C.F.G.

S: Laboratorio de Análisis y de Control de Calidad Módulo: Ensayos Microbiológicos

ANTIBIOGRAMA

Anexo III
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PRUEBA DE SENSIBILIDAD BACTERIANA: ANTIBIOGRAMA.

PNT-MIC-PI-013

1- Definición:

Antibiograma: es una prueba en la que se enfrenta la bacteria inoculada sobre la superficie de un

medio de agar a una disolución antibiótica absorbida en discos de papel de filtro o en pastillas.
La difusión del mismo a través del medio produce un halo de inhibición del crecimiento, cuyo
diámetro será proporcional a la potencia del antimicrobiano. Varios factores afectan el halo de
inhibición: la carga de antibiótico en los discos, la difusión del antibiótico en el medio de
cultivo, el tamaño del inoculo bacteriano, la composición y grosor del medio de cultivo, la
velocidad del crecimiento bacteriano y el tiempo de incubación.

2- Material y reactivos:

- Microorganismo
- Asa de siembra
- Estufa
- Tubo con caldo BHI (5 ml)
- Placas con agar Müeller Hinton
- Discos de antibióticos

3- Técnica:

- Preparar cultivos de 18 horas de las bacterias que hay que ensayar en agar tripticasa soja
(TSA).
- Mediante tinción de Gram si es Gram + o -.
- Inocular 3 ó 4 colonias de las bacterias en 5 ml de caldo de tripticasa soja (TSB) o caldo de
infusión cerebro corazón (BHI) e incubar a 37 ºC hasta que la turbidez sea visible (2-5
horas). Ajustar la turbidez con disolución salina o el mismo caldo estéril hasta una turbidez
equivalente al estándar 0,5 McFarland.
- Nota: alternativamente, como método más rápido, se puede preparar directamente a partir
del cultivo en el medio de agar de 18 horas, suspendiendo las colonias en disolución salina o
caldo de cultivo estéril, hasta lograr la turbidez equivalente al estándar 0,5 McFarland.
- Utilizando un hisopo de algodón, sumergirlo en el inóculo y eliminar el exceso
presionándolo sobre la pared interna del tubo que lo contiene y por encima del nivel del
caldo de cultivo.
- Inocular la superficie de una placa de agar Müeller-Hinton con el hisopo pasándolo
uniformemente por una mitad de la superficie en tres giros de 90 º (técnica de siembra de
Kirby-Bauer). Por último, pasar el hisopo por el reborde de la placa de agar. Dejar secar la
placa semiabierta e invertida durante 4-5 minutos, antes de colocar los discos.
- En función de la tinción realizada, colocar los discos de antibióticos apropiados, sobre la
superficie del agar utilizando unas pinzas estériles y apretándolos suavemente sobre la
superficie del agar. Los discos no deben estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa y
lo bastante separados entre ellos para que no se superpongan las zonas de inhibición
(aproximadamente 20 mm). Dejar las placas 15 minutos a temperatura ambiente para que
comiencen a difundir los antibióticos.
- Incubar la placa en posición invertida a 37 ºC durante 18-24 horas.
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- Medir los diámetros de las zonas de inhibición con una regla o un calibrador utilizando luz
refleja sobre fondo negro.

Video: https://www.youtube.com/watch?v=Ja1Q6Y1W6Ec

4- Resultados:

- Interpretación. Los diámetros de los halos de inhibición se traducen a las categorías de

resistente (R), intermedio (I), moderadamente sensible (MS) o sensible (S), de acuerdo a los
criterios interpretativos de la tabla de interpretación de los halos de inhibición de
antibacterianos.

Anexo III
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5- Tabla de bacterias y antibióticos

Bacterias Gram negativas Bacterias Gram positivas

Ampicilina Penicilina G
Amoxicilina+ácido clavulánico Amoxicilina+ácido clavulánico
Cefotaxima Meticilina (para resistentes a penicilina)
Ceftriaxona Oxacilina
Ciprofloxacina Cefalotina
Gentamicina Cefotaxima
Cotrimoxazol Ceftriaxona
Ciprofloxacina
Eritromicina (de elección para niños)
Vancomicina
Cotrimoxazol

Anexo III
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