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Enzimol Clinica
Enzimol Clinica
(Tema 17)
Enzimologí
Enzimología Clí
Clínica.T-
nica.T-17
1. Los enzimas como catalizadores.
• Estructura y naturaleza de los enzimas
• Comportamiento cinético de los enzimas
2.-
2.- Medida de la actividad enzimá
enzimática.
• Fundamento.
• Factores que modifican la actividad enzimática.
• Medida de la actividad enzimática de muestras clínicas
• Instrumentación. Optimización de las condiciones de medida.
• Sistemas acoplados.
3.-
3.- Los enzimas como marcadores de lesió
lesión tisular.
• Enzimas como marcadores de daño celular
• Distribución tisular de los enzimas
• Patrón isoenzimático.
4.-
4.- Enzimas séséricos de importancia diagnó
diagnóstica clí
clínica.
• Transaminasas (ALT, AST)
• α−Amilasa
• Creatín fosfoquinasa (CPK)
• Fosfatasa ácida (ACP)
• Fosfatasa alcalina (ALP)
• Gama glutamil transpeptidasa (GGT)
• Láctico deshidrogenasa (LDH)
• 5’-nucleotidasa (NTP)
1
1. Los enzimas como catalizadores.
• Naturaleza proteica de los enzimas
2
1.2 Velocidad de una reacció
reacción
S→P
Δ [S]
ΔT
Δ [P]
ΔT
3
1.4 Velocidad de una reacció
reacción catalizada por un enzima.
La velocidad de una reacción catalizada por un enzima con cinética enzimática michaeliana
es proporcional a la concentración de substrato, pero es saturable y alcanza un máximo.
Reacción no
enzimática
“Actividad“
Actividad“ y “cantidad”
cantidad” de un enzima en una muestra.
4
2.- La medida de la cantidad de un enzima en una muestra.
2.-
• Fundamento.
• Optimización de las condiciones de medida.
• Medida de la actividad enzimática de muestras clínicas
• Instrumentación.
• Sistemas acoplados
5
2.1 Medida de la actividad enzimá
enzimática.
S→P
6
2.3 Medida de la actividad enzimá
enzimática de muestras bioló
biológicas.
Por ejemplo, la actividad LDH se mide mediante la reacción:
Piruvato + NADH → Lactato + NAD+
Δ [S]
ΔT
S→P
Δ [P]
ΔT
Absorbancia = ε x concentración x
Absorbancia
NAD(P)+
7
A medida que avanza la reacción y el piruvato se convierte en lactato, hay
un consumo de NADPH, y como consecuencia de ello una disminución en la
absorbancia a 340. La velocidad de la reacción se mide por la variación de la
absorbancia con el tiempo con un espectrofotómetro.
Δ Absorbancia 340 nm Ä
Moles consumidos de NAD(PH)/seg Ä
Absorbancia a 340 nm
actividad enzimática
Tiempo
8
3.-
3.- Los enzimas como marcadores de lesió
lesión tisular (I)
3.1 Caracterí
Características de los enzimas utilizados como marcadores:
¿por qué
qué aumenta su nivel en plasma...?:
• Necrosis de los tejidos
• Aumento del catabolismo celular (reparación tisular, cáncer)
• Aumento concentración intracelular (inducción)
• Obstrucción en la salida exocrina (α-amilasa)
9
3 Los enzimas como marcadores de lesió
lesión tisular (III)
3.2 Distribució
Distribución tisular de la actividad enzimá
enzimática de enzimas
con significació
significación clí
clínica
60 AST/GOT
50 ALT/GPT
Unidades/g
40
AST: mitocondria y citosol
30 ALT: citosólica
20
10
0
Hígado Corazón Músculo Cerebro Riñón Páncreas Pulmón Hematíes
10
Actividad tisular fosfatasa ácida
1200
1000
Unidades/g
800
600
400
200
0
Próstata Riñón Páncreas
40
Hígado
Riñón
30
20
10 Próstata
11
Creatín fosfoquinasa en tejidos
2500
M.esquel.
2000
Unidades/g
1500
1000
Cerebro
500 Miocardio
M. liso Riñón Hígado
0
100 Ganglios
80
Páncreas
60
Eritrocitos
40 Pulmón
20
12
3.-
3.- Los enzimas como marcadores de lesió
lesión tisular (IV)
3.3 Patró
Patrón isoenzimá
isoenzimático de algunos enzimas con significació
significación clí
clínica
- +
3 2 1
Muestra suero
La CPK está constituida por dos subunidades. Existen dos tipos de subunidades.
diferentes, lo que explica la existencia de tres isoformas son distintas. En los
los tejidos está presente una isoforma distinta.
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Estructura de LDH y sus isoenzimas:
isoenzimas:
LDH5 = β4 - +
5 4 3 2 1
150
100
50
0
Pulmón
Páncreas
Riñon
M. esquel
4
Eritrocitos
)α 3β
(1
)α 2
Miocardio
(2 2β β3
)α )α 4
Hígado
(3 (4 )β
(5
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Patrón isoenzimático de la LDH de suero en infarto de
miocardio y en hepatitis aguda
3.-
3.- Los enzimas como marcadores de lesió
lesión tisular (II)
Localizació
Localización del dañ
daño celular
• Muy pocos enzimas son específicos de un solo tejidos. Alternativas:
•medida de más de un enzima (p. ej. “perfil hepático”)
•isoenzimas
Alteraciones inespecí
inespecíficas de enzimas sé
séricos.
• Factores dependientes de la edad y sexo
• Factores atribuibles a la conservación de las muestras
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4.-
4.- Enzimas sé
séricos de importancia diagnó
diagnóstica clí
clínica (I).
4.-
4.- Enzimas sé
séricos de importancia diagnó
diagnóstica clí
clínica (II).
16
4.-
4.- Enzimas sé
séricos de importancia diagnó
diagnóstica clí
clínica (III).
• 5´ nucleotidasa (NTP)
• Valores normales: <9U/ml en el adulto.
• Aumento importante: colestasis intra o extrahepática, enfermedades hepatobiliares, cáncer hepático
• Aumento moderado:
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Enzimas séricos en la enfermedad hepática
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