Práctica de Microscopía

Objetivo
Esta práctica tiene como objetivo poder conocer la relevancia de la microscopía dentro de la
microbiología, profundizando así desde la historia de la microscopía hasta la actualidad,
mencionando lo que es el microscopio, así como poder identificar cuatro diferentes tipos de
microscopios.

También conoceremos las partes del microscopio óptico junto con la descripción de cada uno, y para
cerrar con broche de oro podremos identificar 10 imágenes con bacterias diferentes.

Introducción
Históricamente, los mayores avances de la microbiología han coincidido con el desarrollo de nuevas
herramientas y mejora de las tradicionales existentes para el estudio de los microorganismos. El
microscopio es el instrumento más antiguo y más básico para el estudio de las estructuras microbianas.

Existen muchos tipos de microscopios, y algunos de ellos son extremadamente potentes. Por tanto,
para el estudio de las estructuras celulares revisaremos algunas de las herramientas habituales para
visualizar las células con el fin de entender cómo funcionan y qué pueden enseñarnos.

Espero que sea de agrado del lector.

Materiales a utilizar:
• Laptop.
• Microsoft Word.
• Artículos Médicos y de microbiología.
• Libros como: Brock, biología de los microorganismos, y Sherris, Microbiología Médica.
 Metodología.

Microscopía
El estudio detallado de los componentes de células y tejidos animales o vegetales, por el
tamaño que poseen, requiere el uso de instrumentos que permitan ampliar la imagen de las
estructuras que los constituyen. El instrumento que fue empleado por los primeros biólogos
para estudiar la célula y los tejidos, es el microscopio. Su nombre deriva etimológicamente de
dos raíces griegas: mikrós (pequeño) y skopéoo (observar). El microscopio es un instrumento
que sirve para observar objetos o estructuras pequeñas.
Existen dos tipos de microscopios que emplean la luz como fuente de energía para formar
imágenes aumentadas y detalladas de objetos que a simple vista no es posible observar:
a) Microscopio fotónico simple o lupa.
b) Microscopio fotónico compuesto.
El microscopio simple o lupa es un instrumento de amplificación de imágenes que consiste
en la utilización de una o más lentes convergentes en un solo sistema óptico.
Dependiendo de la curvatura de la superficie de las lentes, las lupas pueden ampliar las
imágenes de los objetos hasta 50 veces. Forman una imagen de mayor tamaño, derecha y
virtual.
Los microscopios fotónicos compuestos que se
emplean actualmente tienen sus antecesores
en los instrumentos ópticos desarrollados, en
el periodo comprendido de 1590 y 1610, por
Hans y Zacarías Janssen; quienes mediante el
tallado de lentes biconvexas construyeron los
primeros microscopios compuestos.
El microscopio es el instrumento más
utilizado en el estudio de células y tejidos. Se
fue perfeccionando, tanto en su parte óptica
como en su parte mecánica, gracias a los adelantos tecnológicos aplicados a los componentes.
Son compuestos porque la imagen se forma mediante la utilización de tres sistemas de lentes,
cada uno de ellos constituidos por lentes convergentes y divergentes.
Los sistemas de lentes son el condensador, los objetivos y los oculares.
En la actualidad, el microscopio fotónico es un instrumento de uso cotidiano en los
laboratorios de investigación y de diagnóstico, así como en las aulas de enseñanza de
Biología, Embriología, Histología, Microbiología y Patología.
Descubrimientos más relevantes en la historia de la microscopía después de la invención
de Jansen:
 • El naturalista holandés Jan Swammerdam observó insectos con el, descubrió también que la
sangre no es un líquido uniforme rojo, sino que existen corpúsculos que le dan ese color.
• El botánico inglés Nehemiah Grew estudió los órganos de reproducción de las plantas y
descubrió los granos de polen.
• El anatomista holandés Reigner de Graaf realizó estudios en animales describiendo ciertos
elementos del ovario que desde entonces se conocen con el nombre de folículos de Graaf.
• Marcello Malpighi fue uno de los microscopistas más grandes de la historia. Sus primeros
estudios los realizó con pulmones de rana, pudiendo observar en ellos una compleja red de
vasos sanguíneos, demasiado pequeños para ser vistos por separado y muy anastomosados.
Las arterias y las venas se hallaban unidos mediante una red de vasos llamados capilares.
• El científico inglés Robert Hooke realizó uno de los mejores trabajos en esta rama. En 1665
publicó un libro llamado Micrographia en el cual pueden encontrarse algunos de los mejores
dibujos que se hallan hecho de observaciones microscópicas.
• Un comerciante holandés, Anton van Leeuwenhoek usaba lentes simples, que por su reducido
tamaño podían obtenerse de pequeños trozos de cristal perfecto. Puliendo cuidadosamente
dichos fragmentos, logró aumentar un objeto hasta 270 veces sin perjuicio de la nitidez.
Tenía 419 lentes alguna de las cuales eran de cristal de roca y hasta de diamante, en algunos
casos no eran mayores que el tamaño de un alfiler, por lo que sus microscopios tenían un
tamaño diminuto comparados con otros de la misma época.
• El microscopista danés Otto Muller consiguió en 1773 distinguir lo suficientemente bien a
aquellos pequeños seres para clasificarlos en dos tipos: bacilos (que significa “pequeños
vástagos”) y espirilos (por su forma espiral).

Microscopio
El microscopio permite observar lo que es invisible a simple vista. Existen diversos tipos de
microscopios, desde la lupa, formada por una sola lente, hasta el microscopio electrónico. Es
un vocablo que proviene del griego micro, que significa pequeño, y scopein, mirar. Tipos de
microscopio:
Nombre Función ¿Qué podemos observar? Imagen
Microscopio Permite llegar a un La imagen se obtiene a partir de
electrónico de número de aumentos los electrones que han
transmisión mucho mayor, usa atravesado la muestra y que
electrones como posteriormente han impactado
elemento de sobre una placa fotográfica.
visualización. Para conseguir el correcto flujo
El mecanismo de un de electrones por su interior, este
microscopio debe estar al vacío. Los
electrónico de electrones son acelerados hacia
transmisión se basa en la muestra mediante un campo
hacer incidir electrones magnético.
sobre una muestra Cuando inciden sobre esta,
ultrafina. algunos electrones la atravesarán
y otros “rebotarán” y serán
dispersados. Esto da lugar a
imágenes con zonas oscuras
(donde los electrones han
rebotado) y zonas claras (donde
los electrones han atravesado la
muestra), que en su totalidad
conforman una imagen en
blanco y negro de la muestra.
Los microscopios electrónicos
pueden ampliar un objeto hasta
1.000.000 de veces. Esto permite
la visualización de bacterias,
orgánulos, membranas,
estructuras citosólicas,
complejos moleculares de la
matriz extracelular y virus.
Microscopio Generan una imagen La preparación es iluminada
de gracias a las mediante una lámpara xenón o
fluorescencia propiedades de vapor de mercurio, se trabaja
fluorescentes de la con gases.
muestra observada. Estos gases iluminan la muestra
Es muy utilizado en con una longitud de onda muy
microscopía biológica concreta que permite que las
y analítica, pues es una sustancias de la muestra
técnica que otorga gran empiecen a emitir luz propia. Es
sensibilidad y decir, es la propia muestra la que
especificidad. genera luz. No la iluminamos,
incitamos a que ella produzca
luz.
La microscopía de fluorescencia
permite incluso a los usuarios
 determinar la distribución de una
sola especie de molécula, su
cantidad y su ubicación dentro
de una célula.
Microscopio Es un instrumento El microscopio de efecto túnel
de efecto imprescindible en el permite visualizar la estructura
túnel campo de la atómica de las partículas.
nanotecnología. Utilizando principios de la
Pueden ser utilizados mecánica cuántica, estos
para producir cambios microscopios capturan los
en la composición electrones y se logra una imagen
molecular de las de alta resolución en la que cada
sustancias y permite átomo se puede distinguir del
obtener imágenes otro.
tridimensionales
Microscopio Se basa en la colisión Midiendo estos cambios se
electrónico de de electrones sobre la puede obtener toda la
barrido. muestra para lograr la información necesaria para,
visualización, las como si de un mapa se tratara,
partículas impactan hacer una reconstrucción
sobre toda la muestra ampliada de la muestra.
recorriendo distintos permite la observación y
puntos. Como si se caracterización superficial de
tratara de un materiales orgánicos e
escaneado. inorgánicos, dando información
Su funcionamiento se morfológica y de composición
basa en las propiedades química rápida, eficiente y
de los electrones, que simultáneamente del material
después de impactar analizado.
sobre la muestra sufren
cambios: una parte de
su energía inicial se
transforma en rayos X
o en emisión de calor.

Microscopio Óptico
Sistema Mecánico
Parte Función
Pie o base Constituye la base del microscopio y su apoyo principal, puede tener
distintas formas, siendo las más habituales rectangulares y con forma
de Y.
Tubo Forma cilíndrica y por dentro es de color negro para evitar las molestias
del reflejo de la luz. Al final del tubo es donde se colocan los oculares.
Revólver Pieza giratoria en la que se enroscan los objetivos. Cuando giramos este
dispositivo, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en
posición de trabajo. Se le llama revolver por el ruido que hace el piñón
al encajar en un lugar fijo.
Columna o En algunos casos conocida por asa, es la pieza de la parte posterior del
microscopio. Sujeta al tubo en su parte superior y en la parte inferior se
Brazo acopla al pie del aparato.
Platina Es la pieza metálica plana en la que se coloca la muestra a observar.
Tiene un orificio en el eje óptico del tubo que permite que pase el rayo
de luz en dirección a la muestra.
La platina puede ser fija o giratoria. Si es giratoria, mediante tornillos
puede centrarse o moverse con movimientos circulares.
Carro Permite mover la muestra con un movimiento ortogonal, hacia
adelante y atrás, o de derecha a izquierda.
Tornillo El dispositivo enganchado a este tornillo hace que el tubo del
microscopio se deslice verticalmente gracias a un sistema de cremallera.
macrométrico Estos movimientos permiten que se enfoque rápidamente la
preparación.
Tornillo Este mecanismo ayuda a enfocar la muestra con un enfoque exacto y
nítido a través del movimiento casi imperceptible de la platina.
micrométrico Los movimientos son a través de un tambor que tiene divisiones de
0,001 mm. Y que también sirve para medir el grosor de los objetos
acoplados.

Sistema Óptico
Parte Función
Oculares Son los sistemas de lentes más cercanos a la mira del observador. Son
cilindros huecos en la parte superior del microscopio provistos de
lentes convergentes.
Dependiendo de si existe uno o dos oculares, los microscopios
pueden ser monoculares o binoculares
Objetivos Son las lentes que se regulan mediante el revólver. Son un sistema de
lentes convergentes en las que se pueden acoplar varios objetivos.
El acople de los objetivos se realiza de forma creciente según sus
aumentos en el sentido de las agujas del reloj.
Los objetivos llevan su aumento en un lateral y también están
distinguidos por un anillo coloreado. Algunos de los objetivos no
enfocan la preparación en el aire y necesitan utilizarse con aceite de
inmersión.
Condensador Sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra en la muestra proporcionando mayor o menor contraste.
Tiene un regulador para ajustar la condensación a través de un
tornillo. La localización de este tornillo puede variar dependiendo del
modelo de microscopio
 Fuente de La iluminación está constituida por una lámpara halógena.
Dependiendo del tamaño del microscopio puede tener mayor o
iluminación menor voltaje.
Los microscopios pequeños más utilizados en laboratorios tienen un
voltaje de 12 V. Esta iluminación se encuentra en la base del
microscopio. La luz sale de la bombilla y pasa a un reflector que envía
los rayos en dirección a la platina
Diafragma También conocido como iris, se encuentra sobre el reflector de la luz.
A través de este se puede regular la intensidad de la luz abriéndolo o
cerrándolo.
Transformador Necesario para enchufar el microscopio a la corriente eléctrica ya que
la potencia de la bombilla es menor que la corriente eléctrica.

Todas las partes del sistema óptico de los microscopios están formadas por lentes corregidas
para las aberraciones cromáticas y esféricas. Las aberraciones cromáticas se deben a que la
luz está compuesta por radiaciones que sufren una desviación desigual.
Para que no se cambien los colores de la muestra se utilizan lentes acromáticas. Y la
aberración esférica se da porque los rayos que pasan por el extremo convergen en un punto
más cercano, por eso se pone un diafragma para permitir el paso a los rayos en el centro.
 Resultados:

Bacterias vistas a través del microscopio

1. Imágenes al microscopio de campo claro de comunidades de bacterias productoras de
yogur. El conjunto microbiano consta de dos grupos morfológicos: cadenas de cocos,
los estreptococos, y cadenas de bacilos o células individuales, lactobacilos.

2. Imágenes al microscopio de campo claro de bacterias sulfito reductoras de crecimiento

anaeróbico.

3. Imágenes al microscopio de campo claro de cianobacterias (Oscillatoria sp.) en una

muestra de sedimento de acequia.
 4. Imagen al microscopio de campo claro de biodiversidad
morfológica microbiana presente en una gota de agua procedente de
un enriquecimiento con extracto de levadura y carne, de una
muestra de agua de la acequia. La diversidad morfológica
microbiana presente en esta agua estudiada domina los espirilos,
bacilos y cocos.

5. Imágenes al microscopio de campo claro de protozoos ciliados y

cianobacterias. ambién son importantes cuando se enriquece una
muestra de agua con nutrientes. El aumento de las poblaciones
bacterianas como consecuencia de los nutrientes aportados al
sistema determina una explosión de depredadores secundarios, los
protozoos.

6. Ejemplos de cianobacterias filamentosas, en cuyos citoplasmas

podemos contemplar la presencia de vesículas de gas, permitiendo
con ello una localización apical en la columna de agua y
disponiendo con ello una mayor cantidad de oxígeno para
enriquecer su metabolismo aeróbico.

7. Imágenes al microscopio de campo claro de "El universo microbiano" en una gota de

agua
La microscopía de campo oscuro, donde el cierre del diafragma reduciendo con ello el cono
de luz que llega a la preparación, ofrece a los microorganismos la posibilidad de dispersarla,
dando con ello un mayor contraste a la muestra. En estas imágenes puede apreciarse la
presencia de paramecios (protozoos ciliados), cianobacterias (largos filamentos), morfologías
variadas de bacterias (bacilos y espirilos con gran capacidad de movimiento). Aumentando el
objetivo del microscopio a la preparación nos posibilita la observación de amebas y
paramecios de pequeño tamaño, así como morfotipos bacterianos caracterizados como
cadenas de bacilos y espirilos móviles.
 8. Neumococo encapsulado, con la técnica de tinta china modificada.

9. Campylobacter jejuni con flagelos uni y bipolares, con la tinción de Kodaka

10. Corynebacteriun diphtheriae, agente etiológico de la difteria,

en su agrupación característica como letras chinas, con la
tinción de Gram.

Conclusiones.
La microscopía óptica ha jugado un papel preponderante para el desarrollo de diversas áreas
del conocimiento, desde manufactura industrial hasta ciencias de la salud. Esto nos ha
permitido avanzar en el desarrollo tecnológico que disfrutamos hoy en día y a su vez,
incrementar nuestra esperanza de vida, gracias a que es una herramienta fundamental que
permite una observación metódica del entorno celular.
La importancia del microscopio reside en que nos permite ver a las células y ciertas estructuras
intracelulares. También, permite hacer cortes histológicos de tejidos animales o vegetales para
ver su disposición en detalle, caracterizar la epidermis de un animal o de una hoja, y visualizar
un sinnúmero de estructuras más. En la historia de la ciencia, la invención del microscopio
representó un hito de suma importancia.
Bibliografía:
Gajghate, S. (2016) “Introduction to Microscopy”. India: National Institute of Technology Agartala.
Harr, M. (2018) “Different Kinds of Microscopes & Their Uses”. sciencing.com.
Asimov, I. 1997. Historia de la Ciencia II. Ed. Salvat. 731 pág.
• Lozano, V. y Morales, A. 1996. Introducción a la microscopía electrónica.
CoNICET. 246 pág.
Lathrop, K. (s.f.). Light microscopes (Microscopios ópticos). En Ms. Lathrop’s science classes.
http://infohost.nmt.edu/~klathrop/Microscopes.htm.
ATLAS y BAHRTA (1993): Microbial Ecology (3rd edition). Benjamin Cummings Co.(Un buen texto
introductorio para consultar la parte de ecología microbiana).
BROCK, T.D. et al (1997): Biología de los Microorganismos (8ª edición). Edit. Prentice-Hall.