Punto 5

Procesamiento
Post-Transcripcional

1. Concepto de Procesamiento Post-Transcripcional​: Los precursores de los tres

tipos de ARN formados en el nucleo no pueden desempeñar su funcion directamente
sino que han de convertirse antes en ARN maduro, funcional en un proceso llamado
Modificacion o Procesamiento post-transripcional o simplemente maduracion del
ARN. Esta tiene lugar en el nucleo y solo cuando se ha completado pueden las
moleculas de ARN transportarse al citoplasma donde ejerceran su funcion. En
resumen decimos que el procesamiento post-transcripcional es un proceso que consta
de varias reacciones (Modificacion covalente de nucleotidos, adicion de nucleotidos
a los extremos, escincion de nucleotidos de los extremos, division de la molecula en
varios fragmentos y proceso de ayuste, eliminacion o corte de intrones y empalme de
exones) con el fin ultimo de completar o madurar al ARN para que este sea util y
eficaz en su actividad.

2. Importancia​: Se trata de una etapa crucial para obtener las formas maduras y
funcionales tanto en los procariotas como en los eucariotas. Como se vera, la
amduracion confiere estabilidad al ARN basicamente por una mayor resistencia ante
las nucleasas y plegamientos compactos. De igual forma es importante es proceso
pues fomenta el reconocimiento de los mismos por otros componentes celulares
como los ribosomas quienes mejoran su funcionalidad de traduccion.

TIPOS Y DESCRIPCIÓN DE LOS TRES MECANISMOS DE MODIFICACIÓN DE ARN

Procesamiento del ARN mensajero (ARNm)

La maduración de ARNm se describe en tres modificaciones, las cuales pueden ser

simultáneas y ocurren dentro del núcleo
● Modificación del extremo 5’: Se lleva a cabo en el extremo libre 5-PPP del ARNm,
comienza muy pronto luego de la transcripcion, se trata de una modificacion
covalente que implica la accion de tres enzimas (fosfatasa, guaniltransferasa y
metilasas) quienes conducen la incorporacion singular de un nucleotido protector
sobre el NTP (ATP) en posicion 5 terminal del ARN quien actuo como cebador en la
transcripcion.

✓ Formacion de la caperuza o casquete 5’: Se lleva a cabo en dos etapas,

una desfosforilacion previa y una guanililacion a costa de GTP. El producto
de ambas reacciones se conoce como caperuza de guanina o casquete 5. no
se encuentra en ningun otro nucleotido ni acido nucleico. Aqui hay una union
de dos acidos nucleosidos a traves de un enlace trifosfato; y donde una
guanosina se une al lado opuesto del resto de la cadena polinucleotida
(enlace TriP entre dos posiciones 5) ESta caperuza ejerce efecto protector
frente a exonucleasas (actuan en enlaces 3-5fosfodiestres), marca el
preARNm para su empleo posterior como sustrato y sirve como punto de
union entre el ARNm y los ribosomas para iniciar la sintsis proteica.

✓ Metilacion de la caperuza 5: LOs tres primeros nucleotidos de la estructora

5-guanosina-trifosfato-ARNm son modificados por accion de la
metiltransferasa (metilasa) que emplean S-adenosil-L-metionina como
coenzima donadora del grupo metilo.Puede darse en tres posiciones. El N7
de la guanosina terminal formando la caperuza tipo 0; en el 2-OH de la
primera ribosa dando lugar a la caperuza tipo 1; y por ultimo en el 2-OH de la
segunda robosa dando lugar a la caperuza tipo 2. Todos estas metilaciones
se dan antes de que el ARN antes transcrito haya alcanzado un tamaño de
30 nucleotidos.
● Modificación del extremo 3

✓ Formacion del extremo 3 y su relacion con el final de la transcripcion: El

extremo tres deriva de la escincion de la molecula pre-ARMm en una
posicion corriente arriba, por consiguiente es mas corto su extremo 3 que su
transcrito primario. ES decir, se produce un corte tras la aparicion de la señal
de poliadenilacion, esta estimula una endonucleasa especifica quien corta el
ARN justo cerca del extremo tres.

✓ Poliadenilacion del extremo 3: Sobre el extremo 3-OH resultante del corte

de la endonucleasa actua una ARN polimerasa especial que usa ATP como
sustrato, esta añade al ARN grandes cantidades de residuos de Adenilato
(AMP) formando la cola de poliadenilato o cola de poliA. Esta estructura que
permanece intacta hasta la formacion del ARNm final, puee participar en el
transporte del ARNm al citoplasma, de forma estale, para que realice la
sintesis proteica que vaya a ejercer.
✓ Eliminacion de intrones: Es la etapa esencial de la maduracion
posttranscripcional del transcrito primario (preARN) hasta el ARNm
eucariotico que se formará; consiste en la eliminacion de los intrones y la
union o empalme de los exones. Estos intrones son reconocidos y eliminados
por un complejo enzimatico especializado (espliceosoma). Los intrones se
consideran como secuencias “basura” que se deben cortar para conformar
luego sin ellos la molecula de ARN con exones. El espliceosoma une o pega
los exones para generar el ARN final y maduro, el cual sera enviado fuera del
nucleo. Los exones del gen codifican la proteina, los intrones a parte de que
carecen de informacion deben ser eliminados para que el ARNm codifique la
proteina con la secuencia correcta, sino se eliminanse obtendra ARNm con
basura y se produciria entonces una proteina erronea.

✓ Formacion de cuerpos o complejos de empalme: Esta asociada a lo

vnimos diciendo sobre la macromolecula denominada cuerpo o complejo de
empalme o ayustosoma, Este se forma con la asociacion del pre-ARNm y
varias ribonucleoproteinas nucleares pequeñas constituidas a su vez por
proteinas y ARN nuelceares pequeños. Este complejo de corte y emplamne
es necesario tanto para el reconocimiento de los puntos de escincion como
para la catalisis.

✓Mecanismo de reaccion: LA reaccion de corte y empalme supone la ruptura

de dos enlances fosfodiester y la formacion de un nuevo enlace fosfodiester
entre los dos exones. Primeramente se escinde el transcrito primario en el
extremo 5 del intron mediante ataque nucleofilico del 2OH del adenilato.
Union enlace fosfodiester 5-2 y se libera el exon con extremo libre 3OH. A
continuacion se escinde por ataque nucleofilico el centro ayuste 3 del
extremo 3Oh liebre del exon con lo que quedan unidos entonces ambos exon
y el intron se libera con su extremo 3OH libre y su extremo 5 formando un
laso. Este laso estan enlazadas la adenosina con tres nucleosidos por
enlaces fosfodiester en posiciones 2,3,5. Luego el intro en lazo se degrada
rapidamente.
 Pudimos ver que se escinden enlaces fosfodiester y a la vez se forma otro,
sin embargo, no existe gasto energetico apreciable, no hay consumo de ATP
mas si se requiere hidrolisis del ATP apara el ensamble previo del
ayustosoma.

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Procesamiento del ARNr:

​Se transcriben como un ARNr de mayor tamaño (pre-ARNr) que sufren una serie de
procesamientos endonucleolíticos que generarán los ARN maduros. En el genoma de E.
coli hay 7 operones distintos para codificar los ARNr, que se denominan rrnA-G. Cada uno
contiene en un único transcrito las secuencias de los ARNr 16S, 5S y 23S separados a
veces por uno o varios tRNA, dependiendo del operón. Cada operón tiene dos promotores.
El principal (P1) se encuentra a ~300 pb de comienzo de la secuencia del rRNA 16S. A
unos 110 pb de P1 se encuentra P2 que parece ser secundario. La endorribonucleasa III se
encarga de generar p16 y p23, los precursores del 16S y 23S respectivamente, por lo que el
pre-rRNA original 30S tiene una vida muy corta. El acceso de esta RNAsaIII se realiza sobre
las regiones expuestas que deja la estructura secundaria del pre-rRNA 30S. Después de la
acción de la ribonucleasa III, los rRNA 16S y 23S tienen secuencias adicionales en sus
extremos 5’ y 3’, por lo que son todavía mayores que el maduro —se denominan p16 y
p23—. El 5S queda asociado al tRNA que le sigue y sólo se libera cuando el tRNA sufre su
correspondiente procesamiento.
 ✓Metilación de las Ribosas: La 2'-O-metilación es una modificación de los
nucleósidos en el ARN, en la cual se añade un grupo metilo al grupo
2'-hidroxilo de la ribosa del nucleósido. Los nucleósidos con
2'-O-metilación se encuentran fundamentalmente en regiones
funcionalmente esenciales tanto de los ribosomas como del espliceosoma.
Además, la 2'-O-metilación de la adenosina en el ARN evita su edición a
inosina por parte de la adenosina desaminasa. La metilación de la ribosa
está relacionada con la protección de los enlaces fosfodiéster para evitar
la degradación de los ARNr..

✓ Remoción de partes intermedias del pre-ARNr: El preARNr se

fragmenta para generar los ARNr de distintos tamaños-

● Procesamiento del ARNt:

La mayoría de los ARNt de E. coli se transcriben en pre-ARNt que contienen

de 1 a 7 ARNt cada uno, separados por secuencias flanqueantes largas. En el
extremo 3’ del operón suele haber un gen traducible que no tenga nada que
ver con los ARNt. En estos casos, la traducción del ARNt ha de esperar a que
se madure el tRNA y se libere el ARNm maduro. El ARNt de la Tyr es uno de
los mejor conocidos. Se sabe que en la etapa 4 (y antes de que se modifiquen
las bases del ARNt) se puede reconstruir la secuencia CCA en los casos en
los que la exorribonucleasa D haya degradado demasiado mediante la
enzima ARNt-nucleotidil-transferasa. En algunos ARNt de algunas bacterias
(incluida E. coli) ya se ha descrito el ajuste (splicing) necesario para eliminar
intrones de la secuencia y producir el ARNt maduro final.

✓ Modificación de las bases: Algunas bases y azúcares en los ácidos

nucleicos llevan modificaciones químicas, como la adición de un grupo metilo
(-CH3). En el ADN la base más comúnmente modificada es citosina
(5-metillcitosina; m5C) y puede estar involucrada en la regulación de la
transcripción génica. Cuando la citosina es metilada la expresión del genes
metilado puede alterarse (el estudio de este campo es llamado epigenética).

En el ARN existen diferentes modificaciones químicas en sus nucleótidos

como: pseudouridina (Ψ), la dihidrouridina (D), la inosina (I) y la
7-metilguanosina (m7G).

- Pseudouridina: La pseudouridina es el más prevalente sobre todas las

diferentes modificaciones encontradas en el ARN. Es más comúnmente
encontrado en los ARN de transferencia (ARNt) asociados con la timidina y la
citosina en el brazo TΨC y es una de las regiones invariantes del ARNt. La
función no está muy clara, pero se sospecha que juega un papel en la
asociación con la aminoaciltranferasa (son enzimas aciltransferasas que
actúan sobre un grupo amino) durante la interacción con el ARNt
incrementando la iniciación de la traducción.

- Dihidrouridina: La dihidrouridina es una pirimidina el cual resulta de la

adición de dos átomos de hidrógeno haciendo una saturación completa de los
anillos de pirimidina sin doble enlace remanente. Esta modificación se
encuentra en los ARNt y ARNr.

- Inosina: La inosina es un nucleótido que se forma cuando la hipoxantina

(derivado de las purinas) está unido a un anillo de ribosa (también conocido
como una furanosa en el ARN) a través de un enlace β-N9-glucosídico. La
inosina se encuentra comúnmente en ARNt y es esencial para la traducción
apropiada del código genético

- 7-metilguanosina (m7G): La 7-metilguanosina (m7G) es una versión

metilada de la guanina y es un biomarcador para algunos tipos de cáncer
cuando se encuentran en la orina humana. Este nucleótido modificado juega
un papel en el ARN como grupo de bloqueo en su extremo 5’

✓ Adición de -CCA
Proceso de Splicing: El splicing, o proceso de corte y empalme de ARN, es un
fenómeno que ocurre en organismos eucariotas tras la transcripción del ADN
a ARN e involucra la eliminación de los intrones de un gen, conservando los
exones. Es considerado fundamental en la expresión génica. Ocurre mediante
eventos de eliminación del enlace fosfodiéster entre los exones y los intrones
y la posterior unión del enlace entre los exones. El splicing ocurre en todos los
tipos de ARN, sin embargo es más relevante en la molécula de ARN
mensajero. También puede ocurrir en moléculas de ADN y de proteínas.
Puede que al momento de ensamblar los exones, estos sufran un arreglo o
cualquier tipo de cambio. Este evento se conoce como splicing alternativo y
tiene importantes consecuencias biológicas.

● ¿En qué consiste?: Un gen es una secuencia de ADN con la información

necesaria para expresar un fenotipo. El concepto de gen no se restringe
estrictamente a las secuencias de ADN que se expresan como proteínas. El
“dogma” central de la biología involucra el proceso de transcripción de ADN a
una molécula intermediaria el ARN mensajero. Este a su vez se traduce en
proteínas con ayuda de los ribosomas. Sin embargo, en los organismos
eucariotas estas largas secuencias de genes se encuentran interrumpidas por
un tipo de secuencias que no son necesarias para el gen en cuestión: los
intrones.

Para que el ARN mensajero pueda traducirse de manera eficaz estos intrones
deben ser eliminados. El splicing de ARN es un mecanismo que involucra
varias reacciones químicas usado para remover elementos que están
interrumpiendo la secuencia de cierto gen. Los elementos que se conservan
se denominan exones.

¿Dónde ocurre?: El espliceosoma es un complejo enorme de naturaleza

proteica que se encarga de catalizar los pasos del splicing. Está formado por
cinco tipos de ARN pequeños nucleares denominados U1, U2, U4, U5 y U6,
además de una serie de proteínas. Se especula que el espliceosoma participa
en el plegamiento del pre–ARNm para alinearlo de manera correcta con las
dos regiones donde ocurrirá el proceso de splicing. Este complejo es capaz
de reconocer la secuencia consenso que la mayoría de los intrones poseen
cerca de sus extremos 5’ y 3’. Cabe destacar que se han encontrado genes
en los Metazoos que no poseen estas secuencias y usan otro grupo de ARN
pequeño nucleares para su reconocimiento.
● Splicing alternativo: En los seres humanos se ha reportado que existen
cerca de 90.000 proteínas diferentes y anteriormente se pensaba que debían
existir un número idéntico de genes. Con la llegada de nuevas tecnologías y
del proyecto genoma humano se pudo concluir que solamente poseemos
unos 25.000 genes.

Entonces, ¿cómo es posible que tengamos tantas proteínas? Puede que los
exones no se ensamblen en el mismo orden en que fueron transcritos al ARN,
si no que se arreglen estableciendo combinaciones novedosas. A este
fenómeno se le conoce como splicing alternativo. Por esta razón un solo gen
transcrito puede producir más de un tipo de proteínas. Esta incongruencia
entre el número de proteínas y el número de genes fue dilucidada en el año
1978 por el investigador Gilbert, dejando atrás el concepto tradicional de “por
un gen hay una proteína”.