Guía de Prácticas Microbiología

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN
FACULTAD DE ENFERMERÍA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE MICROBIOLOGÍA

Y PATOLOGÍA
GUÍA DE PRÁCTICAS
Docentes:
Dra. Blanca R. Mayorca P.
Dra. Irmia Paz Torres
Dr. José Fernández R.
Mg. Jorge Ballón E.
Dr. Ricardo León Vásquez
Mg. Daniel Valdivia M.
Mg. Fernando Segovia Cruz
Alumno(a):
2021
Complete el nombre de las partes del Microscopio
NORMAS GENERALES Y RECOMENDACIONES PARA EL DESARROLLO DE
LAS PRÁCTICAS
1. La asistencia a prácticas es obligatoria, si falta a alguna de ellas, no tendrá la

oportunidad de recuperarla ni dar el Quiz y su nota será 0.
2. El uso del mandil es indispensable para realizar la práctica, debe estar limpio y
marcado con su nombre o llevar una placa para la identificación del alumno.
Además, es obligatorio el uso de máscara, gorro y guantes para el trabajo dentro
del laboratorio, para protegerse de cualquier contaminación.
3. El estudiante debe ser puntual y traerá consigo su material de trabajo necesario:
Guía de prácticas, lápices de colores. En forma individual o por grupo, deben
tener en cada mesa, un lápiz de cera para marcar en vidrio, una caja de fósforos
o encendedor, un lienzo pequeño (“campo”), para limpiar láminas, toalla y jabón
para lavarse las manos después de realizar su trabajo.
4. Deberán guardar sus pertenencias (libros, cuadernos, mochilas, bolsos, ropa) en
los roperos que tienen en cada lado de las mesas de trabajo, para que no se
contaminen y constituyan luego un peligro para usted o su familia.
5. Está prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio.
6. Manipular el material de trabajo con cuidado. Si ocurre algún accidente
(volcadura de un fluido o contacto directo con un espécimen contaminado) u otro
incidente, informar inmediatamente al profesor.
7. Tener cuidado al manipular los mecheros a gas o alcohol, encenderlos antes de
colocarse los guantes de goma (látex), puede ocasionar un accidente.
8. Maneje los microscopios con cuidado. Si no los está usando, apague las
lámparas (focos); su tiempo de “vida” es corto.
9. Para observar las láminas con el objetivo de inmersión (100x) utilizar sólo una
pequeña gota de aceite de cedro (de inmersión). NO ES NECESARIO “bañar” la
lámina en el aceite.
10. El asa bacteriológica o de Kolle, debe esterilizarse a la llama antes y después de
cada contacto con el material contaminado. Flamearla en posición vertical o
inclinada, formando un ángulo de 45°, evitar la proyección de partículas sobre la
mesa.
11. El material usado: Bajalenguas, torundas, etc. que estén contaminados, NO
deben dejarse sobre la mesa, depositarlos en los recipientes correspondientes;
así también los trozos de papel, algodón o palos de fósforos, NO arrojarlos a los
lavatorios, hacerlo en los depósitos para basura, guantes usados en la bolsa roja.
12. Todo material roto o extraviado, durante la práctica, será de responsabilidad de

todos los integrantes del grupo (mesa).
13. Al concluir la práctica: Dejar las láminas utilizadas fuera del microscopio, en un
lugar para ser descartadas, las preparadas por la Cátedra, NO mezclarlas con las
anteriores, colocarlas separadas o en las gradillas portaláminas
14. Lea cuidadosamente la guía de prácticas; realice los esquemas, anote sus
observaciones, resuelva el cuestionario correspondiente.
15. Lavarse siempre las manos antes de abandonar la sala de prácticas.
MANUAL DE NORMAS DE BIOSEGURIDAD
1. DEFINICIÓN
La bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y

la seguridad del personal que trabaja en el laboratorio, de riesgos que pueden
ser producidos por la naturaleza del trabajo que se realiza.
La seguridad se realiza en conjunto : el personal debe cumplir con las normas

de bioseguridad ; los directivos deben hacerlas cumplir, y por otro lado, la
administración debe dar las facilidades para que estas normas sean cumplidas.
2. AGENTES DE RIESGO :
 Agentes biológicos, transmitidos por ingestión, inhalación, inoculación y por

contacto directo a través de piel o mucosas.
 Agentes físicos y mecánicos, como las temperaturas extremas, radiaciones
ionizantes, contactos eléctricos o conexiones defectuosas, y vidrios
resquebrajados o recipientes dañados o tubos rotos.
 Agentes químicos que pueden ser :
 corrosivos, que causan destrucción o alteración a los tejidos.
 tóxicos, sus manifestaciones dependerán de la vía de exposición, por
inhalación ingestión o contacto directo con mucosas o piel ;
 carcinogénicos,
 inflamables,
 explosivos.
3. PRINCIPIO DE BIOSEGURIDAD :
El término “contención” es usado para describir métodos seguros para el manejo
de agentes infecciosos en el laboratorio. En él intervienen las técnicas de
procesamiento de las muestras de laboratorio, los equipos de seguridad
diseñados para la protección de personal y el diseño del edificio. Se considera
una contención primaria y una contención secundaria.
 Contención primaria, es la protección del personal y del medio ambiente
inmediato contra la exposición a agentes infecciosos y/o productos químicos
de riesgo. Es provista por una buena técnica microbiológica y el uso
apropiado del equipo de seguridad. El uso de vacunas aumenta el nivel de
protección personal.
 Contención secundaria, es la protección del medio ambiente externo contra

la exposición de material infeccioso. Se logra por una combinación de las
características de la edificación y prácticas operacionales.
El propósito de la contención es reducir la exposición del personal del laboratorio

y de otras personas a agentes potencialmente peligrosos, y prevenir el escape
de éstos al exterior.
4. MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
4.1. Del ambiente
a. Todo el laboratorio, debe estar adecuadamente ventilado e iluminado, y

los servicios de agua, luz y gas deben funcionar satisfactoriamente.
b. Se debe contar con cámaras de bioseguridad, lámparas de luz
ultravioleta y cualquier otro equipo o instalación que sea necesario para
proteger al personal, dependiendo del tipo de agente que se está
trabajando o la labor que se realice.
Nota : Mientras no se cuente con una cámara de bioseguridad
(flujo laminar) el personal que trabaje en el aislamiento de
bacterias con virulencia elevada y/o alto poder de contagiosidad,
deberán extremar las medidas de bioseguridad existentes en el
Laboratorio.
c. El espacio de la mesa del laboratorio donde se manipula el material
infeccioso se denomina AREA CONTAMINADA. Debe estar ubicada en
un lugar alejado de la puerta de entrada y de los lugares en los que
habitualmente se producen corrientes de aire.
d. Las mesas de trabajo deben confeccionarse de material sólido con
superficies lisas, impermeables, resistentes a las sustancias corrosivas
y de más fácil limpieza.
Se pondrá en las mesas de trabajo sólo los equipos y materiales
necesarios para el trabajo (cuadernos y libros de trabajo que deben
estar allí) y no se llevarán a otro sector. El teléfono no debe instalarse
en el área de trabajo.
e. Las paredes y pisos deben ser lisos para facilitar la limpieza con
soluciones desinfectantes.
f. Los pisos del laboratorio deben limpiarse todos los días con soluciones
desinfectantes, al final de la jornada de trabajo. No se debe barrer el
piso en seco, ni encerarlo.
g. Por el sistema de desagüe sólo deben eliminarse los agentes biológicos
o químicos previamente descontaminados, neutralizados o inactivados.
h. Se debe realizar el control y eliminación de roedores e insectos.
4.2. Del Personal.

a. Todo el personal del laboratorio deberá ser sometido a un examen
médico completo, que debe comprender una historia clínica detallada al
momento de su incorporación a la institución.
b. Al personal que labora en las áreas de acceso restringido se le tomará
una muestra de sangre para la obtención de suero, el que se
conservará con fines de diferencia. Dicho examen se repetirá una vez
al año para el caso del personal de los laboratorios (VIH 1 y 2, Hepatitis
B, Brucella y otros).
c. Se evitará el ingreso de personas ajenas al Laboratorio, así como la
circulación de personas durante el procesamiento de las muestras.
d. El personal debe someterse a un examen anual de tórax y rayos X, y es
recomendable que sea sometido a un examen médico una vez al año.
4.3. Inmunización del Personal

a. Todo el personal del laboratorio recibirá inmunización protectora contra
el tétanos y la difteria, dependiendo ello de su estado de inmunización.
b. El personal de salud debe dar una reacción positiva a la prueba
tuberculínica o PPD con 2 TU. Aquellos trabajadores que tengan
reacción negativa, no deben prestar sus servicios en el laboratorio hasta
que hayan sido vacunados con BCG.
c. El personal que por la naturaleza de sus funciones deba estar en
contacto con muestras de sangre, recibirá necesariamente inmunización
completa contra hepatitis B.
d. El Servicio médico deberá llevar registro de las vacunas recibidas por el
personal, el cual estará disponible para cuando lo solicite la autoridad
correspondiente.
4.4. Del vestido.

a. Deberá usar un mandil limpio, de mangas largas, mientras que se
realice todo trabajo. Los mandiles deben ser lavados por lo menos una
vez a la semana.
b. No debe usar el mandil del laboratorio fuera del laboratorio.
c. Para el ingreso a las zonas de acceso restringido utilizarán mandilones
especiales, cerrados por delante, de un color determinado, que no
podrán ser utilizados en otros ambientes. Estos mandilones
permanecerán en el laboratorio, y antes de ser lavados serán
desinfectados utilizado hipoclorito de sodio, a la concentración
recomendada. La esterilización en autoclave es también un método
recomendado, pero el material se deteriora rápidamente, por lo que se
utiliza sólo en casos especiales o cuando se han utilizado mandiles
descartables.
d. Las personas que usan pelo largo deben protegerse con gorro o
mantener amarrado el cabello hacia atrás. El pelo largo puede ser
peligroso en el laboratorio, particularmente alrededor de fuego de
mecheros, o porque invariablemente debe ser echado de lado por
manos que han manejado material infeccioso, incluso puede
contaminarse con muestras clínicas y puede ser un riesgo cerca a
máquinas.
e. Se debe tener cuidado en quitarse brazaletes o collares largos antes de
comenzar a trabajar, ya que estos pueden producir accidentes en la
mesa de trabajo con máquinas tales como centrífugas, o pueden
contaminarse fácilmente con muestras clínicas o cultivos.
f. Los zapatos deben cubrir completamente los pies para protegerlos de
los derrames de ácidos y de cultivos. Debe evitarse los tacos altos ya
que facilitan resbalones y otros accidentes.
4.5. De las muestras y su procesamiento.

a. Todas las muestras deben ser tratadas como altamente infecciosas
para evitar el posible contagio.
b. Se debe utilizar mascarillas y guantes, cuando sea necesario, por el tipo
de riesgo.
c. Para tomar muestras de sangre se deben utilizar jeringas y agujas
descartables o sistemas de tubos al vacío (tipo Vacutainer o Venoject).
NUNCA SE DEBE TOMAR MUESTRAS UTILIZANDO SOLO LA
AGUJA.
d. No debe volverse a tapar la aguja con el capuchón de plástico, por el
riesgo de pincharse al momento de realizar el cerrado.
e. En la zona de trabajo de los laboratorio no se permitirá al personal
comer, beber, fumar, guardar alimentos, ni aplicarse cosméticos.
f. Las manos deben lavarse con abundante agua y jabón cada vez que se
interrumpa el trabajo. Para secarse las manos deben usarse toallas
descartables de preferencia, caso contrario las toallas que se utilicen
deberán lavadas diariamente.
g. Nunca pipetear muestras, fluidos infecciosos o tóxicos con la boca. Se
debe usar propipetas, pipetas automáticas o otro equipo adecuado.
h. Nunca mezcle material infeccioso haciendo burbujear aire a través de la
pipeta ni soplar material infeccioso fuera de las pipetas.
i. Antes de centrifugar, inspeccionar los tubos en busca de rajaduras.
Inspeccionar dentro de los vasos portatubos o anillos, por paredes
rugosas causadas por erosión o material adherido. Retirar
cuidadosamente todos los trozos de vidrio del cojín de jebe.
j. Limpiar periódicamente los congeladores y refrigeradores en los cuales
se almacenan los cultivos, y retirar los frascos y tubos rotos. Emplear
guantes de jebe y protección respiratoria durante su limpieza.
k. Desarrollar el hábito de mantener las manos fuera de la boca, nariz,
ojos y cara. Esto puede prevenir la autoinoculación.
l. Evitar molestar en el Laboratorio con sonidos de alto volumen.
m. El operador es el responsable de desinfectar el área de trabajo, antes y
después de cada labor con fenol al 5%, cresol al 3% u otro
desinfectante, dejándolo actuar durante 30 minutos.
4.6. Esterilización terminal.

a. Mientras no sea posible hacer la descontaminación de las muestras en
el propio laboratorio, el material contaminado debe colocarse en
recipientes adecuados con tapa, y enviarse a la sala de esterilización de
material contaminado. No se debe acumular inadecuadamente material
contaminado.
b. Asegúrese de que el material infeccioso descartado sea fácilmente
identificado como tal y sea esterilizado lo antes posible.
c. Las piezas de vidrio reusables (pipetas, Pasteur, láminas de
microscopio, etc.) deben ser colocadas horizontalmente en un depósito
con desinfectante y esterilizarlas cuando este lleno en sus ¾ partes o al
final del día de trabajo esté lleno o no.
4.7. Desempolvado y limpieza del piso.

a. El desempolvado debe ser hecho con una tela limpia saturado con
desinfectante y exprimida ; no hacerlo con un plumero o tela seca.
b. El desempolvado debe ser hecho en toda oportunidad en que sea
necesario, pero por lo menos una vez al mes, preferentemente usando
aspiradora.
c. Se debe trapear los piso diariamente con un trapeador limpio y
humedecido con solución desinfectante.
4.8. Manejo de sustancias químicas de alto riesgo.

a. La recepción, almacenamiento y distribución de sustancias químicas de
alto riesgo (inflamables, explosivos, tóxicos, carcinogénicos) debe
efectuarse en un área apropiada que cumpla con las medidas de
seguridad necesarias para tales productos, como ser ventilada, contar
con extinguidores, etc. y debe estar a cargo del personal técnicamente
calificado.
b. Dentro del área de almacén se deben destinar áreas específicas para
productos químicos sólidos, líquidos o gaseosos, tomando en
consideración el riesgo que representan.
c. En estos estantes se deben almacenar las sustancias químicas en sus
envases unitarios originales y con sus etiquetas firmemente adheridas
al envase. Deben entregarse sellados al usuarios y en ningún caso
deben fraccionarse en el almacén.
d. Las sustancias químicas de alto riesgo que ingresen a los laboratorios
son de responsabilidad del personal técnicamente calificado y del jefe
del laboratorio, quienes deben tomar las medidas adecuadas para su
almacenamiento y uso.
e. El personal que trabaje con sustancias químicas de alto riesgo debe
protegerse adecuadamente, para lo cual debe contar con el siguiente
equipo que utilizará de acuerdo a la sustancia utilizada :
 Delantales de hule.
 Guantes de jebe.
 Protectores faciales.
 Anteojos.
 Botas de jebe.
 Máscaras de protección.
f. Los solventes miscibles con el agua (previamente diluidos a los menos
1 en 10) y en volúmenes no mayores de 1.5 (cada vez), los ácidos y los
álcalis (previamente diluidos 1 en 30), se pueden desechar en el
desagüe tomando las precauciones del caso. Se debe tomar en cuenta
que las cañerías antiguas, hechas de metal, pueden ser dañadas
incluso por estas sustancias diluidas.
g. La manipulación de sustancias que desprendan vapores, gases
irritantes o mal olor, o la incineración y calcinación de combustibles y/o
inflamables, debe realizarse sólo bajo una campana de seguridad
química, o con los protectores de vías respiratorias necesarios.
h. Se debe mantener neutralizantes disponibles para cualquier
emergencia ; bicarbonato de sodio para los ácidos y ácido acético
diluido para álcalis.
i. Todas sustancia química debe ser catalogada, y cada laboratorio debe
mantener un inventario actualizado de todas las sustancias químicas
que almacena y/o utiliza.
j. Todos los productos químicos deben tener en la parte externa la
indicación de qué tipo de riesgo representa trabajar con dicho reactivo y
cuáles son las medidas para su manejo, de acuerdo con las normas
internacionales al respecto.
5. MEDIDAS EN CASO DE ACCIDENTE
5.1. Inoculación accidental, cortes o abrasiones, quemaduras
La persona afectada deberá quitarse la ropa protectora, lavarse las manos y

las partes lesionadas; aplicarse un desinfectante cutáneo adecuado;
dirigirse al Servicio Médico e informar al médico de turno sobre la causa de
la herida y sobre los microorganismos implicados. Se llenará una ficha de
registro apropiada.
5.2. Ingestión accidental de material posiblemente peligroso

La persona será trasladada al servicio médico después de quitarle la ropa
protectora. Se informará al médico sobre el material ingerido y se seguirá
sus indicaciones. El accidente deberá inscribirse en un registro apropiado.
5.3 Emisión de un aerosol posiblemente peligroso

Todas las personas deberán evacuar inmediatamente la zona afectada. Se
informará inmediatamente al director del laboratorio. Nadie podrá entrar en
el local durante una hora por lo menos para que los aerosoles puedan salir y
se depositen las partículas más pesadas.
Se colocarán señales indicando que queda prohibida la entrada. Al cabo de
una hora, podrá efectuarse la descontaminación bajo la supervisión del jefe
inmediato, para ello se utilizará ropa protectora y protección respiratoria.
Las personas afectadas consultarán en el servicio médico.
5.4. Rotura o derrame de recipientes con cultivos

En caso de accidentes por derrame de una muestra en el piso o la mesa,
cubrir con papel periódico, empapar éste cuidadosamente con fenol al 5% y
dejar que actúe durante 30 minutos, como mínimo, antes de limpiar el área.
Se utilizará guantes en todas las operaciones.
5.5. Accidente con material sospechoso de poder contener virus de la

Hepatitis B o virus de la inmunodeficiencia humana, dengue, fiebre
amarilla, influenza, etc.
En principio, toda muestra de suero, sangre o líquido de procedencia
humana es sospechosa de contener estos virus.
 Después que se ha producido un accidente con material potencialmente
contaminado, se debe lavar la zona afectada con agua y jabón
favoreciendo el sangrado de la lesión. Si es necesario, se cubre la herida
con un apósito.
 Se informará inmediatamente al jefe inmediato (responsable de sección),
quien debe examinar la herida y determinar el tipo y cuál es su gravedad
(punción, laceración superficial o profunda, contaminación de la piel o
mucosa no intacta y hasta qué punto puedo contaminarse con sangre.
 Se reportará el accidente a la Jefatura del laboratorio.
 Se tomará una muestra de sangre inicial al trabajador, que será
examinada para serología de hepatitis B y VIH, fiebre amarilla, dengue,
etc.
 Se debe examinar, de la misma manera, una muestra del material con
que se contaminó el personal.
 Si la serología de VIH del trabajador es negativa, esta prueba debe
repetirse cada mes, hasta por un lapso de 6 meses. Si al cabo de este
tiempo la serología para VIH se mantiene negativa, se concluirá que no
se ha producido infección del trabajador.
6. ENVÍO DE MUESTRAS Y MATERIALES INFECCIOSOS EN CONDICIONES

DE SEGURIDAD.
El envío en condiciones de seguridad de muestras, y sustancias infecciosas con

fines de diagnóstico constituye un motivo de preocupación para todos los que
intervienen en este proceso: desde el personal de salud hasta el personal de
laboratorio, los empleados de correo y de las compañías de transporte. Los
profesionales de la salud y el personal del laboratorio se preocupan por los
métodos de transporte para que no dificulten el examen de una muestra y, en
consecuencia, lograr el diagnóstico oportuno de la enfermedad. Al personal
postal y los encargados de transporte, tanto terrestre como aéreo o fluvial, les
inquieta la posibilidad de contraer infecciones causadas por la fuga de
microorganismos nocivos procedentes de material roto, con fugas o mal
embalado.
Teniendo como base las normas internacionales sobre el envío de material

infeccioso se deben tener en cuenta las siguientes consideraciones :
6.1. Definiciones.
 Sustancias Infecciosas. Son aquellas que contengan microorganismos
viables, incluidas bacterias, virus rickettsias, parásitos, hongos o
recombinantes híbridos o mutantes que, según se sabe o se sospecha,
pueden causar enfermedades tanto en el hombre como en los animales.
No incluyen toxinas que no contienen ninguna sustancia infecciosa.
 Muestras para diagnóstico. Son todos los materiales de origen humano o
animal consistentes en excretas, secreciones, sangre y sus componentes,
tejidos y líquidos tisulares enviados con fines de diagnóstico. Se excluyen
los animales vivos infectados.
 Productos biológicos. Son las vacunas producidas con gérmenes vivos o
muertos, componentes celulares, reactivos de diagnóstico o productos
terapéuticos de naturaleza biológica destinados para uso humano o
animal y fabricados según los requisitos exigidos por las autoridades.
6.2. Requisitos de documentación y embalado

Los embalajes destinados a las sustancias infecciosas y las muestras de
diagnóstico constan de tres partes :
 Un recipiente primario hermético en el que se coloca la muestra.
 Un recipiente secundario hermético que contiene material absorbente
entre él y el recipiente primario y puede absorber todo el líquido de la
muestra en caso de fuga.
 Una envoltura exterior para proteger el recipiente secundario de las
influencias exteriores, durante el transporte.
 Las sustancias infecciosas se clasifican como mercancías peligrosas
y en los paquetes debe figurar la etiqueta de sustancias infecciosas.
 Por fuera del recipiente secundario debe adherirse un ejemplar de
formulario de datos relativo a la muestra, así como cartas, oficios u
otro material informativo que permita identificarla o describirla.
 Si la sustancia es perecedera, se debe incluir el embalaje en una caja
térmica (tecknopor), además de las advertencias apropiadas ; por
ejemplo : “Mantener congelación entre 2 a 4oC”.
Fuente : Serie de Normas Técnicas No 18

Manual de Bioseguridad.
Instituto Nacional de Salud
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA Y PATOLOGÍA
SECCIÓN MICROBIOLOGÍA
PRACTICA N°1
COMPORTAMIENTO EN EL LABORATORIO
LAVADO DE MANOS
MICROSCOPIA
Comportamiento en el laboratorio
El trabajo en el laboratorio de Microbiología es una experiencia muy novedosa e

impactante para los estudiantes de las áreas de la salud, porque van a tener un
contacto directo con un mundo “invisible” a simple vista y que los llevará a conocer a
seres tan pequeños que no los imaginan; es importante decir que aunque son tan
diminutos son igual de peligrosos porque pueden causarnos alguna enfermedad, es
por eso que debemos tener mucho cuidado en nuestro comportamiento dentro del
laboratorio para evitar contaminarnos, sobre todo las manos, algunos objetos o
incluso nuestra ropa que luego llevamos a nuestro hogar y podemos estar
transportando a los microbios con mucho riesgo de propagarlos.
Normas generales Peligros frecuentes PROTÉGETE

Está prohibido comer o Manejo incorrecto de Usa mandil o guardapolvo
beber en el laboratorio productos contaminados o siempre, no uses chaqueta
nocivos para la salud
Trabaja con cuidado, Encender los mecheros Usa zapatos cerrados, NO
orden, limpieza y sin prisas con fósforos, estando con sandalias
los guantes puestos
Si se derrama algún Manejo incorrecto de los Cuida tus manos, usa
producto, avisa a tu mecheros de gas o alcohol guantes de látex para
profesor, puede ser que pueden producir protección
peligroso que tú lo limpies accidentes: quemaduras
Está terminantemente Manejo de material de Evita salpicaduras, si es
prohibido hacer vidrio que puede producir posible usa anteojos
experimentos no cortes y heridas protectores
autorizados
Dejar siempre el material Abrir la llave de gas No inhales polvo ni
en orden, los microscopios equivocada, donde no está vapores o esporas de
sin láminas y en el objetivo conectado el mechero, hongos, usa una
de menor aumento material cerca, fácilmente mascarilla
inflamable.
Lávate las manos antes de Las reacciones químicas Tener el cabello recogido,
dejar el laboratorio explosivas dentro del gorro.
Lavado de manos
Esta es una práctica muy saludable, cuando se trata de cuidar y mantener la salud la
Organización Mundial de la Salud OMS, estandarizó la técnica de lavado y
desinfección de manos, así como los momentos en que el personal de salud debe
cumplir con la higiene de las manos. Observar los videos de Técnica de lavado de
manos: https://www.youtube.com › watch ; 5 momentos de la higiene de manos Salusplay
Microscopía
1. Introducción:
Las bacterias son seres microscópicos, cuyo tamaño oscila entre los 3 a 5
micrómetros (), no pueden ser observados a simple vista, son incoloras, pero
algunas poseen flagelos que les permiten movilizarse. Esta propiedad es importante
para diferenciarlas y clasificarlas de acuerdo a ello.
Para observarlas requerimos de un instrumento muy importante que es el microscopio
óptico o de luz, que facilita su observación porque aumenta su tamaño en cientos de
veces. Este instrumento fue ideado por un investigador danés Sir Antonie Van
Leeuwenhoek en el año 1674, consiste en un sistema de lentes que se superponen
unos a otros y ha ido perfeccionándose, el M/O puede aumentar el tamaño de los
objetos hasta más de mil veces. Existen otros tipos de microscopios, como el
electrónico, el de contraste de fases, de luz UV, etc. con otras características y otras
funciones.
En relación al microscopio óptico sus componentes y fundamento, ha sido motivo de
cursos anteriores (Biología, Histología u otros), por lo que los profesores de cada
grupo evaluarán a los alumnos al respecto para recordar algunos conceptos.
2. Objetivos:
Al finalizar esta práctica el alumno será capaz de:
- Recordar puntualmente y reforzar conceptos sobre microscopía óptica adquiridos

anteriormente.
- Reconocer algunos materiales o instrumentos que deberá usar en lo sucesivo
- Reconocer la morfología de las bacterias, calcular y comparar su tamaño con
otros elementos observados.
3. Materiales:
- Jabón líquido, papel toalla

- Láminas portaobjetos con frotis de bacterias coloreados
- Microscopio óptico
4. Procedimiento
1. Colocar la lámina coloreada en la platina del microscopio.

2. Enfocar la lámina empezando con el objetivo panorámico e ir cambiando a los
de mayor aumento, hasta llegar al objetivo de 40x, agregar aceite de cedro y
cambiar al objetivo de inmersión o de 100x.
3. Observar la morfología de las bacterias, ubicar otros elementos y comparar su
tamaño.
5. Informe y Registro:
1. Revisar bibliografía, describir las características de otros tipos de microscopios
2. Calcular cuántas veces está aumentado el tamaño de las bacterias que ve con
el objetivo de inmersión. Respuesta:………………………
3. Hacer un esquema de lo observado. PONER NOMBRE A TODO LO QUE

DIBUJE esto es válido para todas las prácticas.
EXAMEN MICROSCÓPICO
Bacterias G + Bacterias G -
Aumento: 100x Aumento: 100x
Tipos de microscopios
BRMP/
PRACTICA N° 2
CARACTERES MORFOESTRUCTURALES DE LAS BACTERIAS

Coloraciones: AZUL DE METILENO
GRAM
1. INTRODUCCIÓN: Las bacterias tienen tres formas básicas: cocos, bacilos y

espirilos. Su tamaño es variable, pero el rango de sus dimensiones está en el
orden de los micrómetros m (“micras”), es por eso que deben ser observadas
con ayuda del microscopio. Todas las bacterias son incoloras y deben ser teñidas
para poder observar su morfología y su agrupación. En algunos casos se utilizan
coloraciones especiales porque muchas de ellas presentan características
especiales en su pared celular o para poder observar algunas de sus estructuras
como esporas, cápsula, flagelos, etc.
Existen dos tipos de coloraciones:
Simples: Utilizan un colorante y se realiza en un solo tiempo, ejemplo: Azul de

Metileno.
Compuestas: Utilizan dos o más colorantes y se realizan en varios tiempos,

ejemplo: Gram, Ziehl-Neelsen, Wirtz-Coklin.
Coloración de Azul de Metileno: Es una coloración simple y sirve para observar

la morfología y agrupaciones de bacterias solamente.
Coloración de Gram: Fue ideada por el científico danés, Christian Gram en 1884;
es una coloración compuesta y a la vez diferencial, la más importante en
bacteriología, que clasifica a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas,
fundamentalmente por la composición de su pared celular.
2. Objetivos: Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:
- Diferenciar una coloración simple de una compuesta.

- Dada una muestra problema, (líquida o sólida), de productos patológicos o de
cultivos, o cualquier otra, preparar correctamente un frotis o extendido.
- Realizar en forma ordenada y completa los pasos de la coloración de Azul de
metileno y de Gram.
- Utilizando el microscopio reconocer la forma y los diferentes tipos de
agrupación de las bacterias coloreadas por ellos mismos y las
proporcionadas por la cátedra.
- Reconocer y diferenciar una bacteria Gram positiva de una Gram negativa.
3. Materiales:
Para todas las coloraciones:

- Aceite de inmersión
Coloración de Azul de metileno y Gram:
- Suspensión de bacterias en un caldo de cultivo.

- Placa de Petri con cultivo de bacterias.
- Láminas portaobjetos limpias.
- Asa bacteriológica o de Kolle.
- Mechero de alcohol o Bunsen (de gas).
- Varillas de vidrio para soporte de láminas.
- Colorante de Azul de metileno al 1%.
- Batería para coloración de Gram.
- Portaláminas de madera
- Láminas coloreadas
4. Procedimiento:
Preparación de un frotis o extendido, para todos los casos:
1. Utilizar una lámina portaobjetos limpia y sin grasa, para ello utilizar su campo
de franela y cogerla por los bordes para no mancharla, si es necesario, pasarla
por el mechero.
2. Marcarla con un lápiz de cera en uno de sus extremos para identificarla.
3. Si se trata de una muestra líquida o un caldo, tomar una gota con el asa de
Kolle, previamente esterilizada y extenderla en el centro de la lámina, en un
área aproximada de 1-2 cm de diámetro; los frotis no deben ser ni muy
gruesos, ni muy delgados. Si se trata de un cultivo o una muestra semisólida,
se colocará previamente una gota de agua destilada o de caño en la lámina
p.o, luego tomar una pequeña porción de la muestra o de la colonia a
examinar (sólo tocarla), emulsionarla en el líquido y extenderla de igual forma
que la anterior; dejar que seque al medio ambiente, NO calentar al mechero.
4. Fijar el frotis al calor suave, pasándolo por la llama del mechero unas dos o
tres veces. Probar que no esté muy caliente con el dorso de la mano.
5. Colocarlo en el soporte para ser coloreado sobre el lavatorio.
Coloración de Azul de metileno:
- Cubrir el frotis con la solución acuosa de Azul de metileno al 1%, durante 2

minutos.
- Lavar con agua corriente de caño y dejar secar.
- Observar con el objetivo de inmersión (100x).
Lectura: Tanto las bacterias como otros elementos del frotis se observan de
color azul celeste.
Coloración de Gram:
- Cubrir el frotis con Violeta de genciana (solución acuosa al 1%), dejar actuar
por un minuto. Lavar con agua corriente.
- Cubrir con lugol durante 2 minutos. Lavar.
- Decolorar con alcohol al 95% durante 20 a 30 segundos aproximadamente.
Lavar.
- Teñir con safranina (solución acuosa al 0,75%) durante 30 segundos a 1
minuto. Lavar.
- Dejar secar y observar con el objetivo de inmersión.
Lectura: Las Gram positivas se observan de color violeta o azul y las Gram
negativas de color rojo.
AZUL DE METILENO GRAM
Medio líquido / Medio sólido Medio líquido / Medio sólido
5. Informe y registro:
Realizar todos los procedimientos de la práctica; en su guía, realizar los

esquemas y anotar todo lo observado.
Investigue y ponga ejemplos (nombres científicos) de 4 bacterias Gram

positivas y de 4 Gram negativas
Gram positivas: Gram negativas
1. .................................................... 1. .................................................
2. .................................................... 2. .................................................
3. .................................................... 3. .................................................
4. .................................................... 4. .................................................
“LO QUE OIGO LO OLVIDO, LO QUE VEO LO RECUERDO, LO QUE HAGO,

LO SÉ”
Confucio
BRMP/
PRACTICA N° 3
METODO BACTERIOLOGICO I Gram +: Obtención de muestras.

Cultivo. Técnicas de siembra.
1. Introducción:
El método bacteriológico comprende una secuencia ordenada de pasos con la

finalidad de llegar a la identificación de un microorganismo a partir de una muestra
problema que puede ser por ejemplo de agua, de alimentos, (leche, carne de
diferentes especies: vacuno, pollo, pescado, etc. o platos preparados), muestras
patológicas (orina, heces, sangre, esputo, secreciones).
Esta secuencia puede ser representada en forma de flujograma o diagrama de flujo,

que es aplicable a la generalidad de muestras y que variará de acuerdo al tipo de
muestra y es el siguiente:
OBTENCION DE MUESTRA
Coloración de Gram (opcional)
CULTIVO EN MEDIO ADECUADO
Incubación a 37°C por 18 a 24 horas
OBSERVACION DE CARACTERES CULTURALES
CULTIVO PARA IDENTIFICACION
Incubación a 37°C por 18 a 24 horas
LECTURA Y DIAGNOSTICO
INFORME FINAL
2. Objetivos:
Al término de la práctica el alumno será capaz de:
- Enunciar y explicar cuál es la característica más importante de una muestra.

- Reconocer el material adecuado para obtener muestras de diferentes tipos.
- Obtener correctamente una muestra de cualquier tipo, sea de productos
patológicos, de alimentos o cualquier otra.
- Realizar en forma correcta el cultivo de diferentes tipos de muestra, teniendo
en cuenta las medidas de asepsia y bioseguridad.
- Realizar en forma ordenada y completa el método bacteriológico para el
estudio de una muestra de secreción faríngea.
- Observar láminas coloradas con Gram proporcionadas por la cátedra.
3. Material
- Asa de Kolle
- Tubo de prueba con torunda estéril
- Bajalenguas estéril
- Placa de agar sangre
- Placa de agar estafilococo
4. Procedimiento
A) Obtención de muestra
Los alumnos harán una lectura previa sobre el tema en su guía y además será
explicado por su profesor de práctica.
Tomar nota de lo explicado y realizar la obtención de muestra de secreción faríngea

de uno de sus compañeros, sembrarla en las placas correspondientes.
Rotular las placas con el número de su mesa y llevarlas a la incubadora.
1. Obtención de muestra:
Es el primer paso del Método bacteriológico (M.B) y uno de los más importantes
ya que de éste depende que logremos aislar e identificar las bacterias que se
encuentren en una muestra.
La muestra, como su nombre lo dice constituye una parte de todo el conjunto de

material que está causando el problema, motivo de nuestro estudio, que puede
ser la orina de un paciente con infección del tracto urinario (ITU), las heces de un
niño con diarrea, la secreción del oído de un lactante o de una herida de la mano
de un cocinero y así tantos otros ejemplos que podemos mencionar. Entonces la
característica más importante que debe tener es que debe ser
REPRESENTATIVA, es decir que sea tomada de un lugar adecuado, la cantidad
suficiente, además debe ser obtenida en condiciones estériles o de asepsia
rigurosa, en el recipiente o medio de transporte adecuado y ser transportada en
el menor tiempo al laboratorio para su procesamiento. Todas estas medidas
serán necesarias para garantizar el éxito de nuestro propósito.
TOMA DE MUESTRAS: La toma apropiada de una muestra para cultivo es posiblemente el paso
más importante en la confirmación final de que un microorganismo es responsable de un proceso
de enfermedad infecciosa. Una muestra mal tomada no sólo puede resultar en la recolección
fallida de microorganismos importantes, sino también conducir a una terapia equivocada y aun
dañina si el tratamiento es dirigido hacia un comensal o contaminante.
Se debe tomar en cuenta las siguientes consideraciones para la toma de muestras:
a) La muestra debe ser de material del sitio real de infección, y tiene que ser tomada
con el mínimo de contaminación de los tejidos, órganos o secreciones adyacentes
b) Debe establecerse los momentos óptimos para la toma de muestras, a fin de contar
con las mejores oportunidades de recuperación de microorganismos causantes de
enfermedad. El conocimiento de la historia natural de la enfermedad y de la
fisiopatología del proceso de enfermedad infecciosa es importante para la
determinación del momento óptimo de recolección de la muestra.
c) Debe obtenerse una cantidad de muestra suficiente para llevar a cabo las técnicas de
cultivo solicitadas
d) Debe utilizarse una serie adecuada de dispositivos de recuperación, envases para
muestras y medios de cultivo. Para la toma de la mayoría de muestras deberían
usarse recipientes estériles. También es importante que el recipiente facilite la toma,
particularmente si el paciente debe obtener su propia muestra. Ej. Frascos de boca
ancha para muestras de esputo y orina. Los recipientes deben tener tapas herméticas
para evitar derrames o contaminaciones durante el transporte.
e) Siempre que sea posible obtener los cultivos antes de la administración de
antibióticos
f) El recipiente de cultivo debe estar adecuadamente rotulado.
TRANSPORTE DE MUESTRAS: El objetivo primario en el transporte de muestras de

diagnóstico, es mantener la muestra tan próxima a su estado original como sea posible, con
deterioro mínimo y minimizando el riesgo que afrontan quienes transportan la muestra, mediante
el uso de recipientes herméticamente cerrados.
La mayor parte de muestras de muestras líquidas deben ser transportadas al laboratorio hasta
un máximo de 2 horas. El medio de transporte Cary-Blair es uno de los más usados, este medio
es esencialmente una solución de tampones con carbohidratos, peptonas y otros nutrientes, con
exclusión de factores de crecimiento, y ha sido planeado para preservar la viabilidad de las
bacterias durante el transporte sin permitir la multiplicación.
RECEPCIÓN DE MUESTRAS: Recibir las muestras en un área acondicionada para ello y con
las medidas pertinentes de bioseguridad (uso de mandil, guantes y barbijo)
RECOLECCIÓN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
HERIDAS Y ABSCESOS
RECOLECCIÓN DE MUESTRAS: Las heridas superficiales a menudo están colonizadas por
bacterias provenientes del medio ambiente, en consecuencia, las muestras recogidas no reflejan
siempre la verdadera causa del proceso infeccioso. La aspiración de líquido cavitario o pus de las
profundidades de las heridas pustulosas o vesiculares y abscesos, con aguja y jeringa estériles, es el
método más apropiado para obtener material para su cultivo. El sitio a partir del cual se va a obtener
el cultivo es el primero en ser descontaminado con jabón quirúrgico y luego alcohol etílico al 70 %. Si
el material no puede obtenerse con aguja y jeringa y hay que usar un hisopo, puede ser necesario
separar los bordes con el pulgar y el índice de una mano (usando guantes estériles) o hacer un
pequeño corte con bisturí en el absceso cerrado antes de extender la punta del hisopo sobre la lesión
con la otra mano. Hay que tener cuidado de no tocar los bordes adyacentes de piel. El hisopo será
ubicado inmediatamente en un recipiente de transporte anaeróbico o inoculado en forma directa en
medio de cultivo para anaerobios o aerobios según las circunstancia.
INFECCIONES EN LA SANGRE
RECOLECCIÓN PARA CULTIVOS DE SANGRE: Los sitios de punción venosa se preparan como
sigue:
1. Lavado con jabón
2. Enjuagado con agua estéril
3. Aplicación con tintura de yodo al 1% o 2% ó povidona yodada
(Isodine®) y permitir secar de 1 a 2 minutos
4. Remover el yodo lavando con alcohol
5. Se pueden obtener cultivos de sangre usando jeringa y aguja o
mediante un sistema cerrado que consiste en un frasco aspirante y un tubo colector con doble
aguja.
2. Cultivo y aislamiento:
En la mayoría de casos el paso siguiente del M.B es el cultivo en un medio

adecuado (agar o caldo), pero dependiendo de la muestra que estemos procesando,
se deben realizar otros procedimientos previos al cultivo.
PROCESAMIENTO DE LOS CULTIVOS:
Una vez que una muestra para cultivo ha sido recibida, deben tomarse las siguientes decisiones clave
para recuperar e identificar los microorganismos que puedan estar presentes:
1. Seleccionar el medio de cultivo primario adecuado para el tipo de muestra en particular.

2. Determinar la temperatura y la atmósfera de incubación, para recuperar todos los
microorganismos potencialmente significativos
3. Determinar cuál de los aislamientos recuperados en el medio primario requiere una caracterización
posterior
4. Determinar si se requieren pruebas de susceptibilidad ante microbianos, una vez que se ha
identificado al organismo.
La decisión de hasta dónde hay que procesar los cultivos de muestras individuales debe estar basada
en un profundo conocimiento de las relaciones huésped-parásito que se aplique a cada caso.
La finalidad de cultivar o sembrar una muestra es conseguir que los

microorganismos que se encuentran en ella, se multipliquen y formen colonias en los
medios semisólidos o desarrollen en un caldo según sea el caso.
Para ello debemos aprender algunas técnicas de siembra:
a) Siembra en medio líquido (caldo)

b) Siembra en medio sólido (agar)
- En tubo . Por puntura

. Haciendo estrías en superficie
- En placa . Por agotamiento

. Por dispersión: *En cuadrantes
*En toda la placa
TÉCNICAS PARA EL CULTIVO DE MUESTRAS:

La inoculación primaria puede ser realizada con un asa o un hisopo. A continuación el inóculo es
estriado en cada cuadrante con un movimiento de adelante hacia atrás, girando la placa en ángulo de
90º. La finalidad de esta técnica es diluir suficientemente el inóculo en la superficie del medio
agarizado, de manera que se puedan obtener colonias de bacterias bien aisladas, denominadas
unidades formadoras de colonias (UFC).
Método por Agotamiento:

El inóculo se coloca sobre una pequeña zona cualquiera del agar en un extremo. Trazar
líneas paralelas por toda la superficie de la placa hasta agotamiento total de la siembra en el
asa. Incubar en la estufa a 37º C por 24 horas.
(Ver esquema en técnicas para cultivo de muestras)
Método por Dispersión:

Con el asa cargada de material, colocar el inóculo en un extremo de la placa y hacer estrías
paralelas. Esterilizar el asa sin tomar nuevo inóculo, trazar otra serie de estrías rotando la
placa en ángulo de 90º empezando desde la última estría, repetir esta operación.
(Ver esquema en técnicas para cultivo de muestras)
Inoculación Agotamiento Dispersión
El medio en los tubos puede ser líquido, semisólido (agar del 0.3 al 0.5%) o sólido (agar 1 al 2%). El
agar semisólido es conveniente para las pruebas de movilidad. Los caldos de cultivo en un tubo
pueden ser inoculados por el método siguiente:
Punto de
inoculación
A B
Los picos de flauta de medio agarizado se inoculan primero por una punción en profundidad del
agar, seguido por un estriado del pico de flauta desde el fondo a la parte superior con un
movimiento en S a medida que se retira el asa.
3. Incubación
Llevar las placas recién cultivadas a la incubadora a 37º C por 18 a 24 horas

PRACTICA N° 4
MÉTODO BACTERIOLÓGICO II: Gram +
1. Introducción
El método bacteriológico constituye una serie de pasos ordenados como vimos

anteriormente, el procesamiento de muestras clínicas, se realiza en varios días,
dependiendo del tipo de las mismas, es por eso que es importante su seguimiento, que
comprende la observación de los caracteres culturales de las bacterias, es decir,
cómo han desarrollado en agar formando colonias, tomando algunos parámetros de
referencia para diferenciarlos de otros, ahora observaremos los cultivos que realizamos
en la práctica anterior y continuaremos la secuencia.
Las vías respiratorias superiores albergan bacterias Gram positivas: Streptococcus viridans,
Staphylococcus epidermidis (albus) y Gram negativas Moraxella catarrhalis, que constituyen la flora
normal de este lugar; cumple una función protectora evitando la invasión de otras bacterias
patógenas. En un buen porcentaje, algunas personas pueden contener una flora transitoria
conformada por Streptococcus pneumoniae (neumococo), o Staphylococcus aureus que son
patógenos, sin presentar ningún síntoma llamándolos portadores “sanos” o asintomáticos.
Streptococcus pyogenes , llamado también Estreptococo beta hemolítico del grupo A, es un patógeno
que causa infecciones agudas como faringitis y faringoamigdalitis; se transmite por vía aérea a través
de microgotas o aerosoles que son eliminados al medio ambiente al toser, estornudar, cantar o
simplemente hablar, causando un síndrome febril intenso , sobre todo en niños, que se acompaña
además de odinofagia (dolor al pasar la saliva o los alimentos), malestar general, tos y presencia de
placas de exudado purulento en faringe o en superficie y criptas amigdalianas.
Staphylococcus aureus: son cocos Gram positivos agrupados en racimos, producen beta hemólisis en
agar sangre, fermentan el manitol salado y son coagulasa y catalasa positivos. Son los patógenos
más resistentes a las condiciones adversas entre las bacterias no esporuladas. Son causa
principalmente de infecciones de piel, heridas y quemaduras, también producen osteomielitis
(infección de los huesos) y menos frecuentemente septicemia y neumonía que son muy graves.
2. Objetivos
o Observar después de la incubación, el crecimiento en las placas y reconocer

los caracteres culturales de las bacterias en los diferentes medios de cultivo.
o Realizar la coloración de Gram de las diferentes colonias.
o Identificar y diferenciar los diferentes tipos de bacterias encontradas
3. Materiales:
- Placas de Agar sangre y Agar estafilococo con cultivos anteriores que presenten
colonias
- Asa bacteriológica (Kolle)
- Batería para coloración de Gram
- Láminas porta objetos
- Microscopios. Estereoscopio
- Mechero Bunsen
- Encendedor
- Láminas coloreadas de estafilococos, estreptococos y neumococos.
4. Procedimiento:
B) Reconocimiento de caracteres culturales:
INTERPRETACIÓN DE LOS CULTIVOS: La interpretación de los cultivos primarios se realiza

luego de una incubación de 24 a 48 horas evaluando el crecimiento de las colonias para decidir si
son necesarios procedimientos adicionales. Esta valoración es realizada anotando las
características y el numero relativo de cada tipo de colonia recuperada en el medio agarizado,
reacción frente a la coloración de Gram y morfología de las bacterias en cada tipo de colonia, y por
la observación de los cambios en el medio que rodea a la colonia, el cual refleja las actividades
metabólicas específicas de las bacterias recuperadas.
Características Culturales más Notorias: Las placas de cultivo estándar son de 100mm de
diámetro y se pueden sostener en una mano para observar la superficie del agar y detectar el
crecimiento bacteriano. Durante el examen las placas deben ser viradas en distintas direcciones
bajo una iluminación brillante y directa, de modo que la luz se refleje desde distintos ángulos. Las
placas de agar sangre también deben ser examinadas por transiluminación de una luz brillante
desde detrás de la placa, para detectar las reacciones hemolíticas en el agar.
Tome la placa sembrada y cerca al mechero y si es posible con ayuda de un

estereoscopio observe las colonias que hayan quedado completamente aisladas,
verifique si son de un sólo tipo o de varios; en todo caso anote las siguientes
características:
Forma, tamaño, borde, elevación, superficie, aspecto, consistencia, hemólisis si

corresponde, e incluso puede usarse el olor de los cultivos como característica para
su identificación
Las siguientes ilustraciones nos ayudan a describir algunas características de las

colonias:
CARACTERES CULTURALES
Plana
Puntiforme Entero
Elevada
Circular Ondulado
Filamentosa Umbilicada
Filamentoso
Rizoide Lacerado Convexa
Irregular Enrulado Acuminada

Forma Borde Elevación
1. Tamaño: Es variable, pequeñas desde colonias puntiformes hasta varios
milímetros, 5 a 7 mm. o más; en algunos casos, depende si están aglomeradas
en un solo lugar.
2. Forma: Puntiforme, circular, irregular, filamentosa, rizoide, festoneada, etc.
3. Color: Dependerá si se debe a la producción de un pigmento característico de

la bacteria, por ejemplo de color amarillo dorado de Staphylococcus aureus, o
verde azulado de Pseudomona aeruginosa, a diferencia de un color adoptado a
partir del medio de cultivo, debido al efecto sobre el mismo, ejemplo las
enterobacterias fermentadoras de lactosa toman un color rosado debido al
indicador de pH (rojo neutro) contenido en el agar MacConkey o en el D.C
(Desoxicolato citrato)
4. Borde: Entero, ondulado, lobulado, filamentoso, rizoide.
5. Elevación: Plana, convexa, acuminada, crateriforme, umbilicada.
6. Superficie: Lisa, rugosa, mate, brillante, húmeda, seca.
7. Aspecto: Opaco, transparente.
8. Consistencia: Cremosa, pastosa, viscosa, mucoide, seca, compacta,

membranosa.
9. Hemólisis: Sólo se observará si el medio de cultivo es agar sangre y puede ser

de tres tipos: parcial (alfa), total (beta) o ausente (gama).
10. Los olores producidos por la acción de ciertas bacterias en medio de agar y en
medio líquido pueden ser muy útiles para la identificación tentativa de los
microorganismos involucrados.
5. Informe y registro:
Esquematice las colonias observadas en las placas de agar. Lo mismo, hacer un

esquema, pero lo observado en el frotis de las colonias con la coloración de Gram
Agar sangre Coloración de Gram

100x
BRMP/
PRACTICA N° 6
LABORATORIO DE VIRUS
2. Introducción
El laboratorio donde se manejan virus, es muy especial, requiere medidas de

bioseguridad muy rigurosas, son muy peligrosos y hay que tener mucho cuidado.
La rabia es la zoonosis viral más antigua conocida, cuya importancia radica en una
letalidad cercana al 100%. El virus pertenece a la familia Rhabdoviridae, género
Lyssavirus tipo 1, tiene forma de bala, mide 130 a 240 por 65 a 80nm, su genoma
posee una sola cadena de RNA, su envoltura está constituida por una capa de lípidos
cuya superficie contiene cinco proteínas estructurales. La rabia se transmite a través
de la mordedura o contacto directo de mucosas o heridas con la saliva de animales
infectados; también se ha documentado su transmisión por trasplante de córnea de un
donante muerto infectado y no diagnosticado, o por aerosoles en cuevas donde
habitan y hay heces de murciélagos, también puede ser transmitido en personal de
laboratorio durante el trabajo en forma accidental.
Los corpúsculos de inclusión llamados corpúsculos de Negri, contienen unidades

infectivas de virus y otros elementos celulares, son cuerpos esféricos, ovalados o
alargados, eosinofílicos, con 2 a 10 micrómetros de diámetro; pueden ser únicos o
múltiples, se encuentran en el citoplasma de las células piramidales del hipocampo y
en las células de Purkinje del cerebelo.
1. Objetivos
- Comprender y explicar cómo funciona un laboratorio donde se trabaja con virus

en otras realidades
- Identificar corpúsculos de Negri en láminas preparadas por la cátedra, con
diferentes coloraciones
2. Materiales
- Video sobre el trabajo en el laboratorio de virus

- Láminas de stock de improntas cerebrales coloreadas con Seller y Mallory
- Aceite de inmersión
3. Procedimiento
- Previamente ver el video del siguiente link https://vimeo.com/69338642
- Visualizar y comprender la explicación de otro video en la sala de práctica
- Observar usando el microscopio óptico, las láminas de los corpúsculos de Negri
coloreadas por la cátedra
- Hacer los esquemas correspondientes en su guía de prácticas
4. Informe y registro
- Realizar los esquemas de lo observado
- Revisar bibliografía relacionada al tema
- Responder las interrogantes planteadas
CORPÚSCULOS DE NEGRI
COLORACIÓN DE SELLER COLORACIÓN DE MALLORY

100x 100x
Preguntas:
1. ¿A cuánto equivale un nanómetro, en relación a un milímetro?

…………………………………………………………………………………………….
2. ¿Dónde o en qué se cultivan los virus?
…………………………………………………………………………………………….
…………………………………………………………………………………………….
…………………………………………………………………………………………….
3. ¿A qué temperatura se conservan los virus?.........................................................
4. ¿Qué nivel de bioseguridad se debe aplicar cuando se trabaja con virus?

……………………………………………………………………………………………
5. ¿Dónde están localizados los corpúsculos de Negri?

…………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………..
6. ¿Qué color toman los corpúsculos de Negri con la coloración de Seller y de Mallory?
Con Seller………………………………………………………………………………..
Con Mallory………………………………………………………………………………
Continuación de la práctica de Método bacteriológico II Gram +
Prueba de sensibilidad a antibióticos: ANTIBIOGRAMA:
Utilizaremos el método de Kirby-Bauer, que consiste en lo siguiente:
Una vez identificadas las bacterias, tomar la placa y con el asa previamente
esterilizada y enfriada, hacer un barrido de varias colonias (4 ó 5), inocular en los 0,5
mL de caldo simple o peptonado, homogenizarlas hasta formar una emulsión que sea
comparable con el tubo 0,5 de la Escala de McFarland.
Con un hisopo tomar un inóculo, escurriendo el exceso en las paredes del tubo y
sembrarlo con el mismo hisopo en forma uniforme, dispersándolo en toda la superficie
de la placa de agar Mueller Hinton.
Esperar unos minutos para que seque la superficie o colocar la placa semi abierta en
la incubadora, luego con una pinza esterilizada y enfriada cada vez, colocar los discos
de papel filtro que contienen los antibióticos de diferente tipo y concentración. La
elección de los discos será de acuerdo al tipo de bacteria aislada, sea una Gram + o
una Gram -.
Llevar la placa a incubación por 18 a 24 horas a 37°C a la estufa
Lectura del antibiograma se hace teniendo en cuenta el efecto que han tenido los
antibióticos sobre el crecimiento bacteriano.
Lo que se observará será la formación de un halo de inhibición, cuyo diámetro debe

ser medido para compararlo con las tablas que existen, pero en líneas generales se
puede considerar tres tipos de respuestas:
SENSIBLE : Halo de inhibición de 15 a 20 mm o más.

INTERMEDIO : de 10 a 15 mm
RESISTENTE : < de 10 mm
ESQUEMATICE RESULTADOS
DEL ANTIBIOGRAMA
BRMP/
PRACTICA N° 7
PRUEBAS O REACCIONES INMUNOLÓGICAS

AGLUTINACIÓN: GRUPOS SANGUÍNEOS
PRECIPITACIÓN: VDRL O RPR
1. Introducción:
Se conoce como antígeno a cualquier sustancia capaz de unirse a un anticuerpo

o a un receptor de la célula T. Ahora se sabe que cualquier molécula biológica,
incluyendo metabolitos intermediarios, azúcares, lípidos, hormonas, como
también macromoléculas tales como hidratos de carbono, fosfolípidos, ácidos
nucleicos y proteínas, pueden servir de antígenos. Sin embargo, sólo las
macromoléculas, pueden iniciar la activación linfocitaria.
Los anticuerpos o inmunoglobulinas, son moléculas de proteínas capaces de

combinarse con determinantes antigénicos. Se hallan presentes en el suero y
líquidos corporales como las secreciones gástricas y la leche materna. Las
inmunoglobulinas se dividen en Ig A, Ig D, Ig E, Ig G e Ig M.
La respuesta inmune por parte del organismo, con la producción de anticuerpos

(respuesta humoral) o mediada por células (respuesta celular) se da en un
mismo momento, pero se estudia en forma separada sólo con fines didácticos.
Las reacciones Antígeno - Anticuerpo, son llamadas también reacciones o

pruebas inmunológicas, son específicas y se utilizan en el laboratorio como
método de Diagnóstico Inmunológico de enfermedades o de estados fisiológicos,
en las que vamos a determinar la presencia de un anticuerpo (Ac), cuando
conocemos al antígeno o determinamos la presencia de un antígeno (Ag)
conociendo el anticuerpo.
Existen muchas reacciones de este tipo, como la determinación de grupos

sanguíneos y factor Rh, la reacción de Widal para diagnóstico inmunológico de
fiebre tifoidea, de Huddleson para brucelosis, de Paul Bunnel para mono
nucleosis infecciosa, de V.D.R.L para sífilis, la de E.L.I.S.A para VIH, Hepatitis A,
B o C, Chagas, etc., Western blot para VIH, test de pregnosticón para embarazo,
prueba de látex para artritis reumatoidea, etc.
Clasificación:
Debemos diferenciar dos tipos entre las reacciones inmunológicas.

A. R. de aglutinación
B. R. de precipitación
a) Reacción de aglutinación: Se llama así cuando el antígeno que utilizamos es

particulado, no soluble como por ejemplo: células (glóbulos rojos, bacterias) o
elementos inertes como esferas de látex a los que se les recubre con el antígeno
deseado.
El anticuerpo se une a los antígenos formando redes finas de Ag-Ac o
conglomerados que pueden ser observados como grumos finos pequeños a
simple vista. Para ello también es necesario que las cantidades de ambos sea
equiparable y una temperatura adecuada para que se produzca la reacción.
Ejemplos: Determinación de grupos sanguíneos y factor Rh, hemaglutinación en

lámina o en tubo, reacción de Widal para diagnóstico de Fiebre tifoidea entre
otras.
b) Reacción de precipitación: Se llama así cuando el antígeno que utilizamos se

encuentra en forma soluble, no particulado; y cuando se produce la reacción
antígeno-anticuerpo, se forma un precipitado de micelas grandes, observables a
simple vista, que se califican de acuerdo a la cantidad producida de éstas.
Ejemplo: Reacción de V.D.R.L (Venereal Diseases Research Laboratory) para el

diagnóstico de sífilis, o su equivalente la reacción R.P.R. que se diferencia de la
anterior en que se han agregado partículas de carbón, para hacer visible la
reacción a simple vista.
A. Determinación de grupos sanguíneos y factor Rh
Los anticuerpos generalmente se producen como respuesta a la inoculación de

antígenos extraños; sin embargo el hombre y los animales tienen anticuerpos
contra antígenos que nunca se les ha inoculado. Por eso a estos anticuerpos se
les llama iso-anticuerpos. Dentro de este grupo están los responsables de los
grupos sanguíneos llamados iso-aglutininas.
Los glóbulos rojos contienen en su superficie iso-antígenos llamados también

aglutinógenos (A y B), constituidos por glicoproteínas y son hereditarios.
Existen cuatro grupos sanguíneos: A, B, AB y O, descubiertos por Landstainer en

1900, como resultado de las combinaciones de los antígenos A y B. El plasma
sanguíneo contiene anticuerpos contra los antígenos ausentes, de modo que el
antígeno (Ag) y el anticuerpo (Ac), correspondiente no coexisten en la misma
persona.
La determinación de los grupos sanguíneos es importante, ya que se podrán

evitar reacciones Ag-Ac cuando se realizan transfusiones sanguíneas entre
personas diferentes que podrían causar la muerte; además son fáciles de realizar.
Existe otra clase de antígenos en los eritrocitos, que fueron descubiertos en

monos Rhesus, corresponde al factor Rh o antígeno D, siendo de importancia
clínica ya que existen personas que presentan este antígeno en sus glóbulos
rojos (Rh+) y otras que no los tienen (Rh-). En ambos casos no existen
anticuerpos en el plasma. El problema surge cuando una persona con Rh - recibe
sangre de otra Rh +, se produce una reacción inmediata que provoca la muerte: y
también cuando una mujer Rh – concibe un hijo Rh +, la madre es sensibilizada
en el momento del parto cuando la sangre de la placenta regresa hacia ella y va a
producir anticuerpos contra los glóbulos rojos del feto que tienen el antígeno Rh +.
Cuando tiene otro hijo, los anticuerpos producidos (Ig G) atraviesan la placenta y
van a ocasionar destrucción de los glóbulos rojos del nuevo feto produciéndole
una anemia hemolítica intraútero y probablemente la muerte antes o poco tiempo
después del nacimiento, a esto se le conoce como Eritroblastosis fetal.
2. Objetivos
- Observar reacciones Ag-Ac: Reacción de aglutinación

- Determinar el grupo sanguíneo y factor Rh de un donante.
3. Materiales
- Lámina portaobjetos excavada y limpia

- Lanceta estéril
- Alcohol yodado, torundas de algodón
- Reactivos: . Suero anti A (color celeste)
. Suero anti B (color amarillo)
. Suero anti Rh o anti D (incoloro)
- Muestra de sangre del donante.
4. Procedimiento
1. Con el lápiz de cera marcar cada una de las excavaciones con las letras A, B
y Rh respectivamente.
2. Previa antisepsia del pulpejo del dedo medio o anular, con ayuda de una
lanceta estéril, obtener tres gotas de sangre de su compañero donante y
colocarlas en cada una de las excavaciones.
3. Colocar una gota de suero anti A, sobre la gota de la excavación A.
Una gota de suero anti B, en la de la excavación B y una gota de suero anti
Rh en la excavación correspondiente.
4. Mezclar con mondadientes distintos en cada caso; pasar por la llama del
mechero suavemente, ir rotando la lámina durante unos 5 a 10 segundos
5. Observar la reacción producida dentro de los próximos 3 a 5 minutos.
6. Anotar los resultados.
Lectura:
Aglutinación positiva: Cuando los hematíes se adhieren entre sí, formando

grumos finos y dejando el fondo limpio
Aglutinación negativa: Cuando los hematíes permanecen en suspensión

homogénea, no hay grumos, NO se produjo aglutinación
A Rh B
5. Informe y Registro
Realizar todos los procedimientos indicados y efectuar los esquemas
correspondientes en su guía.
Revisar bibliografía y hacer una tabla donde figure:
Grupo sanguíneo Antígeno Anticuerpo Puede donar Puede recibir

A
B
AB
O
B. VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory) o RPR (Rapid plasma

reagin)
Es utilizada como prueba de “screening” o tamizaje para detectar personas que

puedan estar infectadas con el Treponema pallidum. Es considerada una prueba
sensible pero no específica para diagnóstico de Sífilis ya que utiliza un antígeno
que no es de la bacteria, la cardiolipina de corazón de buey y puede dar
reacciones cruzadas con otras enfermedades, pero es muy útil si se trata de
investigar grandes poblaciones. Resulta más precisa cuando es cuantitativa y se
utilizan diluciones de suero obteniendo títulos de anticuerpos contra la reagina
La RPR sólo se diferencia de VDRL porque se añaden partículas de carbón lo

cual permite visualizar mejor el resultado de la precipitación del Ag y el Ac.
1. Materiales:
Antígeno (cardiolipina + partículas de carbón)

Control positivo y control negativo
Tarjetas de reacción
Botella y aguja de dispensado
Pipeta/mezclador
Suero problema
Agitador automático
2. Procedimiento:
3. Dispensar una gota de suero problema sobre el círculo de

la tarjeta, usando la pipeta/mezclador.
4. Extender la muestra en toda el área del círculo con el
extremo plano de la pipeta/mezclador
5. Empleando el dispensador, dejar caer una gota del
antígeno sobre la muestra.
6. Inmediatamente rotar la tarjeta en agitador automático
durante 4 minutos a 100 rotaciones/minuto
7. Transcurrido el tiempo indicado, observar el resultado
bajo una buena fuente de luz.
Con cada tanda de muestras, se recomienda correr un control positivo y un control

negativo, para comprobar la correcta realización del ensayo.
3. Lectura:
Suero reactivo: Agregados grandes o medianos

Suero débilmente reactivo: Agregados finos y dispersos
Suero no reactivo: No se observa ningún agregado

PRACTICA N° 8
LABORATORIO DE HONGOS CONTAMINANTES Y LEVADURAS
1. Introducción
Los hongos filamentosos contaminantes, son microorganismos multicelulares,

saprofitos que se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza, tierra,
vegetales, agua, alimentos, excretas, etc. Algunos son frecuentemente contaminantes
de laboratorio y otros son importantes como productores de antibióticos, u otros
productos en la industria, tenemos por ejemplo a Penicillium, Aspergillus, y
Rhizopus.
Algunas especies están relacionadas con enfermedades del oído, bronquios y

pulmones, como las de los géneros Aspergillus y Mucor
Por otro lado, las levaduras, pertenecen al orden de los Eumicetos, son unicelulares y
existen los que forman parte de la flora normal de nuestro organismos, como Candida
albicans, que se encuentra en el tracto digestivo, tracto genital y piel o puede
comportarse como un patógeno oportunista, en personas con inmunodeficiencias y
produce las llamadas candidiasis, oral, vaginal etc.
Hongos filamentosos
Penicllium:
Es el hongo más común entre todos los contaminantes del laboratorio y el medio
ambiente, lo cual de tenerse en cuenta en la preparación y conservación de los
alimentos.
Se desarrollan en agar Sabouraud entre 4 a 6 días y crecen bien entre 4 y 45° C.

Inicialmente es una colonia blanca que se torna verde azulada o verde amarillo al
fructificar; pero existen especies de otros colores. La superficie es aterciopelada o
lanosa, estriada o lisa con reverso incoloro a amarillento, conidióforo hialino de pared
lisa o rugosa, simples o ramificados.
Aspergillus
Conocido también como contaminante frecuente en el medio ambiente, es también
agente causal de enfermedad en pacientes debilitados (otitis, oftalmitis, aspergillosis
pulmonar invasiva, etc.)
Las colonias presentan aspecto lanoso de color blanco o amarillo en el comienzo y
posteriormente de color negro. El reverso de la colonia es de color blanco o amarillo.
Las conidióforos tienen forma radiada, las vesículas son globosas o subglobosas. Las
fiálides nacen sobre métulas hialinas.
Rhyzopus:
Suele encontrarse también contaminando alimentos de ahí su nombre, “hongo del
pan”. Es un hongo invasor, en el cultivo el micelio aéreo es de crecimiento rápido,
algodonoso, inicialmente blanco, que va ennegreciendo en forma paulatina, por la
maduración de los esporangios. El reverso de la colonia es incoloro.
Cultivo: Los hongos filamentosos desarrollan bien a partir del 5º día, en agar
maltosado o glucosado de Sabouraud, a temperatura ambiente y en la oscuridad.
Levaduras:
Candida albicans es la especie más frecuente encontrada en la flora normal del
hombre, existen otros géneros importantes en la industria alimentaria, como
Sacharomyces cerevisiae, que es usado en la producción de la mayor parte de
bebidas fermentadas, cerveza, vino, chicha de diferentes tipos, también de pan, etc.
Cultivo:
Se emplea también el medio agar Sabouraud. Una vez obtenida la muestra se pone
una pequeña porción en un extremo del agar, luego con el asa de siembra dispersarla
en toda la placa. Se incuba a 37° C por 24 a 48 horas.
2. Objetivos
o Observar y reconocer cultivos de hongos filamentosos contaminantes
o Preparar y colorear una muestra de dichos hongos con Azul de lactofenol
o Observar y reconocer los caracteres de cultivos de levaduras
o Preparar frotis de levaduras colorearlas con Gram y observar al microscopio
3. Materiales
- Placas de cultivo con hongos contaminantes: Penicllium, Aspergillus, Rhizopus

- Placas con cultivo de Candida albicans
- Láminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Escuadra y asa de Kolle
- Mechero Bunsen, encendedor
- Colorante azul de lactofenol
- Láminas de stock de hongos dermatofitos
4. Procedimiento
- Observar los caracteres culturales de los cultivos de hongos contaminantes.

- Tener cuidado de NO VOLTEAR LAS PLACAS NI DEJARLAS DESTAPADAS.
- Preparar un montaje del cultivo de hongos contaminantes para lo cual se seguirán los
siguientes pasos: Colocar en una lámina p.o dos gotas del colorante azul de
lactofenol. Cortar con la escuadra de Kolle esterilizada previamente en el mechero,
un trozo pequeño de agar con cultivo de los hongos y colocarlo sobre el colorante,
colocar una laminilla cubreobjetos; pasar la lámina por el mechero al calor suave
para derretir el agar y presionar con el mango de la escuadra para que se haga más
delgado.
- Observar al microscopio con objetivo de 40x. Hacer los esquemas en su guía.
- Preparar frotis de levaduras como si fueran de bacterias y colorearlos con Gram
- Observar éstos al microscopio con objetivo de inmersión 100x
- Observar las láminas proporcionadas por la cátedra también con objetivo de mayor
aumento y hacer los esquemas correspondientes
Realice los esquemas correspondientes de lo observado
HONGOS FILAMENTOSOS COTAMINANTES

Coloración de Azul de lactofenol
Penicillium sp Aspergillus sp
40x 40x
Rhizopus sp
40x
HONGOS LEVADURIFORMES
Coloración Gram Coloración Azul de lactofenol
Candida albicans Candida albicans
100x 40x
BRMP/
PRACTICA N° 10
LABORATORIO DE BAAR: COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN
1. Introducción
Mycobacterium tuberculosis, bacilo fino, muy delgado, aerobio estricto, no se tiñe

con Gram, es difícil de teñirlo, para hacerlo se utiliza una coloración especial: Ziehl-
Neelsen, pero una vez teñido es difícil decolorarlo con una mezcla de alcohol-ácido,
es por eso que se les conoce como Bacilos Alcohol Acido Resistentes (B.A.A.R);
crece muy lentamente, su tiempo de generación es de 12 a 18 horas; crece en
medios de cultivo especiales, contienen yema y albúmina de huevo, almidón o fécula
de papa, como el de Lowestein-Jensen o el Ogawa que contiene asparragina; forma
colonias a las 3 semanas de incubación, éstas son secas y duras, de color crema,
difíciles de disgregar. Resisten a los ácidos y álcalis, son sensibles a las R.U.V.
Es el agente etiológico de la tuberculosis pulmonar, la forma más frecuente de la
enfermedad; a partir de aquí se disemina a otros órganos y puede reactivarse
cuando los mecanismos defensivos están venidos a menos como consecuencia de
una desnutrición, crecimiento rápido o una enfermedad anergizante (sarampión p.e),
dando las llamadas formas extra pulmonares.
Los síntomas más característicos son: tos seca al inicio que luego se hace
productiva con espectoración mucopurulenta y es crónica, por más de 15 días.
Coloración de Ziehl-Neelsen: Es una coloración compuesta que sirve para teñir

Bacilos Alcohol Acido Resistentes (B.A.A.R), como el bacilo que produce la
tuberculosis; esta característica es debida a la gran cantidad de lípidos que presenta
su pared celular y no se tiñen fácilmente con la coloración de Gram y una vez
teñidas con la fucsina, se resisten a ser decoloradas.
2. Objetivos
- Aplicar el método bacteriológico a una muestra de esputo para el diagnóstico de

tuberculosis pulmonar
- Realizar correctamente la coloración de Ziehl Neelsen
- Reconocer y describir colonias de Mycobacterium tuberculosis
- Practicar las medidas de bioseguridad para el manejo de algunas muestras.
3. Material
Coloración de Ziehl-Neelsen:
- Láminas portaobjeto con frotices de esputo autoclavado ya preparados.

- Colorante de Ziehl-Neelsen (fucsina fenicada).
- Alcohol ácido (alcohol al 95% + ác. clorhídrico 3%)
- Colorante de Azul de metileno al 1%
- Mechero Bunsen y de alcohol
- Tubos de Lowestein-Jensen con cultivos de Mycobacterium tuberculosis
4. Procedimiento
Para el diagnóstico de la tuberculosis pulmonar, debe tomarse una muestra de

esputo o secreción bronquial, la primera de la mañana, en un frasco limpio de boca
ancha, no necesariamente estéril, el paciente debe previamente enjuagarse la boca
y luego de un esfuerzo de tos, eliminar la secreción en el frasco y llevarla al
laboratorio lo antes posible.
Preparar un frotis del esputo con ayuda de un palito que luego será descartado en el
frasco con desinfectante, el frotis no debe ser muy delgado ni muy grueso, debe
abarcar las 2/3 partes de la lámina p.o. NO fijarla al calor.
Colocarla en el soporte de láminas en el lavatorio y proceder a realizar la coloración
de Ziehl-Neelsen
Por razones de bioseguridad se usarán frotis de muestras de esputo negativas y

será realizada por los estudiantes como se describe a continuación
Coloración de Ziehl-Neelsen:
 Colocar la lámina en el soporte sobre el lavatorio.

 Cubrir TODA la lámina con el colorante de Ziehl.
 Con el mechero aplicar calor por debajo de la lámina hasta la emisión de
vapores blancos; retirar el fuego; calentar el p.o. nuevamente. Repetir esta
operación en forma intermitente durante 5 minutos. No dejar que hierva ni
que se seque, restituir el colorante si fuera necesario. Enfriar y eliminar el
colorante.
 Lavar con agua corriente.
 Decolorar con alcohol ácido hasta que quede con un tenue color rosado.
Lavar con agua corriente.
 Cubrir el frotis con azul de metileno durante un minuto. Lavar.
 Dejar secar y observar al microscopio con objetivo de inmersión.
El cultivo de Mycobacterias y en este caso Mycobacterium tuberculosis, requiere de

condiciones especiales de bioseguridad, en cámaras de aislamiento con flujo laminar
y ropa especial, por lo que no es posible realizarlo en una sala de prácticas como
ésta ya que expondríamos innecesariamente a los estudiantes a un riesgo de inhalar
las bacterias y enfermar posteriormente.
Por ello, se distribuirá en cada grupo, un tubo con medio de Lowestein-Jensen que
contenga colonias de B.K para ser observadas y describir sus caracteres culturales.
 Observación de tubos con cultivos de Mycobacterium tuberculosis
¡PROHIBIDO DESTAPAR LOS TUBOS!
Limítese a observar, tenga cuidado al manipularlos, hágalo siempre sobre la mesa.

Observación microscópica: Observe y realice los esquemas correspondientes
COLORACIÓN DE ZIEHL - NEELSEN
Muestra de esputo Lámina de stock

100x 100x
Lectura: Los B.A.A.R se ven de color rojo brillante y los demás elementos que
hay en el frotis (células, bacterias, etc.,) se ven de color azul celeste.
Esquematice lo observado en los tubos de Lowestein Jenssen
Mycobacterium tuberculosis
BRMP/
PRÁCTICA N° 12
MÉTODO BACTERIOLÓGICO I GRAM -

Urocultivo
Coprocultivo
1. Introducción
La familia Enterobacteriaceae comprende más de 20 géneros y aproximadamente

100 especies de bacterias que como su nombre lo dice, la mayoría de ellas son
habitantes normales del intestino del hombre y los animales. Como características
comunes a todas ellas tenemos que son bacilos Gram negativos aerobios,
anaerobios facultativos, fermentan la glucosa con producción de ácido, reducen los
nitratos a nitritos y son oxidasa negativa.
Crecen en medios selectivos y diferenciales que contienen carbohidratos, sales

biliares e indicadores de pH, entre otros ingredientes, como el agar MacConkey
(M.C), Desoxicolato citrato (D.C), Eosina azul de metileno (EMB), donde forman
colonias circulares convexas de bordes definidos; algunas fermentan lactosa
adoptando un color rosado (Lactosa +), diferenciándose de las que no lo hacen, que
no se pigmentan (Lactosa -). También pueden crecer en agar sangre y algunas son
hemolíticas.
Para identificarlas se utilizan algunas pruebas bioquímicas que incluyen patrones de

fermentación de carbohidratos (glucosa, sacarosa, lactosa), donde se evalúa
además la producción de gas a partir de la glucosa y la producción de H 2S, para ello
se utiliza el medio de T.S.I; por otro lado puede evaluarse la descarboxilación o
desaminación de aminoácidos como la lisina, esto en medio L.I.A, finalmente la
producción de Indol a partir del triptofano, en caldo peptonado.
Es importante también considerar algunas características como la presencia de

cápsula, por ejemplo es muy prominente en Klebsiella, en Enterobacter, pero en
otras especies es poco común; otra es la movilidad por la presencia de flagelos, casi
todas son móviles a excepción de Shigella y Klebsiella por ejemplo.
Escherichia coli es parte de la flora normal del intestino pero cuando sale de su
hábitat es la primera causa de Infecciones de Tracto Urinario (I.T.U), seguido de
otras como Klebsiella, Enterobacter, Proteus. Esto ocurre con más frecuencia en
mujeres por sus características anatómicas, pero también se produce en varones,
sobre todo niños si tienen malformaciones congénitas del sistema urinario o en
adultos de la tercera edad con problemas de agrandamiento de la próstata
(Hipertrofia Benigna, HBP) y son cateterizados.
INFECCION DE LAS VÍAS URINARIAS
RECOLECCIÓN DE MUESTRAS DE ORINA PARA CULTIVO: Con excepción de la mucosa

uretral que soporta el crecimiento de una microflora, la vía urinaria normal suele carecer de bacterias.
Dado que la uretra de los hombres y mujeres, alojan microorganismos, la orina puede contaminarse
con facilidad con bacterias del canal vaginal y del perineo.
TÉCNICA DE RECOLECCIÓN DEL CHORRO MEDIO: En las mujeres el área periuretral y el perineo
se limpian primero con dos o tres torundas de gasa saturados en agua jabonosa, mediante un
movimiento de adelante hacia atrás, seguido por enjuague con solución salina o agua estéril. Los
labios deberían ser apartados durante la evacuación, y los primeros pocos mililitros de orina pasados
a una chata o inodoro para arrastrar las bacterias de la uretra. La porción media de la orina luego es
recogida en un recipiente estéril de boca ancha que puede ser cubierto con una tapa ajustada.
La preparación con agua jabonosa no se requiere para hombres; más bien una limpieza simple del
meato urinario inmediatamente antes de la evacuación y luego la toma de la muestra del chorro
medio suele ser suficiente.
RECOLECCIÓN CON CATÉTER: La cateterización debe restringirse a pacientes imposibilitados de

producir una muestra de chorro medio. Los primeros mililitros del catéter deben ser descartados para
lavar todos los microorganismos que pueden hallarse alojados en la punta del catéter durante el
tránsito a la uretra. En los pacientes que ya tienen colocado un catéter vesical se pueden obtener
muestras de orina mediante su punción con una aguja Nº 28 con jeringa, asegurándose de realizar la
antisepsia del área donde se va a pinchar.
Sólo en neonatos y lactantes jóvenes, en los cuales se tomaron precauciones especiales se pueden
obtener muestras de orina de bolsas de recolección.
ASPIRACIONES SUPRAPÚBICAS: Están reservadas casi con exclusividad a los neonatos y niños
pequeños. Este procedimiento se lleva acabo cuando la vejiga está llena. La piel suprapúbica que
cubre la vejiga se desinfecta y se ponen en el lugar gasas estériles. Al lado del sitio en que se va a
hacer la perforación se inyecta de manera subcutánea un mililitro de solución anestésica. Con la
punta de un bisturí afilado, se hace una pequeña incisión a través de la epidermis. Por la herida se
extiende con suavidad una aguja de calibre 18, de bisel corto, dentro de la vejiga y se aspiran 10 ml
de orina dentro de una jeringa.
INFECCIONES DEL TRACTO GENITAL
RECOLECCION DE MUESTRAS GENITALES DE HOMBRES: Cuando la descarga uretral es

escasa y los diplococos intracelulares no aparecen en una muestra al azar, la toma de la primera
muestra de la mañana, antes de orinar, suele ser útil. El exudado puede extraerse con suavidad por el
orificio uretral mediante una delicada presión del pene; si no se obtiene material con rapidez, puede
insertarse la punta de un hisopo delgado de algodón, rayón o dacrón en un soporte de aluminio o
plástico 3 o 4 cm. en la uretra anterior. Es conveniente que el hisopo permanezca en el lugar unos
pocos segundos, para que las fibras se saturen con el exudado. Si se está obteniendo una muestra
para el cultivo de Chlamydias, el hisopo deberá rotarse 360 grados para despegar células epiteliales.
Dado que N. gonorrhoeae y C. trachomatis son sensibles a la desecación y el enfriamiento, es
necesario un medio de transporte adecuado si se los va a recuperar en cultivo.
RECOLECCIÓN DE MUESTRAS GENITALES DE MUJERES: Las muestras cervicales se

obtienen con un espéculo, después de eliminar el moco cervical con un hisopo grande. Para obtener
la muestra se recomienda un hisopo más pequeño, con el asa de plástico y punta de dacrón o
poliéster. La punta se inserta unos pocos milímetros después del os cervical, se rota con firmeza para
obtener exudado y células cervicales, y se retira teniendo cuidado de no tocar las paredes del canal
vaginal. Los extendidos del material obtenido deberían hacerse de inmediato, para preparar una
tinción de Gram, una preparación en portaobjetos o ambas, para la detección directa del antígeno. El
material remanente debe inocularse son rapidez en un medio de cultivo selectivo o en un sistema de
transporte como el Stuart modificado.
Por otro lado debe mencionarse la importancia de un grupo de bacterias llamadas

coliformes que junto a Escherichia coli, van a servir como indicadores de
contaminación fecal de alimentos y agua, éstas son Klebsiella sp. Enterobacter sp.
Citrobacter sp.
Existen dos especies patógenas intestinales importantes, las salmonellas, que son
causa de la Fiebre tifoidea, las “fiebres intestinales”, como también las salmonellosis
y las shigellas que causan la disentería bacilar (deposiciones con moco y sangre),
que son adquiridas a través del consumo de alimentos contaminados con heces de
personas enfermas, convalecientes o portadoras asintomáticas como es el caso de
Salmonella typhi, que se aloja en la vesícula.
Existen algunos serotipos de Escherichia coli que también son patógenos
intestinales como E. coli enterotoxigénica (ECET), E.coli enterohemorrágica
(ECEH), E. coli enteropatógena (ECEP) y E. coli enteroadherente (ECEAd) o
enteroagregativa, que son difíciles de diferenciar inclusive bioquímicamente, es
necesario realizar pruebas serológicas especiales.
2. Objetivos
- Aplicar el método bacteriológico para realizar un Urocultivo (orina)

- Aplicar el método bacteriológico para realizar un Coprocultivo (heces)
- Sembrar los medios de cultivo para pruebas bioquímicas
- Reconocer los medios de cultivo que son utilizados en cada caso anterior.
- Realizar la coloración de Gram de las colonias L+ y L-
3. Materiales
- Muestra de orina en frasco estéril

- Muestra de heces en Cary Blair (medio de transporte)
- Tubos con caldo Selenito
- Placas con agar MacConkey M.C, Desoxicolato citrato D.C
- Placas con cultivo de bacterias Lactosa + y Lactosa – para diferenciarlas.
- Tripletes de tubos de identificación bioquímica inoculados con las bacterias
entéricas más representativas (E.coli, Salmonella typhi, Shigella, Proteus).
- Reactivo de Kovac
- Láminas portaobjetos
- Asa y aguja de Kolle
- Pinza
4. Procedimiento
Cada profesor hará un repaso del método bacteriológico y hará que los alumnos
deduzcan cómo debe realizarse para cada una de las muestras a estudiar en esta
práctica: orina y heces, seguirán los pasos del flujograma adjunto.
Se sembrarán las muestras de orina y heces en los medios de cultivo respectivos
como indica el flujograma correspondiente.
Se observarán las características culturales de los dos tipos de enterobacterias
sembradas en agar M.C, lactosa positivas y lactosa negativas.
Se realizará una coloración de Gram de las dos enterobacterias L+ y L- para

comparar sus características morfológicas y tintoriales y para que adquieran más
práctica en la realización de esta coloración.
Se procederá a sembrar los tubos para identificación bioquímica, T.S.I, L.I.A y el
caldo peptonado para la prueba de indol.
Luego de esta evaluación, si se trata de bacterias entéricas, debe procederse a la

identificación bioquímica, para lo cual debe elegirse una colonia representativa y que
esté aislada completamente, marcarla encerrándola en un círculo para proceder a la
siembra de la siguiente manera:
B) Inoculación del T.S.I, L.I.A, y caldo peptonado:
1. Siempre trabajar frente al mechero encendido; marcar los tubos para su

identificación, tomar la aguja de Kolle, esterilizarla, esperar un momento o
enfriarla en una parte del agar de la placa donde no haya cultivo, picar (tocar)
la colonia elegida, sólo en la superficie, no tocar el fondo.
2. Tomar el tubo de TSI, con cuidado introducir la aguja por el centro hasta unos
milímetros antes del fondo, no tocarlo; retirar por el mismo lugar y al salir estriar
en zigzag en la superficie inclinada.
3. Sin esterilizar la aguja, es decir con el mismo inóculo introducirla en el medio

en el medio LIA, pero en tres puntos diferentes, como formando un triángulo,
retirar con cuidado y estriar también en la superficie.
4. Finalmente inocular lo queda en el caldo peptonado.
5. Llevar a la incubadora a 37°C durante 18 a 24 horas, luego proceder a la

lectura con la ayuda de las tablas para este fin e interpretar los resultados.
C) Siembra en agar S.S a partir del caldo selenito:
1. Marcar la placa de agar S.S
2. Esterilizar el asa bacteriológica, enfriar y tomar una gota del caldo selenito
previamente incubado y sembrar por dispersión en cuadrantes en el agar S.S.
3. Colocarlo en la incubadora a 37°C durante 18 a 24 horas.
4. Transcurrido este tiempo observar los caracteres culturales de las nuevas

colonias y si es necesario realizar nuevas pruebas de identificación bioquímica
Anotar resultados y realizar esquemas de todo lo observado durante la práctica, que

será motivo de la evaluación.
 Observación Microscópica:
L+ L-
Cultivo enterobacterias Urocultivo / Coprocultivo

Coloración Gram Coloración Gram
UROCULTIVO
(CUANTITATIVO)
Obtención de la muestra (Condiciones)
Observación de caracteres macroscópicos
Examen del sedimento
Coloración de Gram
(opcional)
Cultivo en Agar MacConkey (M.C)

(Asa calibrada)
Agar sangre
Incubación a 37º C, 24 horas
Observación de caracteres culturales
Recuento de colonias
Siembra en medios de identificación bioquímica

(T.S.I, L.I.A, Indol)

Lectura pruebas bioquímicas
DIAGNOSTICO MICROBIOLÓGICO
CUANTITATIVO
Antibiograma
Lectura antibiograma
INFORME FINAL
BRMP/
COPROCULTIVO
Obtención de la muestra
(Transporte en Cary Blair)
Siembra en Agar D.C Siembra en caldo Selenito
Observación de caracteres culturales
Siembra en medios para identificación Siembra en Agar S,S

Bioquímica (T.S.I, L.I.A, Indol) (Salmonella-Shigella)
Incubación a 37° C, 24 horas
Lectura de Pbs. Bioquímicas Crecimiento
DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO No Sí
Pbs. Bioquímicas
Incubación
Lectura
DIAGNÓSTICO FINAL
BRMP/
PRÁCTICA N° 13
MÉTODO BACTERIOLÓGICO II GRAM –
Urocultivo Continuación
Coprocultivo Continuación
Prueba de sensibilidad antimicrobiana: Antibiograma
1. Introducción:
Luego de la siembra e incubación y una vez caracterizados los cultivos, muchas veces
no es posible dar un diagnóstico, porque algunas bacterias son parecidas entre ellas y
es necesario recurrir a otras pruebas más sutiles que permitan diferenciarlas con más
precisión y se tienen que hacer pruebas metabólicas, de tipo bioquímico y es lo que
haremos a continuación e inclusive pueden hacerse pruebas inmunológicas o de
tipificación por bacteriófagos, esto más que todo con fines de investigación.
En algunos casos debe continuarse con el método e implica la siembra en otros medios
de reaislamiento a partir de medios de enriquecimiento como el caldo Selenito del
coprocultivo.
Finalmente realizaremos la prueba de sensibilidad frente a antibióticos, esto es una

vez aislado un microorganismo es necesario averiguar con qué droga eliminarlo del
organismo cuando se trata de un patógeno específicamente.
2. Objetivos:
- Observar las propiedades metabólicas de las enterobacterias (Pruebas bioquímicas)

- Hacer la lectura de los tripletes que sembraron y los que se les presenten, e
interpretará los resultados de estas pruebas
- Identificar enterobacterias por sus caracteres culturales y por las pruebas
bioquímicas específicamente para ellas
- Describir la metodología para realizar la prueba de sensibilidad a antibióticos:
Antibiograma.
- Realizar la lectura e interpretación de un antibiograma.
3. Materiales
- Tripletes con medios de cultivo para pruebas bioquímicas (T.S.I, L.I.A y caldo
peptonado para la prueba de Indol).
- Reactivo de Kovac para la prueba de Indol
- Asa y aguja bacteriológicas
- Mechero Bunsen
- Tubo con 0.5 mL de caldo peptonado para Antibiograma.

- Hisopo largo de algodón estéril
- Agar Mueller Hinton o tryptosa
4. Procedimiento
D) Prueba de sensibilidad a antibióticos: ANTIBIOGRAMA:
Utilizaremos el método de Kirby-Bauer, que consiste en lo siguiente:
Una vez identificadas las bacterias, tomar la placa y con el asa previamente
esterilizada y enfriada, hacer un barrido de varias colonias (4 ó 5), inocular en los 0,5
mL de caldo simple o peptonado, homogenizarlas hasta formar una emulsión que sea
comparable con el tubo 0,5 de la Escala de McFarland.
Con un hisopo tomar un inóculo, escurriendo el exceso en las paredes del tubo y
sembrarlo con el mismo hisopo en forma uniforme, dispersándolo en toda la superficie
de la placa de agar Mueller Hinton.
Esperar unos minutos para que seque la superficie o colocar la placa semi abierta en
la incubadora, luego con una pinza esterilizada y enfriada cada vez, colocar los discos
de papel filtro que contienen los antibióticos de diferente tipo y concentración. La
elección de los discos será de acuerdo al tipo de bacteria aislada, sea una Gram + o
una Gram -.
Llevar la placa a incubación por 18 a 24 horas a 37°C.
Lectura de las pruebas bioquímicas en T.S.I, L.I.A e Indol en caldo peptonado.
T.S.I (Triple azúcar hierro) Este medio contiene glucosa, sacarosa y lactosa, se
observará la degradación de dichos carbohidratos, que van a producir ácido y ocurre
un cambio de pH, que el indicador rojo de fenol hace que vire a color amarillo en el
medio y se simboliza como A (ácido), si no hay fermentación quedará de color rojo
que se simboliza como K (alcalino). También debe observarse la producción de gas
(CO2) a partir de la glucosa que se verá como burbujas o espacios en medio del agar,
pueden desplazar todo el medio, la cantidad se calificará con cruces, si no se produce
será negativo. Por último se observará la producción de H 2S (ácido sulfhídrico) debido
al metabolismo de algunas bacterias que reducen el tiosulfato de Na, produciendo una
coloración negruzca en medio del agar por la formación de sulfuro de Fe que sí es
posible observar, si no hay es negativo y si existe se califica la cantidad con cruces.
L.I.A (Agar Lisina hierro) La lisina es una aminoácido que puede ser descarboxilado,
desaminado o no sufrir ningún efecto por las enterobacterias
La descarboxilación se produce en medio ácido, se observará de color violeta por el
indicador de pH, púrpura de bromocresol que intensifica el color inicial del medio, se
simboliza como K/K; la desaminación se observará con un cambio de color amarillo
en el fondo y rojo vinoso en el bisel se simboliza como R/A, las cepas de Proteus y
Providencia son las representativas de esta reacción. Algunas como la Shigella, no
descarboxilan ni desaminan la lisina, el color se observa amarillo en el fondo y violeta
en el bisel, se simboliza como K/A. Algunas bacterias pueden producir H 2S que
aparecerá como una coloración negruzca en el tubo, no se simboliza.
Indol La degradación del aminoácido triptofano por las bacterias que poseen la
enzima triptofanasa será evidenciada por la producción de indol que es una sustancia
volátil, para lo cual será necesario añadir unas gotas del reactivo de Kovac por las
paredes del tubo, se producirá una respuesta casi instantánea formándose un anillo
rojo grosella en la superficie del caldo, si es positivo y si no, se formará un anillo
amarillo o anaranjado, que se interpreta como negativo.
La lectura del antibiograma se hace teniendo en cuenta el efecto que han tenido los
antibióticos sobre el crecimiento bacteriano.
Lo que se observará será la formación de un halo de inhibición, cuyo diámetro debe

ser medido para compararlo con las tablas que existen, pero en líneas generales se
puede considerar tres tipos de respuestas:
SENSIBLE : Halo de inhibición de 15 a 20 mm o más.

INTERMEDIO : de 10 a 15 mm
RESISTENTE : < de 10 mm
Conclusión: La observación de estas reacciones producidas por las bacterias en el

laboratorio nos permite llegar a un diagnóstico definitivo, de género y especie con una
precisión de casi 100% quedando en algunos casos por confirmar el mismo con otras
reacciones o pruebas complementarias.
 Observar los resultados y realizar los esquemas de las bacterias

identificadas, poner los símbolos o fórmulas correspondientes
 Representar las fórmulas de las reacciones bioquímicas de los diferentes
tipos de enterobacterias utilizando la tabla respectiva.
TSI LIA INDOL CITRATO

1. Escherichia coli
2. Shigella sp
3. Salmonella typhi
4. Proteus ..................
ESQUEMATICE RESULTADOS
DEL ANTIBIOGRAMA
TABLA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS
EN TSI, LIA E INDOL
GRUPO I HIDROGENO SULFURADO (H2S) POSITIVOS GRUPO II HIDROGENO SULFURADO (H2S) NEGATIVOS
ANAEROGENICOS (GAS NEGATIVO) ANAEROGENICOS (GAS NEGATIVO)
TSI GAS H2S LIA INDOL ENTEROBACTERIA TSI GAS H2S LIA INDOL ENTEROBACTERIA
K/A – +/- ó + K/K – Salmonella typhi K/A – – K/A - ó + Shigella
AEROGENICOS (GAS POSITIVO) A/A ó K/A – – K/K ó K/N + Escherichia
TSI GAS H2S LIA INDOL ENTEROBACTERIA A/A ó K/A – – K/A - ó + Enterobacter
K/A 2+ 4+ K/K – Salmonella A/A – – K/K – Serratia
K/A ó A/A 2+ 4+ K/K – Arizona K/A – – R/A + Proteus
K/A ó A/A 2+ 4+ K/A – Citrobacter K/A – – R/A + Providencia
K/A ó A/A 2+ 4+ R/A - ó + Proteus A/A – – A/A ó K/A - ó + Yersinia
K/A 2+ 4+ K/K + Enwardsiella AEROGENICOS (GAS POSITIVO)
TSI GAS H2S LIA INDOL ENTEROBACTERIA
A/A ó K/A 2+ – K/K ó K/A + Escherichia
K = alcalino A/A 4+ – K/K - ó + Klebsiella
A = ácido A/A ó K/A 3+ – K/K ó K/A – Enterobacter
R = rojo K/A ó A/A 2+ – K/K – Serratia
N = neutro K/A (+) – K/A ó R/A + Proteus
K/A + – K/A ó A/A – Paratyphi A
BRMP/

Guía de Prácticas Microbiología

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE MICROBIOLOGÍA

1. La asistencia a prácticas es obligatoria, si falta a alguna de ellas, no tendrá la

12. Todo material roto o extraviado, durante la práctica, será de responsabilidad de

La bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y

La seguridad se realiza en conjunto : el personal debe cumplir con las normas

 Agentes biológicos, transmitidos por ingestión, inhalación, inoculación y por

 Contención secundaria, es la protección del medio ambiente externo contra

El propósito de la contención es reducir la exposición del personal del laboratorio

4.1. Del ambiente

a. Todo el laboratorio, debe estar adecuadamente ventilado e iluminado, y

4.2. Del Personal.

4.3. Inmunización del Personal

4.4. Del vestido.

4.5. De las muestras y su procesamiento.

4.6. Esterilización terminal.

4.7. Desempolvado y limpieza del piso.

4.8. Manejo de sustancias químicas de alto riesgo.

5. MEDIDAS EN CASO DE ACCIDENTE

5.1. Inoculación accidental, cortes o abrasiones, quemaduras

La persona afectada deberá quitarse la ropa protectora, lavarse las manos y

5.2. Ingestión accidental de material posiblemente peligroso

5.3 Emisión de un aerosol posiblemente peligroso

5.4. Rotura o derrame de recipientes con cultivos

5.5. Accidente con material sospechoso de poder contener virus de la

6. ENVÍO DE MUESTRAS Y MATERIALES INFECCIOSOS EN CONDICIONES

El envío en condiciones de seguridad de muestras, y sustancias infecciosas con

Teniendo como base las normas internacionales sobre el envío de material

6.2. Requisitos de documentación y embalado

Fuente : Serie de Normas Técnicas No 18

El trabajo en el laboratorio de Microbiología es una experiencia muy novedosa e

Normas generales Peligros frecuentes PROTÉGETE

Al finalizar esta práctica el alumno será capaz de:

- Recordar puntualmente y reforzar conceptos sobre microscopía óptica adquiridos

- Jabón líquido, papel toalla

1. Colocar la lámina coloreada en la platina del microscopio.

1. Revisar bibliografía, describir las características de otros tipos de microscopios

3. Hacer un esquema de lo observado. PONER NOMBRE A TODO LO QUE

Aumento: 100x Aumento: 100x

CARACTERES MORFOESTRUCTURALES DE LAS BACTERIAS

1. INTRODUCCIÓN: Las bacterias tienen tres formas básicas: cocos, bacilos y

Existen dos tipos de coloraciones:

Simples: Utilizan un colorante y se realiza en un solo tiempo, ejemplo: Azul de

Compuestas: Utilizan dos o más colorantes y se realizan en varios tiempos,

Coloración de Azul de Metileno: Es una coloración simple y sirve para observar

2. Objetivos: Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:

- Diferenciar una coloración simple de una compuesta.

Para todas las coloraciones:

Coloración de Azul de metileno y Gram:

- Suspensión de bacterias en un caldo de cultivo.

Preparación de un frotis o extendido, para todos los casos:

Coloración de Azul de metileno:

- Cubrir el frotis con la solución acuosa de Azul de metileno al 1%, durante 2

AZUL DE METILENO GRAM

Medio líquido / Medio sólido Medio líquido / Medio sólido

Aumento: 100x Aumento: 100x

Realizar todos los procedimientos de la práctica; en su guía, realizar los

Investigue y ponga ejemplos (nombres científicos) de 4 bacterias Gram

Gram positivas: Gram negativas

“LO QUE OIGO LO OLVIDO, LO QUE VEO LO RECUERDO, LO QUE HAGO,

METODO BACTERIOLOGICO I Gram +: Obtención de muestras.

El método bacteriológico comprende una secuencia ordenada de pasos con la

Esta secuencia puede ser representada en forma de flujograma o diagrama de flujo,