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Caracterización química, capacidad antioxidante y la actividad antimicrobiana contra los

microorganismos relacionados con la alimentación de Citrus limon var.
Pompia aceite esencial de hojas

Francesco Fancello si , 1 , Giacomo Luigi Petretto un , * , 1 , Severino Zara si , María Lina Sanna si ,
Roberta Addis un , mariateresa Maldini un , Marzia Foddai un , Jonathan P. Rourke C ,
Mario Chessa un , Giorgio Pintore un
un Departamento de Química y Farmacia, Universidad de Sassari, Italia
si Dipartimento di Agraria, Universidad de Sassari, 07100, Italia
C Departamento de Química de la Universidad de Warwick, Coventry CV4 7AL, Reino Unido

información del artículo resumen

Historia del artículo: En este estudio, las hojas de Citrus limon var. Pompia (Pompia) fueron sometidos a hidro-destilación y un aceite esencial (EO) se obtuvo.
Recibido el 4 de noviembre de 2,015 análisis cromatográfico de gases nos permitió determinar su composición química, tanto cualitativa como cuantitativamente: los principales
Recibido en forma 21 de enero de 2016
compuestos en el EO eran limoneno, geranial y neral. In vitro DPPH y ABTS ensayos, llevados a cabo en el EO, demuestran su capacidad para
revisada
actuar como un antioxidante. La actividad antimicrobiana de la EO contra 12 bacterias y levaduras 4 se ensayó mediante un ensayo de
Aceptada 7 de febrero de el año 2016 Disponible en Internet el
microdilución en caldo; además el efecto sobre la tasa de crecimiento máximo ( metro) y la fase lag ( l) se evaluó. Los resultados muestran una
11 de febrero de el año 2016
baja actividad inhibidora contra de calidad alimentaria y Lactobacillus cepas, mientras

palabras clave:
Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus fueron inhibidas a baja concentración EO. los Pompia EO demostró una actividad antimicrobiana
Las bacterias ácido lácticas
actividad antioxidante agente frente a la levadura, con Saccharomyces cerevisiae siendo la cepa más sensible. los Pompia EO, incluso a una concentración sub-MIC, afecta
antilisteria GRAS compuestos negativamente a la tasa de crecimiento microbiano ( metro) y el retraso en la fase de latencia en todos los patógenos probados cepas microbianas,
Composición química excepto Candida albicans
3993.
© 2016 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

1. Introducción otros compuestos volátiles, se reconocen generalmente como seguros (GRAS) por la Administración de Alimentos y

Medicamentos de Estados Unidos.

La vida útil de los productos alimenticios está vinculada a ambos factores químicos y biológicos
(por ejemplo, lípidos oxidación, microbiano deterioro etc.). aditivos químicos sintéticos tales como
agentes antimicrobianos y / o antioxidantes se usan comúnmente en combinación con métodos
físicos tales como la refrigeración, la luz pulsada o magnético fi campos con el objetivo de aumentar el
tiempo de conservación de los alimentos ( Bendicho, Barbosa, y Martin, 2002; Fernanda, Hartc,
Lelieveld, Barbosa, y Swanson, 2001 ). La demanda de productos naturales a veces se denomina “ verde
”, para reemplazar aditivos químicos sintéticos, todavía está en aumento. Entre los productos
naturales, derivados de plantas son las alternativas más prometedoras y aceites esenciales (EOS),
así como algunos
OE son mezclas complejas de compuestos naturales que a menudo se caracterizan por la
presencia de sólo unos pocos compuestos principales. Durante mucho tiempo han sido conocidos
por mostrar actividad biológica, incluyendo actividad antimicrobiana y antioxidante. La capacidad
antioxidante de las OE ha sido objeto de numerosos estudios ( Dambolena et al. 2010; Malhotra, Suri,
y Tuli, 2009; S ahin et al. 2004; Viuda-Martos, Ruiz Navajas, S anchez Zapata, helecho andezL opez,
& P erez- Alvarez, 2010 ). Entre el terpenoide compuestos carvacrol, timol y cresol se han encontrado
para mostrar la mayor actividad antioxidante ( Dapkevicius, Venskutonis, van Beek, y Linssen, 1998 ). Sanches-Sil
et al. (2014) informado de la incorporación de varios OE, como una fuente natural de antioxidantes,
en el envasado de alimentos.

* Autor correspondiente. Departamento de Química y Farmacia, vía Viena, 2,
07100, Sassari, Italia.
Dirección de correo electrónico: gpetretto@uniss.it (GL Petretto).
1 Estos autores deben considerarse tanto fi primer nombre en la lista de autores.
OE también se reconocen como agentes antimicrobianos potentes ( Burt, 2004; Lang & Buchbauer,
2011; Tongnuanchan y Benjakul, 2014 ). Recientemente Jing et al. (2014) revisado la actividad
antifúngica

http://dx.doi.org/10.1016/j.lwt.2016.02.018
0023-6438 / © 2016 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
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Cítricos de EO que en los últimos años ha sido objeto de varios estudios que ponen de manifiesto su
eficacia contra Aspergilo y
Penicillium especies. Además, los componentes individuales de estos aceites se han ensayado con
el fin de arrojar luz sobre los componentes más eficaces: varios autores relacionados con la actividad
en el compuesto principal presente en la EOS, mientras que otros estudios vinculados la actividad al
efecto sinérgico o antagónico de la EO componentes.
Citrus limon var. Pompia ( Camarda et al., 2013 ), En el pasado también
conocido como monstruosa cítricos, es una planta que crece en una sub-región de Cerdeña, Italia,
donde se cultiva predominantemente en Siniscola (NU). Reportes de la literatura se centraron en Pompia,
están limitados en número.
Fraternale, Giamperi, Bucchini, Cara y Ricci (2010) desarrollado un protocolo de regeneración para Pompia usando un instrumento Agilent 4890N equippedwith un FID y una columna capilar HP-5 (30m 0,25
y los principales componentes de su EO cáscara se han estudiado como una función de
collectionmonth por Fenu et al., (2010) . Más recientemente Mignani et al. (2015) estudió relaciones
mutuas, por ampli fi fragmento ed polimorfismos de longitud, ampli azar fi ed ADN polimórfico y la
secuencia caracteriza ampli fi región ed analiza, entre varios Agrios spp. destacando así similitudes
entre Pompia, limón y limón. Finalmente
Petretto et al., (2016b) una estudiada Pompia clasificación fi cación entre varios Agrios spp. basado en
la composición química de las sustancias volátiles. A lo mejor de nuestro conocimiento no hay
informes discuten la composición química y la actividad biológica de la EO extraído de las hojas de Pompia. d2-careno 22 mg / ml, limoneno 256 mg / ml, linalool 8 mg / ml, citronelal 5 mg / ml, un- terpineol 8
A pesar de que Smid y Gorris (1999) informó de que un tratamiento directo con los alimentos
con EO necesita una concentración mayor para alcanzar los resultados obtenidos por in vitro ensayos,
el in vitro Los estudios representan la
fi primer paso de cualquier investigación compuesto derivado de la planta ( Combrincka, Regniera, y Kamatoub
análisis repetidos de 6 muestras / día de EO sintético; método precisión intermedia se calculó por el
de 2011 ). Por lo tanto se inició la presente investigación para explorar el EO de la hoja y en el
presente documento que informe (i) la determinación de su composición química, tanto cualitativa
como cuantitativamente, (ii) una evaluación de su actividad antioxidante, y fi finalmente (iii) una
evaluación de su in vitro actividad antimicrobiana frente a 12 bacteriana y 4 especies de levadura.
2. Materiales y métodos
2.1. El material vegetal y la extracción de EO
Tres muestras de las hojas de Pompia se recogieron en junio de Siniscola (NU), Cerdeña, Italia.
Una muestra de pesaje 50 g de hojas se suspendió en 400 ml de agua y se somete a destilación
de vapor usando un aparato de tipo Clevenger durante 2 h ( Farmacopea Europea, 2002 ). El
rendimiento de las OE osciló entre 0,43% (v / w) y 0,52% (v / w) calculado a partir del peso seco.
La extracción se llevó a cabo por triplicado, y la EOS obtenidos se recogieron por separado, se
secó sobre sulfato de sodio anhidro (Na 2 ENTONCES 4) y después se almacena bajo una atmósfera de
nitrógeno a 4 C en viales de vidrio ámbar hasta que se analizaron.
2.2. Gas espectrometría de masas-cromatografía (GC mi MS) análisis
la GC mi El análisis por MS se llevó a cabo usando un Agilent 7890 GC equipado con un
automuestreador Gerstel MPS, junto con un detector Agilent 7000C MSD. La separación
cromatográfica se realizó en un VF-Wax 60 m 0,25 mm ID, 0,5 metro metro fi lm espesor columna
(Agilent), así como en una columna capilar HP-5MS (30 m 0,25 mm, fi espesor lm 0,17 metro m), se
utilizó el siguiente programa de temperatura para la columna de VF-Cera: asimiento 40 C durante 4
min, luego se aumentó a 150 C a una velocidad de 5,0 C / min, se mantuvo durante 3 min y después
se aumentó a 240 C a una velocidad de 10 C / min, y fi finalmente se mantuvo durante 12 min. Para la
columna de la HP-5MS programwas utiliza la siguiente temperatura: 60 C asimiento durante 3 min, a
continuación se incrementó a 210 C en
una tasa de 4 C / min, después se mantiene a 210 C durante 15 min, luego se aumentó a 300 C a
una velocidad de 10 C / min, y fi nalmente celebrada en 300 C durante 15 min. Heliumwas utiliza
como el gas portador a una constante Florida flujo de 1 mL / min para las dos columnas. Los datos se
analizaron usando un MassHunter Workstation B.06.00 SP1, con identi fi cación de los componentes
individuales ( tabla 1 ) Realizado de acuerdo con Petretto et al., (2016A) .
2.3. Cromatografía de gases- Florida detector de ionización de llama análisis (GC-FID)
El análisis de GC de la solución EO en hexano (proporción de dilución 1: 200) se llevó a cabo
mm, fi espesor lm 0,17 metro metro). La temperatura de la columna programwas el mismo descrito
para la columna HP5 en GC mi sección MS. La cuanti compuesto fi de cationes en la EOS se llevó a
cabo de acuerdo con protocolos literatura anteriores ( Petretto et al., 2016A ).
2.4. validación del método
Una solución madre de los estándares de EO (EO sintético) se construyó: mirceno 15 mg / ml,
mg / ml, nerol 36 mg / ml, geraniol 36 mg / ml, nerilo de etilo 5 mg / ml, geranil acetato de 18 mg / ml
y se si- cariofileno 1,5 mg / mL.
Método linealidad en el intervalo de trabajo se evaluó mediante la inyección de dilución en serie
(0,1 mi 500 metro g / ml) de cada solución estándar; método repetibilidad se evaluó mediante
análisis de 6 muestras / día de EO sintético para fi cinco días diferentes. Método límite de detección y
cuantificación valores (LOQ LOD y) se determinaron por el método de adición estándar, hasta que la
concentración de cada analito podría proporcionar una relación señal a ruido de 3 y 10
respectivamente.
2.5. actividad antirradical por difenil-1-picarylhydrazyl de ensayo (DPPH)
Diferentes cantidades de EO, de 0,125 y hasta un máximo de 5 mg se añadieron a la solución
de DPPH. (100 metro M en acetato de etilo) para llegar a una fi volumen final de 1 ml. La actividad de
eliminación del radical DPPH se calculó de acuerdo procedimiento de la literatura anterior ( Petretto et
al., 2016A ).
2.6. ensayo de la capacidad antioxidante (ABTS)
El ABTS Se determinó la actividad radical de barrido libre de cada muestra de acuerdo con el
método descrito por Petretto et al., (2016A) .
2.7. Actividad antimicrobiana
La concentración inhibitoria mínima (MIC) de la Pompia EO ( Tabla 2 ) Contra 12 bacteriana y 4
especies de levadura (Véase Tabla 3 para obtener información detallada sobre cepa utilizada,
condiciones de cultivo y medios de comunicación utilizados en este trabajo), se ensayaron por el
método de microdilución en caldo, de acuerdo con la ISO 10932 ( ISO (Organización Internacional de
Normalización), 2010 ) Estándar y estándar M07-A9 ( Clinical and Laboratory Standards Institute, 2014 )
Para lactobacilos y patógenos respectivamente. soluciones madre fueron EO
fi primer prepara con una concentración de 40 metro L / mL. Las soluciones madre se diluyeron a
continuación, en medio de ensayo de susceptibilidad 2x LAB (LSM) de caldo, se ajustó catión Muller
Hinton Agar (Oxoid, Basingstoke, Inglaterra) y YEPD (extracto de levadura al 2%, peptona al 1%,
dextrosa al 2%) para
 F. Fancello et al. / LWT - Ciencia y Tecnología de Alimentos 69 (2016) 579 mi 585 581

tabla 1
Composición química del aceite esencial de hojas de Citrus limon var. Pompia, ecuaciones de calibración para la cuantificación fi cationes de compuestos, repetibilidad y precisión intermedia expresa como coef fi ciente de variación, CV%. RI:
índice de retención, tr ¼ rastro, nd ¼ no detectado, RT: tiempo de retención, LOD: límite de detección, LDC: límite de cuantificación fi catión.

Compuesto mg / mL SD RI HP5 Rhode Island VFWAX Curva de calibración R2 Repetibilidad CV% La precisión intermedia CV% LOD LOQ

RT Zona RT Zona mg / ml mg / ml

un- pineno tr 939,0 1.037,6 no cuanti fi ed

Epten-2-ona <6-metil> 13 0.5 983,3 1.356,9 1,8-cineol
mirceno 15.3 0.6 987,5 1.176,0 y ¼ 0.0094x 0,0029 0,994 0,1 3.58 0.2 9.7 0.07 0.15
un- phellandrene tr 1.003,0 1.184,3 no cuanti fi ed
careno < delta2> 21.7 0,7 1.004,7 1.168,0 y ¼ 0.0099x þ 0,0019 0,992 0,1 4.64 0.1 9.7 0.07 0.15
limoneno 256,3 2,6 1.027,5 1.221,3 y ¼ 0.0152x þ 0,0021 0,999 0,1 5.34 1.4 29.8 0.07 0.15
1,8-cineol tr 1.029,5 1.230,8 no cuanti fi ed
ocimeno < Z-beta-> 8.0 1,5 1.035,6 1.266,7 mirceno
ocimeno < E-beta-> 71.7 1,7 1.046,6 1.247,9 mirceno
terpinoleno 3.3 0,2 1.082,3 1.305,6 un- terpineol
linalol 8.5 0,1 1.097,7 1.556,2 y ¼ 0.0098x þ 0,0024 0,994 0,0 6.46 0.1 9.1 0.1 0.2
citronelal 5.4 0,0 1.149,9 1.501,6 y ¼ 0.0093x þ 0,0031 0,999 0,0 5.59 0.1 9.2 0.05 0.1
cis Chrysanthenol 3.0 0,1 1162,4 nd 1,8-cineol
iso Verbanol 10.8 0,2 1.180,8 1.570,5 1,8-cineol
un- terpineol 8.4 0,1 1.187,0 1.723,3 y ¼ 0.0078x þ 0,0111 0,995 0,0 4.22 0.1 9.7 0.07 0.15
nerol 37.5 0,2 1.228,9 1.818,5 y ¼ 0.0100x 0,0052 0,999 0,0 5.99 0.1 9.1 0.15 0.3
neral 172,9 1,3 1.242,2 1.716,5 citronelal
geraniol 38.3 0,4 1.257,9 1.862,7 y ¼ 0.0103x 0,0117 0,996 0,0 6.08 0.1 8.9 0.15 0.3
geranial 213,8 0,4 1.273,9 1.767,6 citronelal
acetato de nerilo 5.5 0,1 1.362,6 1.746,3 y ¼ 0.0092x 0,0244 0,997 0,0 7.12 0.1 9.1 0.15 0.3
acetato de geranilo 18.9 0,3 1.382,2 1.775,5 y ¼ 0.0097x 0,0090 0,995 0,0 6.13 0.0 8.9 0.15 0.3
si- cariofileno 1.3 0,0 1.411,8 1.643,1 y ¼ 0.0127x þ 0,0024 0,994 0,0 5.89 0.0 9.6 0.15 0.3
germacreno D 0.7 0,1 1490,0 nd si- cariofileno

Tabla 2
(1,25 metro L / ml, a excepción de Saccharomyces cerevisiae EC1118 (Lallemand, Canadá), para el
las concentraciones inhibitorias mínimas (MIC) de la Citrus limon var. Pompia deja aceites esenciales contra los
cual un 0,625 metro Se utilizó la concentración de L / ml) y se incubaron a 37 C durante 24 h, en un
microorganismos ensayados.
lector de placas (Spectro Nano Star, BMG LABTECH, Alemania) con lecturas de absorbancia
organismos ensayados MIC ( metro L ml 1)
(DO600) tomadas cada 30 min. software de análisis de datos SPECTRO estrella Nano MARS
Las bacterias integrado en el lector de placas permite una grabación de datos automatizada.
acidophilus lb 314 ATCC > 20
plantarum lb 8014 ATCC > 20
plantarum lb ICE5 > 20
paracasei lb subsp. paracasei 5622 DSMZ 5
paracasei lb Shirota 5
rhamnosum lb 7469 ATCC > 20
Staphylococcus aureus 20231 DSMZ 2.5
Listeria monocytogenes si 2.5
Listeria monocytogenes mi 2.5 Tabla 3
Listeria monocytogenes 20600 DSMZ 2.5 Lista de microorganismos, medios y condiciones de cultivo utilizadas en este trabajo, para el ensayo de la actividad
Salmonella enterica 13772 DSMZ > 20 antimicrobiana de Pompia aceite esencial.
Escherichia coli 30083 DSMZ 10
Levadura organismos ensayados Fuente Medio

Candida albicans 3248 2.5

Las bacterias
Candida albicans 3993 2.5
Lactobacillus acidophilus 314 ATCC SEÑORA
bracarensis Candida J6 2.5
Lactobacillus plantarum 8014 ATCC SEÑORA
Saccharomyces cerevisiae E1118 comercio 1.25
Lactobacillus plantarum ICE5 DAFES SEÑORA

Lactobacillus paracasei subsp. paracasei 5622 DSMZ SEÑORA

Lactobacillus paracasei Shirota MRS cepa comercial

Lactobacillus rhamnosum 7469 ATCC SEÑORA

lactobacilos, patógenos y levaduras respectivamente, para dar una serie de concentraciones que Staphylococcus aureus 20231 DSMZ BHI
Listeria monocytogenes si STAA BHI
varían desde 0,078 hasta 20 metro L / mL. cultivos de una noche fueron utilizados para preparar la
Listeria monocytogenes mi STAA BHI
inoculación microbiana utilizada para la prueba. Alícuotas de 100 metro L de la inoculación diluido a Listeria monocytogenes 20600 DSMZ BHI
una concentración celular deseada se añadieron a cada pocillo en la placa de 96 pocillos de Salmonella enterica 13772 DSMZ BHI
micro-dilución que ya contiene 100 metro L de diluciones EOs deseados. Las placas se incubaron a Escherichia coli 30083 DSMZ BHI

continuación a 37 C durante 24 h. Tras la incubación, MICs ( metro valores L / ml) se determinaron Levadura

Candida albicans 3248 DAFES YPD

como la concentración de EO más bajo que inhibía el crecimiento visible de los microorganismos
Candida albicans 3993 DAFES YPD
probados, que se indica por la ausencia de turbidez. DMSO solo (al 1% de concentración) se utilizó bracarensis Candida J6 DAFES YPD
como control negativo. Cada prueba se realizó por cuadruplicado y los experimentos se repitió dos Saccharomyces cerevisiae EC1118 YPD cepa comercial

veces. la de Florida influencia de EO en la dinámica de crecimiento de las cepas que presentan la más MRS: De Man, Rogosa y Sharpe; BHI: Cerebro Tierra infusión; YPD: extracto de levadura, peptona, medio dextrosa.
alta sensibilidad a Pompia Se realizó EO en un ensayo de dilución de microtitulación automatizado. ATCC, American Type Culture Collection; DSMZ, Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Cultivos Celulares,

Las placas de microtitulación se prepararon como anteriormente usando la concentración sub-MIC Colección Alemana de Microorganismos de Cultivos Celulares; CBS, Centraalbureau voor Schimmelcultures hongos
Centro de Biodiversidad, Utrecht, Países Bajos; DAFES, colección de microorganismos de Dipartimento di Agraria de
descrito
la Universidad de Sassari, Sección de Alimentos y Ciencias Ambientales. La temperatura y tiempo de incubación
fueron 37 C y 24 h, respectivamente, para todos los ensayos.
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2.8. Evaluación de los componentes EO actividad antimicrobiana
Los principales componentes de Pompia EO, limoneno, citral (neral más geranial), nerol y
geraniol se ensayaron frente a los 16 microorganismos reportados en Tabla 3 . El intervalo de
concentración de componentes puros a ensayar se base a la concentración del componente en el Pompia
EO ( tabla 1 ), Y la cantidad de Pompia
EO utiliza para el ensayo antimicrobiano (sección 2.7 ). Se utilizaron los siguientes intervalos de
concentración: limoneno de 0,02 metro L / mL a
6.10 metro L / mL, citral from0.03 from8.71 metro L / mL, geraniol from0.003 a
0.87 metro L / mL y nerol ,003-0,85 metro L / mL. La MIC se calculó como se indica en la sección
de 2.7 .
2.9. Análisis estadístico
Las curvas de crecimiento fueron fi TTED con la función de Baranyi, Roberts, y McClure (1993) para
estimar los principales parámetros de crecimiento, a saber, especí crecimiento fi tasa de c ( metro) y
el tiempo de retraso ( l). Los datos se sometieron a la prueba t de Student para investigar el efecto de
diferentes
Pompia Las concentraciones de EO en los principales parámetros de crecimiento utilizando el software
Statgraphics Centurion XV (versión 15.2.11).
3. Resultados y discusión
La destilación del tallo de Pompia hojas dieron un EO incoloro con un olor agradable. A
continuación, la EO obtenido se sometió a ambos protocolos analíticos y estudio químico-biológica.
Los análisis químicos se centran en datos tanto cualitativos como cuantitativos. la GC mi MS técnica
se utilizó con el fin de revelar la composición química de la EO mientras que la técnica GC-FID se
aplicó para obtener datos cuantitativos. Los componentes de EO se agruparon según sus clases
químicas, compuestos mono- y sesquiterpenos, y de acuerdo con sus grupos funcionales tales como
alcoholes y ésteres. Las curvas de calibración se construyeron entonces para cada grupo con los
estándares comercialmente disponibles ( Bicchi et al., 2008 ). El método cuantitativo también fue
validado: repetibilidad y precisión intermedia ( tabla 1 ) Se calcularon como coef fi ciente de variación
(CV%) por intra-día y entre días experimentos respectivamente. Los tiempos de retención mostraron
buena capacidad de repetición que van fromCV% ¼ 0.0 y 0.1 y buenas precisiones intermedios que
van desde CV% ¼ 0,0 y 1,4, de acuerdo con datos de la literatura anterior ( Angioni, Pintore, y Caboni,
2012; Haloci et al., 2014 ). Los valores de área mostraron mayor CV% entre 3,6 y 7.1 para
experimentos intra-día y que van desde 8,9 hasta 29,8 para los experimentos de inter-día, de
acuerdo con datos de la literatura anterior ( Angioni et al, 2012.; Haloci et al., 2014 ). Además, LOD y
LOQ con fi rm buena sensibilidad; fi finalmente, la linealidad se con fi rma en las concentraciones de
rango de trabajo ( tabla 1 ). GC mi MS análisis reveló la presencia de 23 compuestos ( tabla 1 ), Que
representan el 98% de toda la composición, en base a la normalización de área de pico FID. Entre
ellos, limonenewas encuentran para ser el componente principal, a juego 256 mg / ml, seguido de
neral a una concentración de 173 mg / ml. datos de la literatura anterior ( Abderrazak, Abaza, Aburjai,
Kabouche, y Kabouche, 2014; Ellouze et al. 2012 ) Mostró la ausencia o solamente cantidades traza
de limoneno en EO extrajeron de las hojas de Citrus aurantium, que es uno de la Agrios spp. que la
similitud química mostró con Pompia
( Petretto et al., 2016b ). Como se muestra en Figura 1 , Pompia EO tuvo una buena actividad
antioxidante en línea con los resultados previamente obtenidos en Agrios spp ( Ellouze et al. 2012 ).
Cuando la reacción era estable, (300 min para DPPH y 50 min para ABTS), concentraciones aún
más bajas de la EO scavenged los radicales. Teniendo en cuenta que el limoneno es el compuesto
principal de Pompia EO, nuestros resultados con fi rm el estudio de Bacanl yo,
aran BAS, y aran Bas (2015) que describe el antioxidante
la actividad de este compuesto. Además, es razonable suponer que neral (173 mg / mL), uno de los
más potentes compuestos depuradores ( Choi, Song, Ukeda, y Sawamura, 2000 ), Contribuye a la
actividad antioxidante. Sin embargo, si se compara la concentración de EO que inhibió el 50% de la
formación de producto oxidado (IC 50) con la capacidad antioxidante del Trolox, utilizado como
referencia,
fi nd una menor actividad para Pompia hojas EO (IC 50 Trolox: 0,0038 mg /
ml, 0.0048mg / ml, 0.0052mg / mL y IC 50 Pompia EO: 11.9mg / ml,
3,3 mg / ml, 2,3 mg / ml a los 60 min, 180 min, 300 min respectivamente). El ensayo ABTS da
mejores resultados para Pompia EO (IC 50 Trolox:
0,0038 mg / ml, 0,0048 mg / ml y IC 50 Pompia EO: 3,3 mg / ml,
1,2 mg / ml a 0 min, 50 min, respectivamente). El IC inferior 50 los valores de los ensayos de ABTS en
comparación con el IC 50 los valores de los ensayos de DPPH previamente han sido observados por Kuskoski,
Asuero, Troncoso, ManciniFilho, y Fett (2005) y Longhi, Pérez, de Lima, y ​C ^
andido
(2011) donde los autores relacionados el comportamiento diferente en los dos ensayos a la diferente
solubilidad de los reactivos de ABTS y DPPH.
los in vitro actividad antimicrobiana de Pompia hojas EO fue ensayada contra 12 bacterias y 4
especies de levadura. Tabla 2 muestra la MIC de las diferentes cepas ensayadas. Los miembros de
la cepa Lactobacillus género, que incluye algunas de las mayoría de las bacterias importantes en la
fermentación de alimentos, junto con los patógenos Salmonella enterica y Escherichia coli mostró la
alta resistencia antimicrobiana contra Pompia EO. Dentro de Lactobacillus nivel de género las cepas
de Lb. paracasei especies fueron las más sensibles. los Agrios EO ha sido ampliamente investigado ( Fisher
& Phillips, 2008 ), Pero su actividad biológica está todavía en estudio ( Randazzo et al., 2016 ). De
hecho, a lo mejor de nuestros conocimientos, nuestros resultados son los fi el trabajo en primer lugar
sobre el efecto de una Agrios EO en cepas de probióticos y productos lácteos. Debido al uso
generalizado de las OE, por ejemplo, en la producción de alimentos o en los cosméticos, la
evaluación de su efecto sobre estas bacterias es muy importante ya que puede tener numerosos
beneficios fi ciales efectos sobre la salud humana ( Cano-Garrido, SerasFranzoso, y García-OS de
frutas, 2015 ). Un estudio realizado por Bevilacqua, Corbo y Sinigaglia (2010) mostró la alta resistencia
de Lb. plantarum y
Lb. brevis ( dos especies miembros de estropear micro Florida ora de zumos de frutas) en presencia de
Agrios EO.
Como se esperaba, S. enterica y E. coli se muestra una resistencia a la
Pompia hojas EO, apoyando los resultados de varios estudios que mostraron que las bacterias
Gram-positivas eran más susceptibles a Agrios OE que las bacterias Gram-negativas ( Burt, 2004;
Ruiz & Flotats, 2014 ). se debe notar que Petretto et al., (2014)
mostraron que (bacterias Gram positivas) bacterias del ácido láctico exhibieron una resistencia mayor
a mentha suaveolens spp. insularis EO, en comparación con otros microorganismos. Un trabajo
reciente de Chubukov et al. (2015) mostraron que la resistencia de E. coli a limoneno (el componente
principal de Pompia hojas EO) estaba relacionado con una mutación de
ahpC gen, que es capaz de aliviar la toxicidad de limoneno mediante la reducción del hidroperóxido
de limoneno a un compuesto más benigno.
Por el contrario, toda Listeria monocytogenes cepas probadas y Staphylococcus aureus 20231
DSMZ exhibió una alta sensibilidad a baja
Pompia hojas EO concentración; estas fi hallazgos están de acuerdo con otros autores ( Casquete et
al, 2015.; Randazzo et al, 2016.; Settanni et al., 2012 ), Quienes encontraron que Agrios OE
representado una potente actividad antimicrobiana de estas especies, aunque la actividad
antimicrobiana fue dependiente de la cepa. los Pompia hojas EO parece tener una actividad
anti-Listeria inferior a Citrus limon EO, que mostró una CIM de 0,156 metro L / mL ( Settanni et al.,
2012 ) Pero mayor que el de la Citrus aurantium hojas EO ( Ellouze et al., 2012 ). La actividad
inhibidora potente de Pompia hojas EO podría ser debido a la alta concentración de compuestos
oxigenados, que representan 58,5% de la composición EO. Settanni et al., (2012) ha mostrado que la
actividad inhibidora de limón EO está ligada a altas concentraciones de monoterpenos oxigenados.
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Figura 1. La actividad antioxidante de C. limon var. hojas Pompia EO midieron mediante ensayos de DPPH y ABTS en diferentes puntos temporales. Los datos se expresaron como medios ± DAKOTA DEL SUR.

Tabla 4
Efecto de Citrus limon var. Pompia aceite esencial de las hojas en la especificación máxima fi tasa de crecimiento c ( metro max) y la fase de retardo de la curva de crecimiento ( l), estimado utilizando el modelo de Baranyi, Roberts, y McClure (1993) , A una
concentración sub-MIC de 1,25 metro L ml 1 ( excepto por S. cerevisiae EC1118, para lo cual un 0,625 metro L ml 1 Se utilizó la concentración), en las diferentes cepas ensayadas, en comparación con un control (microorganismo crecido en medio sin aceite
esencial).

Presion metro max ( h 1) P Valor Lag (h) P Valor

Controlar Experimental Controlar Experimental

Listeria monocytogenes si 0.57 ± 0.04 0.13 ± 0.02 ** 5.08 ± 0.15 15.53 ± 1.81 **
Listeria monocytogenes 20600 DSMZ 0.50 ± 0.09 0.31 ± 0.01 ** 7.20 ± 0.32 11,92 ± 2.47 **
Listeria monocytogenes mi 0.57 ± 0.03 0.31 ± 0.06 ** 5.65 ± 0.22 8.92 ± 0,72 *
Staphylococcus aureus 20231 DSMZ 0.49 ± 0.03 0.17 ± 0.06 ** 5.04 ± 0.09 14.18 ± 3.85 **
Candida albicans 3993 0.49 ± 0.01 0.48 ± 0.07 NS 6.06 ± 0.44 5,971 ± 0,77 NS
bracarensis Candida J6 0.37 ± 0.01 0.30 ± 0.01 ** 5.88 ± 0.14 6.68 ± 0.30 *
Candida albicans 3248 0.40 ± 0.02 0.38 ± 0.02 NS 4.41 ± 0.39 5.518 ± 0.33 **
Saccharomyces cerevisiae EC1118 0.34 ± 0.01 0.30 ± 0.02 ** 4.08 ± 0.53 5,657 ± 0.21 **

* PAG 0,05; **PAG 0,01, NS: no signi fi hipocresía.

En general, las cepas de levadura fueron más sensibles que las bacterias a la Pompia hojas Eo. resultados ya obtenidos por nska Kunicka-Styczy (2011) . La mayoría de los estudios sobre la
En particular, S. cerevisiae cepa mostró ámico inferior a Candida albicans y bracarensis Candida, estafa actividad de Agrios OE contra C. albicans, así como contra otras especies de levaduras, son
fi rmando contradictorias. Sin embargo, en general,
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Tabla 5
las concentraciones inhibitorias mínimas (MIC) de la Citrus limon var. Pompia aceite esencial de componentes puros contra los microorganismos ensayados.

organismos ensayados componentes MIC ( metro L / mL)

Limoneno citral geraniol nerol

Las bacterias

Lactobacillus acidophilus 314 ATCC > 6.10 4.40 > 0.87 > 0.86
Lactobacillus plantarum 8014 ATCC > 6.10 4.40 > 0.87 > 0.86
Lactobacillus plantarum ICE5 > 6.10 4.40 > 0.87 > 0.86
Lactobacillus paracasei subsp. paracasei 5622 DSMZ > 6.10 2.20 > 0.87 > 0.86
Lactobacillus paracasei Shirota > 6.10 2.20 > 0.87 > 0.86
Lactobacillus rhamnosum 7469 ATCC > 6.10 4.40 > 0.87 > 0.86
Staphylococcus aureus 20231 DSMZ > 6.10 1.08 > 0.87 > 0.86
Listeria monocytogenes si > 6.10 0.50 > 0.87 > 0.86
Listeria monocytogenes mi > 6.10 0.50 > 0.87 > 0.86
Listeria monocytogenes 20600 DSMZ > 6.10 1.08 > 0.87 > 0.86
Salmonella enterica 13772 DSMZ > 6.10 > 8.71 > 0.87 > 0.86
Escherichia coli 30083 DSMZ > 6.10 > 8.71 > 0.87 > 0.86
Levadura

Candida albicans 3248 > 6.10 0.50 > 0.87 > 0.86
Candida albicans 3993 > 6.10 0.50 0.43 > 0.86
bracarensis Candida J6 > 6.10 1.08 0.43 > 0.86
Saccharomyces cerevisiae E1118 comercio > 6.10 0.50 > 0.87 > 0.86

contra bene fi microbios ciales (bacterias del ácido láctico), la utilización de

Agrios OE se describen como menos activos que otros OE ( Carvalhinho, Costa, Coelho, Martins, y Sampaio,
2012; Dutta, Karmakar, Naglot, Aich, y Begam, 2007; Kunicka Styczy nska, 2011; Mandalari et al.,
2007 ) Aunque su efecto es comparable con los antifúngicos más utilizados ( Dutta et al., 2007 ). El
efecto de Pompia hojas EO a una concentración sub-MIC en los parámetros de crecimiento se
evaluó también ( Tabla 4 ). Cada metro máx y l
Pompia EO ofrecería una mejora respecto a las ventajas ya mostradas por Siroli et al. (2016) .
Recientemente Chueca, Pag una, y García-Gonzalo (2014) informado de que el citral mechanismof
microbiana inactivationwas mediada en condiciones aerobias por especies reactivas de oxígeno
(ROS), mientras que en condiciones anaeróbicas se observó un comportamiento diferente.

fueron estadísticamente significante fi cativamente diferente para probar casi todos cepa. Sólo los
parámetros de crecimiento de C. albicans 3993 cepas no estaban en Florida influenciada por la
concentración sub-MIC.
También, en 1,25 metro L / mL, la metro máx fue casi a la mitad en todas las cepas de
L. monocytogenes y en S. aureus. Por otra parte la fase de retardo se retrasó, con la cepa L.
monocytogenes B ser más sensible que probaron otras cepas, con un retraso de aproximadamente
10 h con respecto al control. El efecto de Pompia hojas EO en cepas de levadura fue menos
pronunciado con el S. cerevisiae colar ser el más sensible.
Bevilacqua et al., (2010) , Estudiaron el efecto de eugenol, limoneno y Agrios extraer de los
parámetros de crecimiento de diferentes bacterias y cepas de levadura, el modelado de los datos
utilizando la ecuación propuesta por Zwietering, Jongenburger, Rombouts, y van 't Riet (1990) , Y se
encontró que el crecimiento de las cepas de levadura probado fue afectada por la
4. Conclusiones
En este informe Pompia Se estudió hojas EO. Su composición química se cribó mediante GC
cualitativo mi compuestos de análisis y 23 MS se identificaron fi ed. Además un método GC-FID
cuantitativa fue desarrollado y validado: entre los 23 identi fi ed compuestos, alta cantidad de limoneno
(256 mg / ml), geranial (214 mg / ml) y neral (173 mg / ml) fueron detectados en la composición EO.
La actividad antioxidante, evaluada por in vitro DPPH y ABTS ensayos, del EO mostró una buena
capacidad en radicales de lavado, en línea con otros estudios sobre Agrios hojas EO ( Ellouze et al.
2012 ). los Pompia hojas EO y sus componentes principales se analizaron singularmente, y exhiben
una alta actividad inhibidora contra

Agrios extracto que ejerce un fuerte efecto inhibidor, y signi fi-
cativamente prolongado el tiempo de retardo, con fi confirmando la fi conclusiones de nuestro trabajo.
El análisis de la actividad antimicrobiana de los principales componentes puros de Pompia EO
mostró que citral es el agente antimicrobiano más fuerte ( Tabla 5 ). La actividad antimicrobiana de
citral refleja parcialmente la actividad antimicrobiana de Pompia EO, con una efectividad superior
contra los patógenos transmitidos por los alimentos y levaduras, y disminuir la actividad
antimicrobiana contra bacterias gram-negativas, aunque un efecto inhibidor se observó también en
bacterias de ácido láctico.
La efectividad de la norma pura citral es más alto que las hojas Pompia EO (alrededor de la
mitad de la concentración de solo citral, en comparación con la concentración de citral en EO, que se
necesitaba para inhibir las bacterias y levaduras ensayadas). Entre los otros compuestos,
aparentemente solamente geraniol inhibe el crecimiento de todas las especies de levadura
ensayadas. La actividad antimicrobiana de citral está bien documentada tanto en el modelo y en
alimentos reales ( Belda-Galbis, Pina-P Erez, Leufv en, Martínez, y Rodrigo, 2013; Wuryatmo, Klieber,
y Scott, 2003 ). Recientemente, una obra de Siroli et al. (2016) mostró que la combinación de control
biológico y natural antimicrobiano tal como citral ( “ obstáculos ” tecnología) puede representar una
nueva estrategia para prolongar la vida útil y garantizar la seguridad de los alimentos. En nuestra
opinión, teniendo en cuenta el efecto inhibitorio citral
L. monocytogenes y S. aureus, que se encuentran entre las principales causas de los brotes de
enfermedades transmitidas por los alimentos, y C. albicans ( un hongo patógeno oportunista). Por el
contrario Lactobacillus. spp. cepas, no fueron inhibidas por Pompia EO, mientras estaban inhibidas por
citral cuando se usa como un solo componente.
Fondos
Esta investigación fue apoyada por “ Fondazione Banco di Sardegna ”, y por “ Parco Nazionale di
La Maddalena ”.
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