UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE YUCATÁN

CAMPUS DE CIENCIAS EXACTAS

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

MICROBIOLOGÍA
QUINTO SEMESTRE LIQA
UNIDAD I ADA 1
ESTUDIO DE LA ESTRUCTURA MICROBIANA

LOS COCOS:
Arteaga Itzá Francisco Javier
Dajer Peraza Gerardo Jesús
Duarte Chan Gabriela Montserrat
Puerto Anquino Sophia Alejandra

MIÉRCOLES 24 DE AGOSTO DE 2022

 01
MICROSCOPÍA
Definición, importancia, tipos.
 Microscopía
La microscopía es el conjunto de técnicas y métodos
destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su
pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo normal.

Representa un papel importante en el desarrollo de diversas

áreas del conocimiento, desde manufactura industrial hasta
ciencias de la salud, permitiendo avanzar en el desarrollo
tecnológico e incrementando la esperanza de vida.
 Tipos de microscopios
Simple Lupa

Óptico Campo oscuro

Compuesto Contraste de fases

Microscopios Fluorescencia

Barrido

Electrónico Transmisión

Efecto túnel
 02
MICROSCOPÍA ÓPTICA
Definición, características, tipos.
 Microscopía óptica

Los microscopios ópticos se usan para

examinar células relativamente con
poco aumento.

Todos los microscopios utilizan lentes

que amplifican la imagen. Sin
embargo, el factor limitante para ver
objetos pequeños es la resolución.
 Características
El principio de funcionamiento de un microscopio óptico se basa en la
propiedad de algunos materiales que permiten cambiar la dirección de los rayos
de luz.

Se fabrican lentes capaces

QUITAMOS ESTA de hacer converger o divergir los rayos de luz,
dIAPO?
generando así la imagen aumentada a partir de distintas lentes.

La resolución de un microscopio óptico se determina por la apertura

numérica de su sistema de lentes y la longitud de onda de la luz empleada.

Los microscopios modernos son todos compuestos. Es decir, la imagen

aumentada que forma la lente del objetivo es ampliada por una o más lentes
adicionales.
 Tipos: Campo claro
El microscopio ordinario se denomina
microscopio de campo claro. Las
muestras se visualizan con una imagen
oscura frente a un fondo claro.
La muestra presenta pequeñas diferencias
de contraste con el medio que las rodea,
y estas diferencias son debidas a que las
células absorben o dispersan la luz en
distinto grado.
Tipos: Campo claro
Las células vivas no pigmentadas no
son claramente visibles con un
microscopio de campo claro porque
hay poca diferencia entre las células y
el agua.
Por ello, los microorganismos a
menudo se fijan y tiñen antes de su
observación para aumentar el
contraste y crear variaciones de color
entre las estructuras celulares.
 Tipos: Campo oscuro
En este la luz llega a la
muestra únicamente desde los
lados, la única luz que recibe
la lente es la que dispersa la
muestra ya que se enfoca un
cono hueco de luz, de manera
que no penetren en el objetivo
rayos no reflejados y no
refractados.
Tipos: Campo oscuro
El campo que rodea la muestra aparecerá
negro, mientras que el objeto quedará
iluminado intensamente. Tiene una
mejor resolución que la microscopía
óptica.
Es un método excelente para observar la
motilidad microbiana, ya que los
flagelos suelen poder distinguirse con
esta técnica.
 Tipos: Contraste de fases
Se basa en el principio según el cual las
células tienen un índice de refracción
diferente al del medio que la rodea. Así
pues, la luz que atraviesa una célula tiene
una fase distinta de la que atraviesa el
líquido circundante.
Esta sutil diferencia es amplificada
colocando un dispositivo en el objetivo del
microscopio de contraste, llamado anillo de
fase.
Tipos: Contraste de fases

Se usa mucho en docencia y en

investigación para la observación de
preparaciones vivas.
 Tipos: Fluorescencia
La microscopía de fluorescencia se
utiliza para visualizar muestras que
emiten fluorescencia, es decir, que
emiten luz de un color diferente al de
la luz que han absorbido.
Ya sea porque las células contienen
sustancias fluorescentes naturales o
porque están teñidas con un colorante
fluorescente.
Tipos: Fluorescencia
Uno de los colorantes es el DAPI 4,6-
diamidino-2-fenilindol tiñe las células de
color azul brillante porque forma
complejos con el DNA.
Este colorante puede utilizarse para
visualizar células en sus hábitats
naturales como el suelo, el agua y los
alimentos, o en muestras clínicas.
 03
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
Definición, características, tipos.
Definición y características

En este caso, se aplica el uso de

electrones como fuente de radiación para
la formación de imágenes, en donde
permite una mayor resolución espacial en
comparación con la óptica.

La longitud de onda de los electrones que

se utilizan es de alrededor de 0,5
angstroms. Puede obtenerse información
sobre la estructura cristalina, la
composición química y las propiedades
eléctricas.
 Funcionamiento general
La fuente de electrones forma una corriente de electrones de alto y los acelera en el vacío
hacia la muestra utilizando un potencial eléctrico positivo.

Esta corriente está confinada y enfocada usando aberturas de metal y lentes magnéticas en
un haz monocromático delgado y enfocado.

Este haz se enfocará en la muestra utilizando un lente magnético.

Las interacciones ocurren dentro de la muestra irradiada, afectando el haz de electrones.

Estas interacciones y efectos se detectan y transforman en una imagen.

Diferencias con la
microscopía óptica
El microscopio electrónico utiliza un haz de
electrones y sus características ondulatorias para
ampliar la imagen de un objeto, a diferencia del
microscopio óptico que utiliza luz visible para
ampliar las imágenes.
Los ópticos pueden aumentar entre 40 y 2000
veces, mientras que el electrónico puede resolver
características que son más de 1 millón de veces
más pequeñas.
Tipos: Microscopio Electrónico de
Barrido (MEB o SEM)

El Microscopio Electrónico de Barrido es una

herramienta utilizada para:
• Inspeccionar topografías.
• En el análisis de grietas en microchips
(DIE/packages).
• Identificar cuerpos cristalinos de características
microestructurales pequeñas como 1µm.
 Tipos: Microscopio Electrónico de
Barrido (MEB o SEM)

Es característico por realizar aumentos

muy altos que pueden ir a más de 300.000
X.
La forma en la que proporciona su valiosa
información es combinando imágenes de
alta resolución, análisis elemental y
recientemente, análisis cristalográfico.
 Tipos: MEB
Funcionamiento: https://youtu.be/Xx0PJtRTIYQ

Los componentes principales de un MEB son columna de electrones, sistema de escaneo,

detector(es), pantalla, sistema de vacío y controles electrónicos.
Recorre la muestra con un haz muy concentrado de electrones, parecido a la pantalla de
una televisión. Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o provocar la
aparición de electrones secundarios.
Los electrones perdidos y los secundarios son recogidos y contados por un dispositivo
electrónico situado a los lados del espécimen.
Cada punto leído de la muestra corresponde a un píxel en un monitor de televisión.
Cuanto mayor sea el número de electrones contados por el dispositivo, mayor será el
brillo del píxel en la pantalla.
A medida que el haz de electrones barre la muestra, se presenta toda la imagen de la misma en
el monitor.
Tipos: MEB
 Tipos: MEB
Imágenes tomadas por el microscopio:

Célula cortada
Piel humana en corte, Células vegetales con
transversalmente
600 X. cristales, 1700 X.
observada al MEB.
Tipos: Microscopio Electrónico de Transmisión
(MET o TEM)
En él, un haz de electrones altamente concentrados se
dirige hacia una muestra diluida (<200 nm).
• Normalmente no se requiere escaneo o ayuda a la
alta resolución.
• Los electrones incidentes altamente energéticos
interactúan con los átomos en la muestra
produciendo radiación.
• La información se obtiene de electrones
transmitidos desviados y no desviados,
retrodispersados y secundarios, y fotones
emitidos.
 Tipos: MET
Funcionamiento: https://youtu.be/DGI5lXsk63I

En un electrón de transmisión convencional microscopio, se irradia una muestra delgada con

un haz de electrones como una corriente uniforme.

Los electrones se emiten desde el cañón de electrones e iluminar la muestra a través de

dos o tres sistema de lentes condensadoras de escenario.

Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan
formando una imagen aumentada del espécimen que atraviesa el lente objetivo.

Para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles
de ángstroms.
Tipos: MET
 Tipos: MET
Imágenes tomadas por el microscopio:

60.000 X MET,
Bacilos en división.
mitocondria

MEB
Ventajas
Alta resolución y profundidad
de enfoque (1 X 10^-6 nm).
Archivos adjuntos de análisis
elemental.
Casi todos los tipos de
muestras, conductoras y no
conductoras.
No se requiere una muestra
transparente a los electrones.
Obtención de imágenes a
través de la rotación x-y-z
(3D) de la muestra.
Ventajas y desventajas
MET
Desventajas Ventajas
Costo. Alta resolución, tan pequeña
como 0,2 nm.
Más perillas. Imagen directa de la red
cristalina.
Vacío. Delimitar los defectos dentro
de la muestra.
Baja resolución. Conviene para obtener
imágenes estructurales de
materiales orgánicos.
Se requiere un recubrimiento Técnica de difracción de
superficial con metales. electrones.
Desventajas
Difícil preparación de
muestras.
Alto costo de capital y
funcionamiento.
Entrenamiento especial
requerido para la operación del
equipo.
Las muestras magnéticas
requieren un cuidado especial.
Las muestras no conductoras
requieren un recubrimiento de
oro.
Diferencias entre MEB y MET
• La preparación de la muestra es mucho más sencilla en el MEB
siendo que podemos colocarla con pocos preparativos como el
hecho de hacer el vacío.
• El MEB produce imágenes más tridimensionales y realistas pero
no de forma directa.
• El TEM es más sofisticado que el MEB, lo que implica que sea de
un costo elevado y menos accesible.
En conclusión, para escoger alguno de los dos microscopios podría
en su mayoría usarse el MEB a menos que se necesitara analizar
algo extremadamente diminuto como para hacerlo en el MET.

Otros tipos:
Microscopio de fuerza atómica
Forma imágenes de las superficies
utilizando una que recorre la muestra
haciendo una exploración que escanea la
muestra en función de la posición
.
generando una imagen. Esta técnica nos
permite obtener imágenes topográficas en
3D, hacer mediciones del orden de los
nm, detectar fuerzas de nN, hacer
mediciones de visco-elasticidad y dureza
de la muestra, entre otras.
Microscopio de rayos X
Microscopio de efecto túnel
Está basado en el concepto de efecto. Cuando
una punta conductora es colocada muy cerca de
la superficie a ser examinada, una corriente de
polarización aplicada entre las dos puede permitir
a los electrones pasar al otro lado mediante efecto
túnel a través del vacío entre ellas. Se utiliza para
obtener imágenes de la materia a escala
manométrica de los átomos, Además permite
manipular los átomos individualmente.
 Otros tipos:
Microscopio de rayos X
Los rayos X son producidos mediante la aceleración de electrones desde un cátodo
hacia un blanco metálico (ánodo), por medio de alto voltaje. Los electrones acelerados
chocan con los átomos del metal utilizado como blanco, removiendo electrones de
niveles internos y ocasionando que electrones de niveles superiores cubran los lugares
.vacantes, emitiendo así, fotones de rayos X. A partir de la difracción de rayos X es
posible identificar el sistema cristalino de la muestra analizada y obtener información
tridimensional acerca de la estructura interna del cristal
 Referencias
● Métodos de microscopía electrónica de barrido en Biología. José Ojeda Sahagún. Univ. de
Cantabria. 1997.
● Azad Mohammed, Avin Abdullah. Scanning Electron Microscopy (Sem): A Review. College
of Engineering, University of Sulaimani, Iraq. 2018.
● PCE Instruments. Tipos de microscopios.
https://www.pce-instruments.com/f/espanol/media/microscopio-info-tipo-construccion.pdf
● UNNE. Microscopía electrónica: Barrido y Transmisión.
http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm
● Locquin, M.; Langeron, M. Manual de Microscopía, Editorial Labor, S. A. Barcelona. 1985.