INFORME

PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS

Integrantes

1
Félix Jaramillo 1; Edward Granados 2; Ana Sofía Díaz 3; Fabián Benavides 4; Alexander Mendieta5

2
Profesor
Johan Manuel Cifuentes Castellanos

Microbiología
1,2
Corporación Tecnológica de Bogotá - CTB

Bogotá, D. C., 13 mayo 2023

RESUMEN: En este informe se presentan los resultados que obtuvimos durante la práctica , en la cual nos
enfocamos en la identificación y evaluación de la acción antimicrobiana de los antibióticos ante bacterias.
También se analiza el crecimiento de bacteriano a través de una siembra masiva en cuatro medios de cultivo a
los cuales les fueron inoculados tres tipos de antibióticos en forma de sensidiscos, este método conocido como
método de difusión de discos (Kirby-Bauer), el método de pozos en agar, y el método de dilución en tubos
(turbidimétrico), los cuales evalúan la resistencia de algunos microorganismos a ciertos antibióticos.
Tomamos para muestra problema la bacteria staphylococcus aureus, a la cual se le realizó el estudio que nos
arrojó excelentes resultados en el estudio.

ABSTRACT: This report presents the results we obtained during the practice, in which we focused on the
identification and evaluation of the antimicrobial action of antibiotics against bacteria. Bacterial growth is also
analyzed through seeding in four culture media to which three types of antibiotics were inoculated in the form of
sensidiscs, this method known as the disk diffusion method (Kirby-Bauer), the wells in agar, and the method of
dilution in tubes (turbidimetric), which evaluate the resistance of some microorganisms to certain antibiotics.
We took the staphylococcus aureus bacterium as a sample problem, to which the study was carried out, which
gave us excellent results in the study.

PALABRAS CLAVE: Antibiograma, bacteria, antibióticos, discos, penicilina, siembra masiva, inoculación.

KEY WORDS: Antibiogram, bacteria, antibiotics, discs, penicillin, mass seeding, inoculation.
INTRODUCCIÓN:

Inicialmente se procedió a tomar un tubo de ensayo, al cual se le puso una solución patrón de McFarland, se tomó
con un asa parte de una cepa de bacteria y se introdujo en el tubo con el patrón el cual llegó al mismo grado de
turbidez que contiene un tubo ya previamente preparado por el docente.

A continuación, en el presente informe se realiza la presentación de la evaluación y análisis aplicados a tres

antibióticos y a su capacidad e impacto antimicrobiano, la resistencia de los microrganismos a ciertos antibióticos.
Se empelaron para tres tipos de antibióticos los acles son: penicilina, norfloxacina y gentamicina. Estos
antibióticos fueron inoculados en cuatro cajas de Petri las cuales previamente sembramos de forma manual, en
ellas se sembró la bacteria Cándida y a cada una se les puso en tres lugares distintos los antibióticos. Se realizaron
estos procedimientos con el fin de poder observar el efecto de los antibióticos sobre la bacteria y la respuesta de la
misma ante la presencia de los antimicrobianos bien sea inhibición o resistencia para lo cual se dejan las cajas en
incubadora por 24 horas con una temperatura de 37°, proporcionando el medio adecuado, el ambiente y
temperatura idóneos.

Transcurridas las 24 horas, procedimos a la revisión y observación de la formación de halos alrededor de cada uno
de los tres discos puestos en cada medio de cultivo. En el caso en que los halos de inhibición se sobrepongan hay
que medir desde la mitad del disco hacia afuera y luego multiplicarlo por dos, de esa manera podremos saber el
efecto de cada antibiótico en dicha bacteria.
Es de suma importancia resaltar que un halo nos sirve para para determinar la zona alrededor de un disco de
antibiótico en un antibiograma, en el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de agar inoculada con
el gérmen. También es una medida de la potencia del antibiótico frente al gérmen.

MATERIALES Y MÉTODOS

Material suministrado Reactivos suministrados Material que deben traer

por el laboratorio
Mechero (Gr)
Asa redonda/curva (Gr)
Incubadora (Cu)
6 Tubos de ensayo tapa
rosca estériles (Gr)
2 pipetas estériles de 1
mL (Gr)
1 Pipeta Pasteur de
vidrio (Gr)
1 pera de hule (Gr)
Tubos que contienen el
patrón de McFarland
por el laboratorio los estudiantes
Bacteria en medio de cultivo Marcador delgado Sharpie
líquido (Gr) (indeleble) (Gr)
5 cajas de Petri con Agar
Nutritivo (Es) Guantes (Es)
Sensidiscos con distintos Gorro/cofia (Es)
antibióticos (Cu)
100 mL de Fenol (Cu) Tapabocas (Es)
Toallas desechables (Gr)
Encendedor (Gr)
Vinipel (Gr)
Alcohol antiséptico (Gr)
Cámara fotográfica (Gr)
Hisopos estériles (Gr)
Regla (Gr)
1. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1.1 Patrón de McFarland

Se describe el procedimiento de la siguiente manera: antes de iniciar con el procedimiento, el docente ya
había preparado un tubo el cual contenía la misma muestra de bacteria y trabajamos en este experimento,
sthapylococcus aureus.
Se dio inicio tomando un tubo de ensayo el cual contiene patrón de McFarland, se introdujo con un asa la
bacteria sthapylococcus aureus, se agitó hasta obtener una turbidez semejante a la de la muestra dada por
el docente, dicha turbidez se analizó y con el criterio del docente se determinó que era semejante a la
muestra.

Descripción Imagen 1
 

Se introdujo la bacteria
en el tubo con el
patrón de  McFarland.

Descripción Imagen 2
 

Comparación de la
obtención del grado de
turbidez.

1.2 Método difusión en discos Kirby-Bauer (Antibiograma)

Se describe el procedimiento empleado en el método.
Iniciamos realizando la siembra de la bacteria problema (Staphylococcus aureus), con lo cual sobre
La superficie de las cuatro cajas de agar que previamente sembramos por método de siembra masiva,
empleamos un hisopo el cual se introdujo en el tubo que contenía la muestra de la bacteria en forma
líquida que se preparó con el patrón de McFarland, y seguido de ello se procedió de forma ya mencionada
“masivamente” a la siembra del microorganismo.

En el siguiente punto, se flamearon las pinzas antes de ir tomando los sesidiscos que contenían cada uno
los tres tipos de antibióticos que fueron puestos separadamente dentro de cada una de las cajas que
contienen la siembra de la bacteria. Se inocularon uno a uno los discos dentro de las cuatro cajas.

Después de realizada la siembra con la inoculación de los discos de antibióticos en cada una, procedemos
poner las cajas en incubación por 24 horas a 37°C.

Al pasar las 24 horas realizamos la medición de los halos de inhibición la cual incluyó la medición del
diámetro de los discos.

ANTIBIÓTICOS USADOS PARA INOCULAR LAS SIEMBRAS

 PENICILINA NORFLOXACINO GENTAMICINA
 
   

TABLA Y CAJA No. 1

MEDICIÓN DEL IGAMEN DEL RESULTADO

ANTIBIÓTICO SUSCEPTIBILIDAD
HALO DE LA SIEMBRA
 
 PENICILINA 4 CM (40 MM) SENSIBLE (S) 

 NORFLOXACINO 2.5 CM (25 MM)  SENSIBLE (S)

GENTAMICINA   1 CM (10 MM) RESISTENTE (R) 

TABLA Y CAJA No. 2

MEDICIÓN DEL IGAMEN DEL RESULTADO

ANTIBIÓTICO SUSCEPTIBILIDAD
HALO DE LA SIEMBRA
  

 PENICILINA 3.5 CM (35 MM) SENSIBLE (S) 

 NORFLOXACINO 2.5 CM (25 MM)  SENSIBLE (S) 

GENTAMICINA  1.5 CM (15 MM)  SENSIBILIDAD MEDIA 

TABLA Y CAJA No. 3

MEDICIÓN DEL IGAMEN DEL RESULTADO

ANTIBIÓTICO SUSCEPTIBILIDAD
HALO DE LA SIEMBRA

 PENICILINA 4 CM (40 MM)  SENSIBLE (S) 

 NORFLOXACINO 2.5 CM (25 MM)   SENSIBLE (S)

GENTAMICINA   1 CM (10 MM) RESISTENTE (R) 

TABLA Y CAJA No. 4

MEDICIÓN DEL IGAMEN DEL RESULTADO

ANTIBIÓTICO SUSCEPTIBILIDAD
HALO DE LA SIEMBRA

 
 PENICILINA 4 CM (40 MM)  SENSIBLE (S) 
  NORFLOXACINO 2.5 CM (25 MM)   SENSIBLE (S)

GENTAMICINA   1 CM (10 MM) RESISTENTE (R) 

2. ANÁLISIS:

Los resultados obtenidos han sido interpretados de la siguiente forma: sensible, sensibilidad media o
resistente, esto de acuerdo con el diámetro que arrojó el halo de inhibición tomado en mm y usando como
referencia la tabla del NCCLS.
(tabla 1).
Pudimos evidenciar que la bacteria penicilina y el norfloxacino son los antibióticos que presentan una
mayor sensibilidad a la bacteria (Staphylococcus aureus). Y por otra parte la gentamicina presentó
resistencia y sensibilidad media, lo cual se evidencia en las imágenes presentadas de cada una de las
cuatro cajas.

3. CONCLUSIONES:

Se logró obtener una turbidez similar a la de la muestra, durante el método de Patrón de McFarland.
El método de difusión con disco (Kirby-Bauer) se adapta muy bien a la prueba antimicrobiana debido a lo
práctico, sencillo, y la eficacia del mismo. La forma en que se interpretaron los resultados fue: sensible,
sensibilidad media y resistente, tal como indican los métodos básicos para el estudio de la sensibilidad a
los antimicrobianos.
Por otra parte, evidenciamos que los antibióticos crean barreras y que a su vez unas suelen ser más
resistentes que otras y podemos evidenciar esto resultado debido al comportamiento de la bacteria en el
momento en que entra en contacto con el antimicrobiano. Con la utilización e interpretación de los halos
de la inhibición se respalda esta conclusión.
Se concluye que la bacteria (Staphylococcus aureus). Es sensible a los tres antibióticos usados, y los de
mayor halo son la penicilina y la norfloxacina con el segundo halo de sensibilidad lo cual inhibe su
crecimiento; con la gentamicina genera sensibilidad media.
La bacteria tiene una resistencia a la gentamicina.

4. BIBLIOGRAFÍA

 https://www.ecorfan.org/bolivia/series/Topicos%20Selectos%20de%20Quimica_I/Articulo%208.pdf
 https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimc-
procedimientomicrobiologia11.pdf
 https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/exposiciones
 https://revistas.unal.edu.co/index.php/remevez/article/view/18252/19836
 file:///C:/Users/felix/Downloads/lgomez,+vol4no3y4_Parte5.pdf