Referencias

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• El comportamiento ácido base de los aminoácidos. (2014). https://www.quimitube.com/el-
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• Humaní, C. Á. (2010). Electroforesis. https://es.slideshare.net/angelito290184/electroforesis
9. Investigar la estructura química y valores
de pka de los prolina, ácido glutámico y
arginina.
o Prolina (C₅H₉NO₂); pKa1=2.0, pKa2=10.6
o Ácido glutámico (C5H9NO4); pKa1=2.1, pKa2=9.5
1. ¿Qué es la diálisis y cuál es su fundamento?
La diálisis es una forma de filtración molecular. Es un proceso que
separa moléculas de acuerdo con su tamaño, mediante el empleo
de membranas semipermeables que contienen poros de
dimensiones inferiores a las macromoleculares. Estos poros
permiten que moléculas pequeñas, como las de disolventes, sales y
metabolitos pequeños, se difundan a través de la membrana pero
bloqueen el tránsito de moléculas mayores.
Se emplea rutinariamente para cambiar el disolvente en el que se
encuentran disueltas las macromoléculas. Una disolución
macromolecular se introduce en el saco de diálisis, que se sumerge
en un volumen relativamente grande de disolvente nuevo. Las
moléculas pequeñas pasan a través de la membrana al fluido
externo hasta que se alcanza el equilibrio, las macromoléculas
permanecerán en el interior de saco de diálisis. El proceso puede
repetirse varias veces a fin de sustituir completamente un sistema
disolvente por otro.

8. ¿De qué elementos consta una cámara de electroforesis? ¿Qué
carga tienen el ánodo y el cátodo?
Se necesita una cámara de electroforesis, un peine para pocillos, gel, un
transiluminador, una fuente de poder, el buffer de corrimiento, un marcador
de peso molecular y un buffer de carga.
En las cámaras de electroforesis vertical el polo positivo se encuentra en la
parte inferior de la cámara y en las horizontales, en uno de los extremos. En
ambos tipos de cámaras el polo positivo se identifica con color rojo y el
negativo con negro.
En las cámaras de electroforesis vertical el corrimiento de la muestra sigue la
gravedad, ya que el polo positivo se encuentra en la parte inferior de la
cámara. En la electroforesis horizontal debe cuidarse que el ánodo se
coloque hacia el extremo del gel donde corren las muestras, de lo contrario
las muestras se saldrán del gel.
El cátodo tiene carga negativa, y el ánodo carga positiva.
7. Investigar el comportamiento ácido-base de los aminoácidos
Un aminoácido, como su propio nombre indica, no es más es
un compuesto químico que presenta un grupo amino, -NH2, y un
grupo ácido carboxílico (o también grupo carboxilo o grupo carboxi), -
COOH.
el grupo amino de un aminoácido presenta un comportamiento básico,
ya que se puede protonar para dar -NH3+, o que un grupo carboxilo, -
COOH, presenta un comportamiento ácido, ya que se puede
o Arginina (C6H14N4O2); pKa1=1.8, pKa2=9.0
2. ¿Qué es la amilasa salival, que reacción cataliza y cuáles son sus
condiciones óptimas de actividad? ¿Qué cofactores y/o activadores
requiere?
La α-amilasa salival humana (AASH) es la proteína de la saliva que se encuentra en
mayor concentración y posee actividad enzimática. Desempeña un papel importante
en la colonización y metabolismo de las bacterias que conducen a la formación de la
placa.
En general, las amilasas son proteínas con múltiples dominios que muestran baja
identidad global en las secuencias. El motivo común en ellas es el segmento de ocho
hélices (β/α), que es el que contiene el sitio activo (o núcleo catalítico).
La AASH tiene múltiples funciones biológicas: como enzima cumple un papel
importante en la digestión inicial de almidón, el glucógeno y otros polisacáridos,
porque cataliza la hidrólisis de los enlaces α-1,4-glucosídicos, lo cual resulta en la
configuración α-anómerica de los oligosacáridos.
La complejidad de las condiciones de reacción ha llevado a un estudio profundo de la
estructura de las α-amilasas, mostrando evidentemente que su actividad es afectada
por las variaciones más simples en la estructura, como el cambio de algún
aminoácido en la secuencia general o de igual forma el cambio de los cofactores que
son tan importantes como los cambios en la parte proteica.

Diálisis y
desprotonar para dar -COO–. Es decir, de forma muy general,
podemos escribir, para cada uno de los grupos por separado en
disolución acuosa: 3. Investigar el fundamento de la reacción del Lugol
Comportamiento básico del grupo amino de un aminoácido: R-
con el almidón.
NH2 + H2O → R-NH3+ + OH–

Comportamiento ácido del grupo carboxílico de un
aminoácido: R-COOH +H2O→ R-COO– +H3O+
6. ¿Qué es el pI y cómo se calcula?
El punto isoeléctrico (pI) o pH isoeléctrico (pHI) es aquel pH para
el cual la molécula tiene carga neta cero. Es decir, puede tener
grupos cargados (ionizados), pero la suma de todas las cargas
positivas iguala a la de las negativas.
El pI es una propiedad constante de cada molécula. Depende de
su estructura química, de qué grupos ionizables posea.
El pH es una propiedad del medio, de la disolución. El pH lo
fijamos experimentalmente, no es el resultado de la ionización de
las biomoléculas de la muestra
Cómo se calcula
Lo primero es averiguar los valores de pKa de los grupos ionizables
que tenga la molécula.
A continuación, debemos ordenar los grupos ionizables de menor a
mayor pKa. Ese sería el orden en que se desprotonarían si
hiciéramos una titulación añadiendo base. Para los pH extremos y
los intermedios, razonamos cuál es la carga de cada grupo
ionizable. Sumamos para obtener la carga neta total del
aminoácido en cada condición de pH. El pI será siempre el valor
medio entre dos valores de pKa, aquellos que flanqueen la carga
neta cero.
Se colocan los electrodos en ambos brazos del dispositivo, entre
los que se crea un campo eléctrico, provocando que las
moléculas de la muestra cargadas emigren hacia los electrodos
de polaridad opuesta.
• Electroforesis capilar
Constituye una alternativa electroforética de creciente
implantación en los laboratorios clínicos.
Esta técnica permite obtener resultados en un corto tiempo, una
alta eficiencia de separación y una alta sensibilidad con un
mínimo consumo de muestra. La separación se basa en las
diferentes movilidades electroforéticas adquiridas por los analitos
dentro del capilar al aplicar un campo eléctrico.
electroforesis
5. Indica los principales tipos de electroforesis
y en qué consisten.
▪ Electroforesis de zona
La disolución a tratar se aplica como una mancha o
una banda, y las partículas migran a través de un
disolvente.
Para revelar las proteínas separadas por
electroforesis, el soporte se trata con colorantes. Las
bandas de proteínas adsorben el colorante mas
intensamente que el soporte, de forma que se puede
eluir el exceso de colorante del soporte mientras que
las proteínas quedan teñidas con el colorante. Se
mide densitométricamente, integrando las áreas
correspondientes a cada fracción proteica y
calculando el porcentaje de cada fracción sobre el
total de proteínas. La sensibilidad analítica alcanzada
varía en función del colorante empleado.
Tipos de soportes:
Papel, acetato de celulosa, gel de agarosa, gel de
poliacrilamida (PAGE), SDS-PAGE.
• Electroforesis de frente móvil o libre
Las partículas se mueven de forma libre en el medio
en el que se encuentran dispersas.
Las sustancias a preparar se introducen en un tubo
con forma de U, disueltas en un tampón de pH y
fuerza iónica adecuados.
La prueba del yodo, es la reacción entre el yodo (presente en
el reactivo lugol) y el almidón, que nos permite detectar la
presencia de almidón en algunos alimentos. Esta reacción es
el resultado de la formación de cadenas de poliyoduro
(generalmente triyoduro, I3–) que se enlazan con el almidón
en las hélices del polímero. En concreto, es la amilosa del
almidón la que se une a las moléculas de yodo, que se
visualiza con un color azul oscuro (púrpura) a veces
prácticamente negro. La amilopectina no reacciona apenas
con el yodo. No es por tanto, una verdadera reacción
química, sino que se forma un “compuesto de inclusión” que
modifica las propiedades físicas de esta molécula,
apareciendo la coloración azul violeta.
4. ¿Qué es la electroforesis y cuál es su fundamento?
¿Qué influencia tiene el paso de la corriente (voltaje e
intensidad), el amortiguador, la muestra y medio de
soporte sobre el método de electroforesis?
La electroforesis es una técnica para separación de biomoléculas
según su movilidad y naturaleza (generalmente ácidos nucleicos
o proteínas) en un campo eléctrico sobre una matriz porosa,
Los ácidos nucleicos son atraídos hacia el polo positivo o
ánodo, debido a configuración que deja expuestos a los grupos
cuya composición depende de la biomolécula a analizar. Para la
fosfato, particularmente a los átomos de oxígeno. Por tal
separación de ácidos nucleicos se utilizan matrices de agarosa y
motivo en la matriz electroforética la muestra se coloca
para la separación de proteínas se utilizan matrices de
proximal al polo negativo o cátodo. Como regla empírica,
poliacrilamida.
utilizamos mayores voltajes cuando deseamos separar
El principio de la electroforesis consiste en la migración
moléculas grandes y menores voltajes para moléculas de
proporcional de las moléculas a través de un gel u otro tipo de
tamaño pequeño.
matriz porosa, según su peso molecular o tamaño; movimiento
Los amortiguadores deben reunir varias características, entre
generado por el campo eléctrico. En una electroforesis, los ácidos
las que se incluyen: a) adecuada conductividad, b) estables a
nucleicos migrarán hacia el polo positivo, es decir, el ánodo. En
diferentes temperaturas, c) pH neutro que facilite el arrastre de
el caso de las proteínas, que suelen ser de carga neutra, se
las moléculas sin desnaturalizarlas y d) capacidad de castrar
realiza pretratamiento con detergentes, como el dodecilsulfato de
iones magnesio y calcio, los cuales pueden ser cofactores para
sodio (SDS), que les confiere carga negativa; con ello se
la acción de las exonucleasas.
homogeneizan las proteínas de la muestra y todas migrarán
La matriz para la electroforesis se elabora con un polímero con
hacia el polo positivo; sólo se separarán por tamaño.
las siguientes características: 1) no debe modificar a las
moléculas de las muestras, 2) permita un eficiente paso de la
corriente, 3) se pueda regular el tamaño del poro para
favorecer el paso de las moléculas de acuerdo a su tamaño y 4)
debe ser de fácil preparación y manipulación.