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UPLC y HPLC de ésteres de cafeoilo en cultivos silvestres y Arctium lappa L.
Ghasem Haghi a,B,⇑, Alireza Hatami a,B, Mehdi Mehran B
a Grupo de Fitoquímica, Centro de Investigación de Plantas Medicinales Jundi Shapour, 87135-1178 Kashan, Irán
B Centro de investigación de la empresa farmacéutica Barij Essence, Kashan, Irán
información del artículo
Historia del artículo:
Recibido el 31 de octubre de 2011 Recibido en forma
revisada el 3 de julio de 2012 Aceptado el 6 de
octubre de 2012
On-line el 8 de noviembre de 2012
Palabras clave:
Arctium lappa L.
Bardana
UPLC
HPLC
Ácido clorogénico (ácido 5-cafeoilquínico)
Ácido 1,5-dicafeoilquínico
1. Introducción
Arctium lappa L. (Bardana), una planta Compositae, ha sido
consumido como verdura y bebida en China, Taiwán y Japón durante
mucho tiempo. Además, la bardana también se utiliza como medicina
popular, como diurético y antipirético (Chen, Wu y Chen, 2004; Lou,
Wang, Lv, et al., 2010; Lou, Wang, Zhu y otros, 2010). Varios estudios
han informado que la bardana incluye actividad antioxidante (Duh,
1998; Maruta, Kawabata y Niki, 1995), eficacia hepatoprotectora (Lin et
al., 2000, 2002), actividad antiinflamatoria (Lin, Lin, Yang, Chuang y
Ujiie, 1996), efectos antiproliferativos y apoptóticos (Matsumoto,
Hosono-Nishiyama y Yamada, 2006), actividad antimicrobiana y
antiviral (Chow, Wang y Duh, 1997; Gentil y col., 2006; Lou, Wang, Lv, et
al., 2010; Lou, Wang, Zhu y otros, 2010), efectos protectores de la
oxidación de lipoproteínas de baja densidad (Wang, Yen, Chang, Yen y
Duh, 2007), y actividad captadora de radicales libres (Duh, 1998; Lin y
col., 1996) el atribuido a la presencia de derivados del ácido
cafeoilquínico, en particular 5-CQA y ácido cafeico (CA) (Chenet al.,
2004; Maruta et al., 1995). Se han publicado pocos métodos analíticos
para el análisis de compuestos fenólicos en bardana.Maruta y col.
(1995)dilucidaron la estructura de cinco derivados antioxidantes del
ácido cafeoilquínico aislados de las raíces de la bardana y midieron su
actividad antioxidante. Los estudios deLin y Harnly (2008) se centró en
una mayor identificación de hidroxicina-
⇑ Autor para correspondencia en: Phytochemistry Group, Jundi Shapour Medicinal
Centro de Investigación de Plantas, 87135-1178 Kashan, Irán. Tel .: +98 866436 2112; fax: +98
866436 2187.
Dirección de correo electrónico: g.haghikashani@gmail.com (G. Haghi).
0308-8146 / $ - ver el documento preliminar 2012 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.10.040
Química de los alimentos 138 (2013) 321–326
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Química de Alimentos
abstracto
Se desarrollaron métodos analíticos que incluyen cromatografía líquida de ultrarresistencia (UPLC) y cromatografía
líquida de alta resolución (HPLC) con detector de matriz de fotodiodos (PDA) para el análisis de derivados del ácido
cafeoilquínico en semillas, hojas y raíces de Arctium lappa L. Se realizó la separación
en C18 columna que utiliza ácido acético al 5% (v / v) en agua y acetonitrilo a 330 nm. Ambas metodologías fueron validadas en
términos de linealidad, precisión y recuperación. Los resultados mostraron que las principales ventajas de
UPLC, sobre HPLC fueron el análisis rápido, picos estrechos, alta sensibilidad y reducción del consumo de solvente.
Posteriormente se aplicaron los métodos para la identificación y cuantificación de ácido clorogénico (5-CQA) y ácido
1,5-dicafeoilquínico (1,5-DCQA) como compuestos principales en muestras. El contenido fenólico total de las
muestras osciló entre 3,93 y 14,13 g de equivalente de 5-CQA / 100 g de peso seco (DW). Hubo una variabilidad
significativa de 89 a 571 mg / 100 g para 5-CQA y 48 a 486 mg / 100 g para 1,5-DCQA en seco.
material.
2012 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
ácidos moilquínicos de raíz de bardana usando LC-DAD-ESI / MS. Este
método identificó 18 ácidos hidroxicinamoilquínicos que incluyen isómeros
mono, di y tricafeoilquínicos en la raíz de bardana, con algunos analitos
coeluidos, tiempo de ejecución prolongado y restricción en la elección de la
columna.Ferracane, Graziani, Gallo, Fogliano y Ritieni (2010) informó de la
presencia de compuestos bioactivos, incluidos algunos ácidos fenólicos y
flavonoides en semillas, raíces y hojas de bardana mediante LC / MSnorte. En
otro papel,Liu y col. (2010)utilizó un método de HPLC con detección de
fluorescencia para caracterizar la arctiina y la arctigenina, en frutos de
bardana. El método UPLC-MS / MS de alta sensibilidad se desarrolló para
identificar el ácido benzoico,pag-ácido cumarico y algunos flavonoides en
las hojas de bardana (Lou, Wang, Lv, et al., 2010; Lou, Wang, Zhu y otros,
2010).
El objetivo principal del presente estudio fue investigar el perfil de
derivados del ácido cafeico en muestras de bardana tanto cultivadas como
silvestres por HPLC y evaluar el contenido fenólico total utilizando reactivo
de Folin, con el fin de obtener una mejor comprensión de su uso potencial
en la salud humana. Duplicamos el método de fase inversa-HPLC-DAD
publicado en la literatura (Lin y Harnly, 2008) pero la separación fue
inadecuada. Así, se mejoró un método HPLC para el análisis de los
derivados del ácido cafeoilquínico en semillas, raíces y hojas de bardana;
además, para mejorar la sensibilidad y aumentar aún más la velocidad de
análisis, lo que significó también una reducción en el tiempo de análisis y el
consumo de disolventes, un sistema de cromatografía líquida (UPLC) con
detección de PDA utilizando una columna analítica de menos de 2 micrones
se desarrolló para el análisis de analitos en la raíz y la hoja de bardana.
Hasta donde sabemos, aún no se ha investigado el patrón de estos
compuestos en la raíz de bardana utilizando el método UPLC-DAD. Los
métodos de UPLC se han desarrollado en los últimos años para
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Figura 1. Estructura molecular de ácidos mono y dicafeoilquínicos (numeración IUPAC).
análisis pero aún no utilizado en el análisis de control de calidad de
formulaciones farmacéuticas. Aunque se han informado aplicaciones de
UPLC en los últimos años (WatersWhite Paper & UPLC: Nuevos límites para
el laboratorio de cromatografía, 2004), sigue siendo una nueva tendencia en
las ciencias de la separación y tiene potencial para una investigación más
pionera. Esta técnica es una forma avanzada de cromatografía líquida (LC)
para utilizar columnas de calibre estrecho empaquetadas con partículas
muy pequeñas (sub-2lm) y un sistema de suministro de fase móvil desde la
bomba (soporta contrapresión de hasta 15.000 psi). Las principales ventajas
de la UPLC sobre la HPLC convencional son la mejor resolución, los tiempos
de retención más cortos y la mayor sensibilidad. La determinación
cuantitativa de los ácidos cafeoilquínicos individuales en el extracto de raíz
fue difícil debido a la diversidad y la falta de estándares de acceso. Así, se
seleccionaron 5-CQA y 1,5-DCQA (ésteres de una molécula de ácido quínico
con una y dos unidades de ácido cafeico) como componentes principales
para la validación y el control de calidad de la bardana. 5-CQA y 1,5-DCQA
poseen un fuerte efecto inhibidor sobre herpesvirus (HSV-1, HSV-2),
adenovirus (ADV-3, ADV-11) e inmunodeficiencia humana (VIH-1) que se
distribuye ampliamente en muchas plantas (Chiang, Chiang, Chang, Ng y
Lin, 2002; Yang y col., 2006). La estructura de estos compuestos se ha
demostrado enFigura 1.
2. Materiales y métodos
2.1. Disolventes y químicos
El ácido cafeico, ácido ascórbico, ácido acético, ácido clorhídrico,
hidróxido de sodio, carbonato de sodio, metanol y acetato de etilo de
grado analítico eran de Merck (Darmstadt, Alemania). El ácido
etilendiaminotetraacético (EDTA) y el 5-CQA se compraron a Carl Roth
(Karlsruhe, Alemania). Cynarin (1,3-DCQA, "1,5-DCQA" como nombre
trivial) se obtuvo de Fluka (91801). A partir de 5-CQA se preparó una
mezcla de 3-CQA (ácido neoclorogénico) y 4-CQA (ácido
criptoclorogénico), aplicando el método de isomerización según
nuestra experiencia previa (Haghi, Hatami y Arshi, 2011). El estándar
comercial de 1,5-DCQA no está disponible, por lo que se obtuvo a
partir de hojas de alcachofa utilizando un método de extracción líquido-
líquido (Slanina et al., 2001) con modificaciones menores. Brevemente,
las hojas molidas de alcachofa se mezclaron con metanol (1:10 p /
v) y homogeneizar en un mezclador a temperatura ambiente durante 4
h. La solución se filtró y el residuo se lavó con un disolvente.
y añadido al extracto anterior. El extracto crudo analizado por HPLC
representó tres picos principales (5-CQA, 1,5-DCQA y luteolin-7-
glucósido) y varios picos menores. El extracto se concentró al vacío y se
diluyó con agua para establecer metanol al 30% (v / v). Los compuestos
altamente apolares como la grasa y la clorofila se eliminaron utilizando
éter de petróleo. La capa acuosa se acidificó a pH 6 para eliminar los
compuestos apolares mediante éter dietílico. El extracto de
hidroalcohol acidificado (pH 4) se extrajo con éter dietílico para
obtener 1,5-DCQA. En este paso, el uso de acetato de etilo en lugar de
éter dietílico produce una mayor eficacia. Para eliminar el 5-CQA y el
luteolin-7-glucósido restante, la fracción de éter dietílico se enjuagó
con agua y se añadió sulfato de sodio para eliminar el agua residual. El
extracto de éter dietílico se evaporó a presión reducida y el residuo se
disolvió en metanol (todas las fracciones se analizaron por HPLC). La
identificación de 1,5-DCQA se apoyó usando una reacción de
isomerización de acuerdo con el método anterior. Una alícuota de 1,5-
DCQA obtenida se sometió a un tratamiento de hidrólisis alcalina a
100ºC durante 2 h. En este proceso, el 1,5-DCQA se convirtió en 1,3-
DCQA. El 1,3-DCQA obtenido se confirmó mediante una comparación
de su tiempo de retención, espectro UV con la sustancia de referencia.
2.2. Materiales vegetales
Las dos muestras de bardana cultivada (partes aéreas y raíz) se
obtuvieron de la granja de investigación de Barij Essence Pharmaceutical
Company en junio y septiembre y tres muestras de raíces de bardana en
crecimiento silvestre recolectadas de tres áreas diferentes de Kashan, Irán,
en junio de 2011, y secar en lugar sombreado y ventilado durante 48 h. La
hoja de alcachofa se preparó en un mercado.
2.3. Soluciones estándar
La cuantificación de 5-CQA y 1,5-DCQA en las muestras se llevó a
cabo mediante el método estándar externo utilizando sus estándares.
Las soluciones estándar madre de 5-CQA y 1,5-DCQA (1 mg / ml) se
prepararon recientemente en metanol. Las soluciones de trabajo se
prepararon diluyendo la solución madre con metanol. Estas soluciones
de ensayo se diluyeron adicionalmente con las mismas soluciones
madre para el sistema UPLC. A 1lSe inyectó 1 volumen a cada nivel de
concentración de 5-CQA y 1,5-DCQA por triplicado en los sistemas
UPLC o HPLC para la construcción de la curva de calibración. La curva
de calibración se trazó utilizando varias concentraciones de estándares
(lg / ml) frente al área del pico.
2.4. preparación de la muestra
Se transfirió material vegetal en polvo (0,2 g) a un tubo con tapón
de rosca y se extrajo con 10 ml de metanol acuoso al 70% en un baño
de ultrasonidos a 30ºC durante 60 min. Después de centrifugar a 4000
rpm durante 5 min, se transfirieron 3 ml de sobrenadante a un vial de
5 ml. Esta solución se filtró a través de un filtro de jeringa de
0,2 lMembrana m para análisis LC y para medición del contenido
fenólico total.
2.5. Hidrólisis
La hidrólisis ácida o alcalina es un tratamiento químico ordinario
para la identificación simplificada de ácidos hidroxicinamoilquínicos.
Estos compuestos normalmente están presentes como un éster de
ácido hidroxicinámico con QA en plantas. El extracto preparado se
sometió a hidrólisis alcalina (NaOH 2N) para romper los enlaces
glucósidos, utilizando el procedimiento informado por otros (Nardini y
col., 2002). Los hidrolizados se analizaron por HPLC para identificar las
agliconas relevantes para determinar sus tipos fenólicos.
 G. Haghi y col. / Food Chemistry 138 (2013) 321–326
2.6. Determinación de fenoles totales
El contenido fenólico total se estimó mediante el método
colorimétrico de Folin-Ciocalteu (Wang et al., 2003) con modificaciones
menores. El extracto crudo (0,1 ml) se transfirió a un matraz aforado
de 5 ml y se agitó con 3 ml de agua desionizada. Se añadió el reactivo
de Folin-Ciocalteu (0,25 ml) y se agitó. Después de 3 min, se añadieron
0,75 ml de una solución de carbonato de sodio al 20% (p / v) y se
mezcló. Esto se registró como tiempo cero. Se añadió agua
desionizada para completar el volumen exactamente a 5 ml. La
solución se mezcló minuciosamente y se dejó reposar a temperatura
ambiente durante 2 h hasta que se desarrolló el característico color
azul; la absorción de UV se registró luego en el rango de 550–850 nm.
La absorbancia máxima encontrada fue cercana a los 740 nm. La
cuantificación se realizó sobre la base de la curva estándar de ácido
clorogénico a 740 nm mediante un espectrofotómetro (Perkin-Elmer
Lambda EZ-210 UV / Vis). Todas las pruebas se realizaron por triplicado
y se promediaron.
2.7. Condiciones cromatográficas
Los análisis de HPLC y UPLC se realizaron utilizando un sistema
Knauer UHPLC / HPLC PLATINblue (Knauer, Berlín, Alemania), equipado
con una bomba binaria, un compartimento de columna y un detector
PDA. Las separaciones por HPLC se realizaron en un Eurospher II
100-3 C18 columna (250 4,6 mm) a 30 C.La separación óptima se logró
usando elución en gradiente lineal con 5% (v / v) acuoso
ácido acético en agua (eluyente A) y acetonitrilo (eluyente B). La elución
en gradiente se inició con 8% A a 26% a los 40 min, 26-48% a los 10 min
a un caudal de 1,0 ml / min. El volumen de inyección fue 1ll (bucle 1 ll).
La presión operativa de HPLC fue de 2850 psi en condiciones de
gradiente inicial.
El análisis de UPLC se realizó en un BlueOrchid C18 columna (100 2
mm, 1.8 lm) a 30 C.La fase móvil fue la misma que
Método de HPLC. El gradiente lineal fue del 8% A al 22% a los 25 min a un
caudal de 0,5 ml / min. Todas las muestras se inyectaron tres veces (bucle 1l
l). El valor de las contrapresiones en las condiciones iniciales del gradiente
fue de 8200 psi. La longitud de onda del detector de PDA varió de 210 a 380
nm y la detección se estableció en 330 nm. Los analitos diana se asignaron
haciendo coincidir los tiempos de retención de los picos, los espectros UV,
añadiendo a las muestras compuestos estándar y con los informados
anteriormente.
2.8. validación del método
El método propuesto fue validado en términos de linealidad,
sensibilidad, precisión y recuperación. Para establecer las curvas de
calibración, se probó la linealidad en concentraciones de cinco niveles y se
inyectó por triplicado. Los LOD y LOQ se determinaron inyectando una serie
de soluciones diluidas con concentraciones conocidas sobre la base de una
relación señal / ruido igual a aproximadamente 3 y 10, respectivamente. Las
precisiones intra e interdiarias se determinaron en 1 y 3 días consecutivos
con tres repeticiones cada uno. La recuperación del método de ensayo se
evaluó por triplicado utilizando dos niveles de concentración.
3. Resultados y discusión
3.1. Determinación de fenólico total, 5-CQA y 1,5-DCQA
El contenido fenólico total (TPC) se calculó sobre la base de 5-CQA y
se expresó como equivalentes de ácido clorogénico gramo / 100 g de
material seco. La cantidad de fenoles totales determinada por el
método de Folin-Ciocalteu osciló entre 3,93 y 14,13 g de equivalentes
de ácido clorogénico (CGAE) / 100 g de DW (tabla 1). El análisis reveló
que el total de fenoles en las raíces fue mayor que
323
tabla 1
Contenido medio de ácido clorogénico (5-CQA) y ácido 1,5-dicafeoilquínico (1,5-DCQA)
y fenólico total en material seco.
Muestra 5-CQA mg / 100 g 1,5-DCQA mg / 100 g % Fenólico total (g / g)
Raíz 1w 89 62 4.16
Raíz 2w 177 138 5.72
Raíz 3w 237 195 7.39
Raíz 4C 542 398 13.42
Hoja 4C 293 198 3,93
Raíz 5C 571 486 14.13
Hoja 5C 314 238 4.34
Semilla 5C 418 48 4.12
w Cultivado salvaje.
C Cultivado.
en hojas y semillas. Como se muestra, los niveles de fenólicos totales
más altos se detectaron en las raíces de las muestras 4 y 5 (cultivadas)
con valor de 13.42% y 14.13% y los más bajos en hoja con 3.93%. Se
observó un contenido fenólico total de 4,12 g / 100 g en las semillas.
Hallazgos anteriores indicaron que el contenido fenólico total en las
hojas de bardana es mayor que el de la raíz (Ferracane et al., 2010) y
fue diferente a nuestros resultados. La diferencia también se observó
para 5-CQA y 1,5-DCQA en las muestras que usaban LC. El 5-CQA y
Las cantidades de 1,5-DCQA variaron en el rango de 89–571 y 48–486 mg /
100 g DW, respectivamente (tabla 1). También se observó una ligera
diferencia para el contenido fenólico total de 5-CQA y 1,5-DCQA en las
muestras 4 y 5 (cultivadas) con respecto al tiempo de recolección.
3.2. Separación cromatográfica por HPLC y UPLC
Antes de optimizar las condiciones de cromatografía, intentamos analizar las
muestras como se describió anteriormente (Lin et al., 2008), pero la separación no
tuvo éxito. Este método indicó problemas con la separación de algunos analitos
eluidos en los mismos tiempos de retención o tiempos de retención ligeramente
diferentes. Algunos de los picos de analitos se superpusieron parcial o
totalmente. Se obtuvieron las condiciones cromatográficas óptimas después de
múltiples ejecuciones de diferentes dispositivos móviles.
fases con C18 columna. El análisis se realizó de acuerdo con nuestro
procedimiento anterior con modificaciones menores (Haghi y col.,
2011). En este estudio, se prefirió el acetonitrilo sobre el metanol como
fase móvil, ya que su uso mejoró ligeramente la separación, así como
una contrapresión de la columna significativamente reducida. Como
resultado, se eligió acetonitrilo y agua que contenía ácido acético al 5%
(v / v) como fase móvil para una separación satisfactoria de analitos en
las muestras. El método de HPLC mejorado separó 33 picos en 45
minutos con una buena resolución (Figura 2), mientras que el método
anterior detectó 24 analitos con coelución de algunos picos a 60 min.
tiempo de ejecución. Los picos detectados tenían espectros UV similares (kmax a aprox.
240, 300sh y 328 nm) característico de los derivados del ácido cafeico.
Para dilucidar aún más los ácidos cafeoilquínicos individuales en el ex-
tracto, el extracto crudo y 5-CQA fueron sometidos a un tratamiento de hidrólisis
alcalina, como se informó en nuestro método anterior. La saponificación de los
límites estericos se dio cuenta de sus agliconas. La mayoría de los picos enFigura
2 desapareció y produjo un pico correspondiente al CA estándar (pico 4). Los
analitos se identificaron por comparación con los tiempos de retención y los
espectros UV de los compuestos auténticos. La secuencia de elución de los
analitos en la columna fue similar a los informes anteriores en la literatura (Adzet
y Puigmacia, 1985; Clifford y Kellard, 1989; Danino, Gottlieb, Grossman y
Bergaman, 2009; Gouveia y Castilho, 2012; Lin y col., 2008; Pinelli y col., 2007).
Como se muestra en
Figura 2 los compuestos polares eluyeron más rápido que los compuestos
apolares. Por ejemplo, los isómeros del ácido cafeoilquínico, los grupos
cafeoílo en la posición axial-axial en cis-1,3-DCQA son significativamente
más polares que el trans-1,5-DCQA en la posición axial-ecuatorial y eluyeron
antes. 1,5-DCQA ha sido llamado cynarin (sistema de numeración más
antiguo) por otros (Adzet y col., 1985), el nombre '' cinarina '' y distingue
entre estos dos compuestos (1,3-DCQA y
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Figura 2. Cromatograma HPLC de raíz (A), hoja (B) y sustancias de referencia (C) a 330 nm. (1) ácido neoclorogénico, (2) ácido criptoclorogénico, (3) ácido clorogénico, (4) cafeico
ácido, (5) cinarina, (6) pag-ácido cumarico, (7) rutina y (8) ácido 1,5-dicafeoilquínico.

1,5-DCQA) es confuso. Según la nomenclatura de la IUPAC, este compuesto
es 1,3-DCQA. Algunos autores han informado que el 1,3-DCQA es el
principal compuesto de la alcachofa (Mulinacci y col., 2004; Schütz,
Kammerer, Carle y Schieber, 2004) y se pueden nombrar de acuerdo con la
numeración anterior a IUPAK porque la secuencia de elución de los picos de
ácido clorogénico (3-CQA, una numeración más antigua), 1,5-DCQA y 1,3-
DCQA son similares a nuestros hallazgos y a los demás. (Adzet y col., 1985;
Lin y col., 2008; Pinelli y col., 2007; Slanina et al., 2001). Para lograr una
separación óptima, utilizamos fases móviles similares durante la
optimización de la separación UPLC. Se obtuvo una adecuada separación de
los ácidos cafeoilquínicos eluyendo ácido acético al 5% (v / v) y acetonitrilo
en modo de gradiente lineal durante 25 min. La secuencia de elución y el
número de analitos obtenidos por UPLC se asemeja al cromatograma
obtenido por HPLC (Higos. 2 y 3). El tiempo de análisis real usando UPLC es
menos de 20 min, en comparación
con 45 min para HPLC. Aunque el método UPLC indicó una separación
deficiente, probablemente debido al análisis extremadamente rápido, la
longitud de columna más corta y el tipo de sorbente, trajo algunas ventajas.
No solo fue más rápido, sino también más sensible. El método UPLC
permitió un tiempo de análisis real reducido hasta 2,2 veces en
comparación con el método HPLC. La sensibilidad del sistema UPLC fue
buena incluso para volúmenes de inyección tan bajos como 1ll. La
sensibilidad de detección fue 1.8 más alta para UPLC. El consumo de
disolvente para cada análisis se redujo casi cinco veces de esta manera (
Mesa. 2). El tiempo de equilibrado para llevar la columna a las condiciones
iniciales después del análisis de gradiente fue mucho más corto. Se
recomienda entre 10 y 15 minutos para devolver una columna de HPLC a su
estado equilibrado, pero de acuerdo con nuestras experiencias, solo se
requirieron 2 minutos para que la UPLC recuperara su equilibrio. Se utilizó
un tiempo de equilibrado de 10 min para los análisis de HPLC.
 G. Haghi y col. / Food Chemistry 138 (2013) 321–326 325

Fig. 3. Cromatograma UPLC de raíz (A), hoja (B) y sustancias de referencia (C) a 330 nm.

Tabla 2 er de 0,999. Los LOD para 5-CQA y 1,5-DCQA fueron 1.4 y

Comparación de la duración del análisis y el consumo de disolventes. 0,8 lg / ml para HPLC y 0,7 y 0,5 lg / ml para UPLC, respectivamente.
Compuesto Método Tasa de flujo Análisis Solvente
Los LOQ calculados para el análisis de 5-CQA y 1,5-DCQA sobre la base
(ml / min) duración (min) consumo (ml) de una relación señal / ruido 10 fueron 3,8 y 2,4 mg / ml para HPLC y
5-CQA UPLC 0,5 1.3 0,65
2,1 y 1,4lg / ml para UPLC, respectivamente. Los LOD y LOQ fueron
HPLC 1.0 9.2 9.2 ligeramente más bajos con la metodología UPLC que con la HPLC para
1,5-DCQA UPLC 0,5 2.3 1,15 dos estándares fenólicos. La metodología UPLC reveló las curvas de
HPLC 1.0 28,7 28,7 calibración con pendientes más altas que con HPLC. La repetibilidad se
realizó tres veces en uno y tres días consecutivos y cada ejecución se
3.3. Resultados de la validación repitió por triplicado. La variación intradía e interdiaria del análisis se
determinó para la muestra 5 y fue inferior al 4%. Como también se
Los parámetros de validación utilizados para dos metodologías fueron la puede ver enTabla 3, estos valores fueron con una RSD máxima de
linealidad, intradiaria, interdiaria y recuperación (Tabla 3). Utilizando el 3.9% y 3.1% para el análisis de los compuestos estudiados por HPLC y
análisis de regresión lineal, se establecieron curvas de calibración para 5- UPLC, respectivamente. La recuperación del método se evaluó para la
CQA y 1,5-DCQA en el rango de 4-200lg / ml utilizando ambos métodos. Los muestra 5 añadiendo cantidades conocidas de 5-CQA y 1,5-DCQA a dos
coeficientes de correlación (r2) de las curvas de calibracin eran altas concentraciones diferentes.
326 G. Haghi y col. / Food Chemistry 138 (2013) 321–326
Tabla 3
Datos de validación de los compuestos 5-CQA y 1,5-DCQA por métodos LC-UV.
Compuesto Método Ecuación de regresión
5-CQA UPLC y = 11,846X 21,643
HPLC y = 6583X 13.507
1,5-DCQA UPLC y = 22,327X 9526
HPLC y = 12,416X 5867
a Desviación estándar relativa.
B Porcentaje de analitos en material seco (g / g).
en condiciones optimizadas. El porcentaje de recuperación en las muestras
osciló entre el 96,2% y el 99,7%.
4. Conclusiones
Un método UPLC desarrollado con detección de PDA permite
separar 33 compuestos de ácido cafeoilquínico presentes en la raíz de
bardana en solo 20 minutos. La nueva técnica UPLC permitió reducir el
consumo de la fase móvil y disminuir en el momento del análisis. En
todas las muestras estudiadas se encontraron 5-CQA, 1,3-DCQA y 1,5-
DQA como compuestos bioactivos. Los resultados indicaron que la raíz
de bardana contiene muchos ingredientes activos de derivados del
ácido cafeico que pueden poseer efectos terapéuticos para el
tratamiento de diversas enfermedades. La investigación adicional
conducirá a una mejor comprensión del efecto beneficioso y el riesgo
potencial de consumir bardana como alimento. Este estudio reveló una
diferencia importante en la cantidad de compuestos fenólicos en los
dos tipos de muestra de bardana cultivada (semilla, hoja y raíz) incluso
entre sus extractos de raíz.
Agradecimientos
Los autores agradecen el apoyo financiero de la Compañía
Farmacéutica Barij Essence y el Grupo de Agricultura del Centro de
Investigación de Plantas Medicinales de Jundi Shapour por
proporcionar muestras.
Referencias
Adzet, T. y Puigmacia, M. (1985). Cromatografía líquida de alta resolución de
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Intra-día (RSD)a % (p / p)B Entre días (RSD)% (p / p) % De recuperación (RSD)
0,57 (2,7) 0,58 (2,9) 96,9 (2,3)
0,55 (2,3) 0,54 (2,6) 99,7 (1,9)
0,46 (3,7) 0,43 (3,9) 96,2 (2,5)
0,44 (3,1) 0,42 (3,4) 98,7 (2,3)
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