UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMON

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICAS

CARRERA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA

Trabajo
Práctico
Asignatura: Biología y Genética.
Licenciado: Luis Fernando Amaya Encinas
Integrantes: Arispe Hinojosa Caterina Sol
Bustamante López Dayana Venecia
García Rivera Anahí Paola
Hidalgo Gonzales Jhoselin
Nava Rocha Lizbeth
Niño de Guzmán Borda Ninfa
Grupo: 0/02
Año: 2021

Cochabamba – Bolivia
 Cuestionario
1.DESCRIBA BREVEMENTE LAS CARACTERÍSTICAS Y USOS DEL
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA.

El fenómeno de fluorescencia se debe cuando unas sustancias son excitadas por ciertas longitudes
de onda, algunas sustancias absorben energía y emiten luz de mayor longitud de onda, en
microscopia se utiliza esta fluorescencia para detectar sustancias con autofluorestacion.

Algunos compuestos fluorescentes como vitamina A, riboflavina (vitamina B2) y las porfirinas son
constituyentes normales de las células que como consecuencia pueden ser identificadas y
localizadas por el microscopio de fluorescencia.

El principal uso del microscopio de fluorescencia se produce en combinación con métodos

inmunológicos, en las técnicas inmunocitoquímicas que utilizan anticuerpos conjugados con
compuestos fluorescentes.

Bibiografia: biología celular y molecular 9na edición junqueira carneiro.

 2. DESCRIBA BREVEMENTE LAS CARACTERISTICAS Y USOS DEL
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO

En el microscopio electrónico de barrido se utiliza electrones en lugar de luz para formar imágenes
topográficas tridimensionales de los materiales sujetos al estudio.

Para lograrlo, el equipo cuenta con un dispositivo (filamento) que genera un haz de electrones para
iluminar la muestra y con diferentes detectores se recogen después los electrones generados de la
interacción con la superficie de la misma para crear una imagen que refleja las características
superficiales de la misma, pudiendo proporcionar información de las formas, texturas y
composición química de sus constituyentes.

Detector de electrones secundarios (SE): es el que ofrece la típica imagen en blanco y negro de la
topografía de la superficie examinada. Es la señal más adecuada para la observación de la muestra
por ser la de mayor resolución.

Detector de electrones retrodispersados (BSE): también ofrece una imagen de superficie, aunque de
menor resolución. Su ventaja consiste en que es sensible a las variaciones en el número atómico de
los elementos presentes en la superficie. Si tenemos una superficie totalmente lisa observaremos
distintos tonos de gris en función de que existan varias fases con distintos elementos.

Detector de rayos X (EDS): es el que recibe los rayos X procedentes de cada uno de los puntos de la
superficie sobre los que pasa el haz de electrones. Como la energía de cada rayo X es característica
de cada elemento, podemos obtener información analítica cualitativa y cuantitativa de áreas del
tamaño que deseemos de la superficie. Por ello se conoce esta técnica como Microanálisis por EDS.

Detector de rayos X (WDS): similar al anterior, pero en vez de recibir y procesar la energía de todos
los rayos X a la vez, únicamente se mide la señal que genera un solo elemento. Esto hace que esta
técnica, aunque más lenta, sea mucho más sensible y precisa que la de EDS. Realmente son
complementarias, pues el EDS ofrece una buena información de todos los elementos presentes en la
superficie de la muestra y el WDS es capaz de resolver los picos de elementos cuyas energías de
emisión estén muy cercanas, así como detectar concentraciones mucho más pequeñas de cualquier
elemento y, sobre todo, de los ligeros.

Detector de electrones retrodispersados difractados (BSED): en este caso sólo se reciben aquellos
electrones difractados por la superficie de la muestra que cumplen la ley de Bragg en el punto que
son generados, es decir, se trata de una señal que nos aporta información de la estructura cristalina
de la muestra. Si conocemos previamente la o las fases cristalinas presentes en nuestra muestra, el
sistema es capaz de procesar la señal que recibe en forma de “líneas de Kikuchi” y ofrecer una
variada información cristalográfica: orientación de granos, orientaciones relativas entre ellos,
textura, identificación de fases, evaluación de tensión, fronteras de grano, tamaño de grano…

Bibliografía
http://www.scai.uma.es/areas/micr/sem/sem.html

http://www.upv.es/entidades/SME/info/753120normalc.html

3. DESCRIBA BREVEMENTE LAS CARACTERISTICAS Y USOS DEL

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN (TEM)

Los microscopios electrónicos más sencillos constan de dos lentes formadoras de la imagen de
forma muy parecida a los microscopios ópticos convencionales. La iluminación proviene de un
cañón de electrones emitidos por un filamento de W o LaB 6. Los electrones son acelerados al
aplicar un potencial negativo (100 kV - 1000 kV) y focalizados mediante dos lentes condensadoras
sobre una muestra delgada, transparente a los electrones.

Después de pasar a través de la muestra los electrones son recogidos y focalizados por el lente
objetivo dentro de una imagen intermedia ampliada. La imagen es ampliada aún más gracias a las
lentes proyectoras, las cuales controlan la ampliación de la imagen en la pantalla fluorescente. La
imagen final se proyecta sobre una pantalla fluorescente o una película fotográfica.

Un TEM de dos lentes puede llegar a aumentar la imagen alrededor de 1000 veces. El poder de
resolución podría llegar hasta 5 nm siempre y cuando se consiguiera aumentos de ´50.000  lo que es
posible utilizando un vidrio de aumento sobre la imagen fluorescente en el microscopio, o un
incremento fotográfico de la imagen registrada en la película.

  
Modos de formación de la imagen: existen diferentes modos de formación de la imagen en un
microscopio de transmisión: si la imagen se forma a partir del haz transmitido, que no ha sufrido
dispersión, entonces la imagen del objeto es oscura sobre un fondo brillante. Si, por el contrario, se
utilizan los electrones dispersados en este caso la imagen aparece brillante sobre un fondo oscuro.

Por ello estas dos técnicas se denominan formación de imagen en campo claro y en campo oscuro
respectivamente, la primera es la más utilizada.

 Por otra parte con este microscopio se puede obtener un diagrama de difracción de la muestra, lo
que nos aporta una valiosa información sobre la estructura cristalina de la misma.

    

  

La posibilidad de combinar la difracción de

electrones con los distintos modos de formación de
la imagen hace del microscopio de transmisión una
de la mejores herramientas en el estudio de la red cristalina y sus defectos. Se utiliza
fundamentalmente en dos campos: el de las Ciencias de Materiales en el que analizan
semiconductores, metales, aleaciones, aislantes, cerámicas, etc. y en el campo de la Biología en el
que se estudian bacterias, virus, macromoléculas, tejidos, etc.
1. Sección de fibras de asbesto
2. Precipitación doble de Al

3. Defectos en usemiconductor
4. Defectos reticulares

La microscopia electrónica de
transmisión (TEM) es una técnica usada para observar las características de especímenes muy
pequeños. La tecnología utiliza un haz de electrones acelerado, que pasa a través de un espécimen
muy fino para habilitar a un científico las características de la observación tales como estructura y
morfología.

TEM se puede utilizar para observar partículas en un

aumento y una resolución mucho más altos
que puede ser logrado con un microscopio liviano porque la longitud de onda de un electrón es
mucho más corta que la de un fotón. También ofrece imágenes más de alta resolución que un
microscopio electrónico de exploración, que se puede utilizar solamente para explorar y para ver
la superficie de una muestra. Usando TEM, los científicos pueden ser utilizados para ver
especímenes al nivel atómico, que es menos que 1nm.
Porqué se utiliza la microscopia electrónica de transmisión

Esta tecnología puede informarnos sobre la estructura, la cristalización, la morfología y la tensión

de una substancia mientras que la microscopia electrónica de exploración puede ofrecer solamente
la información sobre la morfología de un espécimen. Sin embargo, TEM requiere los especímenes
muy finos que son semitransparentes a los electrones, que pueden significar que preparación de la
muestra dura.

Cómo un microscopio electrónico de la transmisión funciona

En un microscopio electrónico de la transmisión, una pistola de electrón, fuegos un haz de

electrones. La pistola acelera los electrones extremadamente a las velocidades usando bobinas
electromágneticas y a los voltajes hasta de vario millón de voltios.

El haz electrónico es enfocado en un haz fino, pequeño por una lente de condensador, que tiene una
alta apertura que elimine electrones del alto ángulo. Alcanzando su velocidad más alta, los
electrones empinadura a través del espécimen ultrafino y las partes del haz se transmiten
dependiendo de cómo es transparente la muestra está a los electrones.

La imagen producida por el TEM, llamado un micrográfo, se considera a través de la proyección

sobre una pantalla que sea fosforescente. Cuando es irradiada por el haz electrónico, esta pantalla
emite los fotones. Una cámara de la película colocada por debajo la pantalla se puede utilizar para
capturar la imagen o la captura digital se puede lograr con una cámara del dispositivo (CCD)
acoplado de carga eléctrica.

Referencias

1. Wikipedia en microscopia electrónica de transmisión: 

https://en.wikipedia.org/wiki/Transmission_electron_microscopy#Three-dimensional_imaging
2. Difieren en las diferencias entre la microscopia de la emisión de la transmisión y la microscopia electrónica de
la exploración: http://theydiffer.com/difference-between-scanning-and-transmission-electron-microscope/
3. Sobre en la historia del microscopio: http://inventors.about.com/od/mstartinventions/a/microscope_2.htm

Further Reading

 All Comet Assay Content

 What is the Comet Assay?
  Comet Assay Applications
 All Microscopy Content
 Advances in Fluorescence Microscopy

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Last Updated: Jan 25, 2019

4.DESCRIBA BREVEMENTE LAS CARACTERISTICAS Y USOS DEL

ESTEREOMICROSCOPIO

¿Qué es un estereomicroscopio?
Un estereomicroscopio o lupa binocular es un instrumento óptico de aumento (una lupa), el cual
tiene la particularidad que permite un visionado en 3D, estereoscópico o con relieve, una utilidad
muy importante el equipo que se utiliza para el estudio de craqueladuras, integración de la firma,
pinceladas, obtención de micromuestras e, incluso, para observar si un pigmento es de naturaleza
mineral.

El microscopio estereoscópico es un tipo de microscopio óptico que permite observar la muestra

generando una imagen en tres dimensiones. Esta es su característica principal que lo distingue del
resto de microscopios donde la muestra siempre es observada en dos dimensiones.
Los microscopios estereoscópicos son en general microscopios de luz reflejada. Es decir, un foco
ilumina la muestra y la luz reflejada por la muestra es observada a través de los objetivos y
oculares. Este es el motivo por el cual generalmente los microscopios estereoscópicos tampoco
tienen ni condensador ni diafragma.

Aumento del microscopio estereoscópico

Los microscopios estereoscópicos más habituales tienen objetivos de 2 o 4 aumentos, combinados

con lentes oculares de entre 5 y 20 aumentos.
En consecuencia, el aumento total está comprendido entre 10 y 80 aumentos.
Es verdad que existen microscopios estereoscópicos que pueden proporcionar un aumento de hasta
300x.
Sin embargo, esto es poco habitual ya que tampoco existen muchas aplicaciones para las cuales sea
necesario este poder de aumento en un microscopio estereoscópico.
Características
Permiten una distancia de trabajo relativamente grande si la comparamos con los microscopios. Esta
distancia es superior a los 2 o 3cm y permite la observación de muestras de tamaño más grande.

Existen varios tipos de iluminación, entre los cuales destacamos la de tungsteno, la halógena y la
luz LED blanca, que actualmente es la más común.
Tipos de microscopio estereoscópico

Existen dos tipos de estereomicroscopios, los cuales se diferencian según su óptica interna, y esta,
por su parte, define, en cierta forma, el rango de aplicaciones de cada uno de estos equipos.

Los de tipo Greenough

Poseen dos sistemas ópticos internos idénticos y
simétricos. Son equipos más sencillos que se
emplean en tareas que no requieren muchas
exigencias, como en los casos de inspección de
circuitos, disección de especímenes biológicos o
rutinarias similares.
Los de tipo Greenough poseen dos sistemas
ópticos internos idénticos y simétricos. Son
equipos más sencillos que se emplean en tareas
que no requieren muchas exigencias, como en
los casos de inspección de circuitos, disección de
especímenes biológicos o rutinarias similares.
Los de tipo Galileo o CMO (Comon Main
Objective)
Son equipos corregidos al infinito que cuentan
con un sistema de prismas que invierten la
imagen; tienen una mayor capacidad de
captación de la luz y, a menudo, corrigen la
aberración óptica. Además, permiten la adición
de accesorios, como tubos de dibujo,
multiobservadores, e incluso, elementos para la
visualización de muestras fluorescentes.

Bibliografia
http://www.redbionova.com/observando-al-mas-sencillo-todos-estereomicroscopio/
https://www.raig.com/blog/estereomicroscopios-o-lupas-binoculares-40/
https://www.upc.edu/sct/es/equip/497/estereomicroscopio.html
https://www.mundomicroscopio.com/microscopio-estereoscopico/

5.DESCRIBA BREVEMENTE LAS CARACTERISTICAS DEL MICROSCOPIO

DE CAMPO OSCURO

El Microscopio de campo oscuro esta constituido por un Microscopio óptico al cual se le

acondiciona un condensador especial, este tiene como fin producir una disfracen de los rayos
luminosos enviándolos lateralmente sobre el objeto en forma de un cono luminosos, y de esta forma
tampoco penetran directamente al objetivo.

Condensador de campo oscuro

Existen dos clases de condesador de campo oscuro

Cardiode

Paraboloide.

Ambos son utilizados con el mismo fin, pero el cardiode tiene mayor aplicabilidad en la
investigación con Treponemas.

Para que el efecto de campo oscuro se logre , la apertura numérica del condensador debe ser mayor
que la de el objetivo, lo cual ocurre con los objetivos de pequeño y gran aumento no así con los de
inmersión los cuales deberán adicionarse de un diagrama de suspensión para la reducir la apertura
numérica.

Resolución de microscopía en campo oscuro

Se llama poder de resolución de un sistema óptico a la capacidad de separar detalles y es expresado

por el límite de resolución que es la menor distancia que existe entre dos puntos para que estos
aparezcan individualizados.

Lo que determina la riqueza del detalle de la imagen provista por un sistema óptico es su límite de
resolución y no su poder de aumentar el tamaño de los objetos.

El límite de resolución depende de la apertura numérica (AN) del objetivo y de la longitud de onda
de la luz utilizada.
En la microscopía de campo oscuro la AN no debe ser superior a 1.0 ya que el condensador debe
tener siempre una apertura numérica superior a este valor. El límite de resolución del objetivo esta
dado por la siguiente fórmula:

LR = k x Long. onda AN * k = Constante ( 0.61)

Log. onda = 0.55 Se toma la longitud de onda de la franja verde –

Amarilla por ser el ojo humano más sensible a estos colores que a otros.

AN = Apertura numérica no superior a 1.0

Métodos para observación en fondo oscuro

Existen diferentes métodos para observar un objeto sobre un fondo oscuro es decir, utilizando
únicamente la luz difractada por él.

Observación incidente o por reflexión

La observación por reflexión con iluminación oblicua o anular es la más frecuentemente utilizada
con los microscopios estereoscopios o lupas Binoculares. Generalmente no nos damos cuenta de
que observamos en fondo oscuro cuando el material ocupa todo el campo visual.

Observación por transmisión (Fondo Negro Central)

La observación por transmisión con una pantalla central necesita la utilización de un objetivo con
pantalla interna de Spierer; con una pantalla anular , la de Wilska: anoptral, versión original y no la
fabricada industrialmente que es un contraste de fase negativa a fuerte absorción.

Observación por transmisión (Fondo negro Anular)La observación con iluminación anular de
abertura superior a la del objetivo, es la única que, en la práctica corriente , se denomina campo
oscuro. Debe indicarse que difícilmente puede utilizarse objetivos de gran aumento, de apertura
numérica superior a 1.0. dado que el condensador debe presentar una abertura superior a esta. Debe
entonces practicarse la inmersión, evitando las burbujas de aire.

Observación birrefringente (Polarización)

La observación de un objeto birrefringente entre nicoles cruzados da una imagen sobre fondo negro
de naturaleza muy particular.

Observación haz perpendicular (Fondo Negro ultramicrosopico)La observación con un haz

perpendicular a la dirección de la observación según Ziedentopf y Szimondy da informaciones
sobre la orientación de las partículas observadas.

Naturaleza y estructura de la imagen en fondo oscuro

Las imágenes en auténtico fondo negro son remarcables por un efecto de borde, con numerosas
franjas de difracciòn muy brillantes si el objeto es refringente. Los planos, en el centro de una
estructura parecen ópticamente vacíos. Es por ello que deben adoptarse grandes precauciones en el
momento de interpretar las imágenes. Dado que la imagen solo se forma con las luz difractada,
siempre más débil que la luz directa deben formarse fuentes lumínicas muy intensas, lo que no
siempre es fácil sobre todo cuando los objetos son vivos y, por consiguiente, sensibles a fuertes
iluminaciones.

El microscopio de campo oscuro fue diseñado por el Físico

Ricgard Zsigmond en 1903. Este es un microscopio óptico
estándar de laboratorio en el que ciertas técnicas ópticas son
utilizadas para transformar la forma en la que la luz pasa a través
de la muestra que se observa.

¿Cuál es la función del microscopio de campo oscuro?

La microscopia de campo oscuro es una técnica de contraste donde solo la luz difractada desde el
espécimen se usa para formar la imagen. El espécimen aparece brillante contra un fondo oscuro. ...
Cuando no hay muestra en la platina del microscopio la observación es completamente oscura.

El microscopio de campo oscuro es una modificación al sistema de campo claro, que consiste en
bloquear los rayos centrales que alcanzan al condensador, por medio de un disco o algún otro tipo
de dispositivo, de manera tal que el cono iluminador es un cono hueco de luz, con mayor apertura
numérica que la del objetivo. Esta forma de iluminación permite que sólo aquellos rayos que han
sido desviados por la muestra observada, sean captados por el objetivo. Es decir, la imagen
microscópica está formada en este caso sólo por rayos difractados y constituye un sistema cuyo
funcionamiento se basa en el fenómeno de Tyndall.

https://www.ecured.cu/images/1/18/Microscopio_c.jpg

https://www.ecured.cu/Microscopio_de_campo_oscuro