LuchoZárate MayraBriget ManualdePracticas NRC5496 25-07-21

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO - FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
ESCUELA DE MEDICINA HUMANA - CURSO INMUNOLOGIA BASICA

MANUAL DE PRACTICAS INMUNOLOGIA BASICA
UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
INMUNOLOGÍA GENERAL
TAREA:
. RESOLUCION DEL MANUAL DE PRACTICAS.
ALUMNA:
LUCHO ZÁRATE, Mayra Briget.
DOCENTE:
MEJIA DELGADO, Elva.
TURNO Y NRC:
Jueves: 06:00 pm. / 09:35 pm.
NRC: 5496
TRUJILLO 2021 - 10
1
PRÁCTICA 01
BIOSEGURIDAD Y SEÑALIZACIÓN EN EL LABORATORIO
INTRODUCCIÓN
El Centro para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC) de los Estados Unidos, especifica
cuatro niveles de bioseguridad para el manejo de agentes biológicos, los cuales son conocidos
como Niveles de bioseguridad, la clasificación de cada laboratorio identifica el riesgo
biológico que representan para la salud los agentes que ahí se manejan.
Nivel de Bioseguridad 1: En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro
mínimo para el personal del laboratorio y para el ambiente. En este nivel no se requiere equipo
especial ni tampoco un diseño específico de las instalaciones. El laboratorio no está
necesariamente aislado de las demás instalaciones del edificio. El trabajo se realiza generalmente
en mesas de trabajo abiertas. Por lo general, los materiales contaminados se desechan en
recipientes de residuos abiertos. Incluye varios tipos de bacterias y virus como la hepatitis canina,
Escherichia coli no patógena, Staphylococcus epidermidis, Lactobacillus bulgaricus,
Streptococcus lactis, Sacharomyces cerevisiae, Penicillium roqueforti, así como algunos
cultivos de células.
Nivel de Bioseguridad 2: En él se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el

ambiente y el personal de laboratorio tiene entrenamiento específico en el manejo de agentes
patógenos como las bacterias Bordetella pertussis, Clostridium botulinum, Clostridium
tetani, Corynebacterium diphtheriae, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus,
Streptococcus, Micobacterias oportunistas, Haemophilus influenzae, Yersinia enterocolitica,
Salmonelas gastroenteríticas, Shigella, Legionella, Borrelia, Neiserias patógenas, Vibrio,
Treponema pallidum y virus como Adenovirus, Parvovirus B19, Rotavirus, Virus de la hepatitis
A, Virus de la gripe, Virus del sarampión, Virus de las paperas, Virus de la rubéola. . El acceso al
laboratorio es restringido cuando se está realizando algún trabajo. Se toman precauciones
extremas con instrumentos punzocortantes contaminados. Ciertos procedimientos en los cuales
pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en gabinetes de trabajo biológico.
Nivel de Bioseguridad 3: Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clínicos de

diagnóstico, laboratorios universitarios de investigación, en el cual se realiza trabajo con agentes
exóticos o que pueden causar un daño serio y potencialmente mortal como resultado de la
inhalación o exposición a los mismos, como las bacterias Bacillus anthracis, Brucella,
Escherichia coli (verotoxigénica), Francisella tularensis, Mycobacterium tuberculosis,
Mycobacterium leprae, Rickettsias, Salmonella ser. Typhi, Shigella dysenteriae ser. 1,
Yersinia pestis; y los virus Virus de la encefalitis de California, Virus de la encefalitis equina
americana, Virus de la estomatitis vesicular, Virus de la hepatitis B, Virus de la hepatitis C, Virus
de la hepatitis D, Virus de la fiebre amarilla, VIH. El laboratorio cuenta con un diseño y
características especiales y todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo
de protección. El personal de laboratorio tiene una formación específica en el manejo de
patógenos y agentes potencialmente letales, y son supervisados por científicos competentes con
experiencia en el trabajo con estos agentes. El acceso al laboratorio está restringido.
Nivel de Bioseguridad 4: Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes
biológicos que representan un alto riesgo individual de contagio y que además son un riesgo
para la vida. Por lo regular los científicos que trabajan aquí, utilizan trajes
2
especiales que cubren la totalidad de sus cuerpos y que además tienen una leve sobrepresión
para evitar que entren partículas infecciosas al mismo si es que éste llega a desgarrarse.
Además, las instalaciones están en un edificio separado o en un área controlada dentro de un
edificio, que está completamente aislado de las demás áreas del edificio. Las enfermedades
infecciosas que se manejan en el nivel 4 son: Virus de la viruela, Virus de la fiebre hemorrágica
de Crimea (Congo), Virus de Marburg, Virus Ébola.
OBJETIVO GENERAL
 Aprender las normas de bioseguridad aplicadas al laboratorio de inmunología.
Objetivos Específicos.
 Familiarizar al estudiante con las normas de bioseguridad en el laboratorio de
inmunología.
 Hacer conocer la importancia de los riesgos biológicos del manejo de material
infeccioso.
 Aplicar los conocimientos en la resolución de casos de accidente ocupacional con
material infeccioso.
NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA
1. Requisito indispensable: Antes de realizar cada práctica leer cuidadosamente el

protocolo de la práctica para familiarizarse con el trabajo que va a desarrollar. Al
conocer el protocolo disminuye la posibilidad de que ocurran accidentes y además puede
aprovechar el tiempo de manera eficaz.
2. Prohibido: Comer, beber, fumar y distraer al profesor a la hora de la práctica.
Prohibido el acceso a toda persona ajena al área.
3. Protección: Llevar el equipo de protección personal necesario. Esto garantiza que
cualquier accidente que pueda ocurrir sea de menor gravedad, de no acatar las reglas no
se permitirá acceso a la práctica.
4. Material y Equipo: Debe llevar aquellos materiales estrictamente necesarios para la
práctica que va a desarrollar. Ser cuidadoso con todo el material y equipo que utilice para
evitar accidentes y deterioro del mismo en las prácticas.
5. Limpieza: Dentro del área que se va a trabajar se comienza limpiando el área de trabajo
y se repite este procedimiento después de que se haya terminado. El material de desecho
depositarlo en el lugar que corresponde y el material reutilizable lavarlo y desinfectarlo.
6. Higiene: Durante la sesión de trabajo lavarse las manos con agua y jabón antes de
hacer cualquier procedimiento y al finalizar repita el mismo procedimiento para
mantener buenas condiciones higiénicas.
7. Desechos: Si utiliza guantes, frascos de medicamentos vacíos, jeringas, cubre bocas,
portaobjetos, cubreobjetos, etc., no reciclar y desecharlos.
8. Indisciplina: Se sancionará con la expulsión parcial o total del alumno, según el caso
lo requiera.
9. Responsabilidades: En caso de accidente o lesión, avisar inmediatamente al profesor
o responsable de la práctica para que pueda auxiliar con rapidez y eficacia al alumno.
RECOMENDACIONES:
1. Todo material biológico humano se manipula como si fuera potencialmente

infeccioso.
2. Protección personal: bata y guantes. Las heridas se traen cubiertas con apósitos
impermeables. La ropa de calle es un elemento adicional de
protección, se desaconseja el pantalón corto o el calzado abierto.
3. El cabello largo debe estar atado atrás o arreglado de manera que no entre en contacto
con las manos, con las muestras, con los contenedores ni con el equipo.
4. Para trabajar, se colocan las muestras, reactivos etc. en la parte delantera de la zona
de trabajo, así se evita golpearlos con los brazos en un descuido.
5. Antes de utilizar un reactivo, se observa si tiene símbolos y avisos sobre su toxicidad
y riesgo de manejo (generalmente en recuadros de color naranja).
6. En el laboratorio no se debe comer, beber, aplicarse cosméticos u oler reactivos o
muestras directamente.
7. No arrojar a la papelera o desagüe material usado sin consultar al profesor. Los
residuos y el material punzante (puntas de pipeta, agujas, hojas de bisturí,
cubreobjetos y similares) se desechan en los contenedores repartidos por las mesas.
8. La ropa protectora (bata) no debe ser usada en las áreas que no son de laboratorio
(pasillos, biblioteca, etc.).
9. Las manos deben ser lavadas después que se han quitado los guantes y antes de dejar
el laboratorio, así como en cualquier momento después de manipular material
conocido o sospechoso de estar contaminado.
10. Las superficies de trabajo deben estar limpias y descontaminadas con un
desinfectante adecuado (etanol 70%) al final del trabajo y después de cualquier
salpicadura de material potencialmente infeccioso.
11. Todo material contaminado, sólido o líquido, debe ser descontaminado antes de
descartarlo o de reusarlo.
ACCIDENTES:
1) Las salpicaduras o derrames en la piel intacta se deben lavar inmediatamente con

jabón y agua abundantes.
2) Las salpicaduras a mucosas (ej. a la boca), deben lavarse con agua corriente durante
15 minutos. Las salpicaduras a los ojos se lavarán de inmediato con frasco lavaojos o
con agua corriente manteniendo los ojos muy abiertos con los dedos.
3) Las inoculaciones percutáneas (ej. arañazo o corte con instrumental usado) deben
lavarse con agua y jabón, dejar, en su caso, fluir la sangre libremente
3 minutos, desinfectar con povidona yodada y cubrir con un apósito impermeable. En
todos los casos se comunicará el incidente al profesor.
MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO INFECCIOSOS (RPBI)
Los residuos peligrosos biológico infecciosos (RPBI), son los que contienen bacterias, hongos,
virus, parásitos, microorganismos capaces de causar infecciones, efectos nocivos para la salud
y el medio ambiente.
Los RPBI se clasifican en:

1. Residuos de sangre y sus derivados: plasma, suero, etc.
2. Cultivos y cepas almacenadas de agentes infecciosos: vacunas, placas de cultivo,
etc.
3. Residuos patológicos: residuos de tejidos, órganos, partes y fluidos corporales, etc.
4. Residuos no anatómicos derivados de la atención a pacientes y de los
laboratorios: torundas, guantes, cubrebocas, tubos, etc.
5. Residuos de objetos punzocortantes usados o sin usar: navajas, jeringas, pipetas Pasteur,
porta y cubreobjetos, etc.
Color y tipo de envase requerido para cada uno de los tipos de RPBI:
Tipo de residuos Estado físico Envasado Color

Sangre Sólidos Bolsas de plástico Rojo
Cultivos y cepas de Líquidos Recipientes Rojo
agentes infecciosos. herméticos
Residuos no anatómicos
Patológicos Sólidos Bolsas de plástico Amarillo
Patológicos Líquidos Recipiente Amarillo
s
herméticos
Objetos Sólidos Recipientes rígidos Rojo
punzocortantes
SEÑALIZACIÓN EN EL LABORATORIO
Se entiende por señalización de seguridad y de salud a la que referida a un objeto, actividad o

situación determinadas, proporcione una indicación o una obligación relativa a la seguridad o la
salud en el trabajo mediante señal en forma de panel, un color, una señal luminosa o acústica, una
comunicación verbal o una señal gestual, según proceda. Pictograma es la imagen que describe
una situación u obliga a un comportamiento determinado utilizado sobre una señal en forma de
panel o sobre una superficie luminosa. En principio, los lugares de trabajo deben ser señalizados
con los pictogramas que se ajusten a las características de las tareas que se lleve a cabo en el
laboratorio/ taller.
Requisitos de utilización
 La altura y posición de las señales deberá tener en cuenta su relación con el ángulo
visual.
 El lugar del emplazamiento de la señal debe estar iluminado, ser accesible y
fácilmente visible.
 Las señales deben retirarse cuando deje de existir la situación que las justifica.
CLASIFICACIÓN DE PICTOGRAMAS:
1. Señales de advertencia
 Forma triangular.
 Pictograma negro sobre fondo amarillo, bordes negros.
2. Señales de prohibición.
 Forma redonda
 Pictograma negro sobre fondo blanco, bordes y banda rojos
3. Señales de obligación.
 Forma redonda
 Pictograma blanco sobre fondo azul
4. Señales de relativas a los equipos de lucha contra incendios.

 Forma rectangular o cuadrada
 Pictograma blanco sobre fondo rojo.
5. Señales de salvamento o socorro.

 Forma rectangular o cuadrada.
 Pictograma blanco con fondo verde.
TAREAS DE LABORATORIO:
SEÑALES DE
ADVERTENCIA
SEÑALES DE
PROHIBICIÓN
SEÑALES DE
OBLIGACIÓN
SEÑALES DE
SALVAMENTO
6
SEÑALES DE
RELATIVAS A
LOS EQUIPOS
DE LUCHA
CONTRA
INCENDIOS
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2. De forma sencilla esquematice el laboratorio con sus pictogramas y diga el

significado de cada uno. Sugiera cambios.
6
7
PRÁCTICA 02
TOMA DE MUESTRA PARA LA OBTENCIÓN DE SUERO Y PLASMA
INTRODUCCIÓN
El sistema hematopoyético (Hema = sangre, poyesis = producción, fabricación) es el

sistema encargado de la formación de la sangre. La sangre es un tejido líquido, compuesto por
agua y sustancias orgánicas e inorgánicas (sales minerales) disueltas, que forman el plasma
sanguíneo y tres tipos de elementos formes o células sanguíneas: glóbulos rojos, glóbulos
blancos y plaquetas.
Los glóbulos rojos, los glóbulos blancos y las plaquetas que conforman la sangre se producen
en la parte esponjosa (médula roja) de algunos huesos del esqueleto (esos son: el esternón, los
huesos del cráneo, las costillas, el hueso ilíaco y las terminaciones de los huesos de los
miembros superiores e inferiores.
En la médula ósea roja de los huesos se encuentran las células hematopoyéticas

pluripotenciales de las que derivan todas las células de la sangre. Hasta los 5 años de edad estas
células tienen su origen en, prácticamente, todos los huesos del cuerpo. Después de los 20 años,
los glóbulos rojos, blancos y plaquetas son producidos principalmente por la médula de los
huesos planos, como las vértebras, el esternón y las costillas.
Se puede realizar un examen físico o químico de la sangre, para lo cual se la obtiene por
punción venosa o por punción del pulpejo del dedo (sangre capilar) con lanceta estéril. Para
casi todo el trabajo hematológico se utiliza sangre total. Ello exige el uso de anticoagulantes,
los cuales impiden que el calcio actúe en la coagulación, sea precipitándolo como sal insoluble
(oxalatos) o fijándolo en forma no ionizada (citrato, EDTA). La heparina actúa como agente
antitrombínico, o sea neutraliza a la trombina. Así mismo, casi todas las determinaciones
bioquímicas en el laboratorio utilizan suero, el cual se obtiene tomando la muestra en un tubo
de ensayo y se lo deja coagular, para la separación del suero.
Usualmente en adultos se utilizan las venas del pliegue antecubital del brazo, pero también
pueden ser otras zonas como, por ejemplo: del antebrazo, dorso de la mano, dorso del pie, etc.
La práctica tiene por objetivos:
1. Adiestrar al alumno en la extracción de muestras de sangre del antebrazo para la

obtención de sangre total, suero y/o plasma.
2. Realizar extendidos sanguíneos en láminas portaobjetos.
MATERIAL Y MÉTODOS
1. Equipo necesario para la venopunción: Equipo Vacutainer.
 Tubos de vacío diseñados para llenarse con un volumen predeterminado de sangre por
medio de vacío, esto garantiza una adecuada relación entre sangre y anticoagulante. Los
tapones de goma están codificados por color de acuerdo con el aditivo que contienen así,
por ejemplo, los tubos morados (EDTA) son los más utilizados para hematología
rutinaria y los tubos celestes (citrato) para pruebas de coagulación.
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 Agujas especiales para adaptador.
 Adaptador para tubos de vacío.
 Jeringuillas de 3, 5 y 10 cc.
 Agujas: Están numeradas dependiendo de su calibre. Para colección de sangre para
hemogramas, se recomienda una aguja de diámetro de 0.8mm (21G) para evitar daño a
las células. Las agujas de 0.9-1.1mm de diámetro (20G-19G) se utilizan normalmente
para punción venosa en adultos.
 Torniquete: Generalmente una liga plana de látex.
 Alcohol: Etílico o isopropílico al 70%.
 Algodón
 Gasas y/o vendas adhesivas
 Dispensador de agujas
2. Etiquetado de los tubos
Un adecuado etiquetado de los tubos es esencial para que los resultados de los análisis
concuerden con el paciente correcto. Los elementos clave en el etiquetado para
garantizar la calidad de la muestra pre-analítica son:
 Nombre o iniciales del paciente
 Número de identificación del paciente
 Fecha y hora de la toma de muestra
 Iniciales del flebotomista
3. Punción venosa
La punción venosa permite extraer una mayor cantidad de sangre para las pruebas
necesarias en hematología. Las venas de elección suelen ser las de la cara anterior del
antebrazo (vena cubital, vena cefálica y la vena basílica) porque resulta fácil acceder a
ellas.
Preparación del paciente
 Instruya al paciente sobre la técnica para tomar la muestra. Valore la existencia

de problemas hemorrágicos o de circulación, o alergias.
 Evite puncionar en un área con hematoma, fístulas, quemaduras, escoriaciones
de la piel, cicatrices o del costado en que se ha realizado mastectomía reciente.
 Avisar al paciente que al introducir la aguja sentirá dolor.
 Extienda completamente el brazo con la superficie palmar hacia arriba.
4. Punción capilar
Es utilizada para extraer pequeñas cantidades de sangre en determinaciones de

hemoglobina, hematocrito y frotes periféricos. Hay dos lugares de donde realizar esta
punción: el lóbulo de la oreja, la yema del dedo.
Metodología
 Tome la muestra de las yemas de los dedos o lóbulo de la oreja.
 Desinfecte el sitio de la punción, séquelo y puncione la piel con una
lanceta estéril que no debe penetrar más de 2 mm.
 Deseche la primera gota de sangre. Tome las gotas subsecuentes en un
microtubo y prepare las laminillas con esa muestra.
5. Algunos anticoagulantes utilizados en el laboratorio
 Oxalatos: Los oxalatos de amonio y potasio se utilizan en mezcla de 3 partes del
primero por 2 del segundo. La sal de amonio aumenta el volumen de los GR y la de
potasio lo disminuye, por tanto, es muy usado en hematología. El oxalato de potasio
sólo se utiliza en bioquímica.
 Citratos: Se utiliza la sal disódica al 3.8% (peso x volumen) en proporción de una
parte de la sal por nueve de sangre.
 Dextrosa-citrato ácida: En las transfusiones de sangre y en pruebas
hematológicas para preservar los antígenos de los GR.
 Sequestrene: Sal dipotásica o disódica del EDTA. Por quelación impide que se
ionice el calcio por lo que ejerce una acción anticoagulante muy intensa.
 Fluoruro: Se combina con el calcio impidiendo su acción. Puede
usarse también como conservador cuando la muestra tenga que ser guardada.
 Desfibrinación: Se lleva a cabo en un matraz utilizando perlas de vidrio, a las
cuales queda adherido la fibrina formada por coagulación. Este proceso es útil para
el estudio de GB, GR y plaquetas. Se obtiene también buena cantidad de suero.
CUESTIONARIO:
1. ¿Cuál es el calibre de la aguja utilizada para el procedimiento de venopunción?
Agujas: Están numeradas dependiendo de su calibre. Para colección de sangre para

hemogramas, se recomienda una aguja de diámetro de 0.8mm (21G) para evitar daño a las
células. Las agujas de 0.9-1.1mm de diámetro (20G-19G) se utilizan normalmente para
punción venosa en adultos.
2. ¿Por qué se utiliza una ligadura en el brazo para realizar la extracción sanguínea?
Su función es detener el fluido sanguíneo del brazo para resaltar las venas y de este modo
facilitar la localización de la vena a la cual se le extraerá la sangre.
3. Como se debe de introducir el bisel de la aguja y ¿Por qué?
Punción: esperar a que el desinfectante se haya secado; el ángulo de la aguja suele ser entre 30-40º;
el bisel de la aguja irá hacia arriba, para evitar que resbale sobre la epidermis.
4. Defina que es un anticoagulante:
En medicina y farmacia, un anticoagulante es una sustancia endógena o exógena que interfiere o

inhibe la coagulación de la sangre, creando un estado antitrombótico o prohemorrágico.
5. ¿Qué diferencia hay entre suero y plasma?
El plasma es la parte de la sangre que contiene ambas, el suero y los factores de coagulación El
suero es la parte de la sangre que queda una vez que se han eliminado los factores de coagulación
como fibrina. El plasma contiene los factores de coagulación y agua, mientras que el suero
contiene proteínas como la albúmina y las globulinas.
6. ¿Qué hacer en caso de no tener vena visible para la extracción sanguínea?
-Cerrar el puño hace más prominente una vena.
-Colocar durante 30 segundos previos el compresor.
-Masajear el brazo desde la muñeca al codo.
-Golpear con el dedo índice el lugar de punción.
-Aplicar calor en dicha zona.
-Dejar colgar el brazo para dificultar el retorno y abrir y cerrar la mano a modo de bombeo.
7. Componentes de los tubos vacutainer que se muestran y sus usos:
Para conocerlos un poco mejor, los tubos vacutainer son tubos de ensayo hechos de vidrio y
plástico con una tapa plástica blanda (de colores variados) especialmente diseñado para la
extracción de sangre al vacío. En el centro de la tapa se encuentra un tapón de goma que permite
ser penetrado por la aguja y colocar allí la sangre extraída del paciente.
Existen varios tipos de tubos Vacutainer y son diferenciables por el color que presenta su tapa;
ya que esta indica que hay dentro del tubo y para que será utilizada la muestra. Conozcamos un
poco más sobre esto:
Tapa Roja. Suero; Existen dos modelos para este color, los que tiene el tubo hecho de
material plástico y los de material de vidrio.
Aquellos de TUBOS PLASTICOS contienen dentro agentes coagulantes, esparcido por las
paredes. Este se utiliza cuando se necesita del suero para hacer análisis. Existen dos modelos
para este color, los que tiene el tubo hecho de material plástico y los de material
de vidrio. Aquellos de TUBOS
PLASTICOS contienen dentro agentes coagulantes, esparcido por las paredes. Este se utiliza
cuando se necesita del suero para hacer análisis.
Tapa Amarilla. Suero Con Gel Separador; Estos tubos presentan en su interior un agente
coagulante junto con un gel separador de suero. Este se utiliza para realizar ambos estudios de
**Química Clínica ** y las Determinaciones del Suero. Esto facilita el proceso de realizar
los estudios en una misma muestra.
Tapa Azul. Citrato; Este tubo contiene dentro Citrato de Sodio al 3.2 %; este es un
anticoagulante que puede ser reversible, en estado líquido diluye bien la sangre. Es utilizado para
realizar las pruebas de coagulación de la sangre, entre estos el TP y TTP. Tiempo de
Protrombina (TP): examen de sangre que mide el tiempo en que la porción liquida de
esta, se coagula. Tiempo de
Tromboplastina (TTP): examina el tiempo que toma la sangre coagularse y define si hay
problemas de sangrado o coagulación.
Tapa verde. Heparina: Este tubo puede contener dentro tanto Heparina de Sodio como
Heparina de litio los cuales son agentes anticoagulantes que son utilizados en estos tubos para
futuras pruebas de determinaciones de Química Clínica en el plasma.
Tapa Gris; Estos tubos especiales contienen Fluoruro y Oxalato de Potasio. El oxalacetato
funciona como un anticoagulante mientras que el fluoruro detiene la acción de las enzimas sobre
ciertos sustratos como la glucosa. Estos tubos son utilizados para realizar determinaciones de
glucosa en la sangre.
Tapa Azul Rey o Azul oscuro; Estos tubos contienen en su interior Heparina Sódica
(anticoagulante) y pueden contener además EDTA o silicona. Estos son utilizados para estudios
de presencia de trazas metálicas.
Tubo Negro; Este tubo puede presentar dentro tanto citrato de sodio como EDTA. Este tubo se
utiliza para almacenar aquellas muestras de sangres que se les realizara pruebas de V.S.G. y
Velocidad de sedimentación Globular.
Tapa Morada. EDTA; Estos tubos contienen el EDTA una sal de potasio que sirve como
anticoagulante, el cual se encuentra esparcido por las paredes del tubo. Este sirve para almacenar
la muestra de sangre (entera) cuando se van a realizar pruebas hematológicas (conteo de células
sanguíneas) o realizar frotis para ver en microscopio.
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COLOQUE SUS FOTOS DE LA PRÁCTICA TOMA DE MUESTRA
PRÁCTICA 03
EL HEMOGRAMA
INTRODUCCIÓN
Erlich fue el primero en utilizar colorantes simples de anilina, aunque sus preparados ya no
se utilizan en la actualidad. Lanner, en 1 889, encontró que el precipitado obtenido por la
mezcla de eosina y azul de metileno podía disolverse en alcohol metílico para formar un
colorante útil, que combinaba algunas propiedades de los dos colorantes iniciales.
Romanowsky, 1 890, encontró que al mezclar una solución de azul de metileno madura,
con eosina (policromía), y disolviendo el precipitado en alcohol metílico, se obtenía un
colorante de uso más amplio que el de Lanner, que podía teñir los núcleos celulares y los
gránulos de las plaquetas (a los que la mezcla de Lanner no coloreaba).
Colorantes modernos a los de Romanowsky; por ejemplo, los colorantes de Wright,

Leishman, etc., son semejantes, en principio, al método original de Romanowsky, la
diferencia principal estriba en el método de obtención de la policromía del azul de
metileno.
El estudio cito morfológico de extendidos coloreados de la sangre pone de manifiesto el

producto final de un maravilloso y complicado proceso de maduración que tiene lugar en el
sistema hematopoyético, y que se encuentra representado por los eritrocitos, los leucocitos
y las plaquetas.
Cada profesional de la salud debe entrenarse y aprender a observar todos los elementos del
frotis sanguíneo, mientras lleva a cabo el recuento diferencial. Debe formar el hábito de
verificar en cuanto al tamaño, forma y concentración de hemoglobina en eritrocitos,
además si existe un grado importante de anisocitosis o poiquilocitosis, hipocromía,
microcítocis, macrocitocis e hipercromía aparente, etc. En cuanto a plaquetas se debe tener
en cuenta si se encuentran en cantidades normales (de 3 a 8 por 100 glóbulos rojos), si son
normales o si hay formas gigantes o extrañas. Asimismo, en cuanto a leucocitos se debe
considerar si son maduros o atípicos; si su número es normal, aumentado (leucocitosis) o
disminuido (leucopenia).
En los frotis muy gruesos, los leucocitos son pequeños, difíciles de teñir, siendo imposible
su reconocimiento. Aun en los mejores frotis, a causa de la diferencia de tamaño, densidad,
etc., los leucocitos muestran una distribución particular. Los monocitos grandes y los
polimorfonucleares (PMN) predominan en los bordes y al final de la extensión, mientras
que los linfocitos, más pequeños, se distribuyen en forma más uniforme en la parte media.
El hemograma consta de 2 partes: recuento leucocitario y la fórmula leucocitaria. El

recuento leucocitario consiste en determinar el número total de leucocitos x mm3 y, la
fórmula leucocitaria tiene por objetivo determinar los porcentajes de las distintas clases de
leucocitos normales y anormales en la sangre. A partir de los porcentajes puede incluso
calcularse el número real de cada clase de leucocitos por mm 3 de sangre (valor absoluto),
conociéndose el total de leucocitos.
Por ejemplo:
Si se tiene 60% de neutrófilos segmentados y el recuento total de leucocitos es de 20
000, entonces el valor absoluto de neutrófilos segmentados sería: 60/100 x 20 000 = 12
000.
La práctica tiene por objetivos:

1. Hacer recuentos de leucocitos y plaquetas.
2. Colorear extendidos de muestras de sangre.
3. Reconocer células sanguíneas y establecer la fórmula leucocitaria
MATERIAL Y MÉTODOS:
1. PREPARACIÓN DE EXTENDIDOS:
MATERIAL:
 Sangre total (con anticoagulante).
 Láminas portaobjetos.
PROCEDIMIENTO:
 Preparar una lámina cuyo ancho se ha reducido unos 5 mm. y que servirá como
"lámina extensora".
 Colocar a 1 cm. del extremo de una lámina bien limpia y seca, una gota pequeña de
sangre total o directamente de la aguja, jeringa o del dedo; por delante de ella colocar
un extremo de la lámina extensora en ángulo de 30º y retroceder hasta que toque la
gota que se extenderá a lo ancho de la primera lámina, luego deslizar la lámina
extensora siempre en ángulo de 30º, en forma rápida y uniforme hacia el otro extremo.
 Si el ángulo entre las láminas es mayor, el frotis será más grueso y viceversa.
 Dejar secar las láminas a temperatura ambiente yrotular.
2. COLORACIÓN DE EXTENDIDOS SANGUÍNEOS: (Método de Wright)
PROCEDIMIENTO:
 El frotis bien seco y rotulado se coloca sobre la gradilla de coloración.

 Cubrir la lámina con un volumen de colorante y dejar por un minuto (4-5 gotas)
 Diluir el colorante con dos volúmenes de agua tamponada pH. 6.4, mezclar bien,
observándose la formación de una escarcha metálica y dejar por 6 minutos.
 Lavar con agua corriente y dejar secar colocando la lámina verticalmente. NOTA:
Los tiempos indicados pueden variar de acuerdo a la antigüedad del colorante.
3. RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS
SANGUÍNEAS: MATERIAL:
 Láminas con extendidos sanguíneos coloreados.

 Microscopio óptico.
PROCEDIMIENTO:
 Colocar las láminas coloreadas al microscopio, colocar una gota de aceite de cedro y
observar con objetivo de inmersión.
 Reconocer los diversos tipos de células sanguíneas y dibujar.
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4. RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS
MATERIAL:
 Hemocitómetro (Cámara de Neubauer)

 Pipeta de glóbulos blancos (de Thoma)
 Diluyente: Líquido Turk (Ácido acético 2-3% más gotas de violeta de genciana: La
solución hipotónica del ácido acético destruye los GR y la violeta de genciana hace
observar mejor los GB, a los que tiñe ligeramente).
PROCEDIMIENTO:
 Mezclar bien la sangre con el anticoagulante.

 Llenar con sangre la pipeta de GB hasta la marca de 0, 5 y limpiar la punta.
 Introducir la pipeta en el diluyente de glóbulos blancos y llenar la pipeta hasta la marca
de
11. Hacer rotar para que se movilice la perla mezcladora.
 No permitir que ingrese aire ni se escape sangre.
 Tapar ambos extremos de la pipeta y mezclar manualmente por 1 minuto.
 Preparar la cámara de Neubauer con su laminilla cubre-cámara.
 Agitar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas para luego colocar una gota pequeña cerca de
un extremo abierto de la cámara, para que se llene por capilaridad.
 Dejar en reposo por 3 minutos:
 Enfocar la cuadrícula de Glóbulos blancos y luego con el objetivo de 40X contar en los
cuatro cuadrados grandes angulares.
 La enumeración incluye las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas
limitantes superior e izquierda en el cuadrado grande de recuento y no se consideran las
de los limites inferior y derecho.
Nº de Leucocitos = G. blancos contados en 4 cuadrados x mm3

Áreas contadas X altura cámara X dilución de sangre
Nº de Leucocitos = Glóbulos contados

4 x 1/10 x 1/20
Nº de Leucocitos = Glóbulos contados x 50 x mm3
VALORES NORMALES: de 5 000 a 1 0 000 x mm3
5. RECUENTO DE PLAQUETAS: (método indirecto)
PROCEDIMIENTO:
 De la lámina de hemograma contar 20 campos con más o menos 100 GR/campo.

 Hacer recuento de plaquetas en cada campo.
 Sacar promedio de plaquetas por campo, que corresponde al número de
plaquetas por 100 glóbulos rojos.
 Confrontar con la Tabla de Relación entre Hematocrito y Número de glóbulos rojos y
con dichos datos, calcular el número de plaquetas por mm3
EJEMPLO: Se observa 10 plaquetas por 100 glóbulos rojos como promedio:
Si el paciente tiene 35% de Hematocrito, según la tabla te corresponde 3'850 000 de

glóbulos rojos. Por tanto, el número de plaquetas se obtiene:
18
Si en 100 G. R-----------------------10 plaquetas
En 3' 850 000 G.R. x mm3----------------------X
X = 3' 850 000 G.R. por mm3 X 10 plaquetas

100 G.R.
X = 385 000 plaquetas x mm3
TABLA: RELACIÓN ENTRE HEMATOCRITO Y NÚMERO DE GLÓBULOS ROJOS

(PARA RECUENTO DE PLAQUETAS)
Hto. (%) Nro. G.R. Hto. (%) Nro. G.R.
28 3'140 000 41 4'510 000

30 3'330 000 42 4'620 000
31 3'410 000 43 41730000
32 3'520 000 44 4'840 000
33 3'630 000 45 4'950 000
34 3'740 000 45,5 5’000,000
35 3'850 000 46 5'060 000
36 31960000 47 51170000
37 4'070 000 48 51280000
38 4'180 000 49 5'390 000
39 4'290 000 50 5'500 000
40 4'400 000
Fórmula Leucocitaria:
Como los granulocitos generalmente están en los márgenes del extendido y los linfocitos en el
centro, se recomienda el método utilizado por Schíling, que consiste en tomar cuatro puntos
marginales distintos recorriendo el campo en zig-zag desde el borde hacia la parte central, y
contar 25 a 50 elementos en cada uno de los cuatro puntos.
Tabla: Fórmula leucocitaria normal
TIPO CELULAR %
Granulocito Neutrófilo abastonado 2a5
Granulocito Neutrófilo segmentado 45 a 65
Granulocito Eosinófilo 1a4
Granulocito Basófilo 0a1
Linfocitos 20 a 45
Monocitos 4a8
Estas cifras pueden variar por condiciones climáticas, altura, raza, emociones, dolor, edad, etc.
Conociendo la relación numérica y la cantidad total de leucocitos por milímetro cúbico, es fácil
establecer la fórmula absoluta de cada tipo celular de la siguiente manera:
Fórmula absoluta = Recuento global leucocitario x % variedad de célula.

100
CÁMARA DE NEUBAUER
PIPETAS PARA GLÓBULOS ROJOS Y BLANCOS

TÉRMINOS USADOS:
 Leucopenia: Disminución del número total en el recuento de leucocitos.

 Leucocitosis: Aumento del número total en el recuento de leucocitos.
 Neutropenia: Disminución del número absoluto de neutrófilos. Aplasia medular.
Mieloptisis de la médula ósea. Agentes citotóxicos.
 Trombocitopenia: Disminución del número total en el recuento de plaquetas.
 Linfocitosis: Aumento del número absoluto en el recuento de leucocitos. Infecciones
virales agudas, como la mononucleosis infecciosa, hepatitis, citomegalovirus. Otras
infecciones agudas, como la tos ferina. Infecciones por protozoos, como la toxoplasmosis
y la enfermedad de Chagas.Infecciones bacterianas crónicas como la tuberculosis o la
brucelosis. Cáncer, especialmente del sistema linfático
 Monocitosis: Tuberculosis. Endocarditis bacteriana. Enfermedades virales como
sarampión, rubeola. Colagenosis. Neoplasias.
 Desviación a la izquierda: Significa el aumento de las formas inmaduras (en banda o
cayado, y juveniles) dentro de los neutrófilos. Puede observarse en: infecciones e
intoxicaciones.
 Desviación a la derecha: Corresponde a la hipersegmentación nuclear. La mayoría de
polimorfonucleares presenta más de 5 lobulaciones. Ocurre en: Anemia perniciosa.
Hipersegmentación constitucional hereditaria. Reacciones mieloides de la sepsis.
Afecciones hepáticas. Leucemia mieloide. En la agonía.
 Eosinofilia: Infecciones parasitarias. Reacciones alérgicas. Enfermedades cutáneas.
Neoplasias.
CUESTIONARIO
1. Explique el fundamento del colorante de Wright.
La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky.
Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como eosina Y
o eosina B.
La acción combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que da una coloración púrpura
a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y da color rosado a los eritrocitos. Los
componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y.
Las propiedades de tinción de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras
químicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de ácidos nucleicos, las
proteínas de los núcleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul B, colorante básico. La
tinción de Wright cuyo colorante está compuesto de azul de metileno (que tiñe de color azul las partes
ácidas de las células) y eosina (que tiñe las partes alcalinas) disueltos en metanol (que permite la fijación de
las células), adicionando a la preparación buffer de fosfatos (que rehidrata a las células después de la
exposición con metanol).
La eosina y colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de las moléculas de hemoglobina y a las
proteínas básicas.
2. Cómo haría el recuento de G.B. si no cuenta con la pipeta de Thoma.

-Se debía usar la pipeta antigua con bulbo, pues la dificultad de esta es que no se puede mezclar bien
la sangre por lo que dificultaría la cuenta de leucocitos. Se coloca en otro recipiente para mantener la
misma concentración de glóbulos blancos.
-Para realizar este análisis no se precisa estar en ayunas. Se precisa localizar una vena apropiada y, en
general, se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar la muestra
utilizará guantes sanitarios, una aguja. Le pondrá un tortor en el brazo para que las venas retengan más
sangre y aparezcan más visibles y accesibles.
-Limpiará la zona del pinchazo con un antiséptico y mediante una palpación localizará la vena
apropiada y accederá a ella con la aguja. Le soltarán el tortor.
-Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizará una aspiración (mediante la jeringa o
mediante la aplicación de un tubo con vacío). Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la
zona con una torunda de algodón para favorecer la coagulación.
3. Ud. cuenta 10 campos de 100 G.R. c/u y cuenta un total de 25 plaquetas. Si se tiene el
dato que el paciente tiene 40 de Hto. ¿Cuál es en Nro. de plaquetas por mm 3? Escriba
sus cálculos
Para cuantificar de forma aproximada el número de trombocitos comprendidos en 1 mm cúbico

de sangre, se aplica la siguiente fórmula:
PLT / mm cúbico = PLT / C x 20.000

PLT / mm cúbico = Número de plaquetas por mm cúbico de sangre.
PLT / C = Media del número de plaquetas contadas en varios campos microscópicos (en este
caso, en 10 campos microscópicos)
20.000 = Es el número de campos que equivaldrían a 1 mm cúbico de sangre.
PLT / mm cúbico = (7 + 8 + 11 + 6 + 12 + 10 + 8 + 15 + 7 + 9) / 10 x 20.000 = ( 93 / 10 ) x

20.000 = 9,3 x 20.000 = 186.000 trombocitos.
Número de plaquetas contadas en 10 campos microscópicos: En
total 93 plaquetas.
-Media del número de plaquetas contadas en 10 campos microscópicos (PLT / C):
La media de plaquetas es 9,3 porque hay 93 plaquetas en 10 campos microscópicos.
-Número de plaquetas por mm cúbico de sangre (PLT /mm cúbico): Hay
186.000 plaquetas por mm cúbico de sangre.
4. Dibuje las células sanguíneas observadas en práctica, señalando su nombre.
BASOFILO
GRABULOSITO EOSINOFILO
23
5. Pegue fotos de células observadas en práctica, señalando su nombre y
aumento.
GRANULOSITOS EOSINOFILO
BASOFILO MONOCITO
PRÁCTICA NO. 04
VÍAS DE INOCULACIÓN EN ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
INTRODUCCIÓN
La bioética tiene como objetivo conectar la reflexión ética con la investigación científica, con la
finalidad de construir una ciencia con conciencia al servicio integral del hombre. La
experimentación clínica, constituye un valor en sí misma que debe ser buscado lícitamente por
los científicos y que no se contrapone con la instancia ética en cuanto al objetivo común de
ambas que es la búsqueda de la verdad para el hombre y para su salud.
La elección de especies animales se basa en diversas consideraciones. Se debe tomar en cuenta

si la especie en cuestión es susceptible a la enfermedad contra la cual estamos elaborando el
producto. Es importante, además, considerar el costo de los animales, así como el de su
mantenimiento, el tamaño y docilidad de los mismos, etc. Un factor importante en bioterios
(unidades en donde se crían estos animales) y en laboratorios, es el manejo adecuado, tanto
para evitar heridas por mordeduras y arañazos, etc., como para evitar el excesivo sufrimiento de
los mismos.
Los animales de experimentación han proporcionado modelos para la realización de diferentes

investigaciones en diferentes áreas de las ciencias de la vida. Los animales deben tratarse con
seriedad y cuidado y si el sacrificio es parte de la experimentación ésta debe de realizarse bajo
un protocolo de eutanasia apropiado. El manejo de estos animales varía de especie a especie.
Las especies que más se utilizan en el laboratorio son el cobayo, ratón albino, rata albina y el
Hamster, de ellos ofrecen mayor dificultad la rata y el ratón porque al sentirse capturados
muerden. El cobayo y Hamster son sumamente dóciles.
La inoculación de sustancias es una práctica generalizada, y en el área de la inmunología las

inoculaciones representan la práctica más extendida, pero también existen pruebas
diagnósticas, los test alérgicos que demandan cierto conocimiento de las diferentes vías de
inoculación. Asimismo, la toma de muestras sanguíneas es un procedimiento de rutina en la
mayor parte de los laboratorios de inmunología, ya que a través de este procedimiento se
obtienen células, fluidos y moléculas tanto para la investigación como para el diagnóstico.
OBJETIVO
 Aprender el manejo adecuado de los animales más comunes de laboratorio.
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Y VENOPUNCIÓN (SANGRADO)
1. Inoculación y venopunción intravenosa en ratón y rata. Introduzca al ratón en un

tubo de paredes lisas y con un orificio de salida en la tapa donde se extrae la cola. Limpie
la cola con una torunda y agua caliente, para que la vena caudal se dilate e inocule con una
jeringa de tipo tuberculina usando una aguja de 25. Para la venopunción se procede de la
misma manera e incluso se puede cortar un pedazo de la cola.
25
2. Inoculación intraperitoneal en ratón, rata o cobayo. Sujete al animal con la mano,
con la parte ventral hacia arriba, incline la cabeza hacia abajo, con la idea de que las
vísceras se desplacen hacia abajo, limpie la región peritoneal con una torunda y agua
caliente; posteriormente, con una torunda desinfecte la zona, con la ayuda de una jeringa
tipo tuberculina con aguja delgada, se procede a la inoculación de la sustancia a probar. Al
introducir la aguja debe percibir que perfora los dos planos (piel y pared abdominal).
3. Inoculación subcutánea en rata, ratón o cobayo. Con la ayuda de unas pinzas, se

inmoviliza al animal por atrás de las orejas, fije las pinzas del lado opuesto y jale la cola.
Con los dedos pulgar e índice forme un pliegue de la piel e introduzca la guja por este
pliegue.
4. Inoculación intramuscular. Se utiliza como una vía de administración sistémica, en

estudios de liberación lenta (formulaciones oleosas) y en valoración de vacunas.
La inyección debe hacerse en una masa grande, alejada de vasos sanguíneos y
nervios mayores. Se hará entre la cara lateral y la craneal de los músculos del muslo.
Inyecte lentamente, retire la aguja y dé masajes en la zona.
5. Punción cardiaca. Anestesiar al animal, limpiar la zona izquierda del tórax, localizar el
corazón y extraer lentamente lasangre usando una jeringa con aguja del número 20 x 32.
FOTOS QUE MUESTRAN LAS VÍAS DE INCOCULACIÓN
INOCULACIÓN O SANGRADO INTRAVENOSA INOCULACIÓN INTRAPERITONEAL

PUNCIÓN CARDIACA
TAREA DE LABORATORIO: COLOCAR SUS FOTOS DE LA PRÁCTICA
CUESTIONARIO:
1. Anote los usos de la inoculación.
.Introducir algo que crecerá y se reproducirá, y comúnmente se utiliza esta con respecto a la introducción de
suero sanguíneo, una vacuna o una sustancia dentro del cuerpo de un humano o de un animal, especialmente
para producir inmunidad a una enfermedad específica.
2. Anote los usos de la venopunción.
 Restaurar y mantener el volumen circulatorio y el balance hidroelectrolítico

 Administrar medicamentos
 Administrar sangre y sus derivados
 Suplir déficit nutricional
 Mantener una vía venosa permeable
 Tomar muestras de sangre
PRÁCTICA 05
FAGOCITOSIS IN VIVO
INTRODUCCIÓN
La fagocitosis se inicia con la adherencia de células fagocíticas al endotelio vascular. Estas son
células especializadas, que pueden ser macrófagos o PMN. Los mismos serán estimulados para
que produzcan citoquinas (IL-1, TNF, IFN). La quimiotaxis es la etapa de movilización y
reclutamiento de leucocitos, por medio de la interacción celular, a la zona o tejido lesionado. El
fagocito se adhiere levemente a la superficie del endotelio (previamente activado por las
citocinas), a través de uniones moleculares de baja afinidad entre receptores en el leucocito y
selectinas sobre la superficie endotelial (selectina E y selectina P, por ejemplo).
El flujo sanguíneo laminar empuja a los leucocitos así adheridos en dirección de la corriente
sanguínea. El fagocito se despega de las interacciones corriente-arriba y sus ligandos de
membrana se unen a nuevas selectinas corriente-abajo. El resultado es un movimiento neto a lo
largo de la superficie endotelial. Otras moléculas que participan en esta movilización son las
moléculas de adhesión vascular (VCAM-1) presentes en el endotelio, cuyos ligando
correspondiente muestran preferencia por los linfocitos T y eosinófilos.
En un punto específico, determinado por la presencia y activación de quimiocinas, los fagocitos

movilizados establecen interacciones intercelulares de gran afinidad con el endotelio por medio
de integrinas y otros ligando endoteliales. En especial las moléculas endoteliales LFA-a, CR3 y
VLA-4 se adhieren a ligando específicos sobre los fagocitos, entre ellos VCAM-1 e ICAM-1.
La expresión de estos ligando sobre la superficie del fagocito es regulada por proteínas
inflamatorias, como el TNF y la IL-1.
Es en ese punto de movilización lenta cuando los fagocitos, atraídos por gradientes de
concentración de las quimiocinas, atraviesan el epitelio vascular hacia el foco de infección
patógena. Los receptores sobre la membrana de los fagocitos actúan como mecanismos de
adherencia sobre los microorganismos, sea a productos microbianos específicos o sobre
opsoninas (opsonización) del sistema inmune del hospedador.
La unión a receptores de adherencia promueve señales de comunicación intracelular que

resultan en la evaginación de la membrana del fagocito rodeando al receptor y su ligando
patogénico. Al rodear por completo al complejo receptor-molécula, la membrana se une en sus
extremos y libera al interior de la célula un fagosoma. Esto puede ocurrir en más de un punto
de la membrana celular.
Una vez que el fagolisosoma es formado comienza la desintegración del micororganismo,

proceso que se realiza por mecanismos dependientes o independientes de Oxígeno. El primero
se da tras activarse rutas metabólicas que consumen oxígeno, como el sistema de la NADPH
oxidasa, el cual produce la liberación de radicales libres del oxígeno, que se constituyen en el
principal mecanismo bactericida para los microorganismos. En el segundo caso se liberan
enzimas hidrolíticas que destruirán al antígeno.
OBJETIVO
1. Comprender el proceso de fagocitosis in vivo y aplicar los conocimientos en casos de
daño tisular, o invasión de múltiples microorganismos o sustancias.
1. De laboratorio:
 Tubos de ensayo.
 Mechero y asa bacteriológica, en anillo.
 Centrífuga
 Solución salina fisiológica estéril
 Tubo Nº 3 de Mc. Farland
 Estufa y Baño María
 Agujas hipodérmicas
 Tabla de disección
 Estuche de disección
 Láminas porta-objetos
 Soporte de coloración
 Colorante de Wright y azul de metileno
 Agua destilada
 Microscopio
 Aceite de cedro
2. Biológico:
 Cultivo de Escherichia coli
 Rata blanca adulta
PROCEDIMIENTO:
1. Obtención del inóculo bacteriano
 Sembrar la cepa de E. coli en caldo nutritivo e incubar a 37 ºC por 18 horas

 Centrifugar a 1500r.p.m. durante 15 minutos, eliminar el sobrenadante y agregar
solución salina fisiológica (repetir esta acción tres veces)
 Hacer una suspensión del cultivo equivalente a la turbidez del tubo Nº 03 del
Nefelómetro de McFarland
 Llevar la suspensión a baño maría a 85 ºC durante 60 min.
2. Inoculación: PRIMERA FASE

 Inoculación de 1 mL de suspensión de E. coli (cultivo muerto), mezclado con
saponina (50/50), vía intraperitoneal en ratas blancas adultas.
 Dejar reposar las ratas 48 horas.
3. Inoculación: SEGUNDA FASE

 A la misma rata, inoculación de E. coli (cultivo vivo), vía intraperitoneal.
 Dejar reposar las ratas 4 horas
4. Disección de las ratas

 Luego, diseccionar la rata para la obtención de líquido intraperitoneal con hisopos
estériles.
 Extender los hisopos sobre 4 láminas portaobjetos, secar al mechero.
 Colorear con Wright o azul de metileno y observar al microscopio.
 Dibujar sus resultados y preparación de su informe.
TAREA DE LABORATORIO
1. ¿Cuál es la finalidad de inocular primero el germen muerto?

Genera anticuerpos específicos para la inoculación dada.
2. ¿Cuál es el papel de la saponina?
Las saponinas, tiene un efecto de adyuvante forman poros en las membranas celulares,
permitiendo al antígeno ser procesado y presentado por vía endógena, lo que trae consigo su
presentación en moléculas MHC de clase I y por lo tanto, la activación de CTLs.
3. ¿Por qué se inocula por segunda vez el germen vivo?
Para poder verificar la eficacia de los anticuerpos generados contra la inoculación dada.
4. COLOCAR LAS FOTOS DE SU PROCEDIMIENTO

5.- DIBUJAR SUS OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS, SEÑALANDO LO QUE
OBSERVA
6.- COLOCAR SUS FOTOS DE OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS
MACROFAGOS Y NEUTROFILOS EN FAGOSITOSIS

PRÁCTICA 06
HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1: SHOCK
ANAFILACTICO
INTRODUCCIÓN
La anafilaxia es un síndrome de aparición brusca y afectación plurisistémica cuya incidencia global no se

conoce con toda precisión. La anafilaxia constituye una reacción inflamatoria de instauración
generalmente inmediatamente causada por la liberación masiva de mediadores inflamatorios (histamina,
prostaglandinas, serotonina, factor activador de plaquetas, leucotrienos) de leucocitos basófilos y
mastocitos, como consecuencia de la unión de anticuerpos tipo inmunoglobulina E (IgE) frente a
determinados antígenos. Tales mediadores son causantes de manifestaciones clínicas que según la vía de
acceso y el grado de difusión intracorporal del alérgeno (sustancia extraña), pueden adoptar una
forma localizada como la rinitis o el asma, o generalizada como el eritema, diaforesis, palidez o
cianosis, vasodilatación sistémica, hipotensión, shock, etc.
La unión Ag.-Ac. (Anticuerpo tipo IgE) es uno de los mecanismos fisiopatológicos más importantes que
se involucran en el desarrollo de la anafilaxia, por lo cual los modelos que desarrollan las reacciones
de hipersensibilidad tipo1 asociadas a esta interacción han cobrado vital importancia en la evaluación
preclínica de sustancias con efectos anti anafilácticos.
En la producción del choque anafiláctico experimental existen dos periodos marcados. El primero
llamado “Sensibilizante” es producido por la inyección de un antígeno generalmente, albúmina de
huevo, por vía intraperitoneal o subcutánea, seguida de un periodo de latencia que permitirá al
anticuerpo formado fijarse en los tejidos. El segundo periodo o desencadénate es producido dos a
tres semanas después de la sensibilización con una dosis de antígeno mayor e inyectado por vía
venosa. El cobayo es el animal más usado para la demostración de anafilaxis, debido a que permite
visualizar con claridad todas las manifestaciones de esta reacción.
La serie de manifestaciones que serán observadas en el cobayo dependerán principalmente de dos

factores pato-genéticos: contracción de la musculatura lisa y aumento de la permeabilidad capilar; y
las manifestaciones externas consistirá en un cuadro caracterizado por: Intranquilidad, disnea,
dificultad para respirar, rascado del hocico, trastornos esfinterianos, etc.
OBJETIVO
1. Demostrar al alumno una de las manifestaciones más dramáticas de la combinación

antígeno- anticuerpo (Reacciones de Hipersensibilidad-I).
MATERIALES
 Ovoalbúmina
 Cobayo
 Mechero y asa bacteriológica, en anillo
 Solución salina fisiológica estéril
 Agujas hipodérmicas N°21
 Jeringasde 5 ml
 Equipo de disección
 Algodón
 Alcohol yodado
PROCEDIMIENTO
1. Dosis sensibilizante: Inyectar 1.mL de una solución al 50% de albumina de huevo vía
intraperitoneal. Dejar reposar al cobayo por 21 días.
2. Dosis desencadenante: Después de los 21 días inyectar el doble de la dosis sensibilizante,
vía intracardiaca.
3. Observar los síntomas del choque anafiláctico e interpretar los resultados
4. Tan pronto como el animal deje de respirar, lleve a cabo la necropsia. Observe el corazón
y los pulmones primero, observe otrosórganosbrevemente y describa cualquier otrohallazgo
positivo.
1. Anotar resultados de sus observaciones (NO SE TRABAJO)
SINTOMAS OBSERVACION
Intranquilidad,
Disnea
Dificultad para respirar
Rascado del hocico
Erizado pelos de nuca
OTROS:
NECROPSIA OBSERVACION
Corazón
Pulmones
Hígado
Riñones
Otros órganos
2. Esquematice y explique la fase sensibilizante y la fase desencadenante
3. Colocar sus fotos de la fase sensibilizante:
4. Colocar sus fotos de la fase desencadenante (síntomas y necropsia)
PRÁCTICA 07
SISTEMA SANGUÍNEO ABO Y FACTOR RH
INTRODUCCIÓN
En 1818, James Blundell, Fisiólogo Inglés, hizo la primera transfusión de hombre a hombre y
para 1875 ya se habían hecho unas 350 transfusiones en humanos. En 1899 Shattock informó
sobre la aglutinación de eritrocitos de algunas personas con el suero de otras e interpretó este
fenómeno como anormal. Fue Karl Landsteiner, quien descubrió las diferencias de la sangre entre
grupos de personas y con su teoría sobre la especificidad de las reacciones serológicas (1900) dio
inicio a la era inmunológica de la historia de la transfusión sanguínea.
Lanomenclaturaaceptadaen1928porla LigadelasNacionesfueladeJansky,quienpropuso cuatro

grupossanguíneos:(A, B, O, AB). Eldescubrimientodelosgrupossanguíneosrevolucionó laprácticade
la transfusión sanguíneapuestoqueyaconestehallazgo eraposibleseleccionar los donantes mediante
pruebas pretransfusiónales in vitro. El avance en la tecnología permitió el almacenamiento seguro
de sangre y dio lugar a la formación del primer banco de sangre en Estados Unidos en el Cook
Country Hospital de Chicago en 1937. En los últimos años se ha logrado avanzar al grado de
permitir la transfusióndemúltiplesfraccionesdesangre.
Las membranas de las células del organismo humano, incluyendo los eritrocitos, están formadas
por varias capas de moléculas lipídicas, proteicas, y carbohidratos distribuidos en tal forma que
permiten una separación entre elmedio intracelular yelmedio extracelular. Muchasde estassustancias,
esdecir, glicolípidos yglicoproteínas tienencapacidad antigénica yconstituyen los llamados grupos
sanguíneos. Se cree también que algunos grupos sanguíneos son proteínas puras, pero es posible
que dichas sustancias solo sean las portadoras de los determinantes antigénicos y que siempre
necesiten de lípidos o carbohidratos para efectuar como antígenos completos.
Estos antígenos de la membrana están determinados genéticamente. Los genes que controlan la
estructura de un antígeno en particular, ocupan un lugar correspondiente (loci) en un par de
cromosomas homólogos, en esta forma para todos los genes que se encuentran en cromosomas
autosómicos un individuo puede ser homocigoto o heterocigoto. El único grupo sanguíneo que no
es autosómico es el sistema XG cuyos genes están en el cromosoma X.
Estos antígenos pueden formar parte de la membrana del glóbulo rojo como ser el antígeno Rh
que es una lipoproteina o estar adherido a la superficie de los glóbulos rojos, como los antígenos
ABO que químicamente son lipopolisacáridos. Algunos antígenos sanguíneos (Ej. ABO) están
presentes en la mayoría de los tejidos y líquidos corporales y otros como el Rh, K, etc. limitados y
formando parte de las membranas de los glóbulos rojos. Hoy en día se conocen más de 15
sistemas de grupos sanguíneos distintos como muchas variantes dentro de cada sistema, la
mayoría tienen 2 o 3 alelos pero por ejemplo el Rh tiene por lo menos 28 alelos.
Los antígenos A y B son glicoproteínas, producidas por genes alelicos en un locus único,
localizados en la parte proximal del brazo corte del cromosoma 9. Los antígenos correspondientes
se encuentran aparentemente adheridos a la membrana de los glóbulos rojos. La especificidad
antigénica es conferida por el azúcar, terminal; Ej. Azúcar N- aceteilgalactosamina proporciona la
especificidad antigénica A y el azúcar galactosa determina la actividad B. Los antígenos ABO
están presentes en todos los tejidos excepto el sistema nervioso central, de donde se deduce la
importancia de dicho sistema en
transfusión de eritrocitos, leucocitos, plaquetas y transplantes de tejidos, también se encuentran
presentes en las secreciones, como polisacáridos solubles. El polisacárido presente en las
secreciones es químicamente idéntico al presente en los glóbulos rojos.
SISTEMAS SANGUÍNEOS ESTABLECIDOS
SISTEMA SANGUÍNEO ABO

OBJETIVOS
1. Adiestrar al alumno en la determinación del grupo sanguíneo ABO y Rh
2. Capacitar al alumno en la interpretación clínica de resultados en relación al sistema ABO
y Rh
MATERIAL
 Portaobjetos. Rotulador para vidrio

 Lancetas estériles desechables
 Papel de filtro
 Alcohol de 96°
 Sueros anti-A, anti-B y anti-D
 Algodón
 Sangre obtenida por punción
PROCEDIMIENTO
Determinación del grupo hemático:

1. Masajear enérgicamente la yema de un dedo y limpiar con algodón humedecido en
alcohol. Dejar unos segundos que evapore y pinchar con la lanceta estéril. Sobre el
portaobjetos, depositar tres gotas de aproximadamente
0.5 cm de diámetro, bien separadas.
2. Sobre cada gota de sangre de la lámina porta se pipetean 10 µl del Ac
correspondiente. El orden recomendable es (de izquierda a derecha): anti-A, anti-B,
anti-D.
3. Mezclar bien la sangre y el Ac con una punta limpia para cada gota.
4. Casi instantáneamente podrá ver los resultados de A y B.
5. Para D, espere al menos tres minutos moviendo la lámina porta ligeramente. En caso
de duda, visualice con transiluminador omicroscopio.
1. Explique a qué tipo de reacción serológica corresponde la determinación del grupo
sanguíneo.
La determinación del grupo sanguíneo se da por aglutinación por formar cúmulos visibles ante
la reacción antígeno- anticuerpo. Se utilizó entonces la Reacción Serológica de Aglutinación
2. Explique porque una persona del grupo A no puede ser donador para un receptor del
grupo B.
Porque el grupo B, tiene anticuerpos anti-A en el plasma sanguíneo, lo cual conllevaría a una
hemólisis.
3. Explique porque el grupo “O” es considerado donador universal.

Porque el grupo “O” no posee ningún antígeno en su membrana. Al no tener ningún antígeno no va a
desencadenar una respuesta inmune.
4. Explique porque el grupo “AB” es considerado como receptor universal.
Porque puede recibir sangre de todos los grupos, esto porque no posee anticuerpos en la membrana de
los eritrocitos.
5. Usando cuadrado de Punnet, establezca la descendencia entre un padre grupo “A” y la

madre grupo “B”
6. Usando cuadrado de Punnet, establezca la descendencia entre un padre del grupo “O” y
la madre del grupo “AB”
7. Con esquemas, explique en qué consiste la eritroblastosis fetal, proceso que puede
presentarse en algunos embarazos como consecuencia del factor Rh.
PRÁCTICA Nro. 08
PRUEBAS SEROLÓGICAS DE DIAGNÓSTICO
INTRODUCCIÓN:
REACCIÓN DE WIDAL: demuestra la presencia de anticuerpos aglutinantes (aglutininas)

contra los antígenos H (flagelar) u O (somático) de la Salmonella typhi en el suero de los
pacientes con fiebre tifoidea y también mide los antígenos somáticos de
S. paratyphí “A”, S. paratyphi "B". Los anticuerpos contra el antígeno O aparecen luego de 6
a 8 días de iniciada la enfermedad y desaparecen posteriormente entre 3 y 6 meses. Los
anticuerpos contra el antígeno H aparecen a los 8 a 12 días, alcanzando títulos más elevados
con respecto a los anti-O y pueden persistir por más de 1 año.
LA PROTEINA C-REACTIVA (PCR); es una proteína sanguínea que forma parte de las
denominadas Proteínas de Fase Aguda que tiene la propiedad de precipitar los polisacáridos
somáticos de los neumococos. La PCR comúnmente se encuentra aumentada en artritis
reumatoidea activa, infecciones virales, tuberculosis, fiebre reumatoidea activa, infarto agudo del
miocardio, luego de una operación quirúrgica y de transfusiones sanguíneas. La determinación
de PCR indica la intensidad de la enfermedad y la respuesta del paciente a un tratamiento dado.
La PCR se detecta en suero por reacción con un anticuerpo específico adsorbido sobre un soporte
inerte de látex. La PCR se une a los anticuerpos adsorbidos produciendo la aglutinación de las
partículas de látex, visible macroscópicamente.
LA ARTRITIS REUMATOIDEA; es un Síndrome crónico de origen desconocido; se

caracteriza por la inflamación simétrica de las articulaciones. Los factores reumatoideos
generalmente de tipo IgM reaccionan con las fracciones Fc. de las IgG. El factor reumatoideo de
tipo IgM se detecta en presencia de Gamma-inmunoglobulina o fracción II de Cohn (que actúa
como antígeno) adsorbida sobre un soporte inerte de látex poliestireno. El antígeno se une a los
FR (anti - IgG) produciendo una aglutinación de las partículas de látex poliestireno, visible
macroscópicamente.
ANTIESTREPTOLISINA-O (AS0) es la medición de anticuerpos anti-Estreptococo

betahemolíticos del tipo A (Streptococcus pyogenes). Esta bacteria produce una enzima llamada
estreptolisina O, que puede destruir los hematíes y el cuerpo reacciona contra ella produciendo
anticuerpos específicos antiestreptolisina O. La presencia de títulos altos de antiestreptolisinas O
ó ASLO, indican una infección por la bacteria Estreptococo
betahemolíticosdeltipoA,quepuedeproducirunaglomerulonefritis,unafiebrereumática,una
endocarditis bacteriana o una escarlatina.
SÍFILIS: es una infección sistémica de evolución crónica, con períodos asintomáticos, causada
por Treponema pallidum. Es un patógeno exclusivo del hombre, quien es su único reservorio. Se
adquiere por contacto directo con una lesión de sífilis reciente, por vía transplacentaria y
raramente por transfusión de sangre. T. pallidum penetra a través de mucosa sana o piel
erosionada y rápidamente disemina en el organismo, por lo que desde etapas precoces la
infección es sistémica.
Las pruebas serológicas no treponémicas como el VDRL (Venereal Disease Research
Laboratory) o RPR (Rapid Plasma Reagin) son fáciles de realizar, tienen escaso costo
económico, son útiles para el diagnóstico y esenciales para controlar la respuesta al tratamiento,
para lo cual se necesita que el estudio sea cuantitativo. Resultan reactivas después de 14 a 20
días de aparecido el chancro.
Aunque estas pruebas habitualmente se negativizan después del tratamiento, en algunos
pacientes persisten reactivas por el resto de su vida, pero con títulos bajos. Un descenso no
significativo de los títulos o un nuevo ascenso después del tratamiento, hace sospechar fracaso
terapéutico o reinfección.
El objetivo de la práctica es:
1. Realizar in vitro pruebas serológicas como criterios de diagnóstico.
1. REACCIÓN DE WIDAL: (Aglutinaciones)
 Sobre una placa de cristal “escavada” se coloca en fila 80 uL de suero del paciente sin
diluir (5 en total). Agregar 1 gota de los antígenos correspondientes para S. typhí "O", S.
typhí "H", S. paratyphi "A", S. paratyphi "B” y Brucela.
 Se mezcla el suero con el antígeno, mover la placa varias veces hacia atrás y hacia
adelante por 5 minutos y se procede a la observación de una reacción de aglutinación
visible.
 Con los antígenos positivos repetir con cantidades de 40, 20, 10 y 5 uL,
respectivamente. Con este procedimiento los anticuerpos resultan titulados en 1/20,
1/40, 1/80, 1/160 y 1/320, respectivamente.
Negativo: No hay aglutinación.

Positivo: Aglutinación.
Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce la aglutinación.
2. PROTEÍNA C – REACTIVA
 Preparar una muestra diluida 1:20 de suero en un tubo de ensayo, mezclando 1 gota
(50uL) del suero con 1 mL. de buffer glicina. Luego, en una placa de vidrio mezclar
una gota (50 uL) del reactivo de látex y una gota (50 uL) del suero diluido.
 Inmediatamente poner en marcha el cronómetro, balanceando suavemente la placa de
vidrio por tres minutos. Observar la aglutinación sobre un fondo negro y por encima
de un haz luminoso.
Los sueros positivos pueden titularse efectuando diluciones seriadas de: 1:40, 1:80,
1:160, etc.
Negativo : No hay aglutinación

Positivo : Aglutinación que aparece a los tres minutos.
Título : Inversa de la máxima dilución en la que se observa
aglutinación.
3. ARTRITEST:
 Diluir una muestra de suero 1: 20 con buffer glicina. En una placa de vidrio colocar
separadamente el suero diluido 1 gota (50 uL) y una gota de reactivo de látex-
globulina. Mezclar con un palillo descartaba hasta obtener una suspensión uniforme,
 Inmediatamente disparar el cronómetro, balanceando suavemente la placa de vidrio
observando el resultado dentro de los dos minutos.
 Para la titulación de los sueros se hacen diluciones en tubos, colocando 1,9 mL de
buffer glicina en el primer tubo y 1 mL en los restantes.
 Agregar 0,1 mL de suero al tubo Nº 1 mezclando, luego transferir 1 mL de la
dilución al tubo Nº 2, y así se continua con el resto de los tubos. Se obtienen
diluciones de 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, etc.
Negativo: No se ve aglutinación.
Positivo: Aglutinación dentro de los dos minutos.
Título: Inversa de la máxima dilución en la que se produce aglutinación.
4. ANTIESTREPTOLISINA-O (ASO)
 Llevar los reactivosylamuestraatemperaturaambiente. Agitar el Reactivo Aantes de
usar, vaciando previamentelapipetadelgotero.
 En uno delos sectores delimitados dela placa adjunta al equipo colocar: 1 gota del
Reactivo A(25ul)másla muestra ycontroles25ul.
 Mezclar con palillo descartable (uno para cada muestra) hasta obtener una
suspensiónuniforme enlasuperficie delimitada delaplaca.
 Inmediatamente disparar un cronómetro, balancear suavemente la placa y
observar macroscópicamente el resultado dentro de los 2 minutos.
Negativo: suspensión homogénea.

Positivo: aglutinación que aparece dentro de los 2 minutos. Se califica de 1 a 4 +.
Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce aglutinación visible
macroscópicamente.
5. El VDRL es una técnica de floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina para detectar
anticuerpos antitreponémicos inespecíficos, del tipo reagina, producidos por el individuo
ante una infección sifilítica.
 En una lámina colocar una gota de suero más una gota del reactivo VDRL, agitar
constantemente por 5 minutos y observar al microscopio con objetivo 10X la
floculación formada.
 Para titulación del suero se hacen diluciones en SSF al ½, ¼, 1/8, 1/16, 1/32,
colocando una gota del suero diluido más una gota del reactivo VDRL.
Negativo: No se ve floculación, se informa como No Reactivo

Positivo: Floculación a los 5 minutos. Se informa como Reactivo.
Título: Inversa de la máxima dilución en la que se produce floculación.
6. El RPR es una prueba de floculación diseñada para detectar reagina en el suero de pacientes
con sífilis de manera rápida. La muestra se mezcla con una suspensión que posee
cardiolipina, lecitina y colesterol en partículas de carbón.
 En una lámina colocar una gota de suero más una gota del reactivo RPR, agitar
constantemente por 5 minutos y observar floculación visible.
 Para titulación del suero se hacen diluciones en SSF al ½, ¼, 1/8, 1/16, 1/32,
colocando una gota del suero diluido más una gota del reactivo RPR.
Negativo: No se ve floculación, se informa como No Reactivo

Positivo: Floculación a los 5 minutos. Se informa como Reactivo.
Título: Inversa de la máxima dilución en la que se produce floculación.
TAREA DE LABORATORIO:
1. Defina que es una reacción serológica directa e indirecta Directa: Aquellas que lavadas en el
principio de la reacción antígeno- anticuerpo. En el caso de una enfermedad infecciosa equivale a
decir que investigan la presencia del agente etiológico o de uno de sus componentes.
Indirecta: Aquellas que lavadas en la reacción antígeno- anticuerpo, investigan a la huella
que dejo el agente al pasar por el huésped en términos de una respuesta inmune puesta en
evidencia por el hallazgo de anticuerpos específicos contra el agente.
2. Defina que es reacción serológica de aglutinación y precipitación
Aglutinación: Cuando la acción del anticuerpo está dirigida a un antígeno de superficie celular, el
anticuerpo produce segregación de distintas células. La reacción suele ser más visible cuando el
anticuerpo es tipo Ig M o Ig G.
Precipitación: In vivo ocurren entre moléculas de un antígeno soluble y el anticuerpo
correspondiente. La unión antígeno- anticuerpo precipita de forma soluble y permite establecer la
presencia de anticuerpos específicos.
3. Defina que es una reacción de aglutinación pasiva.

Pasivo o indirecto, se basan en el empleo de una partícula aglutinante inerte a la cual se ha unido
un antígeno como, por ejemplo: Glóbulos rojos (la hemoglutinación). Es decir, son partículas o
células a los cuales se le agregan antígenos.
4. Diga a qué tipo de reacción serológica corresponden las pruebas realizadas en el

laboratorio.
Las reacciones de aglutinación y de precipitación son la base de la mayor parte de las
técnicas inmunológicas. Su principio se basa en la reacción antígeno-anticuerpo. Las
reacciones de precipitación son medibles en cantidad y son fáciles de ejecutar. Las técnicas
de aglutinación son sólo semicuantitativas y algo más difíciles. La aglutinación de los
antígenos nativos insolubles o de las partículas recubiertas por el antígeno puede evaluarse a
simple vista con o sin la ayuda del microscopio. Entre las ventajas de las reacciones de
aglutinación están su alto grado de sensibilidad y la enorme variedad de substancias
identificables a través del uso de partículas que están recubiertas por antígeno o por
anticuerpo. Según Coombs existen 3 requerimientos principales en las pruebas de
aglutinación: 1. Disponibilidad de una suspensión estable de células o de partículas. 2.
Presencia de uno o más antígenos cercanos a la superficie. 3. Conocimiento de que los
anticuerpos "incompletos" o no aglutinables no son localizables sin modificación (reacciones
antiglobulina.
5. Diga porque las pruebas de VDRL y RPR son consideradas no treponémicas. Mencione
que pruebas serológicas son del tipo treponémicas.
_Las pruebas de tamizaje realizadas en un banco de sangre no puedan ser tomadas como un
diagnóstico, pero sí se han convertido en el principal aliado para el control y prevención de
infecciones.
_Las pruebas no treponémicas son aquellas que no determinan anticuerpos específicos
contra T. pallidum, en su lugar detectan anticuerpos contra antígenos generados comúnmente
por los tejidos dañados por este microorganismo. Presentan un bajo costo, son fáciles de
efectuar y son utilizadas para la detección de una infección reciente, o para evaluar la
respuesta a un tratamiento, sin embargo, su desventaja es la alta inespecificidad que
presentan.
_Las pruebas treponémicas, son las que detectan anticuerpos IgG e IgM específicos contra T.
pallidum, gracias a que utilizan antígenos de la membrana externa del protozoo y antígenos
recombinantes.
_Presentan una alta especificidad y sensibilidad, por lo cual son utilizadas para confirmar los
resultados obtenidos con las pruebas no treponémicas.
_ Su desventaja es que no pueden distinguir entre una infección reciente y activa vs. una
infección anterior ya tratada y no contagiosa, debido a que el anticuerpo treponémico
permanece reactivo de por vida en el donador.
_Las pruebas más conocidas de este grupo son FTA-ABS (Inmunofluorescencia indirecta
con absorción del suero), TPHA (Micro-hemaglutinación), ELISA (ensayo de
inmunoadsorción ligado a enzimas) y Western Blot .
6. Coloque fotos de material usado en la práctica
7. Coloque fotos de resultados de la práctica
PRÁCTICA Nro.
09 ELISA
Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas
INTRODUCCIÓN:
ELISA (acrónimo del inglés Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, Ensayo por inmunoabsorción
ligado a enzimas) es una técnica de inmunoensayo, en la cual una enzima ligada a un complejo
antígeno – anticuerpo es capaz de generar un producto detectable con cambio de color. Aunque el
procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran número de variables, tales como selección
de reactivo, temperatura, medición de volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente puede
afectar a los pasos sucesivos y al resultado de la prueba; por lo tanto, como prueba diagnóstica, posee
diversas limitaciones que conviene conocer:
En primer lugar, un resultado positivo que confirma la presencia de anticuerpos no significa
necesariamente que el paciente esté enfermo. El cuerpo de una persona que ha estado enferma y que
ya se ha recuperado, o que ha sido vacunado, puede seguir produciendo anticuerpos. Esto originaría
un falso positivo.
En segundo lugar, hay personas que producen una baja cantidad de anticuerpos, por lo que éstos
pueden pasar desapercibidos y no ser medidos, dando lugar a un falso negativo. Sería el caso, por
ejemplo, de personas que padezcan una inmunodeficiencia, o que se encuentren en el periodo
ventana de la infección en el momento de realizar la prueba, o que estén infectadas por una cepa
extraña.
En tercer lugar, pueden aparecer falsos positivos cuando se da inespecificidad entre antígeno-
anticuerpo. En estos casos, normalmente, se lleva a cabo un western blot donde se detecta la
presencia de varios anticuerpos, simultáneamente, frente a la misma infección en una muestra.
Las enzimas que componen el conjugado deben reunir condiciones como la temperatura de catálisis
semejante a la de la reacción antígeno-anticuerpo; dar productos colorados y solubles al degradar el
substrato; y no dar productos intermedios de catálisis. Las enzimas más empleadas son la fosfatasa
alcalina (con substrato p-nitrofenil fosfato o dietanolamina en bufer carbonato pH 9,6) la peroxidasa
(con substrato ortofenilendiamina) y la beta- galactosidasa (son substrato o.nitrofenil-beta-
galactosido)
Tipos de ensayos ELISA
Se han desarrollado múltiples variantes de ensayos ELISA que permiten desde la cuantificación de
un antígeno en solución (DIRECTO), la detección de un anticuerpo (INDIRECTO) en una solución
(por ejemplo en el clonaje de anticuerpos monoclonales) o la determinación de la subclase (idiotipo)
de un anticuerpo (INDIRECTO).
A continuación se describen los más comunes.
1. ELISA directo Sandwich “DAS” (Double Antibody Sandwich).
Principio: Fijación al soporte de anticuerpos específicos del antígeno. Adición de la muestra
problema conteniendo el antígeno (Reacción Ag-Ac). Adición de anticuerpos monoclonales
específicos del antígeno a detectar (deben tener un epítopo diferente de los anticuerpos con los que se
han tapizado el soporte) conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los antígenos
añadidos con la muestra problema y que se encuentran fijados a los anticuerpos (2da. Reacción Ag-
Ac). Adición de un substrato para la enzima y luego una
sustancia reveladora de haber ocurrido la reacción enzimática. Se realiza la lectura del color en
forma visual (cualitativa) o usando lectores especiales para cuantificar. En caso de negatividad, no
aparecerá ningún color.
2. ELISA directo doble Sándwich “HADAS”.

Principio:
Fijación al soporte de anticuerpos específicos del antígeno. Adición de la muestra problema
conteniendo el antígeno (Reacción Ag-Ac). Adición de anticuerpos monoclonales específicos del
antígeno a detectar (deben tener un epítopo diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado
el soporte). (2da reacción Ag-Ac). Agregar anti-anticuerpos (contra el 2do. Ac) conjugados con una
enzima (3ra. Reacción Ag-Ac). Adición de un substrato para la enzima y luego una sustancia
reveladora de haber ocurrido la reacción enzimática. Se realiza la lectura del color en forma visual
(cualitativa) o usando lectores especiales para cuantificar. En caso de negatividad, no aparecerá
ningún color.
3. ELISA Indirecto
Principio: En el soporte se encuentra fijado el antígeno, se agrega la muestra que contiene el

anticuerpo que capta al antígeno fijado (reacción Ag-Ac). Se adiciona anti-anticuerpos conjugados
con una enzima. Se agrega el sustrato de la enzima usada y luego una sustancia reveladora de haber
ocurrido la reacción enzimática. Se realiza la lectura del color en forma visual (cualitativa) o usando
lectores especiales para cuantificar. En caso de negatividad, no aparecerá ningún color.
4. ELISA Directo Competitivo
Principio: En el soporte se encuentran fijados los anticuerpos. Se agrega en forma simultánea la

muestra que contiene el antígeno problema y una concentración conocida (comercial) del mismo Ag
marcado con una enzima. Se agrega el sustrato de la enzima usada y luego una sustancia reveladora
de haber ocurrido la reacción enzimática. Si la muestra es negativa la lectura de color será mayor a
que si la muestra contiene al antígeno, Estas lecturas deberán ser confrontadas con la curva de
calibración respectiva. Como puede observarse, los dos antígenos agregados están compitiendo con
el anticuerpo fijado en el soporte. También puede utilizarse el ELISA competitivo para detectar
anticuerpos.
5. ELISA Directo de inhibición
Principio: En el soporte se encuentran fijados los antígenos. Se agrega en forma simultánea la

muestra que contiene el antígeno, más un anticuerpo específico marcado con una enzima. En este
paso se establece una reacción de inhibición entre del Ag (muestra) con el Ac marcado, impidiendo
que este último se una al Ag del soporte. Con el lavado se eliminan el anticuerpo no fijado al Ag del
soporte y se determina la cantidad de anticuerpo marcado que se ha inmovilizado. Se construye una
curva de calibrado representando la cantidad de anticuerpo marcado inmovilizado frente a la
concentración de antígeno soluble añadida. Puede emplearse también el inhibitorio indirecto.
Objetivo de la práctica:
1. Conocer las técnicas y el fundamento que se usan para los distintos ELISA.
I. MATERIAL Y MÉTODOS
ELISA directo Sándwich “DAS” (Double Antibody Sandwich).
1. Anticuerpo fijado en el soporte
2. Agregar la muestra con el antígeno problema (Reacción Ag-Ac)
3. Agregar anticuerpo monoclonal contra el Ag que va marcado con enzimas
4. Adicionar sustrato para la enzima y el revelador.
5. Leer cualitativamente a la presencia de color o cuantitativamente en
fotocolorímetro.
ELISA directo doble Sándwich “HADAS”
1. Anticuerpo fijado en el soporte
2. Agregar la muestra con el antígeno problema (Reacción Ag-Ac)
3. Agregar anticuerpo monoclonal contra el Ag
4. Agregar un anti anticuerpo que va marcado con enzimas
fotocolorímetro.
ELISA Indirecto
1. Antígeno fijado en el soporte
2. Agregar la muestra con el anticuerpo problema (Reacción Ag-Ac)
3. Agregar anti-anticuerpo que va marcado con enzimas
fotocolorímetro.
ELISA competitivo para anticuerpos (Indirecto)
1. Antígeno fijado en el soporte.
2. Agregar la muestra con el anticuerpo problema y simultáneamente el mismo tipo de
anticuerpos marcadas con una enzima.
4. Leer al fotocolorímetro: ausencia de color, color tenue, color intenso y confrontar la lectura
con la curva de calibración.
ELISA directo Sandwich “DAS”
ELISA directo doble Sandwich “HADAS”

II. TAREAS DE LABORATORIO
1. Con esquemas, explicar el fundamento de los distintos tipos de ELISA

mencionados.
2. Colocar sus fotos de la práctica
PRÁCTICA 10
PRUEBAS RÁPIDAS DE DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO
INTRODUCCIÓN
DIAGNÓSTICO DE EMBARAZO:
La aparición de la hormona gonodotrofina coriónica ( hCG) en orina y suero poco después de la

concepción y su posterior aumento rápido durante el principio de la gestación convierten a esta
hormonaenunexcelentemarcador para la detección precozdel embarazo. La prueba hCG de
embarazo en un solo paso en placa (Orina/Suero) es una prueba rápida que detecta
cualitativamente la presencia de hCG en una muestra de orina o suero con una sensibilidadde
25mUI/ml.
La prueba utiliza una combinación de anticuerpos monoclonales y policlonales para detectar

selectivamente los niveles elevados de hCG en orina o suero. Laprueba hCG de embarazoen un solo
paso en placa (Orina/Suero) no muestra interferencias cruzadas con otras hormonas
glucoproteicas estructuralmenterelacionadas, FSH, LH y TSH, en niveles fisiológicos altos.
Lapruebautiliza dos líneas para indicar el resultado. La línea de la prueba utiliza una combinación
deanticuerposque incluyen unanticuerpo monoclonal hCG para detectar selectivamente niveles
elevados de hCG. La línea de control está compuesta por anticuerpos policlonales de cabra y
partículas coloidales de oro. Elensayo se realiza añadiendo la muestradeorinaosueroalpocillo de la
placa y observando laformación de líneas de color.
El Ag en las muestras positivas reacciona con el conjugado de color del anticuerpo específico
anti-hCG para formar una línea de color en la región de la línea de la prueba de la membrana. La
ausencia de esta línea de color sugiere un resultado negativo. Para servir como control del
procedimiento, siempre aparecerá una línea de color en la región de la línea de control, si la
prueba se ha realizado correctamente.
PRUEBA RÁPIDA PARA DIAGNÓSTICO DE ANTICUERPOS HIV 1+2
El Centro para el Control y la Prevención de Enfermedades de EE.UU. (CDC), destaca la

importancia de la utilización de pruebas rápidas de detección del HIV para facilitar el acceso al
diagnósticoprecozenzonasdealtaprevalencia, enindividuosdealtoriesgo oenzonas donde otros
métodos de diagnóstico como ELISA, Western Blot o amplificación de ácidos nucleicos no
esténdisponibles.
También son de gran utilidad en el momento del parto, especialmente para el diagnóstico de
mujeres que no hayan sido controladas durante el embarazo. Por otra parte, estas pruebas rápidas
constituyen unaherramienta diagnóstica que puede desempeñar un papel importante en campañas de
prevención y diagnóstico en entornos clínicos y no clínicos, facilitando de esta manera, la
detección precoz de la infección.
WL Check HIV 1+2 es un ensayo inmunocromatográfico "in vitro", de lectura visual, para la
detección cualitativa de anticuerpos contra los virus HIV-1 y HIV-2 en suero, plasma y sangre
entera. Laprueba constadeuncassetteplásticoquecontiene:-unamembranadenitrocelulosa
sensibilizada con antígenos recombinantes para HIV-1 (gp41) y HIV-2 (gp36) en la zona de
prueba "T", conjugados a oro coloidal. La muestra y el buffer se agregan en el pocillo de muestra
"S" solubilizando y mezclándose conelconjugado deantígenosrecombinantes.
Seguidamente, esta mezcla migra por capilaridad a través de la membrana de nitrocelulosa. Si la
muestra es reactiva, los anticuerpos anti HIV-1 y HIV-2 presentes, formarán un complejo con los
antígenos conjugados a oro coloidal. Este complejo se unirá posteriormente a los antígenos
inmovilizados en la zona de prueba "T" dela membranade nitrocelulosa, formando asíuna línea de
color rosa-rojo púrpura. La ausencia de dicha línea indica un resultado negativo. Como control de
procedimiento, la prueba incluye una zona de control "C" de color celeste que cambia a color
rosa-rojopúrpuratraselpasodelamuestra.La ausencia de esta línea invalida los resultados.
OBJETIVO:
1. Describir y comprender el procedimiento y fundamento de pruebas rápida del tipo

directo (Ags) e Indirecto (Acs).
DIAGNÓSTICO DEL EMBARAZO:
MATERIALES
 Muestra de suero y/o orina

 Test en tira
 Contenedor para la recolección de la muestra
 Cronómetro
PROCEDIMIENTO
 Deje que la placa, la muestra de orina o suero y/ó los controles alcancen la temperatura
ambiente (15- 30°C) antes de realizar la prueba.
 Deposite3gotasdeorinaosuero(aproximadamente100μL)enelpocillodelaplaca
(S)ypongaen marchaelcronómetro. Evite quequedenretenidas burbujasdeaire enel
pocillo delaplaca(S).
 Espere hasta que aparezcan una o dos líneas coloreadas. Los resultados deberán leerse
alos 3 minutos cuando se analice orina o a los 5 minutos cuando se analice una
muestra de suero.
 NOTA: Una concentración baja de hCG podría dar lugar, después de un periodo de
tiempo prolongado, a la aparición de una débil línea en la región de la prueba (T); por
tanto, no interprete elresultado después de 10 minutos.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
 POSITIVO: Aparecendos líneas coloreadasdistintas. Una línea quedaráenlaregión de

control (C) y otra línea quedará en la región de la prueba (T).
 NEGATIVO: Una línea coloreada aparece en la región de control (C). No aparece
ninguna línea coloreada en la región de la prueba (T).
 NO VÁLIDO: No aparece la línea de Control. Un volumen de la muestra
insuficiente o una técnica incorrecta son las razones más frecuentes del fallo de la
línea de control.
PRUEBA RÁPIDA PARA DIAGNÓSTICO DE ANTICUERPOS HIV
1+2 MATERIALES
 Muestra de suero y/o orina

 Test en tira
 Contenedor para la recolección de la muestra
 Cronómetro
PROCEDIMIENTO
 Los reactivos y las muestras deben estar a temperatura ambiente (18-30o C) antes de
utilizar.
 Agregar la muestra (dos gotas) sobre la superficieabsorbente del pocillo de
 Iniciar el cronómetro.
 Leer los resultados entre los 20 y 30 minutos. No leer pasado los 30 minutos ya que
pueden obtenerseresultadoserróneos.
 Algunas muestras positivas reaccionan inmediatamente mientras que otras lo hacen más
lentamente dentrodel tiempodelecturaindicado.
CRITERIOS DE VALIDACION DE LA PRUEBA
 El cassettecuentaconuna línea decolor celesteenlazonadecontrol"C" quealrealizar el

ensayo debe cambiar a color rosa-rojo púrpura. Este cambio de color confirma que se ha
agregado el volumen adecuado de muestra, que su migración fue apropiada y que la
realización del procedimiento fue correcta.
 Resultado Positivo (2 líneas): se observan 2 líneas de color rosa-rojo púrpura,
unaenlazonade prueba"T" yotra enla zonade control "C". El resultado espositivo,
aunque las intensidades del color de las líneas "T" y"C" sean diferentes.
 Resultado Negativo (1 línea): se observa solamente una línea de color rojo-rosa
púrpuraenlazonade control "C".
 Resultado Inválido: la ausencia de la línea de color rosa-rojo púrpura en la zona de
control "C" invalida elresultado,aunqueestéonopresentelalíneadecolorrosa-rojo
púrpuraenlazonadeprueba"T".
ESQUEMA DE PRUEBA RAPIDA PARA DIAGNÓSTICO DEL EMBARAZO:
Explique su fundamento
COLOQUE SUS FOTOS DE LA PRÁCTICA
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS CONSULTADAS
1. Mercado-Martínez, Pedro. Guía de Prácticas de Laboratorio de Análisis Biológicos. Departamento de

Microbiología y Parasitología. Universidad Nacional de Trujillo. 8va. Edición. 2017.
2. Mercado-Martínez, Pedro. Guía de Prácticas de Fisiología y Genética Bacteriana. Departamento de
Microbiología y Parasitología. Universidad Nacional de Trujillo. 8va. Edición. 2017.
3. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Manual de Prácticas de Laboratorio de Inmunología.
Universidad Autónoma de México. México 2015.
4. Rubio-Pedraza, Gonzalo. Manual de Prácticas de Inmunología Clínica. Departamento de Bioquímica
y Biología Molecular e Inmunología. Facultad de Medicina. Universidad de Murcia. España 2014.
5. Martínez-Romero, Aurora y Ortega-Sánchez, José. Manual de Laboratorio de Inmunología Básica y
Clínica. Como un suplemento de REDVET Revista electrónica de Veterinaria
(http://www.veterinaria.org/revistas/redvet). Abril, 2011
6. Paz-Morales, Ana y Gaitán-Fernández, Isabel. Manual de Prácticas de Laboratorio de Inmunología.
Facultad de Ciencias Médicas. Universidad Mariano Gálvez. Facultad de Ciencias Médicas y de la
Salud. Guatemala 2013.
Enlaces:
 http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/tema-07.pdf
 http://anatobioterio.blogspot.com/2011/03/tecnicas-de-inoculacion.html
 http://www.uap.edu.pe/intranet/fac/material/04/20122BX040104234040104011/2012
2BX04010423404010401137640.pdf
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UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO - FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

ESCUELA DE MEDICINA HUMANA - CURSO INMUNOLOGIA BASICA

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

LUCHO ZÁRATE, Mayra Briget.

MEJIA DELGADO, Elva.

Jueves: 06:00 pm. / 09:35 pm.

BIOSEGURIDAD Y SEÑALIZACIÓN EN EL LABORATORIO

Nivel de Bioseguridad 2: En él se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el

Nivel de Bioseguridad 3: Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clínicos de

NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA

1. Requisito indispensable: Antes de realizar cada práctica leer cuidadosamente el

1. Todo material biológico humano se manipula como si fuera potencialmente

1) Las salpicaduras o derrames en la piel intacta se deben lavar inmediatamente con

MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO INFECCIOSOS (RPBI)

Los RPBI se clasifican en:

Tipo de residuos Estado físico Envasado Color

Se entiende por señalización de seguridad y de salud a la que referida a un objeto, actividad o

4. Señales de relativas a los equipos de lucha contra incendios.

5. Señales de salvamento o socorro.

2. De forma sencilla esquematice el laboratorio con sus pictogramas y diga el

TOMA DE MUESTRA PARA LA OBTENCIÓN DE SUERO Y PLASMA

El sistema hematopoyético (Hema = sangre, poyesis = producción, fabricación) es el

En la médula ósea roja de los huesos se encuentran las células hematopoyéticas

La práctica tiene por objetivos:

1. Adiestrar al alumno en la extracción de muestras de sangre del antebrazo para la

2. Etiquetado de los tubos

Preparación del paciente

 Instruya al paciente sobre la técnica para tomar la muestra. Valore la existencia

Es utilizada para extraer pequeñas cantidades de sangre en determinaciones de

Agujas: Están numeradas dependiendo de su calibre. Para colección de sangre para

3. Como se debe de introducir el bisel de la aguja y ¿Por qué?

4. Defina que es un anticoagulante:

En medicina y farmacia, un anticoagulante es una sustancia endógena o exógena que interfiere o

5. ¿Qué diferencia hay entre suero y plasma?

-Cerrar el puño hace más prominente una vena.

-Colocar durante 30 segundos previos el compresor.

-Masajear el brazo desde la muñeca al codo.

-Golpear con el dedo índice el lugar de punción.

-Aplicar calor en dicha zona.

Colorantes modernos a los de Romanowsky; por ejemplo, los colorantes de Wright,

El estudio cito morfológico de extendidos coloreados de la sangre pone de manifiesto el

El hemograma consta de 2 partes: recuento leucocitario y la fórmula leucocitaria. El

La práctica tiene por objetivos:

2. COLORACIÓN DE EXTENDIDOS SANGUÍNEOS: (Método de Wright)

 El frotis bien seco y rotulado se coloca sobre la gradilla de coloración.

 Láminas con extendidos sanguíneos coloreados.

4. RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS

 Hemocitómetro (Cámara de Neubauer)

 Mezclar bien la sangre con el anticoagulante.

Nº de Leucocitos = G. blancos contados en 4 cuadrados x mm3

Nº de Leucocitos = Glóbulos contados

VALORES NORMALES: de 5 000 a 1 0 000 x mm3

5. RECUENTO DE PLAQUETAS: (método indirecto)

 De la lámina de hemograma contar 20 campos con más o menos 100 GR/campo.

EJEMPLO: Se observa 10 plaquetas por 100 glóbulos rojos como promedio:

Si el paciente tiene 35% de Hematocrito, según la tabla te corresponde 3'850 000 de

X = 3' 850 000 G.R. por mm3 X 10 plaquetas

X = 385 000 plaquetas x mm3

TABLA: RELACIÓN ENTRE HEMATOCRITO Y NÚMERO DE GLÓBULOS ROJOS

Hto. (%) Nro. G.R. Hto. (%) Nro. G.R.

28 3'140 000 41 4'510 000

Tabla: Fórmula leucocitaria normal

Granulocito Neutrófilo abastonado 2a5