Re 10 Lab 319 Micologia v1

GUIA DE PRÁCTICA CIENCIAS DE LA SALUD QUIMICA
Código de registro: RE-10-LAB-319 Versión 1.0

UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE MICOLOGIA
Práctica No. 1
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.-

La mayoría de los accidentes que ocurren en un laboratorio de prácticas, son ocasionados principalmente
por dos razones: la falta de conocimiento acerca de los procedimientos que se realiza en el laboratorio y la
negligencia para seguir las reglas de seguridad. Es transcendental tener en cuenta que las normas de
seguridad, no son la única base en que los laboratorios efectúan las actividades de docencia, extensión,
diagnóstico e investigación, pero es muy importante que esas medidas sean aplicadas al ingresar al
laboratorio de prácticas. Al realizar cualquier procedimiento en un laboratorio, involucra el exponerse a
diferentes agentes bacterianos o micoticos infecciosos de manera directa al momento de manipular la
muestra o material contaminado, para disminuir este riesgo se debe aplicar la bioseguridad. La
bioseguridad involucra en lograr actitudes y conductas que disminuyan el riesgo del usuario en el
laboratorio, de tal manera que salvaguarde su salud o integridad. El conocimiento previo de normas y la
aplicación adecuada de buenas prácticas de trabajo en el laboratorio es un deber de cada discente. Estas
normas son la base de un buen control de calidad del trabajo que se esté llevando en la realización de cada
práctica para cubrir los objetivos planteados.
Recomendaciones generales para aplicar las buenas prácticas en el laboratorio:

1. Ingresar al laboratorio con bata blanca limpia.
2. Antes de realizar cualquier procedimiento retirarse anillos, pulseras, o cualquier otro accesorio que
pueda entrar en contacto con las muestras o medios que se utilizan en el laboratorio; colocar sus
pertenencias en un lugar apropiado retirado del sitio de trabajo.
3. Evitar pipetear con la boca.
4. Manejo de cualquier muestra con equipo de protección personal (bata, guantes, mascarilla, careta facial
y goggles).
5. Restringir el uso a alumnos sin previa capacitación de agujas, jeringas, y otros objetos punzocortantes a
fin de evitar el riesgo de inoculación.
6. Limpiar y desinfectar con alcohol al 70 % o benzal al 5 % las superficies de trabajo antes, y después de
realizar cualquier procedimiento. Se sugiere realizar una segunda desinfección con hipoclorito de sodio al
0.5 %
7. Lavado de manos antes y después de cada sesión de trabajo con jabón y agua, esto incluye también el
colocarse los guantes.
8. Manejo, tratamiento y disposición adecuada de los Residuos Peligrosos Biológicos Infecciosos (RPBI),
con base a la Norma Oficial Boliviana, Protección ambiental- Salud ambiental- Residuos Peligrosos
Biológicos Infecciosos- Clasificación y especificaciones de manejo.
9. Todos los químicos deberán manejarse con equipo de protección y dentro de una campana de extracción.
10. En caso de un derrame de muestras biológicas deberá agregarse hipoclorito de sodio al 1.0 % y dejar
actuar por 30 min y posteriormente limpiar.
Normas disciplinarias:
1. Leer el reglamento interno del laboratorio de prácticas
2. No se permitirá el ingreso al laboratorio, después de 10 minutos del horario estipulado de inicio de la
práctica.
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3. El acceso al laboratorio es exclusivamente con bata blanca y limpia, por lo que no se permitirá la
permanencia en la sesión práctica de los discentes que no porten su bata.
4. Se prohíbe fumar, comer, beber o realizar cualquier otra actividad que no esté relacionada con la práctica
correspondiente.
5. Se prohíbe el uso de celulares y otros medios electrónicos de comunicación durante la realización de las
prácticas y uso de los laboratorios.
6. Ningún discente podrá salir o entrar sin previa autorización del docente.
7. Las comunicaciones verbales serán de manera ordenada, en voz baja y solo con la mesa que integra el
equipo.
8. Evitar lo más posible el estar circulando entre mesas del laboratorio durante la sesión práctica 9. En caso
de accidentes (quemadura, salpicadura y heridas) avisar inmediatamente al docente encargado de la
práctica.
10. Colocar los desechos en el contenedor correspondiente.
11. No verter sustancias en la superficie de la mesa, suelo o tarjas.
Manejo adecuado de residuos peligrosos biológico infecciosos:
Sangre y material orgánico: Coágulos, aplicadores de madera e hisopos, se sumergirán en una solución de
hipoclorito de sodio al 1.0%, posteriormente serán colocados en bolsas de plástico rojas (sangre) y
amarillas (desechos patológicos) para su eliminación e incineración.
Materia fecal: Al término de la práctica se colocará en una solución de hipoclorito de sodio al 1.0%,
posteriormente serán colocados en bolsas de plástico amarillas (desechos patológicos) para su eliminación
e incineración.
Material de vidrio: tubos, portaobjetos, cubreobjetos, varillas de vidrio, cajas de Petri, matraces y frascos
de diferentes capacidades, serán depositados en contenedores con agua jabonosa adicionada con
hipoclorito al 1.0%, en esta solución permanecerán por tres horas antes de su lavado y secado.
Nota: Material como papel, aplicadores de madera, algodón y similares que hayan estado en contacto con
material infeccioso, deberán ser rociados con hipoclorito al 1.0 %, y posteriormente colocarlos en bolsas de
plástico amarillas (desechos patológicos) para ser incinerados.
Desinfectantes Es importante conocer las diferentes soluciones desinfectantes, como el cloro, que se utiliza
para mantener limpio y desinfectado el laboratorio, materiales, equipos, así como su preparación en las
concentraciones que se necesiten. Al inicio y al final de cada práctica el discente debe lavarse las manos y
colocarse alcohol al 70 % o benzal al 5 %.
Las superficies de trabajo deben ser limpiadas y suministrar con un paño una solución de hipoclorito de
sodio al 0.5 % esperar 3 minutos e iniciar a trabajar.
ADVERTENCIA: No usar fenol, debido a que es una solución cáustica, no se recomienda su empleo sobre la
piel, por su efecto irritativo y acumulativo en la piel.
Glosario de términos:
Accidente: suceso eventual o acción de que involuntariamente resulta daño para las personas o las cosas.
Desinfectante: sustancia que destruye los microorganismos presentes, a excepción de las esporas
bacterianas
Precaución: acción para evitar o prevenir los inconvenientes, dificultades o daños que pueden temerse
durante el procedimiento.
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Investigación: actividad que tiene por fin ampliar el conocimiento, sin perseguir, en principio, ninguna
aplicación práctica.
2.- COMPETENCIAS.-
Aplica las normas de Bioseguridad considerando las recomendaciones de las buenas prácticas de
laboratorio con la finalidad de crear una cultura de bioseguridad que será aplica en el desempeño
profesional.
3.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.-

EQUIPOS y MATERIALES
Número y grupo de
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad estudiantes
1 grupo de 20
1 Probetas de 100 ml 20 piezas estudiantes
2 Agua bidestilada 5 litros
3 Hipoclorito de sodio al 5% comercial 1 Litro
4 Basurero para desechos infecciosos 1 pieza
5 Basurero para basura común 1 pieza
6 Basurero con bolsa amarilla 1 pieza
7 Basurero para cortopunzantes 1 pieza
4.- TECNICA O PROCEDIMIENTO.-

Preparación de soluciones:
Solución de alcohol al 70 %
Alcohol al 96°…………………………………………………….. 73 mL
Agua bidestilada o desionizada………………………………… 27 mL
Hipoclorito de sodio al 0.5 % (áreas sin presencia de material orgánico)
Hipoclorito de sodio (5.0 % presentación comercial)…………………...…… 100 mL
Agua bidestilada o desionizada……………....………………………………… 900 mL
Hipoclorito de sodio al 1.0 % (áreas con presencia de material orgánico)
Hipoclorito de sodio (5.0 % presentación comercial)...……………………… 200 mL
Agua bidestilada o desionizada……………....………………………………… 800 mL
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.- 100 minutos
6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS.-

No se aplica en esta práctica
7. CUESTIONARIO.-
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1. ¿Qué es la bioseguridad?
2. ¿Cuál es el objetivo de la bioseguridad?
3. ¿Cuáles son los tipos de riesgos que existen en un laboratorio?
4. ¿En que se basa la clasificación de los agentes biológicos?
5. ¿Menciona cuáles son las vías de entrada de los agentes biológicos al cuerpo?
6. ¿Métodos para disminuir los riesgos biológicos?
7. ¿Menciona 5 recomendaciones para buenas prácticas de trabajo?
8. ¿Menciona 5 normas disciplinarias de un laboratorio?
9. ¿Qué desinfectantes se pueden usar en la piel?
10. ¿Qué causa el fenol en el organismo?
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Práctica No. 2 y 3
RECOGIDA Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

FUNDAMENTOS BÁSICOS PARA EL DIAGNÓSTICO MICOLÓGICO
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.-
La bacteriología y micología diagnóstica es el estudio de las muestras tomadas a partir de pacientes de los
cuales se sospecha de una infección que involucre a estos agentes.
El laboratorio puede apoyar al clínico de la siguiente manera:
• Confirmando el diagnóstico presuntivo.
• Sugiriendo la quimioterapia de la enfermedad.
• Colaborando en el conocimiento epidemiológico de las enfermedades.
El diagnóstico de Laboratorio, se hace, en la mayor parte de los casos, mediante el examen microscópico
directo de los pelos o del material procedente del raspado de las lesiones. Sin embargo no es raro que haya
que recurrir al cultivo.
Menos fáciles de reconocer clínicamente son las enfermedades micóticas que ocurren con poca frecuencia
o producen infecciones sin lesión local inicial. Son ejemplos de esta clase las Actinomicosis pulmonar e
intestinal, la Cromoblastomicosis, la histoplasmosis y la criptococosis generalizada, en muchos casos, el
diagnóstico de estas infecciones se hace en periodo avanzado o si terminan mortalmente se descubren en
la autopsia.
El diagnóstico de laboratorio se funda en diversos exámenes. El examen microscópico directo del raspado
de la piel, cabellos, raspado de uñas, pus o exudados es el primero y el más sencillo de los pasos para el
diagnóstico, sin embargo rara vez nos permite identificar la especie. Los cultivos, con frecuencia son los
únicos medios de identificación, la fluorescencia ayuda a determinar la presencia de tiña tonsurans o tiña
versicolor, la inoculación de animales es útil en algunos casos, especialmente en infecciones profundas,
cuando el examen directo o el cultivo dan resultado negativo.
2. COMPETENCIAS.-
Utiliza los procedimientos generales para la colección, conservación y envío de muestras clínicas al
laboratorio para el diagnóstico micológico.
3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.-
TOMA DE MUESTRAS.
Es muy importante la selección de materiales para el examen. Cuando existan lesiones de diversos tipos,
habrá que obtener muestras de todas ellas. Por lo general, conviene disponer de material abundante, pero
una pequeña cantidad de buen material es preferible a una mayor, pero mal seleccionada. Para enviarlas al
laboratorio hay que recoger las muestras en recipientes estériles, pero en muchos casos es preferible que
vaya el mismo paciente para elegir material en las mejores condiciones y disminuir así las oportunidades
de contaminación. Las muestras para el examen deben enviarse al laboratorio en seguida y éste deberá
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efectuar el examen sin retardo alguno. Transcurridas de 3 a 4 horas de la toma del material, los resultados
del examen serán menos satisfactorios. Siempre que sea posible, el bioquímico tomará el material para el
examen o ello se hará en su presencia.
Teniendo en cuenta que el tratamiento puede afectar a la abundancia del hongo, así como al periodo de su
desarrollo, es preferible el material tomado de zonas no tratadas, de modo especial las de reciente aparición.
Así los componentes de algunos medicamentos ocultan ciertos hongos o confunden al laboratorista por su
semejanza con ellos. Por ejemplo, las gotas de aceite, pueden parecer células de levadura. En la tina del
cuero cabelludo hay que escoger los cabellos infectados, mientras el paciente es observado bajo rayos UV
filtrados, pues éstos los revelan, así como el asiento de zonas de tina versicolor que no es fácil descubrir a
la luz del día. Cuando la infección causa una alteración porosa de las uñas, deben preferirse para el examen
las partes más profundas de éstas. Son mejores las pequeñas porciones de material esponjoso que grandes
cortes o que incluso la uña completa. El material córneo o escamoso resulta prácticamente inútil para el
examen directo, pero se puede aprovechar para el cultivo.
En el caso de pústulas o de lesiones semejantes a abscesos, es conveniente aspirar el exudado de las lesiones
cerradas por medio de una jeringa estéril. Las biopsias se tomarán en condiciones de asepsia. Debe fijarse
y cortarse una parte de la muestra para el examen microscópico; la porción restante se utilizará para los
exámenes micológico y bacteriológico.
Cuando se sospeche una micosis pulmonar, se examinarán los esputos o un fragmento de tejido obtenido
por broncoscopía. En muchos casos es difícil decidir por el examen directo o el cultivo si las candidas
(monilias), actinomices u otros microorganismos son realmente responsables de la infección de los
pulmones o simples saprofitos bucales. Con cada una de las muestras se proporcionará, además de los datos
habituales, la siguiente información:
a) Naturaleza y procedencia del material.
b) Momento de la recolección.
c) Tipo de hongo que sospecha el clínico.
El material destinado al examen micológico se dividirá en tres porciones:
a) para el examen directo.
b) para el cultivo
c) para eventual inoculación a los animales y para pruebas especiales.
4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO.-
4.1. EXAMEN DIRECTO:

El propósito de este procedimiento, es determinar la presencia de hongos. En muchos casos esto basta para
el diagnóstico y constituye, en el caso de la tina versicolor y algunas otras micosis, el único medio de análisis.
El resultado positivo es mucho más valioso que el negativo. El examen directo no suele ser suficiente para
identificar las especies.
Procedimiento:
a) Se colocan algunos cabellos, raspaduras, escamas, etc., sobre uno de los extremos del porta objetos
limpio y se vierte una gota de solución de KOH al 10%, se coloca el cubreobjetos.
b) Se deja actuar el KOH durante 5 a 10 minutos o hasta que queden disueltos los elementos tisulares,
dejando así los hongos libres para el examen, la preparación se pasa por la llama del Bunsen tres o
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cuatro veces; se examina al microscopio y si no está transparente se vuelve a calentar y se observa
otra vez. Se repiten estas maniobras hasta que los tejidos queden bastante transparentes para un
examen satisfactorio.
c) Se examina al microscopio con luz indirecta reducida, a pequeño y gran aumento
d) Se observa si hay hongos, dentro o fuera del pelo o en ambas posiciones
e) Cuando la preparación no quede transparente, se puede utilizar un disolvente constituido por: 5%
de KOH y 25% de Glicerina. Para el examen de pus cuando se sospecha Actinomicosis o
Blastomicosis, resulta preferible este disolvente, pues los piocitos se destruyen y los hongos son más
evidentes.
f) Rara vez da resultados la tinción en las micosis superficiales, por cuanto el hidróxido decolora
rápidamente la mayor parte de los colorantes para los hongos en preparaciones secas o húmedas es
el azul de lactofenol para algodón.
g) En los cabellos, rara vez se observan filamentos, excepto en el favus, el tamaño de las esporas es
variable, hallándose las mayores en los tricofitas endothrix.
h) En las escamas y la piel macerada de la tina tonsurante se suelen observar filamentos. Cuando la
enfermedad es de larga duración, se encuentran esporas.
i) En tales preparaciones resulta difícil, si no imposible diferenciar entre Microsporum, Trichophyton,
Epidermophyton, todos ellos se presentan como elementos miceliales segmentados y ramificantes.
j) En las preparaciones de uñas, los hongos se encuentran en las partes más profundas. Es raro
observar hifas ramificadas ni formando una malla enredada, puede haber muchas esporas.
k) Son raros los hongos en la sustancia de pústulas o flictenas superficiales. La presencia de gránulos
suele denunciar actinomicosis.
l) El examen directo de los esputos sólo presenta utilidad en caso de Coccidioides inmitis. La
contaminación es fenómeno corriente.
m) m) Los cuerpos extraños se presentan a menudo y pueden prestarse a confusión. En este caso están
los hongos llamados "en mosaico", que pueden ser saprofitos, aceite o grasa, aire, fibras de algodón,
u otras sustancias.
4.2. ESTUDIO CON LUZ DE WOOD.

Cuando se dispone del equipo necesario, suele practicarse antes que el estudio micológico, mas no lo
sustituye. Es útil en algunas micosis superficiales. Se realiza en un cuarto oscuro y se utiliza una lámpara de
luz ultravioleta que emite radiaciones de unos 366 nm y da fluorescencia reconocible con facilidad.
La toma de muestras es sencilla y el material utilizado es barato y está al alcance de todos; generalmente el
instrumental metálico se esteriliza a la flama; se utilizan:
- Pinzas de depilar y tijeras finas y fuertes
- Hoja de bisturí
- Aguja de disección
- Cajas petri o dos porta objetos con envoltura estéril( sirven para toma de muestras y transporte)
- Porta objetos y cubreobjetos
- Asa de aluminio o platino, de preferencia recta; se utiliza para sembrar y tomar productos
- Hisopos estériles
- Jeringas de insulina
4.3. CULTIVO:
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Es la siembra de los productos anatomopatológicos en los medios idóneos, casi siempre se realiza en
laboratorios especiales.
Las muestras se pueden tomar con un hisopo estéril o con el asa de platino previamente calentada al rojo
vivo y enfriado en el medio de cultivo, lo que facilita la adherencia en el caso de pelos y escamas.
En general se colocan los especímenes sobre la superficie del medio de cultivo y se conservan a la
temperatura ambiente 26 a 27°C; en el caso de micosis profundas, es mejor a 30 a 37°C.
Las levaduras se siembran con la técnica de zig-zag.
Los pelos y las escamas se disponen en fragmentos en diferentes puntos de la superficie del medio; puede
ser útil sembrar cerca de la pared de vidrio para observar el cultivo a través de la misma. Algunos colocan
los productos anatomopatológicos en alcohol y los enjuagan antes de sembrar.
En líquidos, heces y pus se deben sembrar aproximadamente 0,5 a 1ml por tubo. Las levaduras se
desarrollan en 24 a 48 horas, y los contaminantes, en dos a cuatro días, pero la mayor parte de los hongos
patógenos requiere una a dos semanas.
Para la identificación de los hongos, al obtener el cultivo de un hongo, se deben estudiar sus características
macroscópicas, microscópicas y fisiológicas para definir el género y la especie.
Las características varían con el medio de cultivo, naturaleza de los azúcares, pureza de la peptona, PH,
grado de humedad y temperatura. Por eso es preferible utilizar siempre medio glucosado de Saboraud
para estudiar y comparar características estándar en las mismas condiciones de humedad y
temperatura, evitando así contaminaciones.
Morfología macroscópica.- Se deben estudiar las características siguientes:
• Forma y tamaño
• Color en la superficie o en el reverso
• Difusión del pigmento
• Coloración: blanca, rosada, gris, anaranjada, verde, rojiza, negra.
• Textura: yesosa, glabra, terrosa, granulosa, vellosa, lanosa, cérea, cremosa.
• Superficie: elevada o plana, levantamiento central.
• Aspecto: plegado, radiado, cerebriforme, crateriforme.
• Consistencia: dura, suave, firme, membranosa.
• Rapidez de crecimiento; por ejemplo, las levaduras y los oportunistas crecen en 24 a
48 horas y los dermatofitos en 5 a 10 días.
Morfología microscópica.- Pueden utilizarse los métodos que siguen:
1. Examen a través del tubo: se utiliza la lupa del microscopio, se observa el borde del crecimiento.
Es un método poco preciso pero rápido.
2. Examen de un fragmento de cultivo: consiste en tomar un fragmento de la colonia, dilacerarlo y
observarlo con azul de lactofenol. Es el método habitual pero puede destruir los aparatos esporíferos y
dificultar la identificación.
3. Método de la cinta adhesiva transparente (Rush-Munro), es una vanante de la técnica anterior
y permite observar las estructuras fúngicas casi sin alteración. Se recorta un pequeño cuadrado de cinta y
se adhiere a la pared terminal del asa de platino, se aplica la parte adhesiva sobre la colonia y luego se coloca
sobre un portaobjetos con una gota de colorante, se retira el asa, se añade otra gota de colorante, se pone
un cubreobjetos y se observa al microscopio.
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4. Cultivo en lámina o microcultivo, es el más preciso y permite observar las estructuras fúngicas in
situ. Consiste en obtener un cultivo sobre un portaobjetos y observar el hongo sin deterioro de su
morfología.
El estudio de los órganos fúngicos por medio del microscopio puede facilitarse mediante la utilización de
contraste de fase; se deben estudiar:
• Talo: filamentos o levaduras; grosor, bifurcaciones; presencia o ausencia de septos (micelio tabicado
o cenocítico); color.
• Esporas asexuadas y aparato conidiógeno Esporas sexuadas y estructuras donde se forman
• Cualquier formación anexa (ornamentaciones

7. CUESTIONARIO.-
• Indique los cuidados para la recolección de las muestras para estudio micológico
• El examen directo de los esputos sólo presenta utilidad en : indique los casos
• Para que se utiliza el KOH?
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LABORATORIO MICOLOGIA
Práctica No. 4 y 5
EXAMEN POR MICROSCOPIA DIRECTA
TÉCNICAS DE TINCIÓN
Este procedimiento no sustituye al cultivo pero brinda una información preliminar o presuntiva al ser una
técnica rápida que puede ser útil al clínico y en algunos casos llegar a ser diagnóstica.
Entre los principales exámenes directos tenemos:
1.1. Hidróxido de potasio (KOH).-Disuelve rápidamente las células permitiendo digerir material
proteico, observando con mayor nitidez los elementos fúngicos, su efecto de clarificar puede incrementarse
al calentar a la llama ligeramente la preparación.
Adicionalmente, se puede emplear colorante para pigmentar la pared de los hongos y mejorar la
visualización. La observación de hifas, permite sugerir la presencia de invasión micótica.
1.2. Tinta china.- Es un método de contraste. Permite visualizar la cápsula de polisacárido de Cryptococcus
neoformans, mediante la presencia de un halo claro y nítido alrededor de la levadura. Existen artefactos
(hematíes, burbujas de aire, leucocitos, gotas de grasa y partículas de talco) que pueden interferir y
confundir al analista. La sensibilidad de la técnica es de 50% en pacientes sin VIH y se puede incrementar
hasta 88% en pacientes VIH con meningitis criptococósica.
1.3. Coloración Giemsa.- Es de utilidad para el diagnóstico de histoplasmosis, neumocistosis y otras
micosis. Permite visualizar blastoconidias intracelulares, como la fase tisular del H. capsulatum.
1.4. Coloración Gram.- Es útil para observar blastoconidias y pseudomicelios de las especies del género
Candida, Malassezia y Cryptococcus, las cuales son Gram positivas con variaciones en la intensidad de la
coloración.
2.- COMPETENCIAS.-
Realizar la tinción básica para hongos en las diferentes muestras de trabajo para conocer su morfología
microscópica.
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Número y grupo de
1 Microscopios 10 piezas
Porta objetos 1 grupo de 20
2 30 piezas estudiantes
3 Cubreobjetos 30 piezas
4 KOH al 10 % 20 ml
5 Tinta china 20 ml
6 Colorante Giemsa 1 kit
7 Colorante Gram 1 kit
hojas de bisturí descartables y/ o ( 5)
8 Sindesmotomo estéril 20 hojas
9 Aceite de inmersión 5 ml
10 Cinta adhesiva transparente 2 piezas
11 Guantes de látex descartables 4 pares
12 Barbijos 4 piezas
13 Solución de hipoclorito de sodio al 1% 500 ml
4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO.-
4.1. Examen micológico de uñas.
Examen directo microscópico: para aclarar la estructura córnea de la uña es indispensable recurrir a
diversas soluciones que disuelve la queratina sin afectar la morfología de los elementos fúngicos.
Las más comunes son las de hidróxido de potasio (KOH) en concentraciones del 10% al 40%, con tinta azul
negra permanente de PARKER, KOH con dimetilsulfóxido o blanco calcoflúor para muestras poco
parasitadas . Si se emplea KOH, suspender las escamas en una gota del mismo con o sin tinta Parker, cubrir
con un cubreobjeto, calentar en la llama del mechero, (evitando llegar a ebullición y formación de burbujas
de aire en el preparado) enfriando rápidamente sobre la mesada.
RESULTADOS: a) Examen directo: Es conveniente entregar este resultado dentro de las 48 horas.
Si no hubo hallazgo se informa:
• “No se observan elementos micóticos”
Si hubo hallazgo se informa según el caso:
• “Se observan hifas hialinas tabicadas y/o ramificadas.
• “Se observan hifas hialinas tabicadas y/o ramificadas, características de dermatofitos”
• “Se observan elementos levaduriformes”
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7. CUESTIONARIO.-
1.- En micología cual es el uso de la tinta china?
2.- La Coloración de Giemsa que permite visualizar?
3.- Cual es la utilidad de la tinción de Gram en Micología?
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Práctica No. 6
MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS PARA AISLAR E IDENTIFICAR AGENTES MICÓTICOS
1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.- El objetivo fundamental de la utilización de medios de

cultivo es optimizar el crecimiento de los microrganismos para luego identificar.
Medios Clásicos
En este rubro pueden ser de tres tipos: naturales, semisintéticos y sintéticos. Los naturales están elaborados
con leche, huevo, granos de cereales, levadura de cerveza, frutas y otros compuestos. Los semisintéticos,
como el Sabouraud, aportan una fuente de carbono y nitrógeno. Los sintéticos tienen una composición
química bien definida y se usan en investigación; no son de uso sistemático.
2.- COMPETENCIAS.-
Prepara medios de cultivo para la aislamiento e identificación de los diferentes agentes micoticos ,
considerando las instrucciones y cuidados necesarios.
Número y grupo de
1 Stat Fax
1 grupo de 20
2 Estufa de cultivo T° 45°C y 36°C estudiantes
3 Balanza
4 Tubos con tapón de rosca 30 piezas
5 Tubos de hemólisis 30 Piezas
6 Asas bacteriológicas 20 Piezas
7 Cajas Petri 30 Piezas
8 Hisopos estériles 30 Piezas
9 Hojas de bisturí 10 Piezas
10 Matraz Erlenmeyer de 500 ml 4 piezas
11 Probetas de 100 ml 5 piezas
12 Agua destilalada 5 litros
13 Espátulas 3 Piezas
14 Hornilla 2 Equipos
15 Autoclave 1 Equipo
16 Marcador de vidrio 10 piezas
17 Guantes de látex 3 pares
18 Papel 4 pliegos
19 Hilo 3 metros
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20 Algodón 4 Paquetes
INSUMOS
Numero y grupo de
1 Agar glucosado de Sabourad 39 g
Agar infusión cerebro corazón (BHIA)
2 con 5 % de Sangre 31.2 g
3 Agar inhibidor para Mohos: MIA 60 g
4 CHROM agar Cándida 60 g
5 Solución de KOH al 10 % 30 mL
6 Colorante Giemsa 1 kit
7 Blanco de Calcoflúor 1 kit
8 Solución salina estéril al 0.85% 50 ml
9 Azul de Lactofenol 50 ml
10 Suero de conejo 5 ml
11 Plasma con EDTA 10 ml
12 Tinta china 30 ml
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Los medios de cultivo clásicos se preparan con facilidad; los ingredientes se disuelven por separado en agua
y se mezclan en un matraz de Erlenmeyer; se calientan 15 minutos a baño María y 5 a 6 minutos en el
mechero, la solución se coloca en tubos y se procesa en autoclave a 110 °C durante 15 a 20 minutos; al
sacarlos se colocan en posición inclinada para aumentar la superficie de cultivo. Cuando sea necesario el
ajuste de pH, se emplearán ácido clorhídrico (HCl) o hidróxido de sodio (NaOH). Se pueden utilizar cajas de
Petri, que deben llenarse después de esterilizar el medio.
Si se emplea tapón de rosca no se debe tapar herméticamente para facilitar la llegada de oxígeno, o se
pueden usar tapones de algodón.
Todas las manipulaciones han de realizarse en el área de esterilidad de la llama de un mechero de Bunsen
o en una campana de flujo laminar.
Medio glucosado de Sabouraud
Es el medio clásico de aislamiento; en ocasiones no es el idóneo, pero se emplea de manera universal para
la identificación sistemática de los hongos.
Fórmula original:
Glucosa cruda 4 g
Peptona granulada (chapoteaut) 1 g
Agar agar 2 g
Agua destilada 100 ml
Fórmula modificada:
Glucosa 20 g
Peptona 10 g
Agar agar 20 g
Agua destilada 1 000 ml
Medio de Sabouraud con antibióticos
Se añaden, disueltos en 10 ml de acetona; cloranfenicol 0.05 g, o cicloheximida (Actidione) 0.5 g, o ambos
(se dispone en el comercio de medios ya preparados como Mycosel-agar, Micobiotic-agar, Dermasec-agar),
que evitan el crecimiento de bacterias y hongos saprofitos.
Para cualquier aislamiento, se recomienda el medio simple de Sabouraud y el adicionado con antibióticos,
pero debe evitarse el cloranfenicol si existe sospecha de actinomicetos, o la cicloheximida (Actidione) si se
sospecha de enfermedad por agentes oportunistas.
Otros medios de cultivo
Medio líquido de Sabouraud
Es igual al medio simple de Sabouraud, pero sin agar; puede emplearse para rehidratar cultivos desecados.
Fórmula:
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Peptona 30 g
Glucosa 20 g
Agua destilada 1 000 ml
Medio de conservación
No tiene azúcares; se emplea para

7. CUESTIONARIO.-
• Indique los cuidados para preparar medios de cultivo
• Indique que antibióticos puedes utilizarse para inhibir el crecimiento de bacterias
• Ventajas y desventajas para utilizar tapa de rosca en la preparación de medios de cultivo
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Práctica No. 7
MÉTODOS ESTANDARIZADOS POR CLSI PARA EL ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD A

LOS ANTIFUNGICOS

Durante los últimos 25 años la frecuencia y variedad de infecciones micoticas se ha incrementado en forma
importante. Esta tendencia se atribuye al aumento en la población de pacientes severamente enfermos y/
o inmunodeprimidos, al uso cada vez más frecuente de procedimientos médicos invasivos, al tratamiento
con esteroides o antibióticos de amplio espectro, a instancias intrahospitalarias prolongadas, etc.
Ante tal incremento de infecciones fúngicas la industria farmacéutica ha respondido a la necesidad de
nuevos agentes antimicóticos. Sin embargo el número creciente de reportes sobre el desarrollo de
resistencia a uno o varios compuestos hace que esta decisión sea más difícil.
La expansión de compuestos antimicóticos fue un factor decisivo que creo la necesidad de desarrollar
pruebas de susceptibilidad in vitro, estandarizadas y clínicamente relevantes a fin de que sean utilizadas
como guías en las decisiones terapéuticas.
1.1. DESARROLLO
FUNDAMENTO
Se basa en determinar la sensibilidad de las levaduras frente a los antifúngicos habituales. Las pruebas de
sensibilidad se podrán realizan por los siguientes métodos:
A.- Microdilución en caldo (CLSI y EUCAST).-
A partir de los 80, el CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute, antes National Committee for Clinical
Laboratory Standards (NCCLS)) inició los trabajos de estandarización de técnicas que permitieran detectar
la resistencia in vitro a los antifúngicos.
Luego de publicar distintos documentos el año 2002 dio a conocer el documento M27-A2 (estándar
aprobado) que sienta las bases para la determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM) para las
levaduras de géneros Cándida y Cryptococcus.
El año 2008 se conoció la última actualización, el M27-A3.

Existe otro estándar del European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST)
documento E. Def 7.1 que permite obtener la CIM para las levaduras del género Cándida.
Ambos estándares son fiables, reproducibles y muy útiles para la vigilancia epidemiológica y gracias a ellos
se puede conocer el perfil de sensibilidad de las distintas especies, y establecer cuál sería el tratamiento
inicial más adecuado. Sin embargo, la realización de estas técnicas es onerosa y muy laboriosa, por lo que
su implementación se ve limitada a los centros de referencia.
ATB® Fungus 3 (ATB F3).- Técnica no colorimétrico comercial, basado en el método de referencia National
Committee for Clinical Laboratory Standards (CLSI).
17
El ATB® Fungus 3 consiste en una galería de 16 pares de cúpulas, que contienen 5 antifúngicos: anfotericina
B (AMB), fluconazol (FCZ), itraconazol (ITZ), Voriconazol (VCZ), 5 fluorocitosina (5FC), en distintas
concentraciones. Según el valor de CIM se pueden categorizar los aislamientos como sensibles (S), sensibles
dependientes de la dosis o intermedios (SDD) y resistentes (R). En el caso de 5 fluorocitosina (5FC) sólo
puede obtenerse a la categoría de sensible (S) o resistente (R). Las galerías y los medios se conservan a 2-
8°C en oscuridad hasta la fecha de caducidad indicada sobre el equipo.
Discos de fluconazol Malbrán (DM): es un método de difusión en agar para FCZ. El Departamento de
Micología INEI, ANLIS “Dr. C. Malbrán" desarrolló y estandarizó este método de difusión en agar, utilizando
discos de papel cargados con FCZ. Esta técnica es aplicable a la rutina de los laboratorios y permite realizar
el tamizaje para detectar los aislamientos de levaduras del género Cándida, sensibles al FCZ.
Tabletas de Neo-Sensitabs Rosco® (T): es un método de difusión en agar. En las Tabletas de Neo-
Sensitabs Rosco®, el antifúngico se encuentra en forma cristalina y se mezcla con una sustancia inerte sin
actividad antimicrobiana que no interfiere con ningún aspecto del proceso.
Existen varias tabletas para los antifúngicos más habituales en el mercado; pero las más usadas son FCZ y
VCZ. Este método se basa en el estándar M44-A qué público el CLSI en el 2004. Las tabletas se pueden
conservar en heladera entre 2 y 8 °C hasta la fecha de caducidad indicada por su fabricante o a temperatura
ambiente por 2 meses.
Tiras con gradiente de concentración de un Antifúngico (Etest): Es una técnica cuantitativa para la
determinación de la CIM a los antimicrobianos. Consiste en la utilización de una tira de plástico que lleva
un gradiente de concentración del antifúngico en μg/ml. El valor de la CIM se indica por la formación de una
elipse en la intersección entre el crecimiento del microorganismo y la zona de inhibición)
B.- Métodos de difusión en agar.
Con el objeto de desarrollar pruebas de susceptibilidad que fuesen más rápidas, menos laboriosas y de
menor costo, investigadores iniciaron una serie de estudios que llevaron al desarrollo del Documento M 44-
P en el año 2003, CLSI movilizo con rapidez a la categoría de aprobación en 2004 (M44-A)
Discos BD-BBL, Oxoid, Discos de fluconazol Malbrán y Tabletas de Neo-Sensitabs Rosco® (T).
2.- COMPETENCIAS.-
Evalúa la sensibilidad a los antifúngicos frente levaduras de los géneros Cándida y Cryptococcus en base al
conocimiento científico.
18
Número y grupo de
1 Autoclave 1 Equipo
Balanza analítica 1 grupo de 20
2 1 Equipo estudiantes
3 Matraz Erlenmeyer de 500 ml 3 Piezas
4 Probetas 2 Piezas
5 Espátula 2 Piezas
6 Stat Fax 1 Equipo
7 Asa de cristal 10 Piezas
8 Agujas bacteriológicas 10 Piezas
10 Tubos de hemolisis 50 Piezas
11 Hornilla 1 Equipo
12 Agua destilada 5 litros
14 Pinzas 20 Piezas
15 Algodón 300 gr
16 Papel 4 pliegos
17 Hilo 3 metros
18 Placas petri 20 piezas
3.1 Medios de cultivo:

INSUMOS
Número y grupo de
Agar Mueller Hinton
(suplementado con 2 % de
glucosa y 0.5 % de azul de 1 grupo de 20
1 metileno.) 60 g estudiantes
2 Glucosa 40 gr
3 Azul de metileno 10 gr
4 Solución salina estéril al 0.85 % 500 ml
Solución de Hipoclorito de sodio al
5 1% 1000 ml
19
7 Candida albicans ATCC 90028 1 vial
Placas de Petri de 10 cm de
8 diámetro. 30 piezas
Solución 0,15 M de cloruro de
sodio estéril (solución salina
9 0,85%) (SSE) 500 ml
Tabletas o discos de Neo
Sensitabs TM Rosco (T):
fluconazol 25 µg, Voriconazol 1µg
Itraconazol 8 µg, ketoconazol 15
µg, Anfotericina 10 µg, 5-
Fluorocitocina 1µg, Caspofungina 20 de
10 5 µg. 140 cada 1
Métodos de difusión en agar
Discos BD-BBL, Oxoid, Discos de fluconazol Malbrán y Tabletas de Neo-Sensitabs Rosco® (T).
• A partir de un cultivo de 24 h a 35ºC en Agar Sabouraud glucosado, se prepara un inóculo de turbidez
0.5 McFarland en SSE.
• Se utilizan placas de Petri de 10 cm de diámetro, con 25 ml de agar Muller- Hinton, suplementado
con 2 % de glucosa y con el agregado de azul de metileno, en una concentración final de 0.5 μg/ml
(medio MHm).
• La superficie de la placa de 20etri con medio MHm se hisopa en tres direcciones con el inoculo
correspondiente.
• Luego se colocan los discos/tabletas de antifúngico, con la ayuda de pinza estéril.
• Se incuban las placas invertidas a 36 ± 2°C, durante 24 horas.
• Si transcurridas las 24 horas de incubación, los halos no son claramente distinguibles, se prolonga
la incubación 24 horas más para dar lugar a especies de desarrollo más lento
Lectura e interpretación de los resultados:

Lectura:
• Se utiliza un calibre o una regla para medir el diámetro del halo externo de la zona de inhibición.
Importante: realizar la lectura de las colonias con desarrollo confluente. Dentro de la zona de inhibición
pueden crecer colonias que muestren un diámetro menor al de las colonias externas. Estas colonias no
deben ser consideradas mutantes resistentes.
Interpretación de los resultados:
20
Discos de Fluconazol Malbrán Diámetro del halo en mm
Antifúngico Sensible A determinar por CIM
Fluconazol ≥ 16 < 16
CONTROL DE CALIDAD
Cándida krusei ATCC 6258 y Cándida parapsilosis ATCC 22019
ATB F3: Antifúngico CIM μg/ml

C. C. krusei
parapsilosis
Fluconazol 1-4 8-32
Itraconazol 0,125-0,5 0,125 - 0,5
Voriconazol 0,06-0,125 0,125 - 0,5
5-fluorocitosina S I/R
21

7. CUESTIONARIO.-
1.- Indique los métodos para determinar la sensibilidad de las levaduras a los diferentes antimicóticos
2.- Razones para estandarizar la turbidez del inoculo
3.- ¿Cuándo se consideran a las colonias mutantes resistentes?
22
Práctica No. 8
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS SUPERFICIALES
El diagnóstico de las micosis superficiales se basa en el hallazgo de hifas o levaduras

características, en el examen microscópico directo y el aislamiento del agente causal en los
cultivos.
2.- COMPETENCIAS.-
• Utiliza el procedimiento a seguir para el examen directo y cultivo de los hongos presentes
en muestras superficiales de piel

Número y grupo de
Etanol al 70 % 1 grupo de 20
1 20 ml estudiantes
2 tubos con Medio de transporte Stuart 10 Piezas
Hojas de bisturí descartables o
3 sindesmótomos estériles 10 Pizas
4 Cinta adhesiva transparente 2 Piezas
5 Escalpelo desechable 2 Piezas
6 Tijera 3 Piezas
Microscopios Cantidad
disponible
en
7 laboratorio pzas
Solución de Hidróxido de potasio al
8 10 % 50 ml
Agua destilada Cantidad
9 necesaria
10 Porta objetos 50 Piezas
11 Cubreobjetos 50 Piezas
12 Heladera 2- 8 º C 1 Equipo
13 Estufa de cultivo a 28 °C 1 Equipo
14 Mecheros 6 Piezas
23
15 Gradillas para tubos 3 Piezas
16 Asa bacteriológica 10 piezas
17 Gancho en L 1 pieza
18 Agujas de disección 10 Piezas
19 Guantes de látex descartables 4 Pares
20 Estufa de cultivo a 35 ° C - 37 °C 1 equipo
21 Matraz Erlenmeyer 500 ml 2 piezas
22 Cajas Petri 20 piezas
INSUMOS
Número y grupo de
Agar Sabouraud glucosado 1 grupo de 20
1 39 gr estudiantes
Agar Dermatophyte Test Medium
2 (DTM) 60 g

A.- Examen microscópico directo.
Para aclarar la capa córnea de la piel es indispensable recurrir a diversas soluciones que disuelve la
queratina sin afectar la morfología de los elementos fúngicos.
Las más comunes son las de hidróxido de potasio (KOH) en concentraciones del 10% al 40%, solo o con
tinta azul negra permanente de PARKER, KOH con dimetilsulfóxido o blanco calcoflúor para muestras poco
parasitadas.
• Si se emplea KOH, suspender las escamas en una gota del mismo con o sin tinta Parker.
• Cubrir con un cubreobjetos.
• Calentar en la llama del mechero, (evitando llegar a ebullición y formación de burbujas en el
preparado).
• Enfriar rápidamente sobre la mesada.
• Si las escamas fueron obtenidas con cinta adhesiva transparente, colocar una gota de la mezcla KOH
y tinta azul Parker para que penetre por capilaridad entre la cinta y el portaobjetos.
• Para determinar la presencia de bacterias filamentosas que parasitan la piel, se pueden realizar
preparaciones teñidas.
• Para ello, una vez examinada la preparación con KOH sacar el cubreobjetos y resuspender las
escamas digeridas en agua destilada.
• Luego colocar la suspensión en un tubo cónico y centrifugar a 2000r.p.m. durante 5 minutos.
• Volcar el sobrenadante y tomar con una pipeta Pasteur el precipitado para realizar un extendido
sobre portaobjeto.
• Dejar secar y luego fijar y teñir con Giemsa al 10%, 30 minutos o con Azul de metileno al 1% durante
5 minutos.
24
B.- Cultivo.-
• La segunda parte del material, se utiliza para la realización de los cultivos en medios sólidos:
Agar Sabouraund dextrosa.
• Cuando se sospecha pitiriasis versicolor, se debe sembrar el material en medios ricos en lípidos
(ácidos grasos de cadena larga) como el Medio de Dixon (ADX), en su defecto Agar miel
Sabouraud con el agregado de aceite de oliva estéril (al 2%) (SAO), Medio de Danker (ADK),
Agar Sabouraud con bilis de buey (ABB).
• Para sembrar el material, se deben fragmentar las escamas lo más posible, para inocularlas en
la superficie del medio de cultivo con un gancho metálico fino, esterilizado a la llama y enfriado
en la superficie del agar.
• Si se emplean tubos, efectuar tres toques en el medio separados por lo menos por 1 cm de
distancia entre ellos. Emplear dos o tres tubos con los medios de cultivo elegidos.
• La incubación se lleva a cabo a temperatura ambiente o en estufas reguladas a 25º ó 28º C.
• Si de acuerdo a los datos epidemiológicos del paciente se sospecha Trichophyton verrucosum se
deberá incubar a 37º C uno de los tubos sembrados.
• Cuando se siembran medios para búsqueda de Malassezia spp, se incubarán de 32 a 35 º C durante
7 días en aerobiosis.
• Examinar los cultivos una ó dos veces por semana hasta completar las tres semanas de incubación.
Resultados:
a) Examen directo:
Si no hubo hallazgo se informa: “No se observan elementos micóticos” o “Negativo”
Si hubo hallazgo se informa según el caso:
“Se observan hifas hialinas tabicadas y/o ramificadas”.

“Se observan hifas hialinas tabicadas y/o ramificadas, características compatibles con de dermatofitos”
“Se observan elementos levaduriformes y/o seudohifas”
“Se observan levaduras y filamentos cortos característicos de “Malassezia spp”
b) Cultivos:
Si durante el lapso indicado de incubación no se obtuvo desarrollo se descartan los cultivos y se informan
“No se obtuvo desarrollo de hongos” o “Cultivo Negativo para hongos”

7. CUESTIONARIO.-
1. Realice un informe de laboratorio del examen directo y de cultivo
2.- Indique las muestras que envía ala laboratorio para el cultivo
25
Práctica N °9
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS DE TRACTO RESPIRATÓRIO INFERIOR

El diagnóstico de las micosis del aparato respiratorio se basa en el hallazgo de hifas o levaduras
características, en el examen microscópico directo y el aislamiento del agente causal en los cultivos.
2.- COMPETENCIAS.-
• Utiliza el procedimiento para el cultivo de muestras del tracto respiratorio inferior considerando todos
los cuidados para finalmente emitir un informe.

Número y grupo de
Microscopio con objetivos de 10x,
1 40x, 100x (inmersión) 20 unidades
Heladera 2- 8 ºC 1 grupo de 20
2 1 equipo estudiantes
Estufa de cultivo a 28 C° , 35 °C y
3 37 ºC 1 equipo
4 Mechero 6 piezas
5 Gradillas para tubos 3 piezas
6 Portaobjetos 20 Piezas
7 Cubreobjetos 20 piezas
Hojas de bisturí descartables estériles
8 o sindesmótomos estériles 10 piezas
9 Asa bacteriológica 10 Piezas
10 Gancho en L 1 Pieza
12 Cajas petri 20 piezas
13 Matraz Erlenmayer 2 piezas
INSUMOS
Número y grupo de
Agar BHI con o sin 5% de sangre 1 grupo de 20
1 ovina 20,8 gr estudiantes
2 Agar Glucosado Sabouraund 26 gr
3 Agar sangre ( agar base) 50 g
26

MUESTRAS A ANALIZAR.-
Muestras obtenidas por expectoración espontánea o por procedimientos invasores.
A. ESPUTO –ASPIRADO TRAQUEAL.

a) Examen microscópico:
• Volcar el esputo en una placa de Petri estéril.
• Examinar macroscópicamente.
• Seleccionar una parte purulenta y separarla con un ansa estéril o con agujas de disección. Colocar
una gota del material así obtenido entre porta y cubreobjeto para realizar el examen microscópico
al estado fresco.
• Con la porción restante efectuar extendidos para coloración de Giemsa, Gram- Ziehl Neelsen, Azul
de Toluidina-O.
• El examen en fresco se realiza inicialmente. con 100x a fin de recorrer rápidamente varios campos
y reconocer si la muestra es representativa, para ello la muestra de esputo apropiada debe tener >
de 25 leucocitos (polimorfonucleares neutrófilos) y < 25 células epiteliales escamosas por campo
de 100x dependiendo del agente causal.
Sin embargo en los pacientes inmunosuprimidos (neutropenicos, VIH +, trasplantados, con tratamientos
prolongados con corticoides) aún las muestras poco representativas deben ser sometidas a estudios
mediante tinciones, en busca de hongos.
• Completar el estudio mediante la observación con 400x. de la muestra.
Este paso permite la visualización de hongos de dimensiones medianas o grandes, con pared celular gruesa
y refringente tales como: seudohifas y blastoconidias de Candida, hifas ramificadas y tabicadas de
Aspergillus, Pseudallescheria, etc, filamentos ramificados no septados de zigomicetos, elementos de las
formas parasitarias de Paracoccidioides brasiliensis, Histoplasma capsulatum var duboisii, Blastomyces
dermatitidis, Coccidioides immitis y acúmulos de Pneumocystis jiroveci
• Los extendidos teñidos deben examinarse con óptica de inmersión a 1000x.
La coloración de Giemsa es útil para observar elementos levaduriformes de Histoplasma capsulatum, la
fase parasitaria de Penicillium marneffei, las formas tróficas de Pneumocystis jiroveci y es también la mejor
tinción para reconocer las células de la muestra.
• De estas últimas tienen particular interés los eosinófilos en la aspergilosis broncopulmonar alérgica
y los macrófagos en la histoplasmosis y penicilosis.
• Una variante de la observación al estado fresco es la preparación con tinta china, ver (PAMR) útil
para ver las levaduras capsuladas de Cryptococcus neoformans ó C. gatti. Para la búsqueda de P.
jiroveci, el material ideal es el BAL, pero cuando éste no puede realizarse, como segunda opción
puede recurrirse al esputo inducido mediante nebulizaciones tibias con solución salina isotónica.
Este microorganismo puede observarse en fresco a 400x, pero debe confirmarse con extendidos teñidos
por las técnicas descriptas en el manual de medios y reactivos (PAMR) Las muestras muy viscosa oueden
fluidificarse antes de la siembra empleando algún agente mucolitico (N-acetil cisteína), dejándola actuar a
temperatura ambiente hasta que se consigue la fluidificación.
b) Cultivo:
27
Una vez finalizado el examen microscópico se puede agregar al esputo 10 ml de una solución de antibióticos
antibacterianos, conteniendo 100 ug/ml de cloranfenicolestreptomicina y dejar en la heladera a 4ºC
durante 24 hs. centrifugar antes de sembrar.
B.-LAVADO BRONCOALAVEOLAR (BAL), MiniBAL y LAVADO BRONQUIAL (LB)

a) Examen microscópico: El BAL es un material de gran utilidad para el estudio de las micosis
broncopulmonares.
Se obtiene por fibrobroncoscopía y reduce al mínimo la presencia de elementos contaminantes de la boca
y vías aéreas superiores.
Si la muestra fue adecuadamente obtenida exhibe, un neto predominio de macrófagos alveolares ó células
inflamatorias, prácticamente no se observan células bronquiales o epiteliales planas de la boca.
El BAL se considera significativo cuando el recuento de células epiteliales planas es < 1 %. Si la muestra no
va a ser examinada inmediatamente, se la refrigera a 4ºC. Centrifugar toda la muestra, separar el
sobrenadante y con el sedimento llevar a cabo los mismos pasos propuestos para el examen de esputo. El
sobrenadante podrá ser utilizado para la detección de ciertos antígenos de hongos patógenos como.
Aspergillus fumigatus, y Cryptococcus neoformans por aglutinación de partículas de látex o por técnicas de
ELISA.
El valor diagnóstico del hallazgo de las diferentes especies fúngicas que colonizan o parasitan el aparato
respiratorio es muy distinto. La presencia de ciertas especies, aunque sólo sea en cultivos, tiene importancia
cuando se trata de patógenos primarios como: P. brasiliensis, H. capsulatum, C. immitis, B, dermatitidis y P.
marneffei . Otras especies sólo tienen valor cuando se los encuentra en el examen microscópico directo y se
los cultiva en forma reiterada de diferentes muestras, como son las especies del género Aspergillus,
Fusarium spp, Pseudallescheria boydii y Nocardia asteroides. Finalmente algunos hongos sólo pueden ser
considerados responsables de la patología respiratoria cuando son observados como invasores de los
tejidos en los estudios histopatológicos de biopsia, piezas quirúrgicas, en pacientes inmunosuprimidos; en
este caso se encuentran C. albicans y otras especies del género.
Resultados:
a) Examen microscópico:
Directo: Es conveniente entregar un resultado de los elementos observados lo más rápido posible
como informe preliminar.
✓ Si no hubo hallazgo se informa: “No se observan elementos micóticos”
✓ Si hubo hallazgo se informa según el caso: Se observan células levaduriformes con
blastoconidias y / o seudomicelios .
✓ Se observan células levaduriformes esféricas de brotación múltiple o en rueda de timón.
✓ Se observan células esféricas de brotación simple (unigemantes) de cuello ancho .
✓ Se observan cuerpos esféricos con endosporos ó esférulas .
✓ Se observan hifas hialinas tabicadas y/o ramificadas.
✓ Se observan hifas cenocíticas.
✓ Se observan elementos compatibles con P. jiroveci. ƒ
Tinta china:
✓ Si no hubo hallazgo se informa: “Negativa”
✓ Si hubo hallazgo se informa: “Se observan levaduras capsuladas”
Coloración de Giemsa:
28
✓ Si no hubo hallazgo se informa: “Negativa”
Si hubo hallazgo se informa según el caso: .
✓ Se observan células levaduriformes con blastoconidias y / o seudomicelios.
✓ Se observan células levaduriformes esféricas de brotación múltiple o en rueda de timón.
✓ Se observan células esféricas de brotación simple (unigemantes) de cuello ancho.

7. CUESTIONARIO.-
1. Indique las muestras que recibe en el laboratorio para el examen directo y cultivo
2. Realice un informe del examen microscópico con coloración de Giemsa

3. Para considerar una muestra adecuada, el esputo en examen microscópico cuantos leucocitos debe
tener?
29
Práctica No. 10
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS DE SANGRE, LÍQUIDOS ESTÉRILES Y TEJIDOS

El cultivo de sangre se basa en la detección de hongos que desarrollan en los frascos comerciales de equipos
automatizados (Bactec o Bact Alert), en frascos de hemocultivos comerciales no automatizados (Britania)
o por la técnica de lisis centrifugación (Isolator o de preparación en el laboratorio, ver PAMR). Este método
es el más sensible y rápido para la recuperación de algunos hongos de la sangre, especialmente Histoplasma
capsulatum, Cryptococcus neoformans y Fusarium spp. Presenta mejores resultados para los hongos
filamentosos, que los obtenidos por las técnicas automatizadas o comerciales no automatizadas.
El hemocultivo para la búsqueda de hongos, se indica en caso de sospecha de fungemia en un huésped
inmunocomprometido grave y en pacientes VIH positivos para la investigación de Histoplasma capsulatum,
Cryptococcus neoformans, Fusarium spp, Candida spp y otras levaduras.
El diagnóstico de micosis en LCR se basa en el hallazgo de levaduras características, en el examen

microscópico directo, el aislamiento del agente causal en los cultivos y en la detección de antígenos o
anticuerpos.
2.- COMPETENCIAS.-
Desarrolla el procedimiento a seguir para el cultivo de hongos presentes en muestras de sangre.

Desarrolla el procedimiento a seguir para el cultivo de hongos presentes en muestras de líquidos de
punción.
Desarrolla el procedimiento a seguir para el cultivo de hongos presentes en muestras de líquido
cefalorraquídeo (LCR).
Número y grupo de
Microscopios con objetivos de 10x, 1 grupo de 20
1 40x y opcional 100x (inmersión) 20 unidad estudiantes
2 Heladera 2- 8º C 1 Equipo
Estufa de cultivo a 32- 35ºC , 28 °
3 C 1 equipo
4 Mechero 10 piezas
5 Centrifuga 1 Equipo
30
9 Aguja vacutainer 10 Piezas
11 Asas estériles 10 Piezas
12 Tubos estériles 30 Piezas
13 Solución fisiológica 500 ml
15 Azul de lactofenol 30 ml
INSUMOS
Número y grupo de
1 Agar Sabouraud glucosado 26 g
Agar Infusión Cerebro Corazón 1 grupo de 20
2 Agar 20,8 g estudiantes
Examen directo microscópico.

No aplica
Cultivos
• Siembra en agar Sabouraund
• Se incuba directamente en estos envases a 28 C y 35 C durante 3 a 4 semanas,
• Es necesario realizar controles al menos 2 veces por semana para ver si existe desarrollo micológico
Resultados:
• Si durante el lapso indicado de incubación no se obtuvo desarrollo se descartan los cultivos y se
informan “Negativo”
• Si durante la incubación se observa desarrollo en los medios sólidos o líquidos, se realiza un examen
microscópico en fresco y un informe “preliminar” describiendo los elementos vistos en la
microscopia.

7. CUESTIONARIO.-
1. Cuidados para la toma de muestras de sangre, LCR
2. Por qué no se realiza el examen microscópico directo?
3. Cada que tiempo se debe realizar el control para ver el crecimiento micológico?
31
Práctica No. 11,12 y 13
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS GENITOURINARIAS

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS CAVIDAD ORAL
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS GASTROINTESTINALES

El microcultivo de hongos nos permite identificar estructuras fúngicas, nos permite visualizar al
microscopio el micelio en su conjunto, no solo una parte del mismo, se aplica técnicas de acuerdo a la
naturaleza de los hongos.
2.- COMPETENCIAS.-
Desarrolla el procedimiento a seguir para el examen directo y cultivo de los hongos presentes en muestras
genitourinarias, gastrointestinales tanto de mucosas bucofaríngea y vaginal.

Número y grupo de
1 40x y opcional 100x (inmersión) 20 unidades estudiantes
3 C 1 equipo
4 Mechero 10 piezas
5 Hojas de bisturí descartables 10 Equipo
9 Autoclave 1 equipo
11 Asas bacteriológicas 20 Piezas
12 Matraz Erlenmeyer de 500 ml 3 Piezas
13 Probetas 3 Piezas
14 Espátula 2 Piezas
15 Stat Fax 1 Piezas
16 unidades de Asa de cristal 10 Piezas
17 Agujas bacteriológicas 10 Piezas
19 Tubos de hemolisis 50 Piezas
20 Hornilla 1 equipo
32
21 Agua destilada csp.
23 Pinzas 20 Piezas
24 Algodón 300 g
26 Papel 3 Pliegos
26 Hilo 3 metros
27 Agar Sabouraud glucosado. 65 g
28 Agar cromogénico . 100 g

La muestra recolectada en el hisopo humedecido en SF o en medio de Stuart, se destina al cultivo, y la
depositada en portaobjetos para el examen microscópico
a) Examen directo microscópico:
• Observar la muestra en fresco entre porta y cubreobjetos con objetivo 40 x
• Luego, dejar secar, fijar y teñir con Giemsa al 10%, 30 minutos o con Azul de metileno al 1% durante 30
minutos y si es necesario, realizar coloración de Gram.
b) Cultivos:
• Sembrar el hisopo en agar Sabouraud (SDA) y/o en agar cromogénico.
• Incubar a 35º - 37º C durante 10 días.
• Examinar los cultivos una o dos veces por semana hasta completar el período de incubación.
• Luego del cultivo primario es recomendable la siembra en un medio cromogénico (si no se hizo como
siembra primaria).El medio cromogénico permite reconocer si en la muestra hay una o más especies.
Con la colonia/s aisladas se puede iniciar la identificación presuntiva
RESULTADOS:
a) Examen directo: Es conveniente entregar este resultado dentro de las 24 horas.
Si no hubo hallazgo se informa:

“No se observan elementos micóticos”
Si hubo hallazgo se informa:
“Se observan elementos levaduriformes y/o seudohifas”
Debe consignarse además, la presencia de leucocitos o piocitos, células, bacterias y parásitos.
b) Cultivo:
Si durante el lapso indicado de incubación no se obtuvo desarrollo se descartan los cultivos y se informan
“Negativo”
Si hubo desarrollo se debe recurrir al POE de identificación (AMID) correspondiente.
7. CUESTIONARIO.-
1. Cuál es la utilidad del medio cromogénico?
2. Cuando existe hallazgo de hongos como se realiza el informe del examen directo?
33
Práctica No. 14
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS OCULARES, CATÉTERES
El espectro clínico de las infecciones oculares fúngicas es tan variado como el de las infecciones bacterianas.
Los hongos pueden afectar tanto a las estructuras oculares internas como a las externas o a sus anejos,
produciendo cuadros de endoftalmitis, queratitis, conjuntivitis o blefaritis. En todas ellas se pone de
manifiesto la habilidad del clínico para la evaluación de las lesiones y su precisión en la recogida de la
muestra adecuada para solicitar los estudios microbiológicos pertinentes.
En las sepsis, uno de los principales focos de microorganismos (Staphylococcus, Corynebacterium, Candida,
etc.) son los catéteres intravasculares. Actualmente, se considera que una de cada cuatro septicemias
hospitalarias está causada por un dispositivo intravascular, calculándose que la incidencia actual de
infección relacionada con un caté- ter intravascular (IRCI) es del 0,3% de los episodios de cateterización.
2.- COMPETENCIAS.-
Utiliza el procedimiento adecuado para la identificación y aislamiento de hongos presentes en muestras
oculares y catéteres, en base a los exámenes microscopios y pruebas fisiológicas con la finalidad de emitir
un informe para su posterior tratamiento.
Número y grupo de
3 C 1 equipo
4 Mechero 10 piezas
34
INSUMOS
Número y grupo de
1 26 g estudiantes
Agar Infusión Cerebro Corazón
2 Agar 20,8 g

No aplica
Cultivos
• Es necesario realizar controles al menos 2 veces por semana para ver si existe desarrollo
micológico
Resultados:
• Si durante el lapso indicado de incubación no se obtuvo desarrollo se descartan los cultivos y se
informan “Negativo”
• Si durante la incubación se observa desarrollo en los medios sólidos o líquidos, se realiza un examen
microscópico en fresco y un informe “preliminar” describiendo los elementos vistos en la
microscopia.

7. CUESTIONARIO.-
1. Cuidados para la recogida y transporte de catéteres intravasculares
2. Procedimiento para realizar el cultivo de muestras oculares
3. Que se entiende por hongo dimórfico
35
Práctica No. 15
IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS
El laboratorio de micología identifica levaduras que tienen significancia clínica. Para lo cual se dispone de
múltiples sistemas bioquímicos rápidos; y también se deben seguir realizando sencillas pruebas que son
útiles en la identificación tales como: observar la micromorfología, producción de pigmento, asimilación de
carbohidratos, producción de ureasa, susceptibilidad a la cicloheximida, desarrollo de película, desarrollo
a 37 y 42.
1.1.- Identificación de Candida albicans, C. glabrata, C. parapsilosis, C. krusei, C. tropicalis,

Rhodotorula rubra, Trichosporon spp., Geotrichum spp., Cryptococcus neoformans
1.1.1.- Objetivo „.- Describir los procedimientos para la identificación de las cepas de Candida albicans, C.
glabrata, C. parapsilosis, C. krusei, C. tropicalis, Rhodotorula rubra., Trichosporon spp., Geotrichum spp.
Cryptococcus neoformans.
1.1.2. Campo de aplicación.-Comprende la identificación de especies de Candida albicans, C. glabrata, C.
parapsilosis, C. krusei, C. tropicalis, Rhodotorula rubra, Trichosporon spp., Geotrichum spp., Cryptococcus
neoformans.
1.1.3. Consideraciones generales.-
a) Determinar si el aislamiento corresponde a una cepa de Candida albicans, C. glabrata, C. parapsilosis, C.
krusei, C. tropicalis, Rhodotorula rubra, Trichosporon spp., Geotrichum spp., Cryptococcus neoformans.
b) El medio de cultivo que se emplea para el aislamiento primario es el ASD con antibiótico. Las colonias
de levaduras son ligeramente abombadas o planas, de consistencia mantecosa, lisa o rugosa, con olor
agradable, tornándose pastosas a medida que envejecen.
c) Las colonias de Rhodotorula rubra se caracterizan por presentar pigmentos carotenoides que confiere a
la colonia un color naranja o rojo anaranjado.
d) Microscópicamente las células de Rhodotorula rubra se encuentran dotadas de una fina cápsula visible
al examen directo con tinta china.
e) Microscópicamente las células de Cryptococcus neoformans se caracterizan por presentar una cápsula
de polisacárido visible al examen directo con tinta china.
2.- COMPETENCIAS.-
Aplica el procedimiento para el aislamiento e identificación de levaduras, considerando la morfología y las

características microscópicas como el aspecto, disposición de las blastosporas presencia de artrosporas y
clamidosporas.
36
Número y grupo de
3 C 1 equipo
4 Mechero 10 piezas
5 Matraz erlenmeyerde 500 ml 5 piezas
9 Atubos de hemólisis 30 Piezas
12 Hornilla 2 Piezas
13 Agar dextrosa Sabouraund 26 g
14 Caldo Sabouraund 50 g
15 Agar Urea de Christensen 60 g

4.1. Identificación de especies del género Candida.
a) Morfología de las colonias.- Se caracterizan por presentar colonias cremosas de color blanco
amarillento, lustrosas, poco elevadas y de bordes bien definidos.
b) Examen microscópico.- Se observan células redondas u ovaladas de tres a siete micras de diámetro,
que se reproducen por blastoconidias y forman pseudomicelio en la mayoría de las especies.
c) Pruebas fisiológicas para identificación.
• Tubo germinativo.- Permite diferenciar las especies de Candida albicans de las no albicans.
Procedimiento.-
✓ Suspender un inóculo de la cepa pura de Candida con 24 horas de desarrollo en 0,5 mL de suero
humano o de conejo.
✓ Incubar a 35–37°C por 2h y 30 min.
✓ Colocar 2 ó 3 gotas de la suspensión en una lámina portaobjeto y cubrir con lámina cubreobjeto y
observar al microscopio con objetivo de 40X.
Interpretación.- La prueba es positiva al visualizar una estructura elongada que se origina a partir de la
levadura.
Realizar esta prueba empleando cepas controles en paralelo a la cepa en estudio. Control positivo: C.
albicans .
37
Control negativo: C. glabrata .

• Desarrollo a 42°C.-
C. albicans y C. dubliniensis .- Tienen comportamiento fisiológico y morfológico similar y la prueba que los
va a diferenciar en el laboratorio de microbiología es el desarrollo a 42°C en agar papa dextrosa
Procedimiento.-Sembrar la cepa aislada en tubo o placa Petri que contenga agar papa dextrosa e incubar
a 42°C por 48 horas
Interpretación.-
Positivo: C. albicans. con desarrollo óptimo.
Negativo: C. dubliniensis sin desarrollo.
• Producción de clamidosporas, blastoconidias y artrosporas.-
Procedimiento.- Sembrar la colonia con estrías en paralelo sobre el medio de cultivo (agar harina de maíz,
agar arroz, agar clamidospora)
Para la lectura colocar una lámina cubreobjeto estéril sobre el área sembrada e incubar a temperatura
ambiente por tres a cinco días.
Colocar la placa Petri al microscopio y sin retirar la lámina cubreobjeto observar con objetivo de 10X y 40X.
Control positivo: C. albicans.
4.2. Identificación de Rhodotorula rubra .-

a) Morfología de las colonias.-Se caracterizan por ser de color rojo naranjado o naranja, de aspecto
cremoso o rugoso, brillante y de superficie lisa.
b) Examen microscópico.-Se observan levaduras redondas, ovoides de 2-6,5 micras de diámetro, en
ocasiones forman pseudomicelio rudimentario, al examen directo con tinta china se visualiza una fina
cápsula.
Identificación de Trichosporon spp..-

a) Morfología de las colonias.-Son de rápido desarrollo, liso, plegado, aterciopelado, ceroso, de color
blanco-amarillento-crema. La textura plegada es más prominente en el tiempo.
b) Examen microscópico.-Se visualiza artroconidias y blastoconidias. Las blastoconidias son unicelulares
y de forma variable y nacen en brotes en los ángulos de las artroconidias. La principal característica es la
de presentar artroconidias usualmente en forma cubica o de barril.
4-3.- Identificación de Geotrichum spp.

a) Morfología de las colonias.-Son de crecimiento rápido, en el período de una semana presentan un color
blanco-grisáceo, que posteriormente cambia a un color amarillento con aspecto ceroso, polvoriento a
rugoso. La temperatura óptima de crecimiento es 25°C, la mayoría de las cepas no desarrollan o lo hacen
débilmente a 37°C.
b) Examen microscópico.-Se observa artroconidias unicelulares, en cadena, hialinas que resultan de la
fragmentación de hifas no diferenciadas por fisión a través de un doble septo, estas estructuras tienen forma
rectangular y redondeada en los extremos, semejante a un barril. Carecen de blastoconidias, conidióforos y
pseudohifas
38
4-4.- Identificación de Cryptococcus neoformans .-
a) Morfología de las colonias.-Son mucoides y brillantes. Sobre el ASD desarrollan un color blanco
amarillento, son poco elevadas y de bordes continuos, mientras que sobre el agar niger seed (agar semilla
de girasol) desarrollan un color marrón.
b) Examen microscópico.-Levaduras redondas de 7 a 15 mm de diámetro, en algunos casos pueden

producir blastoconidias. Su principal características es la de presentar una cápsula que la circunda, visible
al examen directo con la tinta china.
Control positivo: Cryptococcus neoformans
Control negativo: Candida albicans.
Formación de película.-Algunas especies de Candida, Geotrichum y Trichosporon producen una película y

gas sobre la superficie del medio de cultivo (caldo Sabouraud). Procedimiento.-
Inocular una asada de la colonia de levadura, en un tubo de vidrio que contenga caldo Sabouraud. „
Incubar a temperatura ambiente (25°C) por tres días. Interpretación „
Se considerará como prueba positiva si se produce una película sobre la superficie del medio de cultivo.
Producción de ureasa.- Se basa en la capacidad de producir la enzima ureasa, la cual desdobla la urea en
dióxido de carbono y amonio, incrementando el pH del medio y produciendo un cambio de color rojo-
púrpura en el indicador rojo de fenol. Procedimiento „.- Se utiliza el medio de Christensen, en el cual se
inocula una asada de la levadura en estudio. Los medios se incuban a 37°C durante 6 horas o a temperatura
ambiente durante tres días.
Interpretación.-La prueba se considera positiva cuando se alcaliniza el medio, lo que produce un cambio
de color original (amarillo) a rosa o rojo. Una reacción positiva a la prueba ureasa es sugestiva de pertenecer
al género Cryptococcus, la cepa de C. neoformans son productoras de ureasa.

7. CUESTIONARIO.-
1. De que especie es característica la presencia de abundantes clamidosporas sobre el agar?
2. A discutir cuales son las características morfológicas consideradas para la identificación de las
levaduras?
39
Práctica No. 16
IDENTIFICACIÓN DE HONGOS DERMATOFITOS

Los dermatofitos son un grupo de hongos relacionados entre sí que presentan la capacidad de invadir los
tejidos queratinizados (piel, pelo, uñas) del hombre y de los animales, produciendo una enfermedad que se
denomina dermatofitosis o, más comúnmente, tiña.
2.- COMPETENCIAS.-
Aplica el procedimiento para la identificación de dermatofitos en base a las características macroscópicas
de las colonias con la finalidad de emitir un informe al médico para su posterior tratamiento.

Número y grupo de
Microscopios con objetivos de 10x,
1 40x y opcional 100x (inmersión) 20 unidades
Heladera 2- 8º C 1 grupo de 20
2 1 Equipo estudiantes
3 C 1 equipo
4 Mechero 10 piezas
INSUMOS
Número y grupo de
40
1 26 g estudiantes
Agar Infusión Cerebro Corazón
2 Agar 20,8 g
3 Suero de conejo 10 ml

Cultivos
• Es necesario realizar controles al menos 2 veces por semana para ver si existe desarrollo micológico

7. CUESTIONARIO.-
1. Indique las especies que comprenden los dermatofitos

2. Indique las pruebas fisiológicas para la diferenciación de las especies de los dermatofitos
3. Indique las causas predisponentes para dermatofitosis
41
Práctica No. 17
IDENTIFICACIÓN DE HONGOS MICELIALES

Los hongos suelen definirse como organismos eucariontes sin clorofila y por lo tanto heterótrofos, uní o
multicelulares, con paredes celulares que está compuesta fundamentalmente por polisacáridos y por
diversas proteínas.
Los polisacárido más importantes son la quitina (polímero de n-acetil glucosamina), el manano (polímero
demanosa) y el glucano (polímero de glucosa).
Los hongos presentan básicamente dos tipos de morfologías: una multicelular denominada filamentosa y
otra unicelular denominada levaduriforme.
Los hongos filamentosos (miceliares o mohos), representan el crecimiento más típico de los hongos
microscópicos.
En medios de cultivo sólido y también sobre cualquier superficie en la que se desarrollen, por ejemplo frutas
u otros alimentos, producen colonias algodonosas o pulverulentas que son muy característicos
2.- COMPETENCIAS.-
Aplica el procedimiento para la identificación de una especie de hongo filamentoso en base a las
características de crecimiento con la finalidad de emitir un informe para el médico y emitir un informe.
Número y grupo de
Estufa de cultivo a 28 C° , 35 °C 1 grupo de 20
1 y 37 ºC 1 equipo estudiantes
2 Mechero 6 piezas
3 Marcador de vidrio 10 piezas
4 Asa bacteriológica 20 Piezas
7 Cajas petri 20 piezas
8 Matraz Erlenmayer 2 piezas
42
INSUMOS
Número y grupo de
1 26 g estudiantes

• Cultivo: agar Sabouraund glucosa
La identificación de estos agentes se realiza mediante la observación de las características morfológicas y
fisiológicas de los aislamientos.
A.- Observación macroscópica de mohos:
Determinar: tamaño de la colonia, diámetro- textura, lanosa, flocosa, granulosa, etc, color, escala de
colores- presencia de surcos- exudado- producción de pigmento, etc...
B.- Observación con lupa estereoscópica:
Describir las características del micelio aéreo
C.- Observación microscópica de mohos:

Algunos caracteres microscópicos del micelio fúngico:-
Micelio tabicado, hifas septadas, ramificadas, formando una maraña. Observamos la periferia de la misma
para encontrar conidias (macro y microconidias) o bien algunas estructuras morfológicamente
interesantes para el diagnóstico micológico.

7. CUESTIONARIO.-
1. Indique las pruebas morfológicas para la identificación de hongos miceliales
2. Cuáles son las pruebas fisiológicas que se utilizan para hongos miceliales
43
44

Re 10 Lab 319 Micologia v1

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GUIA DE PRÁCTICA CIENCIAS DE LA SALUD QUIMICA

Código de registro: RE-10-LAB-319 Versión 1.0

1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.-

Recomendaciones generales para aplicar las buenas prácticas en el laboratorio:

Manejo adecuado de residuos peligrosos biológico infecciosos:

3.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.-

4.- TECNICA O PROCEDIMIENTO.-

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.- 100 minutos

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS.-

RECOGIDA Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.-

3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.-

4.1. EXAMEN DIRECTO:

4.2. ESTUDIO CON LUZ DE WOOD.

Morfología macroscópica.- Se deben estudiar las características siguientes:

Morfología microscópica.- Pueden utilizarse los métodos que siguen:

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS.-

EXAMEN POR MICROSCOPIA DIRECTA

1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.-

4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO.-

4.1. Examen micológico de uñas.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.- 100 minutos

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS.-

MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS PARA AISLAR E IDENTIFICAR AGENTES MICÓTICOS

1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.- El objetivo fundamental de la utilización de medios de

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.- 100 minutos

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS.-

MÉTODOS ESTANDARIZADOS POR CLSI PARA EL ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD A

1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.-

A.- Microdilución en caldo (CLSI y EUCAST).-

El año 2008 se conoció la última actualización, el M27-A3.

B.- Métodos de difusión en agar.

3.1 Medios de cultivo:

4.- TECNICA O PROCEDIMIENTO.-

Métodos de difusión en agar

Lectura e interpretación de los resultados:

Interpretación de los resultados:

Cándida krusei ATCC 6258 y Cándida parapsilosis ATCC 22019

ATB F3: Antifúngico CIM μg/ml

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.- 100 minutos

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS.-

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS SUPERFICIALES

1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.-

El diagnóstico de las micosis superficiales se basa en el hallazgo de hifas o levaduras

3.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.-

4.- TECNICA O PROCEDIMIENTO.-

“Se observan hifas hialinas tabicadas y/o ramificadas”.

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS.-

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS DE TRACTO RESPIRATÓRIO INFERIOR

1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.-

3.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.-

4.- TECNICA O PROCEDIMIENTO.-

A. ESPUTO –ASPIRADO TRAQUEAL.

B.-LAVADO BRONCOALAVEOLAR (BAL), MiniBAL y LAVADO BRONQUIAL (LB)

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.- 100 minutos

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS.-

2. Realice un informe del examen microscópico con coloración de Giemsa

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS DE SANGRE, LÍQUIDOS ESTÉRILES Y TEJIDOS

El diagnóstico de micosis en LCR se basa en el hallazgo de levaduras características, en el examen

Desarrolla el procedimiento a seguir para el cultivo de hongos presentes en muestras de sangre.

4.- TECNICA O PROCEDIMIENTO.-

Examen directo microscópico.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.- 100 minutos

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS.-