Unidad I: QUÍMICA Y ANÁLISIS DE LOS PAI – SEMANA 3 Prof.

Gabriela Barraza Jáuregui

1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

DISEÑO DE LA SEMANA DE APRENDIZAJE 3

Competencia: Gestiona procesos y proyectos agroindustriales, optimizando los recursos,

fomentando el crecimiento y desarrollo sostenible, a través de: aplicar, adaptar, innovar y generar
procesos de manufactura, gestión de calidad y seguridad alimentaria, respondiendo a las
necesidades de desarrollo social, su contexto, prospectiva y globalización; conscientes de la
sustentabilidad y de aprovechamiento eficiente de los recursos bajo un enfoque de ética y
responsabilidad social.

Capacidad: Aplica conocimientos de matemáticas, ciencias e ingeniería en la solución de problemas

complejos de ingeniería

Resultado de Contenido Producto académico

aprendizaje
Métodos ópticos de análisis. Métodos Cuestionario
Explica métodos espectroscópicos. desarrollado.
espectróscopicos de Práctica de Laboratorio: Determinación de la Informe de prácticas
análisis. curva espectral de pigmentos naturales. desarrollado.

Secuencia de actividades
Unirte a la video llamada, haciendo clic en siguiente enlace:
Teoría:
https://meet.google.com/mvt-fsgz-jvn

Se presenta objetivo de la clase y realiza preguntas de forma verbal para

promover la participación activa de los estudiantes.
Día: miércoles 02/12/2020
Inicio Hora: 10:00-13:00

Práctica:
https://meet.google.com/aod-itxg-ymx

Día: viernes 04/12/2020

Hora: 15:00-17:00

Exposición docente

1. Lectura del módulo “Métodos espectroscópicos de análisis

“(Diapositivas).
Desarrollo En este material se desarrollan los fundamentos teóricos del contenido
de la temática de la semana 3, brindando ejemplos que te ayudarán a
conseguir el aprendizaje deseado. Deberás leer el material antes de
ingresar al aula virtual.
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

2. Presentación con diapositivas

3. Realización y envío de la tarea N°3 (cuestionario).

Lee con atención las instrucciones del cuestionario de la semana 3,
resuélvelo y luego envíalo.

4. Realización y envío del Informe de Práctica N°3.

Revisa tus anotaciones de la clase práctica y calcula los resultados,
elabora la discusión y conclusiones, con atención a las instrucciones
presentadas en la guía de práctica, teniendo en cuenta la rúbrica del
informe de práctica semanal.

Chat de Consultas de la Semana 3.

Si tienes dudas sobre el tema, desarrollo de la tarea y/o informe de prácticas
Cierre
puedes hacer tus consultas al chat del curso.
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

Cuestionario 3

1. Proponga 1 ejemplo para cada uno de los métodos espectroscópicos presentados en el

siguiente cuadro sinóptico.
2. Incluya el fundamento del método y el equipo empleado. Indique sus partes principales.
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

ESPECTROFOTOMETRÍA

I. OBJETIVOS

Graficar el espectro de pigmentos naturales.

Determinar la longitud de onda de máxima absorbancia.

II. FUNDAMENTO

La radiación electromagnética puede clasificarse según la longitud de onda o la

frecuencia. La frecuencia y la longitud de onda están relacionadas por la ecuación
2.

  c (2)

donde  es la longitud de onda (cm), v es la frecuencia y c es la velocidad de la

luz (3 x 1010cm/s). Las unidades de la longitud de onda son generalmente
nanómetros, pero también pueden utilizarse Angstroms, milimicras o
centímetros.

El Cuadro 2 muestra los intervalos de longitudes de onda para las diversas

categorías de radiación electromagnética.

Cuadro 2. Clasificación de la radiación electromagnética y efectos de la

radiación sobre las moléculas.

Región Rayos X Ultravioleta Visible Infrarrojo Microondas

Longitud de 0.1-100 100-400 400-800 800 - 100 105-108
onda (nm) 000
Efecto sobre Excitación Excitación Excitación Aumento de
la molécula de los de los de los Aumento de las
electrones electrones electrones las rotaciones
de valencia de valencia de valencia vibraciones moleculares
moleculares
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

Las especies químicas interactúan con la radiación electromagnética en formas
que reducen la intensidad de la radiación. Los efectos de la interacción varían
con la longitud de onda de la radiación y la naturaleza de las especies químicas,
e incluyen transiciones en las vibraciones moleculares, las rotaciones
moleculares y en los niveles de energía. Las interacciones pueden cuantificarse
comparando la radiación incidente sobre una muestra con la radiación
transmitida por la muestra. En general, estas comparaciones se hacen con
instrumentos llamados espectrofotómetros y requieren que la muestra se
disuelva en un disolvente que no absorba en forma apreciable a la longitud de
onda de interés.

Por lo general, los espectrofotómetros tienen la estructura básica que se muestra

en la Figura 1.

A continuación, se describen los elementos esenciales y sus funciones:

1. Fuente luminosa. Casi siempre se utiliza una lámpara de tungsteno para

generar longitudes de onda entre 340 y 900 nm (visible), y una lámpara de
hidrógeno para generar longitudes de onda entre 200 y 360 nm (uv).

2. Selector de longitudes de onda. Como es necesario tener una luz incidente

mono cromática sobre la muestra, debe utilizarse algún método para
obtener una banda angosta de longitudes de onda a partir de la luz
policromática que generan las lámparas. Se utilizan prismas o rejillas de
difracción para separar las diferentes longitudes de onda en bandas
estrechas.

3. Ranura. La luz que deja el selector de longitud de onda (también llamado

monocromador) no es verdaderamente monocromática, sino que está
compuesta por una banda angosta de longitudes de onda. El propósito de la
ranura es reducir la amplitud de esta banda para mejorar la pureza de la luz
que llega a la muestra.

4. Contenedores para la muestra. En general se utilizan tubos de ensayo de 1

cm de grosor o celdas rectangulares.
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

5. Fototubo o fotocelda detectora de luz. Estos son dispositivos que contienen
un material fotosensible que emite electrones cuando se expone a la luz. Los
electrones se emiten en una cantidad proporcional a la intensidad de la luz.
Así, es posible medir la intensidad de la luz transmitida (I).

Figura 1. Componentes básicos de un espectrofotómetro

La cantidad de luz que interactúa con una muestra en un espectrofotómetro

puede expresarse como transmitancia o como absorbancia. La transmitancia T
es la fracción de luz transmitida por una solución (ecuación 3).

T  I / I0 (3)

Donde, I es la intensidad de la radiación transmitida por la muestra e Io es la

intensidad de la radiación incidente sobre esa misma muestra. La absorbancia A
es una expresión de la cantidad de radiación absorbida por la muestra y es igual
al logaritmo negativo de T (ecuación 4).

A   log T  log I 0 / I (4)

La cantidad de radiación monocromática que una solución absorbe es

proporcional a la concentración de la especie absorbente en la solución y la
distancia que la radiación viaja a través de la muestra. La ley de Beer es una
expresión de estas relaciones (ecuación 5).

A  bc (5)
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

Donde,  es el coeficiente de absorción (también llamado coeficiente de
extinción molar), b es la longitud de la trayectoria de la radiación en la muestra
y c es la concentración de la especie absorbente. Las unidades que más se utilizan
son las siguientes:

A: la absorbancia no tiene unidades

α: Mol-1cm-1 o mMol-1cm-1
b: cm (las celdas con longitudes de trayectoria de 1 cm son las más comunes)
c: Mol o mMol

La ley de Beer es útil para determinar las concentraciones de los solutos en

solución. Establece que debe haber una relación lineal entre la concentración y
la absorbancia. Por lo tanto, si se conocen α y b, es posible calcular la
concentración a partir de un valor de absorbancia que se mide con un
espectrofotómetro. Por supuesto, es necesario asegurarse que el
establecimiento de la longitud de onda y la lectura de absorbancia del
espectrofotómetro sean precisas y que no haya sustancias interferentes
presentes. En la práctica, usualmente es mejor correr una serie de
determinaciones con estándares de concentración conocida y determinar la
concentración de la muestra desconocida a partir de una curva estándar.

En muchos casos, la sustancia que se va a medir no absorbe apreciablemente a

una longitud de onda adecuada, pero podría reaccionar con una segunda
sustancia para formar un compuesto coloreado que sí absorba. Cuando se lleva
a cabo este tipo de análisis, es importante que la segunda sustancia esté presente
en exceso, de manera que no limite la formación de color. A continuación, se da
una ecuación general para este tipo de análisis:

Cuando se utiliza un espectrofotómetro para determinar la concentración de una

sustancia en solución, es mejor construir una curva estándar. Esto se hace
preparando una serie de estándares de diversas concentraciones y haciéndolos
reaccionar con los reactivos que forman el color en las mismas condiciones que
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

se utilizarán al hacer el análisis de la muestra desconocida. En la mayoría de los
casos, los reactivos que forman el color y los disolventes absorberán una
pequeña cantidad de luz a la longitud de onda de interés. Por lo tanto, es una
buena idea preparar un testigo (o blanco) que contenga todos los reactivos en
las concentraciones apropiadas, pero no la sustancia que se va a analizar. La
absorbancia del testigo se resta de la absorbancia de la muestra calibrando el
espectrofotómetro a cero con el testigo o bien calibrando a cero con el
disolvente y restando la absorbancia del testigo a cada lectura de absorbancia de
la muestra. Las mediciones de la absorbancia son más precisas en el intervalo de
0.1 a 1.0 unidades de absorbancia. Por lo tanto, es aconsejable ajustar las
concentraciones (por dilución o por adición de mayor cantidad de muestra) de
modo que las lecturas de absorbancia se encuentren en este intervalo. Los
ajustes de concentración deben hacerse antes de agregar los reactivos que
forman el color.

Con respecto a la ley de Beer ocurren desviaciones evidentes, por lo que es

importante darse cuenta de las situaciones en que el comportamiento no lineal
podría constituir un problema. La ley de Beer sólo es válida en el caso de
soluciones diluidas. En soluciones concentradas, las moléculas pueden
interactuar en formas que cambien sus propiedades de absorción. Si su curva
estándar incluye concentraciones más altas y más bajas que la concentración de
la muestra desconocida, sabrá entonces que tiene un problema y podrá hacer los
ajustes correspondientes. Otra causa común de comportamiento no lineal es que
se agreguen cantidades insuficientes de los reactivos que forman color. La Figura
2 muestra una curva estándar.
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

Figura 2. Curva estándar empleada en espectrofotometría cuantitativa.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales

- Materia prima vegetal

- 10 mL de acetona
- Espectrofotómetro
- 2 tubos de ensayo
- 2 pizetas con agua destilada
- pipetas 10 mL

Métodos

Extracción de pigmentos liposolubles

- Pesar 1 g de zanahoria deshidratadas trituradas.

- Añadir 10 mL de acetona y filtrar a través de papel filtro (humedecido con
acetona y escurrido).
- Repetir la extracción en dos ocasiones más con 5 mL de acetona en cada
caso.
- Centrifugar el filtrado durante 5 min para separar las partículas en
suspensión.
- Filtrar con papel de filtro en un embudo. Guardar el filtrado. Este contiene
el pigmento que va a ser utilizado en el experimento.
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

Extracción de Pigmentos hidrosolubles

- Colocar 1 g de betarraga deshidratada en un beaker. Agregar agua destilada

y realizar la extracción.

- Filtrar con papel de filtro en un embudo. Guardar el filtrado. Este contiene el

pigmento que va a ser utilizado en el experimento.

- Curva Espectral

- Medir la absorbancia de la solución de pigmentos a diferentes longitudes de

onda, entre 320 a 780 nm (barrido espectral)
- Graficar absorbancia vs. Longitud de onda (CURVA ESPECTRAL)

IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

- Graficar la curva espectral de la muestra.

- Determinar la longitud de onda de máxima absorbancia.
-

V. CONCLUSIONES

VI. BIBLIOGAFÍA

Miller, D. D. 2001. Química de Alimentos: Manual de Laboratorio. Editorial

Limusa Wiley.
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

INFORME DE PRÁCTICA 3

Tema: espectrofotometría

Instrucción: Desarrolla y presenta el informe de la sesión Práctica N° 3, respetando las partes de

un informe científico. A continuación, te hago recordar el formato del informe.

Título de la Sesión Práctica

1. Resumen (Incluye objetivo, procedimiento y resultados y conclusiones del trabajo).

2. Introducción

Párrafo 1: ¿Que se conoce sobre el tema? Aspectos generales del tema.

Párrafo 2: ¿Qué se desconoce del tema? ¿Cuáles son los vacíos en el conocimiento que van a
ser llenados por este estudio? Algunos antecedentes sobre el tema.

Párrafo 3: ¿Cuál es la pregunta u objetivo de investigación?

3. Material y Métodos (Incluye los procedimientos, técnicas e instrumentos de recogida de

datos, métodos y/o técnicas de análisis y reducción de los datos)

4.- Resultados (descripción de los análisis, usando gráficos, tablas, matrices, datos textuales
referidos a los objetivos de la práctica)

5.- Discusión (interpretación de los resultados de la sesión práctica y/o desarrollo de ejercicios)

6.- Conclusiones: Hallazgos más relevantes de la investigación, limitaciones y prospectiva

7. Bibliografía (APA www.apastyle.org)

8. Anexos
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1.2. Teoría: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

Rúbrica para evaluar el informe de práctica 3

Contenido: Métodos ópticos de análisis. Métodos espectroscópicos.

Resultado de aprendizaje: Explica métodos espectróscopicos de análisis.
Producto académico: Informe de práctica.
ASPECTOS CRITERIOS Nivel III Nivel II Nivel I Puntaje
El informe El informe El informe
presentado presentado presentado
1. Ortografía muestra una muestra ciertas muestra muchas
ortografía faltas faltas ortográficas
impecable (3) ortográficas (1) (0)
El informe El informe El informe no
presenta el título presenta el título presenta el título
2.
correcto y correcto mas no correcto ni
Presentación
muestra orden muestra orden muestra orden (0)
(2) (1)
La Introducción La Introducción La Introducción
del informe del informe del informe
3. Contenido
desarrolla lo desarrolla solo desarrolla muy
de la
indicado en las parte de lo poco de lo
Introducción
instrucciones (4) indicado en las indicado en las
instrucciones (2) instrucciones (1)
Las partes de Las partes de Las partes de
INFORME Material- Material- Material-Métodos
4. Contenido Métodos y de Métodos y de y de Resultados
DE de Material- Resultados Resultados desarrollan muy
Método y de desarrollan lo desarrollan solo poco de lo
PRÁCTICA Resultados indicado en las parte de lo indicado en las
instrucciones (5) indicado en las instrucciones (2)
instrucciones (3)
Las partes de Las partes de Las partes de
Discusión y de Discusión y de Discusión y de
5. Contenido
Conclusiones Conclusiones Conclusiones
de Discusión y
desarrollan lo desarrollan solo desarrollan muy
de
indicado en las parte de lo poco de lo
Conclusiones
instrucciones (4) indicado en las indicado en las
instrucciones (3) instrucciones (2)
6. Desarrollo Las referencias Las referencias Las referencias
de las bibliográficas bibliográficas bibliográficas no
Referencias respetan las respetan en respetan las
Bibliográficas normas APA (2) parte las normas normas APA (0)
y Anexos APA (1)
TOTAL