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elementos activos de la alcachofa

Karen Chavez

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Vademecum Colombiano de Plant as Medicinales

Neot rópico Biocosmét ica

Det erminación de la act ividad ant ioxidant es en sist emas biológicos

Guillermo Schinella

Vademecum de Plant as Medicinales

net flix grat is
 Extracción y caracterización de principios activos de estructura
fenólica con propiedades antioxidantes y antibacterianas, a partir
de residuos del procesamiento de alcachofas.

J. Dueñas, B. Naranjo & P. Araujo

Departamento de Ciencias de la vida, Escuela Politécnica del Ejército, Sangolquí, Ecuador.

RESUMEN: En esta investigación se determinó la presencia y actividad de compuestos

fenólicos como el ácido cafeico (sin dato) y ácido clorogénico (40.06 - 82.86 mg/L) en brácteas
de alcachofa mediante la aplicación de técnicas de extracción sólido-líquido, fenoles totales de
Folin-Ciocalteu, actividad antioxidante con el reactivo DPPH, actividad antibacteriana,
cromatografía en capa fina (TLC) y HPLC. Los resultados demostraron que el extracto con
mayor concentración de fenoles totales en equivalentes de quercetina fue el extracto
hidroalcohólico (0.160 mg EQT/100g brácteas frescas), seguido del extracto alcohólico (0.153
mg EQT/100g brácteas frescas), del hidrolizado sin calor (0.142 mg EQT/100 g brácteas
frescas) y, del hidrolizado con calor (0.001 mg EQT/100g brácteas frescas). Durante la prueba
de actividad antioxidante se observó que los extractos, alcohólico e hidroalcohólico, fueron
capaces de reducir al reactivo DPPH en 91.46% y 91.28% respectivamente. La prueba de
actividad antibacteriana de estos dos extractos en cultivos de Staphylococcus aureus y
Salmonella spp. demostró que tienen propiedades antibacterianas. Basado en los resultados, es
posible afirmar que las brácteas de alcachofa son un valioso recurso para obtener principios
activos útiles como antioxidantes y antibacterianos.

ABSTRACT: In this investigation it was possible to determine the presence and activity of
phenolic compounds such as caffeic (no data) and chlorogenic acid (40.06 - 82.86 mg/L) in
artichoke bracts by applying solid-liquid extraction methods, Folin-Ciocalteu total phenolics,
DPPH antioxidant activity test, antibacterial activity test and chromatography (TLC and HPLC)
techniques. Four extracts were elaborated and the extract with the highest concentration,
expressed in Quercetin equivalents (QTE), was the hydro-alcoholic extract (0.160mgQTE/100g
fresh bracts), followed by the alcoholic extract (0.153mgQTE/100g fresh bracts), non-heat
hydrolyzed (0.142mgQTE/100g fresh bracts), and heat hydrolyzed (0.001mgQTE/100g fresh
bracts). Antioxidant activity tests demonstrates that alcoholic and hydro-alcoholic extracts were
capable to reduce the concentration of DPPH 91.46% and 91.28% respectively. Antibacterial
activity of the same extracts was also evaluated using Staphylococcus aureus y Salmonella spp.
cultures. Antibacterial activity test determined that both extracts are antagonists of those
bacteria. Based on the results, artichoke bracts are valuable resources of active principles with
antioxidant and antibacterial activity.

1. INTRODUCCIÓN
Las plantas son una fuente de innumerables recursos útiles para el desarrollo de la ciencia, entre
los más importantes están los conocidos principios activos o metabolitos secundarios [2]. Los
compuestos fenólicos son un grupo muy común de metabolitos secundarios presentes en las
plantas, estos incluyen a los fenoles simples, polifenoles, flavonoides, taninos, entre otros. Los
flavonoides son el mayor grupo de fenoles vegetales y los más estudiados [9].
Existen dos compuestos fenólicos de gran importancia debido a su amplia y variada actividad
biológica, estos compuestos son el ácido cafeico y el ácido clorogénico. Las propiedades más
representativas de estos compuestos son antioxidantes, antibacterianas, antivirales, antifúngicas,
anticarcinogénicas, antitumorales, antimutagénicas, hepatoprotectoras, antiinflamatorias,
antihipercolesterolémicas e inmunoestimulantes [11].

En [10], los autores determinaron que los compuestos fenólicos más representativos en la
alcachofa (Cynara scolymus L.) son el ácido Cafeico (ácido 3.4-dihidroxicinámico), el ácido
Clorogénico (ácido 3-Cafeilquinico), la cinarina, el cinarósido, la isorhoifolina, y la narirutina,
todos estos con propiedades antioxidantes.

Muchas fuentes de información mencionan que los principios activos de la alcachofa se

encuentran únicamente en sus hojas y no en otra parte como sus brácteas o el corazón, pero
estudios como el de [7] y [8], demostraron que las brácteas de alcachofa de algunas variedades
poseen concentraciones importantes de compuestos fenólicos con actividad antioxidante, es
decir que contienen lo mismo que las hojas solo que con ciertas diferencias cuantitativas de
concentración. Según [7], las brácteas de alcachofa son una importante fuente de compuestos
fenólicos con propiedades beneficiosas para el organismo y, pueden llegar a ser un recurso
alternativo para las aplicaciones farmacéuticas tradicionales que solo utilizaban extractos de las
hojas. Esto resalta la importancia de utilizar los subproductos o mal llamados desechos que
constituyen las brácteas de alcachofa como material para obtener este tipo de sustancias. Los
principales compuestos fenólicos encontrados en las brácteas fueron el ácido 1.5-O-
dicafeilquínico (cinarina), seguido del ácido clorogénico y la 7-O-glucuronida.

2. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1. Obtención y preparación de la muestra
Las muestras de brácteas de alcachofa fueron obtenidas de la empresa INAEXPO, perteneciente
a PRONACA, en Puembo, Pichincha-Ecuador. La preparación de las muestras consistió en
secarlas a una temperatura menor a 40°C para evitar la alteración de los principios activos y,
finalmente fueron pulverizadas.

2.2. Extracción de principios activos

Los extractos de brácteas de alcachofa se obtuvieron aplicando técnicas de extracción sólido-
líquido recomendadas por [12]. La primera técnica aplicada fue la maceración del pulverizado
en etanol durante 30 días, utilizando 10 mL de etanol al 99.6% por cada 10g de brácteas
pulverizadas. De este procedimiento se obtuvieron dos extractos, uno alcohólico y otro
hidroalcohólico mediante la adición de agua durante la maceración.

La segunda técnica aplicada para la extracción de principios activos fue la hidrólisis ácida con
ácido clorhídrico (HCl) 6N, utilizando 200 mL de HCl por cada 15g de brácteas pulverizadas
durante tres días, luego de la maceración en ácido clorhídrico (HCl) se dejó el extracto en
reflujo durante 12 horas. De este procedimiento se obtuvieron dos extractos, un hidrolizado con
calor y otro a temperatura ambiente. Finalmente todos los extractos fueron concentrados en
rotavapor con vacío y a una temperatura menor de 40°C.
2.3. Caracterización de los extractos
2.3.1. Reacción con Cloruro Férrico (FeCl3)
La presencia de compuestos fenólicos en los extractos se determinó con el reactivo de cloruro
férrico (FeCl3) siguiendo el protocolo de [4], el cual indica que se debe añadir 0.5mL de
solución de cloruro férrico al 5% por cada mL de extracto diluido en etanol.

2.3.2. Cromatografía en Capa Fina

La cromatografía en capa fina del extracto de brácteas de alcachofa se realizó según el
procedimiento indicado por [12]. La fase móvil fue preparada con: butanol-ácido acético glacial
-agua destilada (4:1:5), se usaron como estándares ácido cafeico, ácido clorogénico, quercetina
y los extractos de brácteas de alcachofa sobre cromatoplacas de sílica gel. La identificación de
las bandas se realizó con luz UV a una de longitud de onda 365ηm.

2.3.3. Cuantificación de Fenoles Totales

La cuantificación de fenoles totales en las brácteas de alcachofa se realizó utilizando el
procedimiento de [6] con el reactivo de Folin-Ciocalteu. Se realizó una curva de calibración
previa con concentraciones conocidas del quercetina a 760 ηm de absorbancia en
espectrofotómetro para comparar con los valores de absorbancia de los extractos.

2.3.4. Tamizaje fitoquímico y Cromatografía HPLC

El tamizaje fitoquímico del pulverizado y la cromatografía HPLC de los extractos alcohólico e
hidroalcohólico se realizaron en el laboratorio de Productos Naturales de la Universidad
Politécnica Salesiana por el profesor Wilson Tapia MSc. Para la cromatografía HPLC se
utilizaron como estándares ácido cafeico, ácido clorogénico y quercetina.

2.4. Pruebas de actividad

2.4.1. Actividad antioxidante
Se utilizó el procedimiento de [6] para la determinación de la actividad antioxidante de los
extractos de brácteas de alcachofa utilizando una curva de calibración con concentraciones
conocidas del radical libre DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidracilo) a 517ηm de absorbancia en el
espectrofotómetro para comparar con los valores de absorbancia de los extractos.

2.4.2. Actividad antibacteriana

La actividad Antibacteriana de los extractos de brácteas de alcachofa se realizó mediante el
método de difusión en agar por discos [5], a través de este se determinó la presencia de un halo
de inhibición en el cultivo bacteriano demostrando que el extracto es un agente antibacteriano.
Las bacterias utilizadas para el ensayo fueron Staphylococcus aureus y Salmonella spp.,
obtenidas del laboratorio de microbiología de la Universidad San Francisco de Quito.

2.5. Análisis de Datos

El análisis de resultados se realizó mediante cálculos estadísticos básicos como promedios,
desviaciones estándar y error de muestreo. Para los resultados de concentración de fenoles
totales, actividad antioxidante y antibacteriana se realizaron análisis de varianza (ANOVA) de
un factor, pruebas de Tukey y determinación de correlación mediante el análisis de Pearson.
3. RESULTADOS
3.1. Tamizaje o screening fitoquím
uímico
El pulverizado de brácteas de alca
lcachofa contiene compuestos fenólicos tales comoo flavonoides,
cumarinas y taninos catéquicos os, junto con otros compuestos como azúcares es reductores,
saponinas, esteroles y, carotenoidides.
Alcaloides, antocianidinas, lacto
ctonas y mucílagos no fueron hallados en el screenin
ing.

3.2. Reacción con cloruro férrico

co (FeCl3)
El extracto alcohólico, hidroalcoh
ohólico y el hidrolizado sin calor reaccionaron co
con el cloruro
férrico evidenciando la presenciaa de
d compuestos fenólicos en su composición.

3.3. Cromatografía en capa fina

En el cromatograma del extracto
cto alcohólico se evidenció la presencia de ácidoo clorogénico.
También encontraron otros compupuestos de los cuales no se pudieron identificar.
En el cromatograma del extracto
o hidroalcohólico (Figura 3.1) se encontró ácido cloclorogénico, la
que se presenta mucho más claraa y definida que en el extracto alcohólico. Existiend
ndo también la
presencia de otros componentes no identificados.

Figura 3.1 Cromatograma del extractocto hidroalcohólico. [3]

(a: ácido clorogénico; b: ácido cafeico
ico)

El cromatograma del hidrolizado o sin calor presentó 3 bandas una de las cuales cor
corresponde al
ácido cafeico
El cromatograma del hidrolizado o con calor no presentó bandas identificables. El tra
tratamiento de
las brácteas con ácido clorhídrico
o (HCl) 6N y temperatura mayor a 40°C no permitió itió obtener un
extracto que contenga compues estos fenólicos. La tabla 3.1 resume los result ultados de la
cromatografía.

3.4. Cromatografía HPLC

El resultado del análisis realizado
o al extracto alcohólico (Figura 3.2) e hidroalcohóli
ólico mediante
HPLC revela que las concentrac raciones de ácido clorogénico son 82.8560 y 40. 0.0613 mg/L,
respectivamente. Estos extracto tos no contienen ácido cafeico y quercetinaa según los
cromatogramas.
 Tabla 3.1 Rf de los compuestos identi
ntificados en los cromatogramas. [3]

Extractos Alcohó
hólico Hidroalcohólico Hidroliz
lizado sin calor
Rf Ác. Cafeico 0.96 0.95 0.95*
Rf Ác. clorogénico 0.54* 0.54* 0.53
0.84 0.82 0.90*
Rf Muestra 0.71 0.65 0.76
0.59* 0.52* 0.42
* Indica que el Rf de la muestra corre
rresponde al del estándar.

Figura 3.2 Cromatograma HPLC del

el extracto
e alcohólico. [3]

3.5. Fenoles totales

La tabla 3.2 indica los valores ob
obtenidos de la concentración de fenoles totales enn eequivalentes
de quercetina (EQT) como mg EQ QT/100g de brácteas frescas.

Tabla 3.2 Concentración de fenoles to

totales de los extractos de brácteas de alcachofa. [3]

Extractos m EQT/100g brácteas frescas

mg

Alcohólico 0.153 (±0.004)

Hidroalcohólico 0.160 (±0.004)
Hidrólisis con calor 0.001 (±0.001)
Hidrólisis sin calor 0.142 (±0.004)

3.6. Actividad antioxidante

Los dos extractos, alcohólico e hidroalcohólico,
hi redujeron la concentración de radicical DPPH en
91.46% y 91.28%, respectivamen ente, esto indica la capacidad que tienen de capturturar radicales
libres del medio en el que se apli
pliquen. Por otro lado, el hidrolizado sin calor, aunq
nque presenta
una concentración importante dee fenoles totales no tiene la capacidad de captur turar radicales
libres en un porcentaje represe sentativo. Esto hace suponer que el tratamiento to con ácido
clorhídrico (HCl) no es el adecuauado para elaborar un extracto con propiedades antintioxidantes y,
que esta actividad no está complet
leta ni directamente relacionada con el contenido de compuestos
fenólicos.
Del análisis estadístico se dete
terminó que existe correlación media entre la conce
ncentración de
fenoles totales y la capacidad dee reducir
r la concentración del radical libre DPPH,, eesto significa
que el análisis solo puede explica
car el 50% de correlación entre las variables. La inte
nteracción con
otras moléculas y las condicioneses del medio también influyen en la capacidad captu turar radicales
libres. El valor del coeficiente de correlación de Pearson negativo indica que mie ientras mayor
sea la concentración de fenoles totales
tot menor será la concentración final del radicall llibre DPPH.

Figura 3.5 Curvas de reducción de la Abs517ηm de la solución 0.1mM DPPH. [3]

3.7. Actividad antibacteriana

Los resultados de esta prueba indi
dican que el extracto alcohólico como el hidroalcohó
hólico poseen
actividad antibacteriana frente a S. aureus. y Salmonella spp., siempre que esténn ppresentes en
una concentración igual o mayorr al
a 50%.

Figura 3. 6 Halos de inhibición formaados por el extracto alcohólico en un cultivo de S. aureu

eus. [3]
4. DISCUSIÓN
La caracterización determinó la presencia de compuestos fenólicos en los extractos realizados a
partir de brácteas de alcachofa, confirmando que estos metabolitos no están presentes solamente
en las hojas. La cromatografía en capa fina y HPLC confirmó la presencia del ácido clorogénico
y ácido cafeico en la composición de los extractos alcohólico e hidroalcohólico de brácteas de
alcachofa. Todo esto concuerda con los resultados de los estudios de [7] y [8].

Los extractos alcohólico e hidroalcohólico presentaron actividad antioxidante al capturar

radicales libres del DPPH en medio líquido, confirmando la actividad antioxidante estudiada por
[7] y [8].

La evaluación de actividad antibacteriana confirma que los compuestos fenólicos presentes en

los extractos alcohólico e hidroalcohólico tienen efecto sobre Salmonella spp. y Staphylococcus
aureus, bacterias pertenecientes al grupo de microorganismos afectados por estos compuestos
según la descripción de los autores de [1].

5. CONCLUSIONES
Las brácteas de alcachofa contienen compuestos fenólicos como fenilpropanoides, taninos
catéquicos, flavonoides y cumarinas además saponinas, carotenoides, azúcares reductores y
esteroles.

Las caracterizaciones cualitativa (cloruro férrico y cromatografía en capa fina) y cuantitativa

(Folin-Ciocalteu y HPLC) demostraron que los extractos alcohólico e hidroalcohólico y el
hidrolizado sin calor contienen compuestos fenólicos en su composición. El mayor contenido de
fenoles totales (mgEQT/100g brácteas frescas) lo contiene el extracto hidroalcohólico
0.160(±0.004), seguido del alcohólico 0.153(±0.004), del hidrolizado sin calor 0.142(±0.004) y,
el hidrolizado con calor 0.001(±0.001). El extracto hidroalcohólico contiene mayor
concentración de fenoles totales porque al ser acuoso posee mayor capacidad de extracción de
compuestos polares como son los compuestos fenólicos.
La cromatografía en capa fina de los extractos, hidroalcohólico y alcohólico reveló que estos
contienen ácido clorogénico y, en el caso del hidrolizado sin calor, ácido cafeico. La
cromatografía HPLC determinó que los extractos alcohólico e hidroalcohólico contienen ácido
clorogénico en 82.8560 y 40.0613 mg/L respectivamente, mas no ácido cafeico o quercetina. El
hidrolizado sin calor no fue analizado mediante HPLC porque no presentó actividad
antioxidante.

Los extractos alcohólico e hidroalcohólico presentaron actividad captora de radicales libres

frente al DPPH, reduciéndolo 91.46% y 91.28% respectivamente. La correlación media entre la
concentración de fenoles totales y la capacidad de reducir la concentración del radical libre
indica que mientras mayor sea la concentración de fenoles, menor será la concentración final del
radical libre en el medio. Esta actividad también depende de la interacción de los compuestos
fenólicos con otras moléculas y de las condiciones del medio.
El tratamiento de las brácteas de alcachofa con ácido clorhídrico no es adecuado para
elaborar extractos de compuestos fenólicos con actividad antioxidante porque es un ácido muy
fuerte que junto con el calor destruye a los compuestos fenólicos completamente y no solo el
enlace con los azúcares que forman las agliconas flavonoides. Por esta razón el hidrolizado sin
calor pudo extraer solamente ácido cafeico.
 Los extractos alcohólico e hidroalcohólico poseen actividad antibacteriana frente a
Staphylococcus aureus y Salmonella spp.

Basado en los resultados, es posible afirmar que las brácteas de alcachofa son un valioso recurso
para obtener principios activos útiles como antioxidantes y antibacterianos.

REFERENCIAS

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