Pruebas con fagos

Los bacteriófagos son virus que infectan exclusivamente bacterias. Tienen las
características de un virus de eucariotas, poseen una cápside cuyo interior posee
el material genético que puede ser ADN de doble cadena o ARN. El tamaño de los
fagos oscila entre 20 y 200 nm. Se pueden dividir en bacteriófagos con cola, que
inyectan el material genético sin ingresar en la célula huésped, y los bacteriófagos
sin cola, que necesitan ingresar dentro de la célula para su replicación.
Desde su descubrimiento han sido utilizados en varios campos de la investigación
básica y aplicada, en un principio el interés por los mismos estuvo ligado a su uso
como agentes terapéuticos, una de las primeras aplicaciones de los fagos fue en
microbiología clínica, los fagos de micobacterias han sido largamente usados para
realizar tipicacion de cepas y para el diagnóstico de Mycobacterium tuberculosis.
La aparición de cepas multi- y extremadamente resistentes a drogas, exigen la
implementación de métodos de detección rápidos y capaces de establecer el perfil
de susceptibilidad a drogas del aislamiento clínico en cuestión 1.
La tecnología de amplificación de fagos es simple, rápida y requiere 2 días para
obtener resultados. No se requieren equipos delicados costosos ni instalaciones
especializadas y los resultados se leen a simple vista.
Método PhageTek MB o FASTPlaqueTB
El micobacteriofago usado para este método es el D29, el método consiste en
poner en contacto la muestra descontaminada del paciente con el fago e incubada
con en el medio Middlebrook 7H9 por una noche a 37ºC. Si en la muestra se
encuentran micobacterias, el fago las infecta después de un periodo de incubación
de aproximadamente 1 hora, se agrega un viricida selectivo, que, sin afectar las
micobacterias en el medio, destruye todos los fagos que no han infectado los
bacilos. Para la observación del resultado, se le adiciona una micobacteria de
crecimiento rápido, la cepa Mycobacterium smegmatis . Los resultados los
podemos observar en 24 horas los organismos se replican y crean áreas claras en
el medio. La presencia de estas áreas muestra un resultado positivo y están
relacionadas con el número de Mycobacterium tuberculosis viable que contenían a
los micobacteriofagos.2
 (a)Negativo; sin placas. (b) Positivo; placas contables, que suman 20 o más. (c) Positivo; lisis
confluente. (d) Positivo; lisis completa.

El método con bacteriófagos también tiene la posibilidad de determinar

Mycobacterium tuberculosis resistente. El ensayo FASTPlaque TB -MDRi es una
prueba basada en bacteriófagos para la indicación rápida de TB-MDR en 48
horas, basado en la susceptibilidad de las cepas a la rifampicina. El método es
igual excepto por el añadido de rifampicina al medio, si el bacilo es resistente a la
rifampicina, se formarán placas claras en el medio. 3
Método Luciferase Reporter Phage (LPR)
Durante la última década se han desarrollado micobacteriofagos indicadores de
luciferasa, este método utiliza un fago indicador modificado genéticamente para
detectar micobacterias viables, que tras la infección producen luz cuantificable 4.
En principio, cuando el fago infecta la micobacteria viable, el gen de luciferasa se
expresa tras la adición de sustrato de luciferina lo que da como resultado la
emisión de luz en presencia de ATP celular y Mg2, La luz emitida se mide con un
luminómetro.5
El ATP es elemento clave de la actividad vital de las bacterias, de tal manera
cuando bacterias sensibles son sometidas a la acción de fármacos, mueren y por
ende no se produce ATP, inhibiéndose la producción de luz. En ensayos de
susceptibilidad a fármacos, la producción de luz es interpretada como la presencia
de bacilos resistentes al fármaco antituberculoso evaluado, debido a que la
replicación del micobacteriófago solo ocurre en bacterias viables de ahí que esta
metodología puede ser usada como prueba de susceptibilidad.
Bibliografía:

1. Alcaide F, Moreno J, Gonzales J, Palacios J. Procedimientos en microbiología clínica:

Micobacterias. SEIMC [Internet]. 2005 [citedo 7 Octubre 2021];:26-27. Disponible en:
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologi
a/seimc-procedimientomicrobiologia9a.pdf

2. Alcaide F, Galí N, Domínguez J, Berlanga P, Blanco S, Orús P et al. Usefulness of a New

Mycobacteriophage-Based Technique for Rapid Diagnosis of Pulmonary Tuberculosis.
Journal of Clinical Microbiology. 2003;41(7):2867-2871. Disponible en :
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC165270/

3. Trollip A, Albert H, Maskell T. Bacteriophage-based technologies for the rapid diagnosis

and drug susceptibility testing of tuberculosis [Internet]. PubMed. 2001 [citado 7 octubre
2021]. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11766419/

4. Banaiee N, Bobadilla-del-Valle M, Bardarov S, Riska P, Small P, Ponce-de-Leon A et al.

Luciferase Reporter Mycobacteriophages for Detection, Identification, and Antibiotic
Susceptibility Testing of Mycobacterium tuberculosis in Mexico. Journal of Clinical
Microbiology [Internet]. 2001 [citado 7 octubre 2021];39(11):3883-3888. Disponible en:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC88459/

5. Anbarasu S, Revathy K, Radhakrishnan M, Krupakar P, Joseph J, Kumar V. Luciferase

Reporter Phage Assay for Anti Tuberculosis Screening: Current Status and Challenges
[Internet]. Bioscience Biotechnology Research Communications. 2020 [citado 7 Octubre
2021]. Disponible en: http://bbrc.in/bbrc/luciferase-reporter-phage-lrp-assay-for-anti-
tuberculosis-screening-current-status-and-challenges/