PREGUNTAS DE LA GUIA DE LABORATORIO

Practica 1
Normas generales y conocimiento del laboratorio de
microbiología
1. Indique si las siguientes afirmaciones son falsas o verdaderas.
Todo el material de desecho de laboratorio se deposita en una sola caneca.
SI ___ NO _x__
No colocar objetos personales sobre los mesones.
SI _x__ NO ___
Los implementos de protección personal como guantes, tapabocas pueden
ser reutilizables siempre y cuando no se utilicen sustancias altamente
contaminantes.
SI ___ NO __x_
No hablar mientras se esté realizando un procedimiento de siembra o
cultivos.
SI _x__ NO ___
2. Cuáles son las normas generales de utilización de equipos y especifique la
importancia.
3. Qué son agentes biológicos, microorganismos y cultivos celulares.
Agentes biológicos: microorganismos con inclusión de los genéticamente
modificados cultivos celulares y endoparásitos humanos susceptibles de
originar cualquier tipo de infección alergia o toxicidad.
Microorganismos: toda entidad microbiológica, celular o no, capaz de
reproducirse o de transferir material genético.
Cultivos celulares: el resultado del crecimiento in vitro de células
obtenidas de organismos multicelulares.
4. Para qué se utiliza la autoclave.
El autoclave se utiliza para la esterilización y desinfección del material del
laboratorio.
5. Enumere cinco normas y recomendaciones de laboratorio.
Normas Recomendaciones
1. __________________________ 1. No se permitirá comer, beber, fumar o
maquillarse

2. __________________________ 2. No se permitirá correr en los laboratorios.

3. __________________________ 3 Las manos deben lavarse cuidadosamente
después de cualquier manipulación de laboratorio y antes de retirarse del mismo.
 4. __________________________ 4. Utilice los recipientes adecuados para depositar
los residuos peligrosos biológicos infecciosos que se generen en la realización de la práctica.

5. __________________________ 5. Cuando se manipulen microorganismos evite

hablar

6. Explique el procedimiento correcto para trabajar en una cámara de flujo

laminar.
Dentro de estas cabinas o campanas se trabaja con obleas de semiconductor,
cultivos celulares o cualquier otro sistema que deba mantenerse limpio y deba
evitarse la contaminación con partículas minúsculas. Estas cabinas están
diseñadas para proporcionar un aire limpio y constante a una velocidad de
paso de aire de 0,3 a 0,5 metros por segundo para así barrer la superficie de la
zona de trabajo y evitar la suspensión de partículas así como una posible
contaminación de las muestras Las cabinas de flujo laminar pueden tener una
lámpara de rayos ultravioleta-C con acción germicida para esterilizar el recinto
y su contenido, cuando no se utiliza. Es importante apagar la lámpara durante
la utilización de la cabina, ya que rápidamente se producirían quemaduras de
sol en la piel expuesta, y también puede causar cataratas oculares.

Practica 2
Guía de microscopio
1. Qué tipos de microscopios existen y cuál es su uso (por lo menos cuatro
microscopios diferentes).
Microscopio óptico
En el microscopio óptico la muestra es iluminada mediante luz visible.
Esto significa que existe un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa
misma luz es conducida a través del objetivo y del ocular hasta llegar a
formar la imagen en el ojo del observador. Este es el tipo de microscopio
más habitual pero su resolución está limitada por la difracción de la luz.
El aumento máximo que se puede obtener con este tipo de microscopio
alcanza alrededor de 1500x.
 Microscopio electrónico
En el microscopio electrónico la muestra no es iluminada con luz sino
que se utilizan electrones. Los electrones impactan contra la muestra
 dentro de una cámara de vacío. Existen diferentes tipos de microscopio
electrónico pero su principio de funcionamiento se basa siempre en
capturar los electrones dispersados u omitidos por la muestra y
así poder reconstruir una imagen.
Microscopio de luz polarizada
También conocido como microscopio petrográfico. Este microscopio
es en realidad un tipo de microscopio óptico al que se la han añadido
dos polarizadores. Esto significa que la onda de luz utilizada para
observar la muestra tiene una dirección de oscilación concreta. Este tipo
de microscopio es muy útil para observar estructuras cristalinas de
rocas y minerales.
Microscopio de fluorescencia
Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las
propiedades de fluorescencia para generar una imagen de la muestra.
Este microscopio permite observar sustancias que emiten luz
propia cuando son iluminadas con una longitud de onda determinada.
Para ello la muestra es habitualmente iluminada con una lámpara
xenón o con una lámpara de vapor de mercurio. Estos microscopios
incorporan además filtros de luz para aislar la luz correspondiente a la
muestra.

2. Elabora un dibujo del microscopio óptico y señala todas sus partes.

3. Elabora un cuadro donde coloques recomendaciones para el buen

cuidado del microscopio incluyendo el mantenimiento y las medidas de
precaución para su conservación.
Recomendaciones Mantenimiento
 4. Dibuja en el cuaderno todos los enfoques realizados con los diferentes
objetivos y anota tus propias conclusiones.
5. Si una bacteria mide 0.3 micras, de que tamaño se observa al enfocar
con cada uno de los objetivos.

Practica 3
Métodos de siembra
1. Qué es un cultivo axénico
Un cultivo puro o axénico es aquel que contiene un solo tipo de
microorganismo. En el cultivo axénico es un grupo de bacterias en cultivo,
pero sin control, y en el cultivo puro, se lleva un control de reproducción
para que se conserve sus características genéticas puras.
2. Qué es un cultivo diauxico.
El crecimiento diaúxico es un tipo crecimiento microbiano bifásico que tiene
lugar cuando hay presentes dos sustratos diferentes que pueden ser
utilizados como fuente de carbono. En este tipo de crecimiento microbiano
se observa una curva de crecimiento bifásica debido a la utilización
secuencial de distintas fuentes de carbono.
3. Qué es un inóculo microbiano.
Un inoculo microbiano es una preparación solida o líquida la cual contiene
una gran cantidad de microorganismos, como bacterias y hongos. Estos
microorganismos se encuentran activados, es decir son viables y están
listos para ser, como su nombre lo dice, inoculados en un medio de cultivo
o en un biorreactor.
4. Escriba tres posibles causas de contaminación de un cultivo.
a. No trabajar dentro de un radio de un mechero bunsen o de una
campana de flujo laminar.
b. No flamear adecuadamente el asa y la pipeta Pasteur
c. No tener los implementos necesarios para la practica
5. Cuándo se utiliza la siembra masiva y cuándo por agotamiento.
Las siembras masivas se utilizan cuando queremos abarcar toda la caja
Petri con las colonias mientras que por agotamiento las utilizamos cuando
queremos aislar las colonias.

Practica 4
Coloración de Gram
1. Cómo esta compuesta la estructura química de la pared celular de las
bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Esto tiene que ver con la capa externa de la célula de las bacterias gram-
positivas, las cuales tienen una gruesa capa de peptidoglicano, que
 absorbe la tinción de Gram. Las bacterias Gram-negativas tienen una
bicapa lipídica gruesa en la parte exterior, que es selectivamente
permeable, no todo puede pasan a través de ella, y una de esas cosas es la
tinción de Gram. Las bacterias gram-positivas (ya que las cosas pueden
pasar a través de ella con facilidad) son mucho más susceptibles a los
antibióticos que las bacterias gram-negativas
2. Cuál es la acción de cada uno de los compuestos que se utilizan en la
coloración de Gram.
Violeta de Hensiana: se pega a las paredes de las bacterias que contienen
peptidoglicanos es mas a fin con las bacterias gran positivas
Lugol: actúa como mordiente
Alcohol de acetona: decolorar la pared
Colorante de safranina: nos baja el contraste para las bacterias gran
negativas
3. Si usted hiciera la coloración de gram por pasos y mirara al microscopio en
cada paso, qué observaría en una bacteria gram positiva y qué en una
gram negativa. Cuáles son las morfologías clásicas en las bacterias.
Las bacterias Gram positivas, también llamadas bacilos gram
positivos (forma de barra) o cocos gram positivos (de forma esférica), se
caracterizan por mostrar un color violeta o azul cuando se les aplica la
prueba de coloración o tinción de Gram. Esto se debe a que, no tienen
membrana celular exterior, sino que en su lugar, contienen una pared
de peptidoglucano (también llamado peptidoglicano), un exoesqueleto que
da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la
bacteria y que es responsable de que la coloración violeta se mantenga.
Las bacterias gram negativas, también llamados bacilos gram
negativos (forma de vara o barra) o cocos gram negativos (las de forma
esférica) son aquellas que se caracterizan porque no se tiñen de azul
oscuro o de violeta una vez que se les aplica la prueba de coloración
o tinción de Gram sino que lo hacen de un color rosado tenue. Esto se debe
a que, tienen una membrana celular exterior, es decir, presentan una doble
membrana celular (una es externa y la otra citoplasmática) lo que refleja un
tipo natural de organización bacteriana. Las bacterias gram negativas
poseen espacio periplasmático es decir, un espacio entre la superficie
externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana
externa.

Practica 5
Medios de cultivo
1. Qué es un cepario y cómo se debe mantener
Un cepario es una colección de especies de microorganismos que se
mantienen en el laboratorio, por diversos métodos de conservación, durante
 un tiempo determinado, un cepario es necesario conservarlas por distintas
técnicas que ayuden a prevenir algún posible cambio metabólico o genético
manteniendo así las características de cada cepa
2. Describa dos métodos de conservación de cepas bacterianas
CONSERVACIÓN A CORTO PLAZO (15-20 DIAS): Se basa en transferir
el cultivo del medio seco a uno fresco proporcionándole las condiciones
óptimas de crecimiento, lo que condiciona el elevado riesgo de
contaminación y variabilidad de las características de las cepas, las cuales
constituyen sus principales desventajas. El método de resiembra en serie
en tubos inclinados y en medio líquido en refrigeración tiene una duración
de 15 a 20 días de almacenamiento
CONSERVACIÓN A MEDIANO PLAZO (Dos-Cinco Años): A mediano
plazo, es el término que agrupa las técnicas con las que se logra mantener
la viabilidad de los cultivos entre dos y cinco años. Se destacan en este
grupo la desecación en diferentes soportes (arena estéril, sílica gel, perlas
de vidrio, esferas de plástico o papel filtro) donde la paralización del
crecimiento se produce por eliminación del agua disponible así como el
almacenamiento en suelo estéril, parafina líquida y la suspensión en agua
estéril (destilada o de mar), métodos bien documentados en especial para
los hongos . Para este tipo de conservación se utiliza un soporte sólido para
atenuar el metabolismo.
3. Enuncie dos medios de cultivo selectivos y dos medios de cultivo
diferenciales.
Medios Selectivos: Son los medios utilizados para favorecer el crecimientos de
ciertas bacterias contenidas en una población microbiana. El fundamento de estos
medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población
microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se
utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el resto de entero
bacterias.
Medios Diferenciales: se utilizan para poner en evidencia
características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies.
La adición de un azúcar fermentable o sustrato metabolizable se utilizan
para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite
distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo
hacen. También lo son el C.L.E.D (Agar cistina-lactosa deficiente en
electrólitos – lactosa+/lactosa -), el agar sangre (tipo hemólisis), el SS
(Salmonella Shigella Agar que es doblemente diferencial) etc.
4. Cómo se reactivan las cepas liofilizadas que se consiguen comercialmente.
 La liofilización es la forma de conservación a largo plazo más utilizada por
las colecciones de cultivo. En este proceso las células se someten primero
a un proceso de congelación y a una posterior sublimación en condiciones
de vacío, quedando un material poroso de fácil rehidratación.
5. Cómo se transportan las cepas bacterianas.
Almacenan temporalmente los especímenes que se transportan al
laboratorio para su cultivo.
Mantienen la viabilidad de todos los organismos presentes en la muestra
sin alterar su composición.
Mantienen regulada la falta de carbono, nitrógeno, y factores de crecimiento
orgánico con el fin de evitar la multiplicación microbiana.
Se mantiene libre de oxígeno molecular para el mantenimiento.