y aumentan la eficacia de su diagnóstico final.

3.4.- Microscopía electrónica

− La microscopia electrónica permite detectar las
partículas virales en el interior de las células. Es un
método de gran especificidad, pero su sensibilidad
no supera el 50 %, por lo que su uso no se ha
extendido.

− Además, es un método costoso, con un elevado

tiempo de procesamiento y no permite la
determinación de genotipo específico

4.- Idoneidad de la muestra y adecuación del frotis

Hay que comprobar ciertos criterios antes valorar la calidad de la muestra:

- Identificación. Información clínica

- Técnica correcta: extensión, fijación y tinción
- Tipos de muestras según el grado de idoneidad

5
4.1.- Identificación. Información clínica
− Hay que comprobar que coinciden los datos de la paciente de la muestra ginecológica
con la hoja de solicitud de estudio.

− También hay que observar que la hoja de solicitud de estudio presenta la información
clínica necesaria: edad de la paciente, FUR, tipo menstrual, tratamiento hormonal,
presencia de DIU, intervenciones quirúrgicas previas, etc.

− En definitiva; tener una buena anamnesis y que ésta coincida con la muestra enviada y
las pruebas solicitadas.

4.2.- Técnica correcta: extensión, fijación y tinción

− La muestra debe ser técnicamente adecuada, con una extensión, tinción y fijación
correcta.

− En el frotis citológico deben observarse células escamosas y células endocervicales o de

transformación.

4.3.- Tipos de muestras según el grado de idoneidad

Considerando estos apartados, la muestra puede clasificarse en:

- Satisfactoria para la evaluación.

• Cumple los tres apartados anteriores.
• Presencia de células escamosas que
ocupan al menos el 10 % de la superficie
del frotis.
• Debemos indicar presencia o no de
células endocervicales/zona de
transformación.
- Satisfactoria para la evaluación, pero limitada. Son frotis en los que se puede hacer
un diagnóstico, pero está limitado por:
• Falta de datos clínicos.
• Inadecuado procesamiento técnico (débil tinción, mala fijación, depósitos del
reactivo, etc.).

6
 • Muestras insuficientes.
• Características de la muestra: moderada
hemorragia, citólisis, inflamación, contaminante,
etc.

- Insatisfactoria para la evaluación. Son frotis no aptos para el diagnóstico por:

• Falta de identificación de la paciente en la muestra o en la hoja de solicitud del
estudio.
• Muestra dañada que impide el procesamiento.
• Celularidad escasa: menos del 10 % de la superfcie del frotis.
• Dificultad para interpretar más del 75 % de las células epiteliales cubiertas por
excesiva sangre, inflamación, fondo sucio, etc.

5.- Evaluación hormonal

− Se basa en la influencia de las hormonas esteroides (estrógeno y progesterona) sobre el
epitelio escamoso de la vagina y, por lo tanto, solo se hará cuando la muestra contenga
toma vaginal y una adecuada información clínica de la paciente (edad, FUR, duración del
ciclo menstrual, tipo menstrual, si existe embarazo o menopausia y tratamiento
hormonal).

7
 − Aunque la recomendación actual es no hacer evaluación hormonal dada la enorme
cantidad de variables que influyen en la maduración del epitelio cervical, las limitaciones
dependientes de la toma de la muestra (no siempre se realiza adecuadamente la toma
del tercio superior de las paredes laterales de la vagina) y, con frecuencia, el escaso rigor
con que se realiza el cálculo de los índices. Todo ello contribuye a que la evaluación
hormonal citológica sea poco precisa y haya ido perdiendo vigencia en relación con las
dosifcaciones hormonales en sangre, cuyos métodos de cuantificación son mucho más
fiables.

5.1.- Índices celulares de acción estrogénica:

− Índice cariopicnótico: porcentaje de células poligonales,
de núcleo picnótico, sin tener en cuenta la coloración del
citoplasma.
− Índice de eosinofilia: porcentaje de células eosinófilas
sin tener en cuenta el aspecto del núcleo.
− Índice de maduración: porcentaje de células profundas
(basales y parabasales), intermedias y superficiales.

5.2.- Índices celulares de acción progesterónica:

− Índice de plegamiento: relación entre las células maduras dobladas y las extendidas, sin
tener en cuenta la coloración citoplasmática y el aspecto del núcleo.
− Índice de agrupamiento: relación de grupos de cuatro o más células con respecto a las
aisladas. Siempre es paralelo al índice de plegamiento e indica estímulo progesterónico.
• En general, cuando en un frotis hay un alto índice cariopicnótico y eosinofilia, se
acompaña de un bajo índice de plegadura y agrupamiento, y viceversa.
• La evaluación hormonal puede ser:
- Patrón hormonal valorable compatible con edad y datos clínicos.
- Patrón hormonal valorable incompatible con edad y datos clínicos.
- Patrón hormonal no valorable: porque el material es insuficiente, porque no pude
observarse correctamente las células epiteliales para su valoración (debido a intensa
inflamación, hemorragia, etc.), o porque las células tienen cambios celulares
correspondientes a procesos benignos o atípicos que las modifican.

6.- Citología normal del aparato genital femenino

6.1.- Células epiteliales
En el aparato genital femenino se puede encontrar dos tipos
de epitelios:

− Epitelio plano poliestratificado no queratinizado o

escamoso: vulva, vagina y exocérvix.
− Epitelio cilíndrico simple o glandular: endocérvix y
endometrio.

8
De ellos, los que sufren cambios durante el ciclo menstrual son el epitelio escamoso vaginal y
del exocérvix, y el epitelio glandular del endometrio.

6.2.- Epitelio escamoso

Tiene como funciones la protección mecánica
contra agresiones, por la estratificación; y la
protección biológica, por el glucógeno y bacilos
de Döderlein, produciendo la acidez necesaria
para prevenir infecciones.

6.3.- Epitelio plano poliestratificado

Formado por:

− Capa basal. Es la más profunda y descansa sobre una

membrana basal que se separa del estroma. Formada
por células basales, las células más pequeñas e
inmaduras de la vagina, con núcleos grandes y
citoplasmas escasos y cianófilos. La relación núcleo
citoplasma es de 1/1. Se observa en casos de intensas
atrofias epiteliales por la escasa acción estrogénica
(niñas, pospartos y menopausia).
− Capa espinosa profunda. Formada por varias hileras
de células parabasales redondas u ovales, con núcleos
algo menos voluminosos que el de las células basales
y citoplasmas cianófilos y algo más aumentados. La
relación núcleo citoplasma es de 1/3.
− Capa espinosa superficial. Formada por varias hileras
de células intermedias, frecuentemente ricas en
glucógeno en su citoplasma.
Son las células más constantes y numerosas en los
frotis vaginales y se presentan como células
poligonales, con núcleos más pequeños y citoplasmas
grandes, cianófilos y bordes plegados. La relación
núcleo citoplasma es de 1/5. Es frecuente
relacionarlas con la presencia de los bacilos de
Döderlein.
- Capa córnea o superficial. Formada por varias hileras
de células superficiales completamente maduras por
el efecto estrogénico. Tienen una forma poligonal,
con citoplasmas amplios y eosinófilos y núcleos
pequeños y picnóticos. La relación núcleo citoplasma
es de 1/7. Se observan en la fase ovulatoria del ciclo
menstrual normal.

9
6.4.- Epitelio glandular del endocérvix
− Las funciones del epitelio se deben a la secreción de
moco que protege la cavidad uterina y facilita el ascenso
de espermatozoides.

− Las células endocervicales tienen forma cilíndrica, con

núcleo excéntrico y citoplasma claros microvacuolados
por su acción secretora de moco. Aparecen aisladas o en
grupos que se disponen en:

• Empalizada: se observan monohileras de células

cilíndricas alargadas con núcleos basales.

10
 • Panal: grupos aplanados y cohesivos con células de forma redondeada, núcleos
esféricos y céntricos y con escaso ribete citoplasmático.

6.5.- Epitelio glandular del endometrio

Las células endometriales aparecen normalmente
durante los 12 primeros días del ciclo y en pacientes con
DIU. Cuando aparecen después del día 12 y en mujeres
menopáusicas se considera como anormal y puede
indicar una patología endometrial.

Son células cúbicas, con una elevada relación

núcleo/citoplasma, núcleos redondos, céntricos y con
una cromatina finamente granular.

Se disponen en pequeñas placas de células

hipercromáticas formando la típica imagen en “rueda de
carro”.

11
7.- Ciclo menstrual normal
Es el proceso para desarrollar los óvulos, produciendo unos cambios dirigidos a un posible
embarazo. El inicio del ciclo se define como el primer día de la menstruación y el fin del ciclo es
el día anterior al inicio de la siguiente menstruación. La duración media del ciclo es de 28 días,
aunque puede ser más largo o más corto

- Fase menstrual (días 1 al 6). Fase en la que se desprende el endometrio junto a una
pequeña cantidad de sangre que da lugar a frotis citológicos con un fondo sucio
hemorrágico, con células endometriales aisladas o en grupos, y con predominio de
células intermedias.

- Fase folicular o proliferativa (días 6 al 13). Desde el final de la menstruación hasta la

ovulación. En ella, el ovario produce estrógenos, el óvulo madura y el endometrio se
engrosa.

- Fase ovulatoria o estrogénica (días 13, 14 y 15). En ella, el óvulo finaliza su maduración
por el aumento de estrógenos y se suprime la producción de hormona luteinizante.
Predominio de células superficiales eosinófilas, aisladas, bien extendidas y con bordes
bien definidos en un fondo limpio.

− Fase progesterónica o luteínica (días 15 al 28). Si no hay fecundación del óvulo, este se
desintegra y se expulsa por el sangrado vaginal de la siguiente menstruación,
comenzando así un nuevo ciclo.

12
8.- Patrones hormonales fisiológicos. Citología de las alteraciones
hormonales
− Recién nacida

El epitelio vaginal de la recién nacida es similar al de la embarazada, debido al paso de las

hormonas maternas a través de la placenta.

- Infancia

Se inicia cuando pierde el influjo hormonal de la madre, que da lugar a una escasa producción
de hormonas y hace que el epitelio vaginal sea atrófico (similar al de mujeres menopáusicas).

- Pubertad

Hay un aumento de los estrógenos, que produce una maduración progresiva del epitelio vaginal;
disminuyen las células profundas y aumentan las células intermedias y después, las superficiales,
hasta el comienzo de los ciclos menstruales.

8.1.- Menopausia
− Este periodo se inicia con el cese de la actividad cíclica del ovario y se manifiesta
clínicamente por la ausencia de la menstruación.

− Si hay duda en el diagnóstico se debe realizar un test de proliferación, que consiste en

administrar estrógenos a la paciente para que madure el epitelio y así realizar una nueva
toma cérvico-vaginal (con predominio de células superficiales en un fondo limpio),
donde se evalúa si las atipias han desaparecido o persisten, existiendo una lesión.

− Debido a la disminución del espesor del epitelio (por la disminución de la maduración)

los procesos inflamatorios son muy frecuentes en este tipo de frotis y se denomina
vaginitis atrófica.

− Puede no haber atrofia nunca, pero un aumento considerable del efecto estrogénico en
los frotis tiene una importancia en el carcinoma de mama y endometrio.

13
8.2.- Embarazo
Durante el embarazo normal se observa una disminución progresiva de las células superficiales
y un aumento de la descamación de las células intermedias debido a la gran cantidad de
progesterona.

A partir del tercer mes de embarazo se instaura un frotis luteínico, con células intermedias
agrupadas y plegadas, que frecuentemente contiene en su interior glucógeno, denominadas
células naviculares (con aspecto en barca).

Existe una serie de signos de mal pronóstico de amenaza de aborto:

- Aumento de la maduración del epitelio, observándose células superficiales eosinófilas

(inminencia de aborto).
- Aparición de células profundas (muerte fetal).
- Presencia de células endometriales (aborto
inevitable).
- Gran cantidad de escamas anucleadas del
epitelio de revestimiento del feto (rotura de la
bolsa amniótica).

14
8.3.- Posparto
Se caracteriza por la ausencia de actividad
estrogénica y un frotis atrófico (células basales y
parabasales) durante 5-6 semanas en mujeres
lactantes.

Aproximadamente, hasta los 6 meses después

del parto no se recupera el aspecto normal de la
citología vaginal, y si un año después del parto el
frotis continúa siendo atrófico, se debe estudiar
para detectar alteraciones hormonales.

9.- Artefactos contaminantes en la citología cérvico-vaginal

9.1.- Artefactos
Se producen alteraciones en la morfología normal del frotis ocasionadas durante su procesado
(extensión, fijación, tinción y montaje), dando lugar a imágenes no habituales.

- Extensión:
• Demora en realizar la extensión sobre el porta: las células se desecan y sufren
cambios degenerativos (destrucción nuclear).
• Extensión gruesa: aparecen grumos, aplastamiento celular y los núcleos
adquieren una escasa coloración basófila.
- Fijación:
• Menos de 15 cm de distancia del espray al porta: el gas deposita una resina
encima de las células y el frotis adquiere un aspecto reticular (manchas de color
marrón).
• Insuficiente: se alternan áreas bien conservadas con otras que presentan células
pálidas con pseudoeosinofilia, mal definidas y escasa nitidez.

15
 - Tinción:
• Mala conservación de los colorantes: si no están limpios, filtrados o renovados
se produce un precipitado. El más frecuente aparece con la hematoxilina,
apareciendo acumulaciones de material granular basófilo.
• Sobretinción: se tiñen intensamente las células y hace imposible o dificulta la
observación de las características morfológicas de las células. Se soluciona con
tiempos de tinción más cortos.
- Montaje:
• Burbujas de aire: aparecen sobre todo en extensiones gruesas
• Gotas líquidas: se producen cuando el xilol entra en contacto con agua.
• Polvo dorado: partículas de color amarillo, marrón o negro sobre las células, que
simulan alteraciones del núcleo o del citoplasma. Es debido a la desecación del
extendido antes de aplicar el medio de montaje.

9.2.- Contaminantes
Son las partículas y organismos ajenos a la población celular y microbiota específica del frotis, la
mayoría de origen ambiental.

- Elementos seminales: entre las 24 y 48 horas antes de realizar la toma citológica no se

debe mantener relaciones sexuales. Podemos encontrar:
• Espermatozoides: suelen aparecen en el moco
endocervical y se caracterizan por una cabeza
ovoidea de pequeño tamaño (con una parte anterior
basófila y otra posterior más clara) y flagelo. Cuando
pierden el flagelo hay que diferenciarlos de los
hongos.
• Células de las vesículas seminales: parecidos a los
histiocitos, de forma ovoidea, núcleos excéntricos y
citoplasmas con gránulos pardos.

16
- Contaminantes vaginales: tampoco deben utilizarse las 24-
48 horas antes de la toma y los más frecuentes son cremas
terapéuticas y lubricantes, óvulos y espermicidas. Pueden
dejar residuos en los extendidos en forma de acúmulos
irregulares basófilos que pueden dificultar la valoración de
la muestra.

- Polvo de talco y almidón: procedente de los guantes

quirúrgicos.

El primero, son estructuras poligonales refringentes con un punto central oscuro, y en

el segundo, tienen una disposición amorfa y color azul-violeta.

- Células vegetales: forma geométrica cuadrangular o rectangular en las que destacan la

doble cubierta y los depósitos pigmentados en su interior.

- Polen: generalmente son redondos, con una gruesa cápsula refringente y una porción
central de color rojo-anaranjada granular y brillante, denominado imagen de “sol
naciente”.

- Parásitos: son poco frecuentes, pero el más habitual son los huevos de oxiuros. Suelen
aparecer en pacientes que tienen este gusano en el aparato digestivo. Son estructuras
ovoideas con cápsula refringente y coloración eosinófila parda.

- Hongos: suelen contaminar los frotis cuando estos quedan expuestos al medio
ambiente. Entre ellos destacan la cándida y el aspergillus (aspecto arborescente). Las
cándidas se diferencian de las micosis patógenas por formar agrupaciones locales y
porque no causan alteraciones celulares.

- Cocos: se disponen de forma peculiar de cuatro en cuatro, denominándose tetrágenos.

17
18