- TRABAJO PRÁCTICO Nº1:

MICROSCOPIA ÓPTICA EN
ESTUDIOS BIOLÓGICOS
- TRABAJO PRÁCTICO Nº2:
ESPECTROFOTOMETRÍA

Materia: Biología
PROFESORA: Dra. MORENO, Silvia
CARRERA: Bioquímica
ALUMNA: CESAR, María Jimena
AÑO: 2021
 - TRABAJO PRÁCTICO Nº1: MICROSCOPIA ÓPTICA EN
ESTUDIOS BIOLÓGICOS

Se puede definir al microscopio como un instrumento que

permite observar en un tamaño aumentado elementos que son
imperceptibles a simple vista.

Ocular

Tubo

Revolver
Brazo
Objetivo

Platina
Tornillo macrométrico
Diafragma y condensador
Tornillo micrométrico
Luz
Base

Responder:
 1. ¿Cuáles son las partes principales del sistema óptico de un
microscopio?
Las partes del sistema óptico del microscopio son dos:
- Oculares: más próximos al ojo y de menos aumento.
- Objetivos: de diferentes aumentos, se encuentran montados
sobre el revólver.
2. ¿Cuáles son las partes principales del sistema mecánico de un
microscopio?
Las partes principales del sistema mecánico son: la base, el
brazo, cabezal, la fuente de luz, la platina, los tornillos macro y
micrométricos, el diafragma, el condensador y el revólver.
3. ¿Cómo se llama el conjunto de lentes que se encuentran más cerca
del ojo en un microscopio?
El conjunto de lentes que se encuentra más cerca del ojo en un
microscopio son los oculares, de menor aumento que el resto.
4. ¿Cuál es la diferencia entre el portaobjetos y el cubreobjetos?
¿Para qué se utilizan?
El portaobjetos es una capa delgada de vidrio rectangular sobre la
cual ha de colocarse la muestra a ser observada. El cubreobjetos, sin
embargo, es una fina capa, puede ser de diferentes medidas y
materiales, siempre transparente, que ha de colocarse por encima de la
muestra que se encuentra en el portaobjetos, y cuya finalidad es fijar la
misma para su correcta observación al microscopio.
5. ¿Qué son los objetivos de inmersión?
Los objetivos de inmersión son aquellos que precisan encontrarse
en contacto con un medio, generalmente aceite, para poder obtener una
óptima resolución. El medio se coloca entre el cubreobjeto de la muestra
y el lente. En los microscopios, el objetivo de inmersión es aquel con
aumento 100X.

TRABAJO PRÁCTICO Nº2: ESPECTROFOTOMETRÍA

 Es uno de los métodos de análisis más usado basado en la relación que
existe entre la absorción de luz monocromática (de una sola longitud de onda)
por parte de un compuesto y su concentración.  
Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción que muestra la cantidad
de energía radiante absorbida por la sustancia (Absorbancia) en cada longitud
de onda del espectro electromagnético.
 Prisma Cubeta Detector

Rendija de Rendija de
Fuente de Luz
entrada salida

Visualización de simulación provista por la cátedra.

Responder:

1. ¿Cuáles son las partes del espectrofotómetro?

Las partes de un espectrofotómetro son:
- Fuente de luz; lámpara W- luz visible, lámpara deuterio- UV.
- Rendija de entrada de haz lumínico.
Monocromador: separa
- Prisma la longitud de onda
- Rendija de salida de haz lumínico deseada.

- Cubeta conteniendo la muestra

- Detector de haz lumínico

2. ¿Cuál es la función y utilidad del espectrofotómetro?

La función del espectrofotómetro, es la de medir la cantidad de luz
absorbida por una muestra al ser atravesada por un haz de luz
monocromática emitida por dicho instrumento, y a partir de ello poder
determinar la concentración de una sustancia en solución.
 Cuantifica la cantidad de energía radiante absorbida por las
moléculas de la muestra, a partir de longitudes de onda de trabajo
específicas.

3. ¿Cuál es la función del prisma o red de difracción?

El prisma o red de difracción forman parte del monocromador, y
su función es la de dispersar la luz incidente a fin de obtener la longitud
de onda de trabajo deseada.
Podemos encontrar dos tipos de dispositivos:
Prismas: si bien son más económicos y simples a la hora del empleo, la
dispersión es no lineal y resulta dependiente de la temperatura.
Red de difracción: consiste en un gran número de rendijas (líneas)
equidistantes que reflejan o transmiten radiación dispersando el haz de
luz de forma lineal y sin depender de la temperatura de trabajo.

4. ¿Qué parámetro mide el detector?

Un detector mide la radiación electromagnética emitida por la
fuente de luz y la convierte en un flujo de electrones para,
posteriormente, transformarla en una corriente o voltaje en el circuito de
lectura. En muchos casos la fotocorriente requiere amplificación,
particularmente cuando se miden bajos niveles de energía radiante. Las
características más importantes para cualquier tipo de detector son:
sensibilidad espectral, respuesta a la longitud de onda, ganancia y
tiempo de respuesta.

5. ¿Cómo se construye una curva de calibración y cómo se calcula la

concentración en una muestra incógnita?
La curva de calibración se construye como un gráfico de A
(absorbancia) en función de la concentración de la molécula absorbente.
Es una gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco
soluciones estándar de concentraciones conocidas, con la absorbancia
de cada una de ellas a la longitud de onda máxima.
Debe calibrarse con el blanco, a fin de evitar lecturas erróneas.
 En este procedimiento es necesario preparar una serie de
soluciones de concentración conocida en las mismas condiciones de la
muestra problema, se realizan las mediciones de las muestras patrón de
las concentraciones y las absorbancias y se calculan los parámetros de
la recta. Tendremos entonces una tabla de datos correspondientes a
pares ordenados (x,y) conocidos, los que podremos representar en un
gráfico de ejes cartesianos. En el eje de las X se representan las
concentraciones conocidas de las soluciones y en el eje de las Y se
representan las A (absorbancia) medidas en el equipo
La recta de calibración o curva de calibración obtenida será
nuestra referencia para transformar la medida de A de cualquier muestra
desconocida en un valor de concentración para el analito. Podemos
hacerlo gráficamente (interpolando el valor de A medido en la gráfica) o
bien despejando el valor de X que le corresponde a la medida Y (A), en
la ecuación de la recta de calibración obtenida.