Laboratorio 3 Car

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE
MATERIALES
‘ESPECTROFOTOMETRIA UV-VISIBLE’
CURSO : CARACTERRIZACIÓN DE MATERIALES
DOCENTE : ING. OTINIANO MENDEZ, DIONICIO
ALUMNOS : GAMBOA LÓPEZ, KATHERLINE GERALDINE
LUIS MEREGILDO, GIANNELLA LIZBETH
MARCHENA CHOPITEA, FERGIE ANTUANETH
SÁNCHEZ SALAZAR, EDISON OCTAVIO
SÁNCHEZ SEGURA, RICARDO
CICLO : V
TRUJILLO-PERÚ
2017
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO Escuela de Ingeniería de Materiales
ÍNDICE
Pág.
I. OBJETIVOS…………………………………………………………………….….…4
II. FUNDAMENTO
TEÓRICO………………………………………………….............4
2.1 Conceptos previos……………………………………………………………..…..4
2.2 Espectrofotometría………………………………………………………………...5
2.3 Tipos de
espectrofotometría……………………………………………………….6
2.3.1 Espectrometría de absorción………………………………………………….....6
2.3.2 Espectrometría de fluorescencia…………………………………………………

6
2.3.3 Espectrometría de rayos x……………………………………………………….6
2.3.4 Espectrometría de llama……………………………………………………….7-

8
2.3.5 Espectrometría de emisión de

plasma…………………………………………....8
2.3.6 Espectrometría de chispa o arco………………………………………….…...8-9
2.3.7 Espectrometría
visible…………………………………………………………...9
2.3.8 Espectrometría ultravioleta……………………………………………………...9
2.3.9 Espectrometría infrarroja……………………………………………………......9
2.3.10 Espectrometría de
fotoemisión………………………………………………..10
2.4 Principios……………………………………………………………………...…10
2.4.1 Ley de Lambert………………………………………………………..….……10
2.4.2 Ley de Lambert-Beer………………………………………………..….…..10-

11
2.4.3 Ley de Bouguer-Beer-Lambert…………………………………………...……11

2.5 Modos de excitación……………………………………………………….....11-12
Pá gina 2
2.6 Transmitancia……………………………………………………………..….
….12
2.7 Absorbancia……………………………………………………………….....12-13
2.8 Espectrofotómetro………………………………………………………..….…..13
2.8.1 Definición………………………………………………………………..…....13
2.8.2 Componentes de un espectrofotómetro…………………………………....13-14

2.8.3 Características de un espectrofotómetro…………………………………..14-15
2.8.4 Manejo de un espectrómetro………………………………………….……15
2.9 Curva de calibración……………………………………………………............16-17
III. MATERIALES, EQUIPOS E INSTRUMENTOS…………………………......16-17
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL……………………………………....18-24
V. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS…………………………..…..24-25
VII. CONCLUSIONES…………………………………………………………..…....26
VIII. RECOMENDACIONES……………………………………………………...26-27
IX. REFERENCIAS……………………………………………………..………...…...27
X. ANEXOS………………………………………………………………….....…..29-38
Pá gina 3
LABORATORIO N°03
ESPECTROFOTOMETRIA UV-VISIBLE
I. OBJETIVOS
 Aprender el procedimiento de análisis de espectrofotometría UV-VISIBLE.
 Hacer un espectrograma de absorción para el azul de metileno.
 Graficar una curva de calibración (Ecuación polinómica).
II. FUNDAMENTO TEÓRICO
2.1.- Conceptos previos
Radiación electromagnética:
Es la propagación de energía a través del espacio sin soporte de materia, es decir, a

través de ondas producidas por la oscilación o aceleración de una carga eléctrica
(dualidad onda-partícula).
Naturaleza ondulatoria:
Caracterizada por su frecuencia (ν) o longitud de onda (λ). ν = número de ondas que
pasan por un punto en la unidad de tiempo. λ = distancia que hay ente dos puntos
iguales de la onda, máximos, mínimos, etc.
Pá gina 4
Figura N°01. Naturaleza ondulatoria

Naturaleza corpuscular, partícula: formada por fotones con energía (E) E = h·ν, donde h
es la constante de Plank. La radiación electromagnética se puede ordenar en un espectro
que se extiende desde ondas de frecuencias muy elevadas (longitudes de onda pequeñas;
rayos gamma) hasta frecuencias muy bajas (longitudes de onda altas; ondas de radio).
La luz UV-visible es sólo una pequeña parte del espectro electromagnético, visible
(780-380nm); UV (380-200nm).
Figura N°02. Espectro UV
2.2.- Espectrofotometría:
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en la

relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su
concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de
onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el
medio y otra transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea
atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del
rayo de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción a medir, la
muestra puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles y
Pá gina 5
ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es generalmente disuelta para

formar una solución. Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual es
una curva que muestra la cantidad de energía radiante absorbida, absorbancia, por la
sustancia en cada longitud de onda del espectro electromagnético, es decir, a una
determinada longitud de onda de la energía radiante, cada sustancia absorbe una
cantidad de radiación que es distinta a la que absorbe otro compuesto. [1]
Figura N°03. Espectro de absorción de dos compuestos diferentes.
2.3.- Tipos de espectrofotometría.
2.3.1. Espectrometría de absorción:

La espectrometría de absorción es una técnica en la cual la energía de un haz de luz se
mide antes y después de la interacción con una muestra. Cuando se realiza con láser de
diodo ajustable, se la conoce como espectroscopia de absorción con láser de diodo
ajustable. También se combina a menudo con una técnica de modulación, como la
espectrometría de modulación de longitud de onda, y de vez en cuando con la
espectrometría de modulación de frecuencia a fin de reducir el ruido en el sistema. [6]
2.3.2. Espectrometría de fluorescencia:
La espectrometría de fluorescencia usa fotones de energía más elevada para excitar una
muestra, que emitirá entonces fotones de inferior energía.
Esta técnica se ha hecho popular en aplicaciones bioquímicas y médicas, y puede ser
usada con microscopía confocal, transferencia de energía entre partículas fluorescentes,
y visualización de la vida media de fluorescencia. [6]
2.3.3. Espectrometría de rayos x:
Cuando los rayos X con suficiente frecuencia (energía) interaccionan con una sustancia,
los electrones de las capas interiores del átomo se excitan a orbitales vacíos externos, o
bien son eliminados completamente, ionizándose el átomo. El "agujero" de la capa
interior se llena entonces con electrones de los orbitales externos. La energía disponible
Pá gina 6
en este proceso de excitación se emite como radiación (fluorescencia) o quitará otros

electrones menos enlazados del átomo (efecto Auger). La absorción o frecuencias de
emisión (energías) son características de cada átomo específico. Además, para un átomo
específico se producen pequeñas variaciones de frecuencia (energía) que son
características del enlace químico. Con un aparato apropiado pueden medirse estas
frecuencias de rayos X características o energías de electrones Auger. La absorción de
rayos X y la espectroscopia de emisión se usan en química y ciencias de los materiales
para determinar la composición elemental y el enlace químico.
La cristalografía de rayos X es un proceso de dispersión. Los materiales cristalinos
dispersan rayos X en ángulos bien definidos. Si la longitud de onda de los rayos X
incidentes es conocida, se pueden calcular las distancias entre planos de átomos dentro
del cristal. Las intensidades de los rayos X dispersados dan información sobre las
posiciones atómicas y permiten calcular la organización de los átomos dentro de la
estructura cristalina. [6]
2.3.4. Espectrometría de llama:

Las muestras de solución líquidas son aspiradas en un quemador o una combinación de
nebulizador/quemador, desolvatadas, atomizadas, y a veces excitadas a un estado
electrónico de energía más alta. El uso de una llama durante el análisis requiere
combustible y oxidante, típicamente en forma de gases. Los gases combustibles
comunes que se usan son el acetileno (etino) o el hidrógeno. Los gases de oxidante
suelen ser el oxígeno, el aire, o el óxido nitroso. Estos métodos son a menudo capaces
de analizar elementos metálicos en partes por millón, billones, o posiblemente rangos
más bajos de concentración. Son necesarios detectores de luz para detectar la luz con
información que viene de la llama. [7]
* Espectrometría de emisión atómica. Este método usa la excitación de la llama; los
átomos son excitados por el calor de la llama para emitir luz. Este método suele usar un
quemador de consumo total con una salida de incineración redonda. Se utiliza una llama
de temperatura más alta que la usada en la espectrometría de absorción atómica para
producir la excitación de átomos de analito. Ya que los átomos de analito están
excitados por el calor de la llama, no es necesaria ninguna lámpara elemental especial.
Puede usarse un policromador de alta resolución para producir una intensidad de
emisión contra el espectro de longitud de onda por encima de un rango de longitudes de
onda que muestran líneas de excitación de elementos múltiples. O bien puede usarse un
Pá gina 7
monocromador en una longitud de onda determinada para concentrarse en el análisis

de un solo elemento en una cierta línea de emisión. La espectrometría de emisión de
plasma es una versión más moderna de este método. [7]
* Espectrometría de absorción atómica (a menudo llamada AA). Este método usa un
nebulizador pre-quemador (o cámara de nebulización) para crear una niebla de la
muestra, y un quemador en forma de ranura que da una llama de longitud de ruta más
larga. La temperatura de la llama es lo bastante baja como para no excitar los átomos de
la muestra de su estado basal. El nebulizador y la llama se usan para desolvatar y
atomizar la muestra, pero la excitación de los átomos de analito se realiza mediante
lámparas que brillan a través de la llama en varias longitudes de onda para cada tipo de
analito. En la absorción atómica, la cantidad de luz absorbida después de pasar por la
llama determina la cantidad de analito en la muestra. Suele usarse un horno de grafito
para calentar, desolvatar y atomizar la muestra con el fin de obtener una mayor
sensibilidad. El método del horno de grafito también puede analizar algún sólido o
muestras mezcladas. A causa de su buena sensibilidad y selectividad, es un método que
todavía se usa para el análisis de ciertos microelementos en muestras acuosas (y otros
líquidos).
* Espectrometría de fluorescencia atómica. Este método usa un quemador con una
salida de incineración redonda. La llama se usa para solvatar y atomizar la muestra, y
una lámpara emite luz a una longitud de onda específica en la llama para excitar los
átomos de analito. Los átomos de ciertos elementos pueden entonces fluorescer,
emitiendo luz en diferentes direcciones. La intensidad de esta luz fluorescente sirve para
cuantificar la cantidad del elemento analizado en la muestra. También puede usarse un
horno de grafito para la espectrometría de fluorescencia atómica. Este método no es tan
común como el de absorción atómica o el de emisión de plasma. [6]
2.3.5. Espectrometría de emisión de plasma:
Es similar a la emisión atómica por llama, y la ha sustituido en gran parte.
* Espectrometría de plasma de corriente contínua (DCP). Un plasma de corriente

contínua se crea por una descarga eléctrica entre dos electrodos. Es necesario un gas de
apoyo al plasma, y el más común es el argón. Las muestras pueden ser depositadas en
uno de los electrodos.
* Espectrometría de emisión óptica por descarga luminiscente (GD-OES)
Pá gina 8
* Espectrometría de emisión plasma-atómica acoplada inductivamente (ICP-AES)

* Espectrometría de ruptura inducida por láser (LIBS), también llamada espectrometría
de plasma inducida por láser (LABIOS)
* Espectrometría de plasma inducida por microondas(MIP)
2.3.6. Espectrometría de chispa o arco:
Se usa para el análisis de elementos metálicos en muestras sólidas. Para materiales no
conductores, se usa polvo de grafito para hacer conductora la muestra. En los métodos
de espectroscopia de arco tradicionales se usa una muestra sólida que es destruida
durante el análisis.
Un arco eléctrico o chispa se pasan por la muestra, calentándola a alta temperatura para
excitar los átomos. Los átomos de analito excitado emiten luz en varias longitudes de
onda que pueden ser detectadas mediante métodos espectroscópicos comunes. Ya que
las condiciones que producen la emisión por arco no son controladas cuantitativamente,
el análisis de los elementos es cualitativo. Hoy día, las fuentes de chispa con descargas
controladas bajo una atmósfera de argón permiten que este método pueda ser
considerado eminentemente cuantitativo, y su uso está muy extendido en los
laboratorios de control de producción de fundiciones y acerías. [6]
2.3.7. Espectrometría visible:
Muchos átomos emiten o absorben la luz visible. A fin de obtener un espectro lineal
fino, los átomos deben estar en fase gaseosa. Esto significa que la sustancia tiene que
ser vaporizada. El espectro se estudia en absorción o emisión. La espectroscopia de
absorción visible a menudo se combina con la de absorción ultravioleta (espectroscopia
UV/Vis). Aunque esta forma pueda ser poco común al ser el ojo humano un indicador
similar, todavía se muestra útil para distinguir colores. [6]
2.3.8. Espectrometría ultravioleta:
Todos los átomos absorben en la región ultravioleta (UV) ya que estos fotones son
bastante energéticos para excitar a los electrones externos. Si la frecuencia es lo bastante
alta, se produce la fotoionización. La espectrometría UV también se usa para la
cuantificación de proteínas y concentración de ADN, así como para la proporción de
proteínas y ADN en una solución. En las proteínas se encuentran generalmente varios
aminoácidos, como el triptófano, que absorben la luz en el rango de 280nm. El ADN
absorbe la luz en el rango de 260nm. Por esta razón, la proporción de absorbancia
260/280nm es un buen indicador general de la pureza relativa de una solución en
Pá gina 9
términos de estas dos macromoléculas. También pueden hacerse estimaciones

razonables de la concentración de ADN o proteínas aplicando la ley de Beer. [6]
2.3.9. Espectrometría infrarroja:
La espectrometría infrarroja ofrece la posibilidad de medir tipos diferentes de
vibraciones en los enlaces atómicos a frecuencias diferentes. En química orgánica, el
análisis de los espectros de absorción infrarroja indica qué tipo de enlaces están
presentes en la muestra. [6]
2.3.10. Espectrometría de fotoemisión:
La fotoemisión puede referirse a:
* Emisión de electrones a partir de la materia después de la absorción de fotones
energéticos (efecto fotoeléctrico).
* Emisión de fotones a partir de los semiconductores y metales cuando los electrones
que fluyen en el material pierden energía mediante deceleración o recombinación. [6]
2.4. Principios:
En la espectrofotometría se aprovecha la absorción de radiación electromagnética en la
zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la radiación
incidente en este espectro y promueve la transición del analito hacia un estado excitado,
transmitiendo un haz de menor energía radiante. En esta técnica se mide la cantidad de
luz absorbida como función de la longitud de onda utilizada. La absorción de las
radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las
moléculas, y es característica de cada sustancia química. [1]
2.4.1. Ley de Lambert
La ley de Lambert trata sobre la iluminancia de una superficie situada a una cierta
distancia de una fuente de luz. Determina que la iluminación producida por una fuente
luminosa sobre una superficie es directamente proporcional a la intensidad de la fuente
y al coseno del ángulo que forma la normal a la superficie con la dirección de los rayos
de luz y es inversamente proporcional al cuadrado de la distancia a dicha fuente. [1]
Figura N°04. Ley de Lambert

2.4.2. Ley de Lambert-Beer
Pá gina 10
La ley de Lambert-Beer afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo

depende de la concentración en la solución.
Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar disuelta y en otro vaso
tenemos la misma cantidad de agua pero con mayor cantidad de azúcar en solución. El
detector es una celda fotoeléctrica, y lo que se mide es la concentración de la solución
de azúcar.
Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la
cantidad de luz que saldría del otro lado sería mayor que si repitiéramos esto en el
segundo, ya que en este último las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor
número de átomos o/y moléculas y son absorbidos por estos. [1]
Figura N°05. Ley de Lammbert-Beer.
2.4.3. Ley de Bouguer-Beer-Lambert
Una ley muy importante es la de Bouguer-Beer-Lambert (también conocida como ley de

Lambert Bouguer y Beer), la cual es solo una combinación de las citadas anteriormente.
[1]
2.5. Modos de excitación
a) Transiciones σ ----> σ∗¿
La longitud de onda <150 nm . Este tipo de transiciones se dan sobre todo en

hidrocarburos que únicamente poseen enlaces σ C-H o C-C. La energía requerida para
que tenga lugar esta transición es relativamente grande, perteneciente a la región
espectral denominada ultravioleta de vacío.
b) Transiciones n----> σ∗¿
La longitud de onda esta entre 150-200 nm . Correspondientes a hidrocarburos que

poseen átomos con pares de electrones no compartidos (electrones de no enlace). La
energía necesaria para que se produzca esta transición sigue siendo alta (aunque menor
que en las σ ----> σ∗¿ ) perteneciendo éstas a la región espectral UV Lejano.
Pá gina 11
c) Transiciones n------>π y π------> π*
La longitud de onda esta entre 200-700 nm. La mayoría de las aplicaciones de

espectroscopia UV-Visible están basadas en transiciones que ocurren en esta zona. Se
requiere que las especies participantes aporten un sistema de electrones π (grupos
cromóforos: compuestos con insaturaciones, sistemas aromáticos multicíclicos, etc.).
Las energías de excitación en las transiciones π------> π* son medianamente altas,
correspondiendo a la región UV Lejano y Próximo, mientras que las n-----> π* son
considerablemente menores, correspondiendo a la región visible del espectro.
En espectroscopia UV-Vis se irradia con luz de energía conocida suficiente como para
provocar transiciones electrónicas, es decir promover un electrón desde un orbital de
baja energía a uno vacante de alta energía.
Transiciones electrónicas posibles entre orbitales n: orbital que contiene par de

electrones no compartidos (ejemplo en : O, N, Cl)
Las transiciones más favorecidas son entre el orbital ocupado de energía más alta
(HOMO) y el orbital desocupado de energía más baja (LUMO)
el espectrómetro UV-Vis registra las longitudes de onda donde se registra absorción y

cuantifica la absorción.
El espectro se registra como absorbancia (A) Vs. longitud de onda (Å), las bandas del
espectro UV son anchas por que incluyen la estructura fina de transiciones vibracionales
y rotacionales de menor energía.
2.6. Transmitancia:
Es la razón entre la luz monocromática transmitida (P) por una muestra y la energía o
luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energía radiante incidente como la transmitida
deben ser medidas a la misma longitud de onda.
T = P / P0 = 10-abc ó %T = 100 P / P0
Se acostumbra a considerar la transmitida como la razón de la luz transmitida por la
muestra y la luz transmitida por un estándar arbitrario. Este estándar puede ser el líquido
(solvente) en que esta disuelta la muestra, aire, blanco analítico (solución que contiene
todos los componentes de la solución problema menos la sustancia problema) u otra
sustancia elegida arbitrariamente. Debido a que la transmitancia de este estándar no es
necesariamente 100%, es necesario especificar el estándar con el cual la muestra es
comparada. [2]
Pá gina 12
2.7. Absorbancia:
Se define como la cantidad de energía radiante absorbida por una sustancia pura o en
solución. Matemáticamente, corresponde al logaritmo negativo de la transmitancia (T),
transmitancia expresada como fracción decimal %T, transmitancia expresada como
porcentaje.
A = - log T = 2 – log %T
Pero: T = P / P0 = 10-abc
Luego: A = - log (P / P0) = - log 10-abc
A=abc
Esta ecuación indica que la absorbancia es una función lineal de la concentración, donde
a es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a
depender de las unidades de b y c. Si la concentración c está expresada en moles por
litro y la longitud de la cubeta b en centímetros, la constante a recibe el nombre de
absortividad molar (ξ). Luego: A = ξ b c. [1]
2.8. Espectrofotómetro
2.8.1. Definición:
El espectrofotómetro es un instrumento usado en la física óptica que sirve para medir,

en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud
fotométrica relativos a dos haces de radiaciones. También es utilizado en los
laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos. Hay
varios tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción atómica o espectrofotómetro
de masa.Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática
a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra.
[3]
2.8.2. Componentes de un espectrofotómetro:
 Cubetas de espectrofotometría: En un primer plano, dos de cuarzo aptas para el

trabajo con luz ultravioleta; en segundo plano, de plástico, para colorimetría (es
decir, empleando luz visible).
 Fuente de luz: La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las
siguientes condiciones: estabilidad, direccionalidad, distribución de energía
espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio
Pá gina 13
(también llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón y lámpara de deuterio que

es utilizada en los laboratorios atómicos.
 Monocromador: El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda
deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz
monocromática .
Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de
dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente
que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un
prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada
se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida.
 Compartimiento de Muestra: Es donde tiene lugar la interacción, R.E.M con la
materia (debe producirse donde no haya absorción ni dispersión de las longitudes
de onda). Es importante destacar, que, durante este proceso, se aplica la ley de
Lambert-Beer en su máxima expresión, en base a sus leyes de absorción, en lo que
concierne al paso de la molécula de fundamental-excitado.
 Detector: El detector, es quien detecta una radiación y a su vez lo deja en evidencia,
para posterior estudio. Hay de dos tipos: a) los que responden a fotones y b) los que
responden al calor.
 Registrador: Convierte el fenómeno físico, en números proporcionales al analito en
cuestión.
 Fotodetectores: En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16
Fotodetectores para percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda,
cubriendo el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las
partes móviles del equipo. [2]
2.8.3. Características de un espectrofotómetro:
 El espectrofotómetro se usa en el laboratorio con el fin de determinar la

concentración de una sustancia en una solución, permitiendo
así la realización de análisis cuantitativos.
El espectrofotómetro, construido mediante procesos avanzados de fabricación, es

uno de los principales instrumentos diagnósticos y de investigación desarrollados
por el ser humano. Utiliza las propiedades de la luz y su interacción con otras
sustancias, para determinar la naturaleza de las mismas. En general, la luz de una
Pá gina 14
lámpara de características especiales es guiada a través de un dispositivo que

selecciona y separa luz de una determinada longitud de onda y la hace pasar por
una muestra. La intensidad de la luz que sale de la muestra es captada y comparada
con la intensidad de la luz que incidió en la muestra y a partir de esto se calcula la
transmitancia de la muestra, que depende de factores como la concentración de la
sustancia.
Figura Nº06. Instrumentación de un espectrómetro

2.8.4. Manejo de un espectrómetro.
Las instrucciones generales de manejo de un espectrofotómetro serían:
 Encendido de lámparas:
 Lámpara de tungsteno (zona del Visible, 900 a 340 nm), encendido instantáneo.
 Lámpara de Deuterio (zona del UV, 340 a 200 nm aprox.), necesita un
calentamiento previo.
 Adaptación del espejo a la lámpara adecuada, atendiendo al rango de longitud de

onda de trabajo (sólo en los espectrofotómetros no automáticos).
 Seleccionar el valor de longitud de onda con el mando correspondiente.
 Ajuste del cero de transmitancias (tapa levantada) con ayuda del mando “Ajuste del
cero”, hasta que aparezca CERO en la pantalla.
 Ajuste del 100% de transmitancia (0 de absorbancia) con la referencia, que
normalmente es el disolvente de la muestra, utilizando para ello el mando “A-T”.
 Leer el valor de Absorbancia/Transmitancia de la muestra. [3]
Pá gina 15
2.9. Curva de calibración.
La curva de calibración es un método muy utilizado en química analítica para

determinar la concentración de una sustancia (analito) en una muestra desconocida,
sobre todo en disoluciones. El método se basa en la relación proporcional entre la
concentración y una determinada señal analítica (propiedad). Conociendo esta
relación, será posible conocer la concentración en una muestra dada mediante la medida
de esa señal. La relación concentración – señal se suele representar en una gráfica a la
que se le conoce como curva de calibración o curva de calibrado.
Es imprescindible que la señal analítica utilizada mantenga una relación proporcional

con la concentración. Las señales más utilizadas son aquellas cuya relación con la
concentración es lineal, al menos en el rango de trabajo. Por ejemplo, una de las
propiedades más utilizadas es la absorbancia (absorción lumínica) que suele mantener
una relación lineal con la concentración de solutos en disoluciones. Al ser una relación
lineal, se puede representar mediante una recta, de ahí que este tipo específico de curva
de calibración se conozca también como recta de calibración. [5]
Figura Nº.07. Curva de calibración

Si es válida la ley de Beer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relación debe
ser una recta, que pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan
desviaciones debidas a diversos factores. [4]
III. MATERIALES, EQUIPOS E INSTRUMENTOS
Pá gina 16
3.1. Preparación de la solución patrón:

a) Materiales
- 0.0250 g de Azul de metileno (C16H18ClN3S).
- Agua destilada.
b) Instrumentos
- Vaso de precipitación 250 ml.
- Fiola de 50ml.
- Piseta
- Balón aforado de 1000 ml.
c) Equipos
- Balanza analítica (± 0.001 g ¿(Modelo: GR200 / Marca: AND)
Componentes de la balanza analítica
a) Generador de señal: Masa física de la probeta
b) Transductor de entrada: Platillo de la balanza
c) Procesador de señal: Fuerza mecánica a señal eléctrica
d) Transductor de salida: Display digital indicador de la masa.
3.2. Preparación de las muestras de soluciones con Azul de metileno para

análisis de un espectro de absorción.
a) Materiales
- 7 frascos de vidrio con capacidad entre 100 a 200 ml con tapa.
- Solución patrón.
- Pipeta graduada de 10 mL.
- Probeta graduada de 100 mL.
b) Equipos
- Espectrofotómetro. (Modelo: T80+VS/VIS/Marca: PG – INSTRUMENT
LTD).
Pá gina 17
Componentes del espectrofotómetro
a) Generador de señal: Emisión de radiación
b) Transductor de entrada: Lámpara de tungsteno
c) Procesador de señal: Señal electroquímica a señal eléctrica.
d) Transductor de salida: Display digital indicador de absorbancia.
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

4.1. Medición del Azul de metileno a través de la balanza analítica:
a) Calibración de la balanza analítica.-
MARCA: AND
MODELO: GR-200
1. Conectar la balanza de la red eléctrica como mínimo una hora.
2. Verificar que no haya ningún peso sobre la balanza.
3. Presione y mantenga presionado la tecla CAL hasta que aparezca CAL

OUT y después suelte la tecla.
4. La balanza muestra Cal 0 y luego se presiona PRINT y en la balanza

aparecerá 200.
5. Colocar la pesa de calibración y posteriormente presionar PRINT.
6. Finalmente esperar hasta que aparezca END.
7. Sacar la pesa y verificar que la lectura sea de 0.0000
b) Nivelación de la burbuja
Gire las dos patas regulables hasta que la burbuja de aire se ponga en el
centro del nivel:
Pá gina 18
1. Burbuja a las 12: Gire las dos patas en sentido contrario a las agujas del
reloj.
2. Burbuja a las 3: Gire la parte izquierda en el mismo sentido y la derecha

en sentido contrario a las agujas del reloj.
3. Burbuja a las 6: Gire las dos patas en el mismo sentido que las agujas
del reloj.
4. Burbuja a las 9: Gire la pata izquierda en sentido contrario y la derecha

en el mismo sentido que las agujas del reloj.
Nota: cada vez que la balanza cambie de lugar se debe de nivelar y

ajustar.
- Después de realizar la calibración de la balanza analítica y nivelación de la

burbuja.
- Procedemos a pesar 0.0250 g de Azul de metileno y continuamos con el
paso c).
c) Preparación de la solución patrón:
- Con ayuda de un vaso de precipitación de 250 ml y una piseta agregamos
agua destilada a un balón aforado de 1000 ml y luego lo agitamos de manera
adecuada.
- Luego en una fiola de 50 ml agregamos 0.0250 g de Azul de metileno
(C16H18ClN3S) y agua destilada.
- Repetimos este proceso dos veces y continuamos con el paso d).
d) Preparación de las muestras de soluciones con Azul de metileno para
análisis de un espectro de absorción.
- Lavamos los 7 recipientes con agua destilada, de manera interna y externa.
- Rotulamos estos envases con los siguientes datos: 0, 10, 15, 20, 30,40 y 50
Ppm de Azul de metileno (C16H18ClN3S).
- Calculamos el volumen para la solución patrón para los datos anteriores y
continuamos con el paso e).
e) Cálculo del volumen de la solución patrón
N° Volumen de la solución Ppm Volumen de agua

patrón (C16H18ClN3S) (mL)
Pá gina 19
1 5 5 45
2 10 10 40
3 15 15 35
4 20 20 30
5 30 30 20
6 40 40 10
7 50 50 0
- Empleamos la siguiente fórmula C 1 V 1=C 2 V 2 para hallar el volumen de la

solución patrón.
- También tenemos en cuenta que cada frasco debe contener 50mL entre
(Ppm de Azul de metileno+ H 2 O destilada), y para eso hacemos uso de la
pipeta de 10 ml y una probeta de 100 mL.
 Para N°1 :
C 1=¿50ppm de sol C16H18ClN3S; V 1=¿ 50 mL; C 2=¿ 0; V 2=?
C 1 V 1=C 2 V 2
( 5 ) ( 50 )=( 50 ) V 2
V 2= 5 mL
 Para N° 2:
C 1 V 1=C 2 V 2
( 10 ) ( 50 )=( 50 ) V 2
V 2= 10 mL
 Para N° 3:
C 1 V 1=C 2 V 2
Pá gina 20
( 15 ) ( 50 )=( 50 ) V 2
V 2= 15 mL
 Para N° 4:
C 1 V 1=C 2 V 2
( 20 ) ( 50 )=( 50 ) V 2
V 2= 20 mL
 Para N° 5:
C 1 V 1=C 2 V 2
( 30 ) ( 50 )=( 50 ) V 2
V 2= 30 mL
 Para N° 6:
C 1 V 1=C 2 V 2
( 40 )( 50 ) =( 50 ) V 2
V 2= 40 mL
 Para N° 7:
C 1 V 1=C 2 V 2
( 50 ) ( 50 )=( 50 ) V 2
V 2= 50 mL
f) Medición de la absorbancia de muestras a diferentes Ppm de Azul de

metileno (C16H18ClN3S) mediante el espectofotómetro.
f.1) Limpieza de los tubos de ensayo del espectofotómetro
- Usamos agua destilada y alcohol de manera intercalada , de manera que los tubos de
ensayo estén libres de impurezas, y que al momento de realizar la curva de calibración
para las muestras a diferentes Ppm de Azul de metileno (C 16H18ClN3S) obtengamos los
resultados esperados.
Pá gina 21
- Posteriormente continuamos con el paso f.1), y podemos complementarlo con la

Tabla N° 1.
f.2) Calibración del espectrofotómetro
Antes de utilizar el espectrofotómetro o fotocolorímetro es indispensable realizar rutinas

básicas de calibración para asegurarnos que el aparato proporcione datos y lecturas
confiables.
Antes de usar sus equipos debe hacer lo siguiente:
- Limpieza de la superficie del instrumento.
- Limpieza de los filtros y fuente de luz (lámpara y condensador).
- Verificar instalaciones eléctricas.
Los pasos para probar la operatividad del equipo son los siguientes:
- Se enciende el equipo y se deja que caliente por lo menos 15 minutos (sí el aparato es
automático, dará una señal cuando esté listo para funcionar).
- También se observa las funciones F1, F2, F3, F4 en el menú principal, cuyas funciones
consisten en
 F1: Medidas fotométricas y con espectros, encontramos la función MODO

TRABAJO que se subdivide en :
(1) Longitud y porcentaje de absorbancia o transmitancia (%).
Si el aparato que se va a utilizar tiene las dos escalas (absorbancia y transmitancia) se

ajustan las lecturas a cero de absorbancia y 100% de transmitancia utilizando los
controles grueso y fino en vacío. Se selecciona la función absorbancia o transmitancia.
(2) Introducimos la longitud de onda “ λ”
Se selecciona la longitud de onda deseada (esto depende de la muestra a ser leída y del
reactivo utilizado). Para nuestro caso es Se selecciona la longitud de onda deseada (esto
depende de la muestra a ser leída y del reactivo utilizado). Para nuestro caso es λ=¿550
a 750 nm.
(3) Factor de corrección.
Pá gina 22
Nos permite verificar la toma de datos y realizar correcciones.
(4) Equipo de otro ambiente.
 F2: ELIMINAR los datos anteriores.
 F3: PARÁMETROS DE CONTROL para 8 tubos de ensayos.
 F4: MEDICIÓN, donde nos muestra los resultados obtenidos por el equipo.
TIPO ESPECIFICACIONES NOTA

Dimensión 550 x 350 x230 nm
Peso 16.5 Kg
Voltaje de entrada 220V± 10 % , 110V ± 10 % Seleccioneel voltaje de
entrada a través del
Interruptor PC 5
Frecuencia 50Hz ± 1 Hz
rango
Ambiene 15 - 35
Temperatura
Relativa ¿ 80 % Sin condensación
humedad
Muestra 165 x 100 x 92 nm Dimensiones internas
cámara
Monocromador Rejilla holográfica
Detector Fotodiodo de sílice HAMAMATSU
PHOTONICS, JAPÓN
Tabla N°1: Especificaciones físicas del espectofotómetro.
Pá gina 23
- Cuando nos encontramos en F3, vertimos la solución de la muestra 1, con 0

Ppm de Azul de metileno (C16H18ClN3S) en un tubo de ensayo, de manera que
nuestros dedos estén sujetando la parte opaca de este.
- Repetimos dos veces de modo que la solución este contenida en las paredes del
tubo de ensayo. A la tercera vez, colocamos la solución para la medición con el
espectrofotómetro.
- De tal manera que para esta primera muestra, se obtuvó como longitud de onda
inicial λ=¿ 664.8 nm, y con absorbancia de 1.802.
- Asimismo, realizamos consecutivamente este procedimiento para las siguientes
muestras de 10, 15, 20, 30,40 y 50 Ppm de Azul de metileno (C16H18ClN3S).
- Observamos en el espectofotómetro que las curvas que se forman para cada una
de las muestras va en ascenso y simula una parábola que abre hacia abajo
(sentido negativo) en el eje de las ordenadas “Y”.
- Finalmente anotamos los datos obtenidos de la absorbancia medida y
determinamos la curva de calibración mediante el espectrofotómetro para cada
una de nuestras muestras.
V. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La siguiente imagen se muestra un espectrograma de absorción de para las diferentes

concentraciones (5, 10, 15, 20, 30, 40 y 50 ppm) de azul de metileno con las que se
trabajó.
Figura N° 08. Espectrograma de absorción para el azul de metileno.
Después de haber realizado la práctica de espectrometría UV-visible se recolectaron los

datos de absorbancia de los picos más altos para cada concentración en una tabla, por
Pá gina 24
ejemplo: en la fig. ¿? Se observa una pequeña flecha que señala el pico más alto de
absorción para la concentración de 50 ppm de azul de metileno que es 2.685 que se da a
676.2 nm.
Tabla N°02. Resultados de absorbancia.
Concentración de azul de metileno en ppm Absorbancia
5 1.034
10 1.802
15 2.362
20 2.487
30 2.678
40 2.756
50 2.685
Curva de calibración
Para construir la curva de calibración se representó los datos en una gráfica de

dispersión y se trató de encontrar una curva que relaciona la concentración vs
absorbancia mediante una ecuación polinómica.
Curva de calibracion
60
50
concentracion en ppm
40
f(x) = 23.95 x² − 70.86 x + 54.05
R² = 0.8
30
20
10
0
0.5 1 1.5 2 2.5 3
absorbancia
Figura N°09. Gráfica de concentración vs absorbancia.
Pá gina 25
 La curva que más se ajusta a los puntos es una polinómica cuadrática cuya
ecuación es la siguiente: y = 23.953x2 - 70.863x + 54.051, siendo la variable
independiente “y” la concentración de azul de metileno en ppm y la variable
dependiente “x” la absorbancia.
 En grafica se observa que los puntos correspondientes a las concentraciones de
5, 10, y 15 ppm están más alejados que el resto de puntos, por lo que hubiera
sido conveniente realizar el experimento con más pruebas entre el rango de
concentración de 0 a 15 ppm, por ejemplo, cada 2.5 ppm en lugar de cada 5
ppm.
 También en la gráfica se puede ver que la absorbancia para la concentración de
50 ppm disminuyo respecto a la absorbancia de la concentración de 40 ppm,
cuando esta debería de aumentar, esto puede ser una causa para que haya un
mayor índice de error en la ecuación de la curva de calibración.
VI. CONCLUSIONES
 Se logró aprender el procedimiento de análisis de espectrofotometría UV-VISIBLE.

 Se logró realizar un espectrograma de absorción para el azul de metileno.
 Se logró graficar una curva de calibración (Ecuación polinómica).
VII. RECOMENDACIONES
7.1. Medición de peso con la balanza
- Es recomendable pesar con la mayor precisión y exactitud posible.

- Tener cuidado al momento de agregar la muestra ya que podría caer dentro de la
balanza y posiblemente llegar a malograrla.
- El cuarto de pesaje debe estar limpio y libre de polvo.
- La mesa de pesaje debe ser sólida y sin vibraciones, corrientes de aire (como por
ej. la apertura constante de ventanas, puertas o encendido/apagado de aire
acondicionado) y tan nivelada como sea posible.
- Mantenga nivelada la balanza utilizando nivelador de burbuja.
- No instale la balanza cerca de calentadores, salidas de aire acondicionado.
- No instálela balanza en un lugar donde reciba la luz directa del sol.
- No utilice la balanza cerca de otro equipo que genere campos magnéticos.
- Una esquina es la mejor área para colocar su balanza puesto que es el lugar
menos dispuesto a vibraciones.
Pá gina 26
- Calibre su balanza antes de utilizarla y después de moverla a otro lugar.

7.2 Volumen de las muestras
- Tratar de suministrar en los recipientes las cantidades indicadas si no fuese así
sería recomendable realizar el experimento nuevamente.
7.3 Limpieza de los recipientes
- Antes de llevar a cabo el experimento es recomendable limpiar correctamente
los recipientes o instrumentos a utilizar (pipeta, probeta, balón, fiola), no debe
quedar ningún residuo de uso posterior antes de realizar el experimento, ya que
posiblemente si esto llega a suceder será notable al momento de observar los
resultados en el equipo (espectrofotómetro).
7.4. Uso correcto del espectrofotómetro
- Antes de usar el equipo se recomienda leer el manual para aprender bien los
pasos a seguir en la medición.
- Hay que ser cuidadosos al usar el equipo.
- No olvidar enjuagar más de una vez el tubo de ensayo del equipo.
- Siempre secar correctamente por fuera el tubo de ensayo con mucho cuidado sin
que los dedos de la mano lleguen a tocar la parte clara de este.
- Colocar el tubo de ensayo dentro del espectrofotómetro sin rebalsar el contenido
y cerrar la tapa del equipo lentamente.
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] Guia_TP_2_Quimica_II_2010.pdf
[2] http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1311
[3] http://campus.usal.es/~quimfis/apoyo/Carmen/Practicas/Espectrofotometria.PDF
[4] http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf
[5] http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CURVASDECALIBRACION_23498.pdf
[6] http://www.espectrometria.com/tipos_de_espectrometra
[7] https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractica4.pdf
Pá gina 27
ANEXOS
Pá gina 28
 MATERIALES
Figura N°10. Azul de metileno Figura N.11. Agua destilada
 INSTRUMENTOS
Pá gina 29
Figura N°12. Vaso de precipitación de 250ml Figura. N°13. Fiala de 50ml
Figura N° 14. Frascos de vidrio con capacidad de 200 ml con tapa
Pá gina 30
Figura N° 15. Pipeta de 10 ml
Figura N° 16. Probeta 100 ml
Figura N° 17. Piseta Figura N° 18. Balón aforado
 EQUIPOS
Pá gina 31
Figura N° 19. Balanza Analítica Figura N° 20. Espectrofotómetro
 PROCEDIMIENTO
Figura N° 21. Calibración de la Figura N° 22. Peso de 250 g de

balanza analítica Azul de metileno
Pá gina 32
Figura N° 23. Se agrega agua destilada. Figura N° 24. Llegar hasta los 100 ml
Aa aprox.
Figura N° 25. Se almacena en el balón Figura N° 26. Se mezcla la solución

aforado.
Pá gina 33
Figura N°27. Se vierte en una Figura N°28. Sin rebalsar para que
. probeta de 100 ml la pipeta ingrese con facilidad.
Figura N°29. La pipeta facilita Figura N°30. Se vierte en la fiola de

transporte de la solución a la fiola. 50 ml.
Pá gina 34
Figura N°30. Se agrega agua destilada hasta el menisco de la fiola.
Figura N°31. Siete frascos con solución patrón.
 Para cada solución el siguiente procedimiento:
Pá gina 35
Figura N°32. Los tubos de ensayo previamente son lavados con alcohol.
Figura N°33. Se enjuagan dos veces con la misma solución.
Pá gina 36
Figura N°34. Se vierte la solución en las 3/4 partes del tubo de ensayo.
Figura N°35. Se secan las paredes externas del tuvo de ensayo con toallitas secadoras.
Pá gina 37
Figura. N°36. El tubo se coloca dentro del espectrofotómetro para su análisis.
Figura N°37. Grafica total de las 7 muestras con la solución patrón de azul
de metileno.
Pá gina 38
Figura N°38. Foto grupal
Pá gina 39

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

CURSO : CARACTERRIZACIÓN DE MATERIALES

DOCENTE : ING. OTINIANO MENDEZ, DIONICIO

ALUMNOS : GAMBOA LÓPEZ, KATHERLINE GERALDINE

LUIS MEREGILDO, GIANNELLA LIZBETH

MARCHENA CHOPITEA, FERGIE ANTUANETH

SÁNCHEZ SALAZAR, EDISON OCTAVIO

SÁNCHEZ SEGURA, RICARDO

2.1 Conceptos previos……………………………………………………………..…..4

2.3.1 Espectrometría de absorción………………………………………………….....6

2.3.2 Espectrometría de fluorescencia…………………………………………………

2.3.3 Espectrometría de rayos x……………………………………………………….6

2.3.4 Espectrometría de llama……………………………………………………….7-

2.3.5 Espectrometría de emisión de

2.3.6 Espectrometría de chispa o arco………………………………………….…...8-9

2.3.8 Espectrometría ultravioleta……………………………………………………...9

2.3.9 Espectrometría infrarroja……………………………………………………......9

2.4.1 Ley de Lambert………………………………………………………..….……10

2.4.2 Ley de Lambert-Beer………………………………………………..….…..10-

2.4.3 Ley de Bouguer-Beer-Lambert…………………………………………...……11

2.8.2 Componentes de un espectrofotómetro…………………………………....13-14

2.1.- Conceptos previos

Es la propagación de energía a través del espacio sin soporte de materia, es decir, a

Figura N°01. Naturaleza ondulatoria

Figura N°02. Espectro UV

La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en la

ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es generalmente disuelta para

Figura N°03. Espectro de absorción de dos compuestos diferentes.

2.3.- Tipos de espectrofotometría.

2.3.1. Espectrometría de absorción:

en este proceso de excitación se emite como radiación (fluorescencia) o quitará otros

2.3.4. Espectrometría de llama:

monocromador en una longitud de onda determinada para concentrarse en el análisis

* Espectrometría de plasma de corriente contínua (DCP). Un plasma de corriente

* Espectrometría de emisión óptica por descarga luminiscente (GD-OES)

* Espectrometría de emisión plasma-atómica acoplada inductivamente (ICP-AES)

términos de estas dos macromoléculas. También pueden hacerse estimaciones

Figura N°04. Ley de Lambert

La ley de Lambert-Beer afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo

Figura N°05. Ley de Lammbert-Beer.

2.4.3. Ley de Bouguer-Beer-Lambert

Una ley muy importante es la de Bouguer-Beer-Lambert (también conocida como ley de

2.5. Modos de excitación

a) Transiciones σ ----> σ∗¿

La longitud de onda <150 nm . Este tipo de transiciones se dan sobre todo en

b) Transiciones n----> σ∗¿

La longitud de onda esta entre 150-200 nm . Correspondientes a hidrocarburos que

c) Transiciones n------>π y π------> π*

La longitud de onda esta entre 200-700 nm. La mayoría de las aplicaciones de

Transiciones electrónicas posibles entre orbitales n: orbital que contiene par de

el espectrómetro UV-Vis registra las longitudes de onda donde se registra absorción y

El espectrofotómetro es un instrumento usado en la física óptica que sirve para medir,

2.8.2. Componentes de un espectrofotómetro:

 Cubetas de espectrofotometría: En un primer plano, dos de cuarzo aptas para el

(también llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón y lámpara de deuterio que

2.8.3. Características de un espectrofotómetro:

 El espectrofotómetro se usa en el laboratorio con el fin de determinar la

El espectrofotómetro, construido mediante procesos avanzados de fabricación, es

lámpara de características especiales es guiada a través de un dispositivo que

Figura Nº06. Instrumentación de un espectrómetro

Las instrucciones generales de manejo de un espectrofotómetro serían:

 Adaptación del espejo a la lámpara adecuada, atendiendo al rango de longitud de

2.9. Curva de calibración.